이 작품은 스위스 국립 과학 재단 (SNSF, #320030_156019)의 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자는 하이델베르크 엔지니어링 GmBH, 독일에서에서 비재무 지원을 받았다.

모든 절차, BALB/c 성인 남성 및 여성 쥐 Cx3cr1의 발기인에서 gfp 익스프레스 누가 사용된 24 했다. 마우스 ARVO 성명에 따르면 안과 및 비전 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 치료 하 고 모든 절차는 동물 복지에 스위스 연방 규정에 따르면 스위스 정부에서 승인 했다. 마우스는 medetomidine 염 산 염 (0.75 mg/kg)과 케 타 민 (45 mg/kg)의 피하 주입에 의해 취 했다. 적절 한 마 취 호흡 속도 동물을 모니터링 하 여 확인 되었다 &#39; 꼬리 핀치에 대 한 s 반응. 실험의 끝에, 쥐와 CO 2 흡입 안락사 되었다.
 참고: 이미징 각 세션 (최대 20 분) 가능한 한 빨리 수행, 백 내장 형성 이후 다음 마 취 망막 시각화 30을 방해 수 있습니다.
 1. 시스템 구성 <ol><li>컴퓨터를 켭니다.</li>
	<li>전원 공급 장치를 켭니다. 메시지 &#34; 시작 수집 모듈 &#34; 장치의 제어판 화면에 나타납니다.</li>
	<li>소프트웨어를 작동 하는 소프트웨어의 바탕 화면 바로 가기를 두 번 클릭.</li>
	<li>데이터베이스 보기에서 클릭는 &#34; 환자를 추가 &#34; 아이콘.</li>
	<li>팝업 창에서 필요한 모든 정보를 삽입 (성, 이름, 제목, 생년월일, 성별, 및 환자 ID)를 클릭 하 고 &#34; 확인 &#34;. 팝업 창에서 2 mm 각 막 곡률을 설정 하 고 &#34; 확인 &#34;.</li>
	<li>표준 30 ° 시 앞 78 D 표준 안과 콘택트 슬릿 램프 렌즈를 놓고 테이프로 안전 하 게 그것을 건다.</li>
	<li>장치의 왼쪽에 있는 필터 레버는 표시에 위치 확인 &#34; A &#34; IR + 10 월 및 ( 그림 1) 이미징 어.</li>
</ol> 2. 마우스 준비 <ol><li>0.75 mg/kg와는 케 타 민 medetomidine 염 복용량을 사용 하 여 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS, pH 7.4) 마 취 솔루션 준비에 45 mg/kg의 복용량. 따라서, 20 g 마우스에 대 한 medetomidine 염 산의 15 µ L 18 µ L의 PBS에서 50 µ L의 최종 볼륨을 마 취 제와 혼합. 솔루션 4 ° C에서 최대 1 주일까지 저장.</li>
	<li>아저씨에 의해 마우스를 파악 하 고 눈동자 팽창 시킴을 달성 하기 위해 각각의 눈에 한 방울 tropicamide 0.5% + phenylephrine 염 2.5% 적용.</li>
	<li>구속, 마우스를 유지 하 고 30 G 바늘에 연결 된 인슐린 주사기, 피하 주사 마 취 솔루션의 50 µ L. 생리대 위에 배치 된 그것의 감 금에서 다시 마우스를 넣어. 마우스 완벽 하 게 진정 될 때까지 3-5 분을 기다립니다. 마 취 깊이 평가, 마우스의 꼬리를 꼬집어. 마우스 각 막을 면봉으로 부드럽게 터치 하 여 각 막 반사를 확인 합니다. 없는 긍정적인 반사를 관찰 하는 경우는 영상 계속. 
	참고: 그것은 마 취 동안 호흡 속도 모니터링 하는 것이 중요입니다. 마우스 완벽 하 게 진정 하지 고통 스러운 자극에 따라 호흡 속도 증가 합니다.</li>
	<li>수화물 2 %hydroxypropylmethylcellulose 응용 프로그램과 함께 마우스 각 막 각 눈에 떨어진다.</li>
</ol> 3. SD-10 월 <ol><li>소자의 턱 받침대 ( 그림 1)에 연결 된 맞춤 플랫폼에 약 32 ° C의 온난 화 패치를 배치.</li>
	<li>오른쪽 눈 이미지를 플랫폼 ( 그림 1)의 왼쪽된 부분에 마우스를 놓습니다. 마우스의 오른쪽 궤도 렌즈 얼굴과 신체 거짓말 플랫폼의 왼쪽된 부분에는 경향이 확인 하십시오.</li>
	<li>오른쪽 눈에 hydroxypropylmethylcellulose의 방울을 적용 하 고 신중 하 게 그것은 + 4 디 옵 터 엄밀한 가스 침투성 콘택트 렌즈 위치 (구형 전원: +25.00 디 옵 터에-25.00). 균형 잡힌된 소금 솔루션 (BSS)에 콘택트 렌즈를 저장 합니다. 렌즈를 잡아,를 사용 하 여 플라스틱 또는 실리콘 집게 손상을 방지.</li>
	<li>수집 모듈 ( 그림 2A에 녹색 상자)을 시작 하는 컨트롤 패널 디스플레이의 오른쪽에 노란 상자를 누릅니다. 노란색 상자는 녹색 켜 집니다 고 컨트롤 패널 메뉴 화면 ( 그림 2A)에 표시 됩니다.</li>
	<li>B 검사의 인수, 컨트롤 패널 ( 그림 2A)에 IR + 10 월 옵션을 선택 합니다. 선택한 설정 컨트롤 패널에서 파란색으로 강조 표시 됩니다.</li>
	<li>선택 &#34; 망막 &#34;에서 &#34; 응용 프로그램 및 구조 &#34; 소프트웨어에 이동 마우스 눈으로 렌즈에 사용 하 여는 micromanipulator 장치 ( 그림 1). 망막에 초점을 맞추고, 전에 확인 표시 &#34; OD &#34; 스크린의 왼쪽된 하단 부분에 선택. 소프트웨어는 자동으로 왼쪽 (OS)를 식별 하 고 오른쪽 (OD) 눈은 목표의 위치에 따라. 
	참고: 목표는 플랫폼의 중간에 위치 하는 경우 화면 하단에 오류 메시지가 표시 됩니다. 이 경우, 다시 마우스를 놓고 약간 때까지 올바른 눈을 인식 하는 소프트웨어.</li>
	<li>초점 손잡이와 초점을 망막에 큰 배는 명확 하 게 컴퓨터 화면 왼쪽에 저 이미지에서 볼 때까지. 카메라는 micromanipulator 왼쪽 또는 오른쪽, 그 방향으로 카메라를 이동 또는 시계 방향 또는 시계 반대 방향으로, 최대 또는 아래로, 각각 카메라를 이동 하 여 이동. 
	참고: 플랫폼에서 마우스 위치를 변경 하거나 적외선 이미지에서 시 신경 머리의 선호 지역화를 달성 하기 위해 렌즈 위쪽으로 또는 아래쪽으로 이동.</li>
