없음입니다.

<ol>
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A.E.에 의해 지원 되었다 연구 보조금 (PZ00P3_154709), "SNSF Ambizione 점수" 프로그램에서 "Forschungsfond, Förderung strategischer Projekte" 바젤의 대학, Stiftungsinfektionskrankheiten 바젤, 및 Bangeter Rhyner 재단. L.K. 기술 대학의 그라츠, 오스트리아의 교부 금에 의해 지원 되었다. : J.L. 시스템 생물학 프로그램 (9번째 전화)에서 SystemsX.ch 이니셔티브의 iPhD 친교에 의해 지원을 인정합니다.

사전 및 사후 예방 접종 독감 바이러스 titers 특정 항 체의 정량화 백신 연구에 필요한 중요 한 도구입니다. Seroprotection 같은 바이러스 감염에 대 한 보호의 대리 측정에 따라 (> 1시 40분) 또는 혈 (4-fold titer 증가), 예방 접종 전략 수9에 최적화 된. 제공 된 프로토콜을 사용 하 여 확인할 수 있습니다: (i) 특정 바이러스, 및 (ii) 항 체 titers 관심의 바이러스에 대 한 hemagglutination 잠재력.
수정 및 문제 해결:
이 프로토콜은 WHO 표준12를 기반으로 합니다. 우리는 혈 청 준비 (단계 5 참조)에 대 한 PCR 튜브 스트립을 사용 하 여 프로토콜을 수정. 이 수정 도움을 크게 줄이고 작업 분석 결과의 처리량을 증가. 또한, 우리 비용 효과적인 초과 항 적정 단계에서 1 4 항 원 양을 감소. 세럼 (10 µ L)의 낮은 금액 샘플 금액은 제한 하는 경우에 특히 도움이 됩니다 RDE 치료에 사용할 수 있습니다 (예를 들어, 마우스 세라). 다시 적정 및 긍정적인 제어 적혈구의 노화를 모니터링 하 고 적절 한 내부 통제 역할을 항 체 측정 판에 포함 됩니다.
또한, 우리는 좋은 시각적 판독에 대 한 적혈구 응고의 최적의 크기를 설정 하려면 WHO 표준12 에 비해 다른 적혈구 농도 사용. 이것을 보장 하기 위해 분석 결과 전에 적혈구 농도 검사 하는 것이 좋습니다. 비록, 우리는 최적화 되지이 부분 우리의 프로토콜에 흡 광도 측정 OD 또는 셀 계산 등 방법은 사용할 수 있습니다.
경우는 RDE 완전히 비활성화 하지 Rbc 수 desialylated 및 역방향 하 양성 우물 hemagglutination은 실 온에서 측정. 비록 우리는 결코이 문제를 관찰,이 경우에, 우리는 것이 좋습니다 RDE 활동은 4 ° c.에 훨씬 낮은 이후 4 ° C에서이 수행 그러나, 4 ° C에서이 분석 결과 수행 느립니다.
기술의 한계:
이 분석 결과의 몇 가지 중요 한 측면은 다음 사항을 포함: 흥미롭게도,는 hemagglutination 강력 하 게 적혈구 (예를 들어, 터키 또는 기니 피그 RBC)의 특정 종류에 따라 달라 집니다. 최적의 종류 혈액의 특정 바이러스 스트레인 평가 되 고 분석 결과 통해 혈액의 동일한 종류를 사용 해야 하기 전에 테스트 되어야 합니다. 바이러스 사이 분 유도 약간 새로운 바이러스19,20의 면역학 이점을 생성 수 있습니다, 하지만이 낮은 특이성 때문 진단 관점에서 몇 가지 문제를 발생할 수 있습니다. 따라서, 유사한 바이러스 간의 교차 반응 한다 신중 하 게 해결 되며 연구에서 설명. 특정 종에서 적혈구를 선택, 분의 크기를 다소 낮출 수 있습니다.
기존의 방법에 관하여 의미:
이 높게 재현 하 고 신뢰할 수 있는 결과 제공 하 기초가 튼튼한 표준 방법입니다. 안녕만 HA 줄기 루프를 바인딩할 하 고 그로 인하여 중화 연관 항 체를 감지 하는 반면 ELISA 등 다른 기술을 비 중화 항 체를 검색할 수 있습니다.
프로토콜 내에서 중요 한 단계:
난다 저 해제 및 바인딩을 비활성화 하는 RDE로 혈 청 치료를 포함 하는 가장 중요 한 단계는 바이러스의 하 하. 그들은 시간이 지남에 따라 나이 또 다른 중요 한 단계는 적혈구의 용 혈에 대 한 컨트롤입니다.
미래의 응용 프로그램:
Hemagglutination 잠재적으로 다른 바이러스에 대 한 프로토콜을 사용할 수 있습니다. 비록 우리가에 인간 세라 샘플 여기 결과 나타났습니다, 분석 결과 또한 항 체 titers 마우스 세라 또는 세포 배양 자극된 B-세포 (데이터 표시 되지 않음)와 표면에 뜨는 측정 하 사용할 수 있습니다. 요약 하자면,는 백신 유발 항 체 titers의 신속 하 고 재현성 평가 수 있습니다.

인플루엔자 바이러스 감염 상당한 질병 률, 사망률, 및 높은 의료 비용1,2,,34와 연결 됩니다. 특히, 신생아, 임산부, 노인과 만성 질병을 가진 환자는 더 심한 임상 결과 대 한 위험이 있습니다. 따라서, 순환 하는 인플루엔자 바이러스 변종에 대 한 예방 접종이 고 위험도 인구에 있는 질병의 부담을 줄이기 위하여 기본 척도 이다. 예방 접종, 예를 들면, 보호 임계값 이상 인플루엔자-특정 항 체 후 개별 면역 반응의 증가 감염의 개별 위험과 일반 인구 내에서 바이러스 성 전송의 가능성을 감소 5. 백신 유도 체액 면역 반응의 다른 인구에 다양 한 연령층에 걸쳐 자세한 이해는 중요 한 임상 질문6,,78 대답 하는 핵심 요소 , 9와 같은: 왜 일부 노인 환자 이전 예방 접종에도 불구 하 고 감염을 해야 합니까? "좋은"와 "충분 한" 백신 유도 보호는 무엇입니까? 얼마나 자주 백신 보호 titers 도달 immunosuppressed 환자에 게 적용 한다? 가장 효과적인 복용량 무엇입니까? 예방 접종 후 항 체 titers에 소설 보조의 영향 이란 무엇입니까? 백신 관련 항 체 생산의 측정 이러한 중요 한 질문에 대답 하 고 예방 접종 결과 개선 하는 데 도움이 있습니다.
바이러스 특정 항 체 titers의 정량화는 다양 한 면역 방법으로 수행할 수 있습니다. 이 고체 상10 또는 비드 기반 ELISA11 분석 실험,이 분석 결과12및 중화 분석 실험13포함 됩니다. ELISA 기반 메서드는 상대적으로 많은 양의 다양 한 항 원에 대 한 혈 청 샘플의 검사를 수 있습니다. 또한, 병원 체 관련 면역 글로불린 (Ig) M와 IgG 수 수 별도로 탐험. 항 원, 예를 들면, 선형 아미노산 시퀀스 또는 바이러스와 같은 입자의 특성 항 체의 바인딩을 영향을 미칠 수 있습니다, 비록 잠재적인 epitopes의 스펙트럼은 매우 광범위 하 고 여부 항 체에 정보를 제공 하지 않습니다. 응답 기능 관련이 있다.
반면, 중화 시험 기능 세포의 감염을 억제 하는 항 체의 잠재력을 결정 하 고 따라서 잠재적인 중립화를 반영 한다. 그러나,이 방법은 매우 노동 집약 이다, 라인 세포 및 바이러스, 라이브 특정의 경작 그리고 그러므로, 그것은 소모, 비싼, 특별 한 장비가 필요 합니다 필요 합니다.
이 문서에서는 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 세계 보건 기구 WHO 기반이 프로토콜12 는 단계별 설명. Hemagglutination은 적혈구의 교착을 선도 하는 일부 바이러스의 특성 효과 이다. 환자 혈 청이이 효과의 저해 중화 효과 반영 하는 억제 항 체 농도의 측정을 허용 한다.