	<li>시계 반대 방향으로 줄이기 위해 또는 저 이미지의 밝기를 증가 하는 방향으로 감도 조절기를 돌립니다. 최적의 초점을 달성 하는 경우는 SD-10 월 B-스캔 화면 오른쪽에 나타납니다. 
	참고: B-스캔 초점을 조정 하 여 구상 될 수 없습니다, 경우 키보드 조합 Ctrl + Alt + Shift + O를 누릅니다. 팝업 창에서 값을 조정 하는 참조 팔의 B-스캔 화면에 나타날 때까지.</li>
	<li>화면의 오른쪽 하단에 패턴 메뉴 (한 줄 그림 2b에서)에서 단일 검색을 선택 하십시오.</li>
	<li>Micromanipulator 장치 ( 그림 1)의 왼쪽, 오른쪽, 앞으로, 또는 (그 방향으로 카메라를 설정)을 뒤로 돌려 B-스캔 위쪽과 아래쪽 사이 위치 되도록 모서리의 SD-스캔 창.</li>
	<li>적어도 9 높은 품질의 이미지를 자동 실시간 (미술) 값 설정. 
	참고: 예술 여러 연속 스캔을 평균 하 여 이미지 품질을 향상 시킵니다. 높은 &#34; 예술 &#34; 가치, 높은 신호 대 잡음 비율 그리고 이렇게 이미지 품질. 그러나, 증가 하 여는 &#34; 예술 &#34;는 획득 가치 시간 또한 증가.</li>
	<li>보도 &#34; 취득 &#34; ( 그림 2) 제어판 화면에 버튼 하 고는 이미지.</li>
	<li>왼쪽된 눈 이미지 및 반복 단계 3.2-3.12 마우스 위치.</li>
	<li>플라스틱/실리콘 집게로 콘택트 렌즈를 제거 하 고 그것은 BSS.</li>
	<li>Hydroxypropylmethylcellulose의 신선한 드롭 마우스 각 막 수 화와 티슈 페이퍼와 초과 제거.</li>
	<li>시계 반대 방향으로 회전 하 여 표준 30 ° 광 제거.</li>
	<li>55 ° 렌즈를 탑재 하 고 각 눈에 대 한 단계 3.4-3.12 반복.</li>
</ol> 4. 형광 이미징 자동 <ol><li>플랫폼에서 마우스를 이동 하지 않고 제어판에서 IR을 선택 합니다.</li>
	<li>초점 손잡이와 큰 망막 혈관에 초점.</li>
	<li>컨트롤 패널에서 AF를 선택 합니다.</li>
	<li>감도 노브를 시계 반대 방향으로 줄이기 위해 설정 또는 이미지의 밝기를 증가 하는 방향으로.</li>
	<li>감도 손잡이 누르고 설정에 &#34; 예술 &#34; 67 이상의 높은 품질을 얻으려면 이미지 값.</li>
	<li>때 세트 &#34; 아트 &#34; 값에 도달 했습니다, 눌러 &#34; 취득 &#34; 이미지를 얻으려면 제어판에서. 감도 노브를 다시 평균 중지를 누릅니다. 다른 망막 레이어를 시각화 하려면 초점 조정.</li>
	<li>55 ° 렌즈를 제거 하 고 넓은 분야 102 ° 렌즈를 탑재. 4.1 단계 &#8211; 4.6 각 마우스의 두 눈에 대 한, 모든 마우스.</li>
	<li>클릭 &#8220; 이미지 저장 &#8221; 창과 클릭의 왼쪽된 상단 테두리에 &#8220; 종료 &#8221;. 컴퓨터에 이미지를 저장 하려면 마우스 이름을 두 번 클릭 하 여 마우스 화면 오른쪽 부분에 있는 목록에서 선택 합니다. 별도로 각 이미지를 두 번 클릭 한 다음 플로피 디스크 아이콘을 클릭 합니다. .Tif,.bmp,.jpg 또는.png 원하는 폴더에로 이미지를 저장 합니다. 소프트웨어 보도 종료 하려면 &#8220; 파일 &#8221; 및 &#8220; 종료 &#8221;.</li>
</ol> 5. 마 취 반전 <ol><li>마우스 눈 hydroxypropylmethylcellulose의 한 방울을 수 화와 생리대에 마우스 반환.</li>
	<li>준비 atipamezole 솔루션 medetomidine 염 산 염의 진정 효과를 2.25 mg/kg의 복용량에. 20 g 마우스에 대 한 150 µ L PBS의 최종 볼륨을 사용 하 여 atipamezol의 9 µ L을 추가 합니다. 솔루션 4 ° C에서 최대 1 주일까지 저장.</li>
	<li>분 마 취 주입 (2.2 단계), atipamezole 솔루션의 150 µ L를 피하 주사 후.</li>
	<li>마 취에서 회복 될 때까지 마우스를 모니터링합니다. 때 마우스는 완전히 복구 (5-10 분 atipamezole 주입 후) 다시는 새 장에 넣어. 한쪽에 누워 때 그 시체를 설정 하는 동물의 능력에 의해 복구 표시 됩니다 활동, 산책 및 환경 자극에 대 한 응답에서 반응의 회복.</li>
</ol> 6. SD-10 월 이미지에서 수동 망막 두께 측정 <ol><li>OCT 검사는 동물의 이름에 더블 클릭 하 여 엽니다.</li>
	<li>B-스캔 30 ° 또는 55 ° 렌즈와 함께 얻은 열.</li>
	<li>선택 &#34; 두께 프로 파일 &#34;.</li>
	<li>보도 &#34; 레이어 세그먼트 편집 &#34; 아이콘 ( 그림 2B). 소프트웨어 자동으로 내부 제한 식별 하 고 기지 막.</li>
	<li>필요한 경우는 수동으로 해결 한다 내부 제한의 위치 그리고 막 기초. 이렇게 하려면 화면 그리고 빨간색 동그라미 옵션 ( 그림 2B)의 왼쪽에서 수정할 레이어를 선택 합니다. 이동 마우스 버튼으로 원 선 수정 누르면.</li>
	<li>올바르게 해당 레이어를 줄을 수정 합니다. 클릭 &#34; 저장 하 고 닫습니다 &#34; 창 종료. 
	참고: 맥락 막의 반사도, 인해 소프트웨어 식별할 수 있습니다 하지 기본 막 제대로. 따라서, 그것은 망막 두께 측정을 진행 하기 전에 그것을 수동으로 정의 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>선택 &#34; 망막 &#34; 아래는 &#34; 계층 &#34; 옵션. 망막 두께의 다이어그램 화면 하단에 표시 됩니다.</li>
	<li>망막 두께 (µ m에 표시 됨) 볼 B-스캔 또는 다이어그램에서 다른 위치에 선택 된 위치에 대 한 클릭 하십시오.</li>
	<li>시 신경 머리에서 원하는 거리에 망막 두께 측정 하 고 스프레드시트에 값 복사.</li>
	<li>5.1-5.9 30 °와 55 ° 렌즈 각 마우스에 대 한 단계를 반복.</li>
	<li>원하는 소프트웨어와 통계 분석을 수행.</li>
</ol>