우리는 동시에 여러 샘플의 효율적 처리 및 필요한 시간을 줄일 수 있도록 WHO 프로토콜의 워크플로 수정 했습니다. 첫 번째 프로토콜 특정 인플루엔자 항 원의 교착 잠재력의 결정을 설명합니다. 이 과정에서 두 번째 프로토콜에 대 한 올바른 인플루엔자 항 원 농도 결정 됩니다. 이 부분은 혈액의 각 배치 뿐 아니라 모든 새로운 바이러스 성 항 원, 반복 한다.
두 번째 프로토콜 인플루엔자-특정 항 체 titers 결정을 설명합니다. 그러나 제시 프로토콜 인플루엔자 바이러스와 인간 혈 청 샘플의 수사를 위해 최적화 된, 그것은 또한 적용할 수 마우스 혈 청 샘플 또는 셀 문화 supernatants 자극된 면역 세포, 예를 들어, 바이러스 특정 B 세포에서. 절대 측정된 titers로 결과 확인할 수 있습니다. 많은 백신 연구,은 titers 및 95% 신뢰 구간에는 각 특정 인구 표시 됩니다. 해석, seroprotection 또는 혈에 대 한 특정 바이러스 인구의 민감성을 설명 하기 위해 자주 사용 됩니다. Seroprotection 이상 4-fold titer 두 시간 점 (가장 일반적으로 사전 예방 접종과 30 일 사후 예방 접종에 사용 되는) 사이 seroprotective titers 달성과 증가의 ≥1:40, 그리고 혈 titer로 정의 됩니다.
두 프로토콜은 사용 하기 쉽게 하 고 그들은 연구 질문의 광범위 한 범위에 적용할 수 있습니다. 특히, 안정적이 고 신속 하 게 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다 hemagglutination, 홍 역, polyomaviruses, 유행 성 이하선염, 또는 풍 진14,15,16 등에 대 한 용량을 가진 다른 다양 한 바이러스에 대 한 항 체 titers .

<table style="border-collapse:collapse;width:716pt" width="955">
	<colgroup>
		<col style="width:263pt" width="351" />
		<col style="width:100pt" width="133" />
		<col style="width:85pt" width="113" />
		<col style="width:269pt" width="358" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl67" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">25 ml Disposable Multichannel Pipette Reservoirs</td>
			<td class="xl67" style="width:100pt" width="133">Integra</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">4312</td>
			<td class="xl68" style="width:269pt" width="358"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">8-well PCR tubes</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Brand GMBH</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">781332</td>
			<td class="xl66">For serum aliquots</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">96-well microtiter plate, U-shaped</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">TPP</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">92097</td>
			<td class="xl66">For HI assay when using mammalian RBCs</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">96-well microtiter plate, V-shaped</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Corning Costar</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">3897</td>
			<td class="xl66">For HI assay when using avian RBCs</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Aqua ad iniect. Steril</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Bichsel AG</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:85pt" width="113">1000004</td>
			<td class="xl66">For preparing influenza antigen and cholera filtrate solutions</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Chicken RBC (10%)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Cedarlane</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">CLC8800</td>
			<td class="xl66">10% suspension of chicken red blood cells in Alsever&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Cholera filtrate</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">C8772</td>
			<td class="xl66">Used as receptor destroying enzyme (RDE)</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Dulbecco&#39;s PBS</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">D8537</td>
			<td class="xl66">For diluting the serum samples, RBCs and antigens</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Eppendorf Multichannel pipette, 12-channel, 10-100 &#181;l</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">Z683949</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Eppendorf Multichannel pipette, 8-channel, 10-100 &#181;l</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">Z683930</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Guinea Pig RBC (10%)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Cedarlane</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">CLC1800</td>
			<td class="xl66">10% suspension of guinea pig red blood cells in Alsever&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">14/134&#160;</td>
			<td class="xl66">Used as positive control at the HI assay</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Influenza Anti-A/Switzerland/9715293/2013-like HA serum&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl67" style="width:85pt" width="113">14/272</td>
			<td class="xl66">Used as positive control at the HI assay</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/178</td>