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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatic+Effect+of+Oral+CSF-1R+Kinase+Inhibitor+on+Retinal+Microglia+Revealed+by+In+Vivo+Scanning+Laser+Ophthalmoscopy.">Dramatic Effect of Oral CSF-1R Kinase Inhibitor on Retinal Microglia Revealed by In Vivo Scanning Laser Ophthalmoscopy.</a> Transl Vis Sci Technol. 6 (2), 10 (2017).</li><li>Gabriele, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducibility+of+spectral-domain+optical+coherence+tomography+total+retinal+thickness+measurements+in+mice.">Reproducibility of spectral-domain optical coherence tomography total retinal thickness measurements in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (12), 6519-6523 (2010).</li><li>Nakao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wide-field+laser+ophthalmoscopy+for+mice:+a+novel+evaluation+system+for+retinal/choroidal+angiogenesis+in+mice.">Wide-field laser ophthalmoscopy for mice: a novel evaluation system for retinal/choroidal angiogenesis in mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (8), 5288-5293 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+fundus+hyperautofluorescent+spots+and+their+role+in+retinal+degeneration+in+a+mouse+model+of+Goldmann-Favre+syndrome.">Origin of fundus hyperautofluorescent spots and their role in retinal degeneration in a mouse model of Goldmann-Favre syndrome.</a> Dis Model Mech. 6 (5), 1113-1122 (2013).</li><li>Wang, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+origin+of+fundus+autofluorescence+in+patients+and+mice+with+a+defective+NR2E3+gene.">Cellular origin of fundus autofluorescence in patients and mice with a defective NR2E3 gene.</a> Br J Ophthalmol. 93 (9), 1234-1240 (2009).</li><li>Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sick+photoreceptors+attract+activated+microglia+from+the+ganglion+cell+layer:+a+model+to+study+the+inflammatory+cascades+in+rats+with+inherited+retinal+dystrophy.">Sick photoreceptors attract activated microglia from the ganglion cell layer: a model to study the inflammatory cascades in rats with inherited retinal dystrophy.</a> Brain Res. 588 (1), 21-28 (1992).</li><li>Hughes, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+activated+sialoadhesin-positive+microglia+during+retinal+degeneration.">Generation of activated sialoadhesin-positive microglia during retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 44 (5), 2229-2234 (2003).</li></ol>

저자는 공개 없다.

현재 문서에서는 망막 B-스캔의 수집과 같은 이미징 세션에서 마우스 망막에 gfp 긍정적인 microglia 분포의 이미징에 대 한 프로토콜을 보여 줍니다. SD-10 월과 SLO는 점점 사용 망막 질환의 동물 모델에서10,,1417,18,21이상 망막 변경의 정보를 제공 하. 이 프로토콜, Cx3cr1gfp/gfp 또는 Cx3cr1gfp / + 마우스 망막 비 접촉 이미지 수와 망막 두께의 정보를 얻을 수 있습니다. 이것은 질병의 심각도 시간이 지남에 변경 또는 치료 치료 테스트 때 망막 질병 실험 모델에서 매우 중요 하다입니다. 또한, 프로토콜 망막에 형광 세포의 생체 내에서 영상에 대 한 기자 마우스 라인을 활용 하는 방법을 설명 합니다.
그러나, 여기에 제시 된 프로토콜에는 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, 인간을 위해 설계 된 장치에서 마우스 망막의 영상 확대 부정확7측면으로 이어질 수 있는 마우스 눈의 더 높은 총 광학 힘 때문 전하실 수 있습니다. 그러나, 축 SD 10 월 측정은 정확 하 게8. 또한, 소프트웨어의 "참조 설정" 옵션을 사용 하 여 마우스에 따라 시험 플랫폼에 마우스의 하지 고정된 위치 때문에 다소 어려운 이며 따라서 마우스 망막의 경도 이미징 도전적 일 수 있다. 눈의 세로 정렬 시 신경 적외선 이미지의 중심에 위치 하 고 다음 원하는 이미지를 획득 하 여 얻을 수 있습니다. 아이 회전에 대 한 수정, SD 10 월 en 얼굴 이미지의 수동 정렬 취득 후 수행할 수 있습니다과33설명 되어 있는 대로 두께 측정에 적용 있습니다. 현재 프로토콜에 사용 되는 이미징 시스템 외 다른 이미징 시스템도 개발 되었습니다 콘택트 렌즈를 사용 하지 않고 더 큰 망막 영역 이미지 수 있습니다 큰 각도 제공 하는. 예를 들어 Optos 큰 망막 표면을 커버 수 있지만 현재에 사용 되는 장치에 비해 큰 이미지 가변성 연구34. 이러한 제한에도 불구 하 고 현재 프로토콜 망막 질병의 여러 실험 모델에서 활용할 수 있습니다. 얻을 수 있는 정보는 망막 두께 변경 (붓기, 위축), 망막 분리의 탐지 또는 hyperreflective 점 및 fluorophore 표시 된 셀 및 증가의 존재 또는 그들의 숫자의 감소를 포함 합니다.
Cx3cr1 의 식 heterozygous 쥐에는 두 가지 방법의 조합 (Cx3cr1gfp / +), vivo에서 동시에 검색 하기 위해 실험을 수 있는 기능 fractalkine 수용 체 망막 질병 이나 부상 하는 동안 (예를 들어, 망막 부 종, 망막 위축) 망막 이상이 주변 실시간 및 가능한 microglia 축적에 망막 무결성의 변경. 또한, 형태학 분석을 적용 하 여 microglia 활성화 상태 소마 크기에 따라 평가 될 수 있다 그리고 복잡성 microglia의 처리21. 망막 질환, 망막 정 맥 폐색 등에서 활성화 및 망막 위축 사이트에 microglia/대 식 세포의 축적 관찰 되었습니다27. 또한, 마우스에 결함이 Nr2e3 유전자 (핵 수용 체 Subfamily 2 그룹 E 회원 3)에 대 한, recessively 상속의 마우스 모델 향상 된 S 콘 감도 증후군 (ESCS), 외부 핵 층 (rosettes) 접는 초기에 관찰 될 수 있다 출생 후 일입니다.
흥미롭게도, microglia 세포는 근 엽 내부 찾을 수 있습니다 그리고 그것은 해당 microglia 이러한 마우스35,36의 망막에서 관찰 하는 대뇌의 퇴보에 기여할 수 있습니다 제안 되었습니다. Microglia의 활성화의 과정에 연루 되어 이후 다양 한 망막 질병의 때로는 망막 건축10,,2737,38 변경 동반 , SD-10 월과 SLO의 조합 microglia 활성화 및 망막 변성 사이의 상관 관계를 밝힐 수 있다. 어떤도 전에 불구 하 고 현재 프로토콜 경도, 그러한 정보를 제공할 수 있습니다 및 따라서 그것 microglia 배포/활성화와 망막 손상의 상관 관계 및 치료 치료의 모니터링에 대 한 가치가 있을 것 이라고 효과21.