			<td class="xl66">Used as positive control at the HI assay</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/254&#160;</td>
			<td class="xl66">Used as positive control at the HI assay</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza Anti-B/Massachusetts/02/2012 HA serum&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/182</td>
			<td class="xl66">Used as positive control at the HI assay</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Influenza antigen A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181)&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">12/168</td>
			<td class="xl66">Inactivated, partially purified A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181)&#160; virus (ca. 46&#181;gHA/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Influenza antigen A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">14/254</td>
			<td class="xl66">Inactivated, partially purified A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) virus (ca. 55&#181;gHA/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Influenza antigen A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/112</td>
			<td class="xl66">Inactivated, partially purified A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) virus (ca. 74&#181;gHA/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza antigen B/Brisbane/60/2008</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/234</td>
			<td class="xl66">Inactivated, partially purified B/Brisbane/60/2008 virus (ca. 42&#181;gHA/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Influenza antigen B/Massachusetts/02/2012</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">NIBSC</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">13/134</td>
			<td class="xl66">Inactivated, partially purified B/Massachusetts/02/2012 virus (ca. 35&#181;gHA/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Serum-Tubes</td>
			<td class="xl75" style="width:100pt" width="133">S-Monovette, Sardstedt</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">01.1601.100</td>
			<td class="xl66">For serum extraction with clotting activator</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:263pt;height:31.5pt" width="351">Single Donor Human RBC, Type 0</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Innovative Research</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">IPLA-WB3&#160;</td>
			<td class="xl66">Suspension of single donor human red blood cells in Alsever&#39;s solution (ca. 26%)</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Turkey RBC (10%)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Cedarlane</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113">CLC1180</td>
			<td class="xl66">10% suspension of turkey red blood cells in Alsever&#39;s solution</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:263pt;height:15.75pt" width="351">Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td class="xl63" style="width:100pt" width="133">Gibco</td>
			<td class="xl63" style="width:85pt" width="113"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an optimized hemagglutination inhibition (hi) assay to quantify influenza-specific antibody titers

항 체 titers 인플루엔자와 다른 병원 체에 대 한 혈 청 학적인 보호에 대 한 대리 표식으로 일반적으로 사용 됩니다. 사전 및 사후 예방 접종 항 체 생산의 상세한 지식은 백신 유도 면역을 이해 해야 합니다. 이 문서에서는 인플루엔자-특정 항 체 titers를 확인 하는 신뢰할 수 있는 포인트 프로토콜을 설명 합니다. 첫 번째 프로토콜 hemagglutination, 두 번째 프로토콜 (hemagglutination 분석 결과, 분석 결과 HA)에 후속 사용 농도 표준화에 필요한 항 원 금액을 지정 하는 방법을 설명 합니다. 두 번째 프로토콜 인간의 혈 청 또는 셀 문화 supernatants (hemagglutination 저해 분석 결과,이 분석 결과)의 직렬 희석을 사용 하 여 다른 바이러스 성 긴장에 대 한 인플루엔자-특정 항 체 titers의 정량화를 설명 합니다.
적용 예를 들어, 우리는 trivalent inactivated 인플루엔자 백신을 접종 하는 건강 한 코 호트의 항 체 응답을 보여줍니다. 또한, 다른 인플루엔자 바이러스 사이의 분 표시 되 고 동물 적혈구 (Rbc)의 다른 종류를 사용 하 여 분을 최소화 하는 방법을 설명 했다. 토론 하이라이트 장점과 제시 분석의 단점 및 어떻게 인플루엔자-특정 항 체 titers 결정 백신 관련 면역의 이해를 향상 시킬 수 있습니다.

인플루엔자 A H3N2에 대 한 사전 및 사후 예방 접종 유도 항 체 응답 백신 유발 항 체 응답 26 건강 한 자원 봉사자는 사 3가 소 단위 독감 백신을 접종, 포함 된 인플루엔자 A/H1N1/캘리포니아/2009 A/H3N2/텍사스/2012, B/매사 추세 츠/02/2012는 2014 이전에 평가 되었다 / 2015 독감 시즌입니다. 그림 6 2 백신 수령인의 대표적인 예를 보여 줍니다. 흥미롭게도, 그 특정 독감 시즌 동안 A/H3N2/텍사스/2012는 순환 하지, 그리고 시즌 다소 다른 바이러스 성 긴장을 포함 하는 대신: A/H3N2/스위스/2013. A/H3N2/텍사스/2012 A/H3N2/스위스/2013의 바이러스 성 조류 97% 순서 신원 표시 하 고 단지 11 아미노산 ( 표 4참조), 그 위치는 그림 7에 강조 표시 됩니다에서 다릅니다.