실험적인 안과에서 망막 병 리의 검사 일반적으로 조직학 기술을 사용 하 여 평가 합니다. 그러나, 조직학 동물 euthanization를 요구 하 고 조직의 실제 속성 변경 발생할 수 있습니다. SD-10 월과 SLO 정기적으로 사용 됩니다 임상 안과에서 진단 목적을 위해 여러 망막 질환 당뇨 황 반 부 종9, 앞쪽 허 혈 성 시 신경 병10또는 망막 화11 등의 모니터링 . SD-10 월과 SLO 추가 개입 없이 넓혀 진된 눈동자를 통해 시각화 되는 망막의 고해상도 이미지를 생성 하는 비-침략 적 기술이 있습니다. SD-10 월 SLO 입체 이미지는 망막의 생산 형광 데이터를 수집 하는 동안 망막의 단면 이미지를 만들려고 backscattering 데이터를 수집 하 여 망막 구조와 망막 두께의 정보를 제공 합니다. 요즘, 모두는 점점 작은 설치류12,13,,1415 (또는 심지어 zebrafish16,17)를 사용 하 여 실험 안과에서 사용 기술과 수 있습니다. 모두 질적 및 양적 정보12,,1718,,1920,21을 제공 합니다.
Lipofuscins 같은 내 생 fluorophores의 축적 또는 망막에 드루의 형성 자동 형광 신호 SLO에 의해 구상 될 수 있다. 이 특징은 SLO 진단 및 연령 관련 황 반 변성 등 망막 화22,23망막 질병의 모니터링을 위한 귀중 한 기술. 실험적인 안과에 자동 형광 이미징 (AF) 기자 마우스 라인에서 특정 세포 유형의 탐지에 대 한 사용할 수 있습니다. 예를 들어 마우스 Cx3cr124 의 발기인에서 gfp의 표현을 위한 heterozygous microglia/대 식 세포의 수사를 위해 정상적인 망막에 microglial 세포의 생체 내에서 시각화 한 유리는 망막 질병21역학입니다. Microglia는 조직의 항상성 및 부상1,,2526시 조직 복구에 중요 한 역할을 하는 망막의 상주 대 식 세포는. Microglia 활성화는 망막에 허 혈, 망막 부상과 변성, 망막 질병2,3,,45, 에서이 세포의 역할을 제안 보고 되었습니다. 6.
현재의 프로토콜의 목적은 망막 이미징 및 SD-10 월를 사용 하 여 망막 두께의 측정에 대 한 사용 하 여 Cx3cr1gfp/gfp 마우스 망막 gfp 긍정적인 microglia 셀의 시각화를 위한 비교적 간단한 방법 설명 하는 SLO (하이델베르크 Spectralis HRA + 10 월 시스템). 이 프로토콜은 다양 한 마우스 라인에서 건강 또는 질병 망막의 이미징 및 두께 측정을 위해 활용할 수 있습니다. 또한, 형태학 분석 식별 및 정량화 microglia 숫자 및 SLO21을 사용 하 여 망막에 microglia 활성화에 대 한 수행할 수 있습니다. Microglia 세포 망막27,,2829를 포함 하 여 중앙 신경 시스템 (CNS)에 퇴행 성 질환과 연결 됩니다. 따라서, 현재 프로토콜에서 사용 하는 두 가지 방법을 조합 하 여 microglia 유통 및 망막 변성의 상관 관계 만들 수 있는 모니터링 질병의 심각도 촉진할 수 있다 또는 vivo에서접근의 치료 효과.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Spectralis Imaging system (HRA+OCT)</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ophthalmic imaging platform system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Eye Explorer</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Version 1.9.13.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>78D standard ophthalmic non-contact slit lamp lens</td>
			<td>Volk Optical Inc., Ohio, USA</td>
			<td>V78C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis wide angle 55&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50897-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultra widefield 102&#176; lens</td>
			<td>Heidelberg Engineering, Germany</td>
			<td>50117-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medetomidine hydrochloride 1 mg/mL (Domitor)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>Swissmedic Nr. 50&#39;590 - ATCvet: QN05CM91</td>
			<td>anesthetic/analgesic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ketamine 50mg/ml (Ketalar)</td>
			<td>Parke-Davis, Zurich, Switzerland</td>
			<td>72276388</td>
			<td>anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tropicamide 0.5% + phenylephrine HCl 2.5% (Augentropfen mix)</td>
			<td>ISPI, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnican Insulin-50 0.5 ml G30 0.3 x 12mm</td>
			<td>B. Braun Mesungen AG, Carl-Braun-Stra&#223;e, Germany</td>
			<td>9151125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydroxypropylmethylcellulose (Methocel 2%)</td>
			<td>OmniVision, Neuhausen, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>+4 dpt rigid gas permeable contact lens</td>
			<td>Quantum I, Bausch + Lomb Inc., Rochester, NY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Base Curve: 7.20 to 8.40 mm 
			Diameter: 9.00 / 9.60 / 10.20 mm 
			Power: -25.00 to +25.00 Diopters</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>balanced salt solution (BSS)</td>
			<td>Inselspital, Bern, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>silicon forceps</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>atipamezole 5 mg/mL (Antisedan)</td>
			<td>Provet AG, Lyssach, Switzerland</td>
			<td>N/A</td>
			<td>&#945;2 adrenergic receptor antagonist</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software, Inc, San Diego, CA, USA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>statistical analysis software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging of cx3cr1gfp/gfp reporter mice with spectral-domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy

스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 및 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy (SLO) 실험 안과에 광범위 하 게 사용 됩니다. 현재 프로토콜에서 마우스 표현 녹색 형광 단백질 (gfp) Cx3cr1 의 발기인에서 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) microglia 세포에서 vivo에서 망막에 이미지를 사용 했다. Microglia 상주 세포는 망막의 고 여러 망막 질환1,2,3,4,,56에 연루 되었습니다. 이 프로토콜의 망막 B-스캔, SD-10 월과 SLO에서 vivo에서,와 함께 Cx3cr1gfp/gfp 마우스 microglia 셀 배포판의 이미징 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하는 세대에 대 한 상세한 접근을 제공 합니다. 프로토콜은 여러 기자 마우스 라인에서 사용할 수 있습니다. 그러나, 여기에 제시 된 프로토콜 몇 가지 제한이 있습니다. 첫째, SLO 및 SD-10 월, 고해상도 모드에서 사용 될 때 높은 축 해상도 측면 해상도와 데이터 수집 낮습니다 (3.5 µ m와 6 µ m, 각각). 또한, SLO에 초점 및 채도 수준을 높은 매개 변수 선택 및 눈의 올바른 정렬에 의존 합니다. 또한, 인간의 눈;에 비해 쥐에서 인간 환자는 마우스 눈의 더 높은 총 광학 힘 인 도전 위해 고안 된 장치를 사용 하 여 이 또한 다른 사람의 사이에서 마우스 렌즈에 의해 확대에 따라 확대 부정확7, 측면을 발생할 수 있습니다. 그러나, 축 검사 위치에 불구 하 고 측면 배율에 따라 달라 집니다, 그리고 축 SD 10 월 측정은 정확 하 게8.

여기에 제시 된 프로토콜을 사용 하 여, SD-10 월 스캔 하 고 SLO 이미지 같은 이미징 세션에 Cx3cr1gfp/gfp 마우스에서 입수 했다. 그림 3 에 대표 SD-10 월 단일 검사는 30 °와 55 ° 렌즈 (그림 3A) 또는 대표 SLO 이미지 얻은 gfp 긍정적인 microglia 셀 시각화는 55 ° 또는 102 ° 렌즈와 함께 얻은 포함 되어 있습니다. 맥락 막의 높은 반사도 SD 10 월에서 관찰 검사 30 ° 55 ° 렌즈에 비해 얻은. 그러나, 망막 건축 30 °와 55 ° 이미지 (그림 3, 오른쪽 확대 이미지)에서 분명 하다. 망막 경계 수동 수정 후 (내부 제한 막 기반), 시 신경 머리 ( 에서에서 같은 거리에서 측정할 때 망막 두께 측정의 좋은 상관 관계 30 o 와 55 ° 렌즈 사이 관찰 되었다 그림 3C; 피어슨 상관 관계 0.967 p = &#60; 0.0001). 이전 연구 조직학 망막 섹션15,31 에 따라서 SD 10 월 측정 ex vivo와 SD 10 월 검사 상관에 망막 두께 측정 비-침략 적 기법으로 사용할 수 있습니다. 대 한 망막 두께 측량. 그러나 SLO를 사용 하 여 우리가 식별할 수 있는 gfp 긍정적인 microglia 셀 자동 형광 이미지에서 hyperreflective 신호 넓은 필드 102 ° 렌즈 55 ° 렌즈에 비해 더 큰 저 영역을 커버 수 있었다. SLO는 망막 microglia 셀 배포 및 활성화 기능 fractalkine 수용 체와 기자 쥐에서의 모니터링에 대 한 또한 이용 될 수 있다 (Cx3cr1gfp / + 마우스) 정상 또는 병에 걸리는 망막12, 21,32. 같은 이미징 세션에서 SLO와 SD 10 월의 조합 microglia 배포 및 망막 변성에 활성화에 대 한 정보를 제공할 수 있습니다 그리고 쥐21망막 질병을 모니터링 하기 위한 도움이 될 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig1.jpg"> 
그림 1: 현재 연구에 사용 된 장치의 대표 이미지. 마우스의 오른쪽 눈 이미지를 마우스 오른쪽 궤도 렌즈와 플랫폼의 왼쪽된 부분에 발생 하기 쉬운 거짓말 그 시체와 함께 맞춤 플랫폼의 왼쪽된 부분에 배치 됩니다. 플랫폼의 높이 (낮은 플랫폼)을 시계 방향으로 돌려 조정 또는 시계 반대 방향으로 (하기 플랫폼) 될 수 있습니다 "턱 나머지 조정". 필터 레버 "a" IR + 10 월 및에 어 이미징 수 있도록 배치 해야 합니다. (그림에는 표시 되지 않음) 초점 손잡이로 실험 스캐너의 초점을 변경할 수 있습니다. micromanipulator 제대로 조명 하 고 높은 품질의 이미지에 대 한 망막을 정렬에 사용할 수 있습니다. 목적은 수 이동 최대, 아래로, 오른쪽, 또는 카메라 핸들 왼쪽. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig2.jpg"> 
그림 2: 디바이스의 컨트롤 패널의 그림. (A) 수집 모드를 선택할 수 있는 컨트롤 패널 디스플레이의 왼쪽된 부분에 (적외선, IR, 자동 형광, AF 또는 indocyanine 녹색 제품은, ICGA; 결합 또는 하지 광학 일관성 단층 촬영, 10 월). 패널의 가운데 부분에 수집 설정 (IF 이미지, 섹션 또는 볼륨 검사의 강도) 선택할 수 있습니다. 보기의 필드 로드 렌즈에 의해 결정 됩니다. 감도 손잡이와 IR 또는 어 이미지의 밝기를 조정할 수 있습니다. 감도 손잡이 눌러, 소프트웨어는 높은-품질의 이미지를 제공 하는 IR 또는 AF에서 얻은 이미지를 평균 시작 됩니다. (B) 그림 수집 패턴 메뉴의. (C) 해당 아이콘으로 소프트웨어에서 사용 되는 기능의 요약입니다. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55984/55984fig3.jpg"> 
그림 3: 10 월 검사와 자동 Cx3cr1gfp/gfp 마우스 망막의 형광 이미지. (A) B-55 ° (위 패널) 또는 30 ° 렌즈 (하단 패널)으로 얻은 마우스 망막의 검사. 노란 박스의 높은 배율 오른쪽 패널에 표시 됩니다. (B) 55 °와 102 ° 렌즈 (왼쪽 및 오른쪽 패널, 각각) 얻은 Cx3cr1gfp/gfp 쥐의 망막에 gfp 긍정적인 microglia 셀의 이미지. (C) 망막 두께 측정, 시 신경 머리 30 °와 55 ° 렌즈에서 파생 된 SD 10 월 검사에서에서 같은 거리에 측정. 두 렌즈 사이 좋은 상관 관계 관찰 되었다 (피어슨 상관 관계 = 0.967). 바 규모: 200 µ m, 100 µ m에 확대 SD 10 월 이미지 (A, 오른쪽 패널). <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55984/55984fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

Vivo에서 스펙트럼-도메인 광학 일관성 단층 촬영 스캐닝 레이저 Ophthalmoscopy와 Cx3cr1gfp/gfp 기자 쥐의 이미징

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

in-vivo-imaging-cx3cr1gfpgfp-reporter-mice-with-spectral-domain

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

10.5K 조회수.  Bern University Hospital and University of Bern. 이 프로토콜 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 등 어떻게 고해상도 이미징 기술을 설명 하 고 스캐닝 레이저 ophthalmoscopy에 정보를 얻기 위해 안과 이미징 플랫폼 시스템을 사용 하 여 작은 설치류에 이용 될 수 있다 망막 두께 microglial 각각 유통, 셀.

비디오: In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Oral Biofilm Analysis of Palatal Expanders by Fluorescence In-Situ Hybridization and Confocal Laser Scanning Microscopy

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of natural heterogeneous biofilm is today facilitated by a comprehensive range of staining techniques, one of them being fluorescence in situ hybridization (FISH).1,2 We performed a pilot study in which oral biofilm samples collected from fixed orthodontic appliances (palatal expanders) were stained by FISH, the objective being to assess the three-dimensional organization of natural biofilm and plaque accumulation.3,4 FISH creates an opportunity to stain cells in their native biofilm environment by the use of fluorescently labeled 16S rRNA-targeting probes.4-7,19 Compared to alternative techniques like immunofluorescent labeling, this is an inexpensive, precise and straightforward labeling technique to investigate different bacterial groups in mixed biofilm consortia.18,20 General probes were used that bind to Eubacteria (EUB338 + EUB338II + EUB338III; hereafter EUBmix),8-10 Firmicutes (LGC354 A-C; hereafter LGCmix),9,10 and Bacteroidetes (Bac303).11 In addition, specific probes binding to Streptococcus mutans (MUT590)12,13 and Porphyromonas gingivalis (POGI)13,14 were used. The extreme hardness of the surface materials involved (stainless steel and acrylic resin) compelled us to find new ways of preparing the biofilm. As these surface materials could not be readily cut with a cryotome, various sampling methods were explored to obtain intact oral biofilm. The most workable of these approaches is presented in this communication. Small flakes of the biofilm-carrying acrylic resin were scraped off with a sterile scalpel, taking care not to damage the biofilm structure. Forceps were used to collect biofilm from the steel surfaces. Once collected, the samples were fixed and placed directly on polysine coated glass slides. FISH was performed directly on these slides with the probes mentioned above. Various FISH protocols were combined and modified to create a new protocol that was easy to handle.5,10,14,15 Subsequently the samples were analyzed by confocal laser scanning microscopy. Well-known configurations3,4,16,17 could be visualized, including mushroom-style formations and clusters of coccoid bacteria pervaded by channels. In addition, the bacterial composition of these typical biofilm structures were analyzed and 2D and 3D images created.

We present a protocol for structural and compositional analysis of natural oral biofilm from orthodontic appliances with in situ hybridization (FISH) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). Oral biofilm samples were collected from palatal expanders, scraping acrylic-resin flakes off their surface and referring them for molecular processing.

형광에 원위치 하이브리드화 및 공촛점 레이저 스캐닝 현미경에 의해 맛이 좋은 확장기의 사정 Biofilm 분석

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) of natural heterogeneous biofilm is today facilitated by a comprehensive range of staining techniques, one of ...

연구

의학

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The cell line was originally induced by intracranial injection of 3-methyl-cholantrene into a C57BL/6 syngeneic mouse strain 1; therefore, immunologically competent C57BL/6 mice can be used. While we use GL261, the following protocol can be used for the implantation and monitoring of any intracranial mouse tumor model. GL261 cells were engineered to stably express firefly luciferase (GL261-luc). We also created the brighter GL261-luc2 cell line by stable transfection of the luc2 gene expressed from the CMV promoter. C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr mice (albino variant of C57BL/6) from the National Cancer Institute, Frederick, MD were used to eliminate the light attenuation caused by black skin and fur. With the use of albino C57BL/6 mice; in vivo imaging using the IVIS Spectrum in vivo imaging system is possible from the day of implantation (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). The GL261-luc and GL261-luc2 cell lines showed the same in vivo behavior as the parental GL261 cells. Some of the shared histological features present in human GBMs and this mouse model include: tumor necrosis, pseudopalisades, neovascularization, invasion, hypercellularity, and inflammation 1.
Prior to implantation animals were anesthetized by an intraperitoneal injection of ketamine (50 mg/kg), xylazine (5 mg/kg) and buprenorphine (0.05 mg/kg), placed in a stereotactic apparatus and an incision was made with a scalpel over the cranial midline. A burrhole was made 0.1mm posterior to the bregma and 2.3mm to the right of the midline. A needle was inserted to a depth of 3mm and withdrawn 0.4mm to a depth of 2.6mm. Two &mu;l of GL261-luc or GL261-luc2 cells (107 cells/ml) were infused over the course of 3 minutes. The burrhole was closed with bonewax and the incision was sutured.
Following stereotactic implantation the bioluminescent cells are detectable from the day of implantation and the tumor can be analyzed using the 3D image reconstruction feature of the IVIS Spectrum instrument. Animals receive a subcutaneous injection of 150&mu;g luciferin /kg body weight 20 min prior to imaging. Tumor burden is quantified using mean tumor bioluminescence over time. Tumor-bearing mice were observed daily to assess morbidity and were euthanized when one or more of the following symptoms are present: lethargy, failure to ambulate, hunched posture, failure to groom, anorexia resulting in &gt;10% loss of weight. Tumors were evident in all of the animals on necropsy.

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Intracranial implantation of GL261 cells into C57BL/6 mice produces malignant gliomas that recapitulate many of the hallmarks of human glioblastoma multiforme. We used GL261 cells stably expressing luciferase to allow us to use in vivo imaging to follow tumor progression. The surgery and 3D in vivo imaging are demonstrated.

이후 3D로 Intracranial 주입 VIVO에서</emMurine Gliomas의> 발광 생물 이미징

The mouse glioma 261 (GL261) is recognized as an in vivo model system that recapitulates many of the features of human glioblastoma multiforme (GBM). The ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double circular scan (CDCS) that scans around the optic nerve head at 3.40 mm and 3.75 mm diameters. The double concentric circles are performed 6 times consecutively over 2 sec. The CDCS scan is saved with Doppler shift information from which flow can be calculated. The standard clinical protocol calls for 3 CDCS scans made with the OCT beam passing through the superonasal edge of the pupil and 3 CDCS scan through the inferonal pupil. This double-angle protocol ensures that acceptable Doppler angle is obtained on each retinal branch vessel in at least 1 scan. The CDCS scan data, a 3-dimensional volumetric OCT scan of the optic disc scan, and a color photograph of the optic disc are used together to obtain retinal blood flow measurement on an eye. We have developed a blood flow measurement software called "Doppler optical coherence tomography of retinal circulation" (DOCTORC). This semi-automated software is used to measure total retinal blood flow, vessel cross section area, and average blood velocity. The flow of each vessel is calculated from the Doppler shift in the vessel cross-sectional area and the Doppler angle between the vessel and the OCT beam. Total retinal blood flow measurement is summed from the veins around the optic disc. The results obtained at our Doppler OCT reading center showed good reproducibility between graders and methods (&lt;10%). Total retinal blood flow could be useful in the management of glaucoma, other retinal diseases, and retinal diseases. In glaucoma patients, OCT retinal blood flow measurement was highly correlated with visual field loss (R2&gt;0.57 with visual field pattern deviation). Doppler OCT is a new method to perform rapid, noncontact, and repeatable measurement of total retinal blood flow using widely available Fourier-domain OCT instrumentation. This new technology may improve the practicality of making these measurements in clinical studies and routine clinical practice.

Total retinal blood flow is measured by Doppler optical coherence tomography and semi-automated grading software.

망막 순환 도플러 광 결맞음 단층 촬영 장치

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

세분화 및 Murine 비만 모델에서 지방 볼륨 측정 X 선 계산된 Tomography를 사용하여

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating important information on the pathogenesis of lesion formation and the action of novel therapies. Use of atherosclerosis-prone mice, surgical methods of lesion induction, and dietary modification has dramatically improved understanding of the mechanisms that contribute to disease development and the potential of new treatments.
Classically, analysis of lesions is performed ex vivo using 2-dimensional histological techniques. This article describes application of optical projection tomography (OPT) to 3-dimensional quantitation of arterial lesions. As this technique is non-destructive, it can be used as an adjunct to standard histological and immunohistochemical analyses.
Neointimal lesions were induced by wire-insertion or ligation of the mouse femoral artery whilst atherosclerotic lesions were generated by administration of an atherogenic diet to apoE-deficient mice.
Lesions were examined using OPT imaging of autofluorescent emission followed by complementary histological and immunohistochemical analysis. OPT clearly distinguished lesions from the underlying vascular wall. Lesion size was calculated in 2-dimensional sections using planimetry, enabling calculation of lesion volume and maximal cross-sectional area. Data generated using OPT were consistent with measurements obtained using histology, confirming the accuracy of the technique and its potential as a complement (rather than alternative) to traditional methods of analysis.
This work demonstrates the potential of OPT for imaging atherosclerotic and neointimal lesions. It provides a rapid, much needed ex vivo technique for the routine 3-dimensional quantification of vascular remodelling.

Ex vivo analysis of arterial lesions from animal models of cardiovascular disease classically relies on histological and immunohistochemical techniques. These provide 2-dimensional measurements in 3-dimensional lesions. This manuscript describes the generation of arterial lesions for quantitative analysis in 3-dimensions using optical projection tomography.

생성 및 마우스의 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영을 사용하여

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent marker. Mouse models (brain tumor and arthritis) were used to evaluate the usefulness of this method. Saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tagged with CellVue Maroon (CVM) fluorophore were administered intravenously. Animals were then placed in the rotational holder (MARS) of the in vivo imaging system. Images were acquired in 10&#176; steps over 380&#176;. A rectangular&#160;region of interest (ROI) was placed across the full image width at the model disease site. Within the ROI, and for every image, mean fluorescence intensity was computed after background subtraction. In the mouse models studied, the labeled nanovesicles were taken up in both the orthotopic and transgenic brain tumors, and in the arthritic sites (toes and ankles). Curve analysis of the multi angle image ROIs determined the angle with the highest signal. Thus, the optimal angle for imaging each disease site was characterized. The MAROI method applied to imaging of fluorescent compounds is a noninvasive, economical, and precise tool for in vivo quantitative analysis of the disease states in the described mouse models.

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo quantitation of a fluorescent marker delivered by saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles. Employing mouse models of cancer and arthritis, we demonstrate how the MAROI signal curve analysis can be used for the precise mapping and biological characterization of disease processes.

형광 SAPC-DOPS Nanovesicles을 사용하여 뇌 종양 및 관절염의 생체 광학 이미징

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

결합<em&gt; 생체</em&gt; 광학 및 μCT 이미징 마우스의 정형 외과 임플란트 감염에 감염, 염증 및 뼈 해부학을 모니터링

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

나노 바디 및 항체 기반의 검증<em&gt; 생체</em마우스에서&gt; 종양 이종 이식 NIRF 이미징 실험 사용<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 유동 세포 계측법 및 현미경

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real time images with a 15 &#181;m axial resolution at an effective tissue penetration of 2-3 mm. Within the OCT images the loss of signal intensity per millimeter of tissue penetration, the attenuation coefficient, is calculated. The attenuation coefficient is a tissue specific property, providing a quantitative parameter for tissue differentiation. 
Until now, renal mass treatment decisions have been made primarily on the basis of MRI and CT imaging characteristics, age and comorbidity. However these parameters and diagnostic methods lack the finesse to truly detect the malignant potential of a renal mass. A successful core biopsy or fine needle aspiration provides objective tumor differentiation with both sensitivity and specificity in the range of 95-100%. However, a non-diagnostic rate of 10-20% overall, and even up to 30% in SRMs, is to be expected, delaying the diagnostic process due to the frequent necessity for additional biopsy procedures. 
We aim to develop OCT into an optical biopsy, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication provides a detailed step-by-step approach for percutaneous, needle based, OCT of renal masses.

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is a high resolution imaging technique that allows analysis of tissue specific optical properties providing the means for tissue differentiation. We developed needle based OCT, providing real-time imaging combined with on-the-spot tumor differentiation. This publication describes a method for percutaneous, needle based OCT of renal masses.

비보, 경피적, 니들 기반, 신장 질량의 빛 간섭 단층 촬영에서

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...