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55833/55833fig8.jpg"> 그림 7 : A/H3N2 인플루엔자 긴장의 조류 비교. 우리는 바이러스 성 긴장 A/텍사스/50/2012 그리고 A/스위스/9715293/2013의 조류를 비교. 우리 유행 성 감기 긴장 A/빅토리아/361/201118, 텍사스 긴장과 95% 98% 시퀀스 id를 보여주는의 매우 유사한 조류의 결정 구조를 사용 하는 이러한 긴장의 아무 조류 크리스탈 구조 때문 스위스 긴장 시퀀스 id입니다. 텍사스와 스위스 긴장 다른 아미노산 위치는 강조 표시 됩니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55833/55833fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
A/H3N2/스위스/2013와 A/H3N2/텍사스/2012 바이러스 변종에 대 한 cross-reactive 면역 반응을 관찰합니다. 안녕하세요 titers에 대 한 인플루엔자 A/H3N2/스위스/2013은 titers 및 유도 seroprotection (그림 8A)에 비해 인플루엔자 A/H3N2/텍사스/2012 (그림 8B) 훨씬 낮은 했다.
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55833/55833fig9.jpg"> 그림 8 : 건강 한 기증자의은 항 체 titers. 항 체-titers (GMTs) 사전 및 사후 예방 접종 25 건강 한 기증자의 2 개의 다른 항을 사용 하 여 결정 됩니다. A/H3N2/스위스/2013 (A)과 A/H3N2/텍사스/2012 (B)의 평균 titers 표시 됩니다. 예방 접종으로 면역 반응은 증가 titers (d7-d60), 예방 접종 후 접종 (d0) 전에 GMTs에 비해 서 관찰할 수 있습니다. 예방 접종 후 180 일에 GMTs 다시 감소. 메모의 유일한 A/H3N2/텍사스/2012 (백신에 있던) 보호 titers 도달 합니다. 바는 titers 나타내고 수염 95% 신뢰 간격을 표시 합니다. 파선은 seroprotection 임계값을 나타냅니다. Seroprotected 사람들의 % (titer > 1시 40분)는 그래프에 표시 됩니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55833/55833fig9large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
예방 접종 후 항 체 titers A/H3N2/텍사스/2012에 대 한 증가 대부분 과목; A/H3N2/스위스/2013 스트레인 백신에 존재 했지만, A/H3N2/스위스/2013에 대 한 titer 뿐만 아니라 일부 과목에서 증가 했다. 그림 9 는 0.745 선형 회귀 모델에 대 한의 R2 와 함께 모든 시간 포인트를 통해 두 titers 사이의 상관 관계를 보여 줍니다. 하나의 기대 A/H3N2/스위스/2013에 대 한 항 체 응답 유도 덜 강력한 했다.
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55833/55833fig10.jpg"> 그림 9 : A/H3N2 인플루엔자 긴장 사이 cross-reaction. 모든 개별 시간 포인트 A/H3N2/텍사스 titers 해당 A/H3N2/스위스 titers에 그려집니다. 선형 회귀 모델 0.745의 R2 를 보여 줍니다. <a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55833/55833fig10large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
Hemagglutination 잠재적인 혈액 사용의 종류에 따라 바이러스 성 조류 다른 종 의존 잠재력 적혈구 hemagglutinate을 보여 줍니다. 이 종 의존 효과 hemagglutination 저해 분석 결과도 영향을 미칩니다. 측정 된 안티 바이러스 titers의 특이성을 개선 하기 위해, 우리 5 바이러스 성 항 원에 대 한 적혈구의 가장 적합 한 유형을 평가 (인플루엔자 B/브리즈번/60/2008와 B/매사 추세 츠/02/2012, 인플루엔자 A/H1N1/캘리포니아/2009, A/H3N2/텍사스/2012, 및 A / H3N2/Switzerland/2013) 최대 hemagglutination 뿐만 아니라 낮은 분을 달성 하기 위해. 우리 사용 긍정적인 제어 세라 국립 연구소에서 생물 표준 및 통제 (NIBSC)에 대 한 각 항 원에 대 한 이러한 분석 실험.
인플루엔자 B B/매사 추세 츠/02/2012 유도 항 체 응답 B/브리즈번/60/2008에 대 한 보호를 제공 하지 않습니다을 관찰 수 우리. 반면, B/브리즈번/60/2008에 대 한 항 체는 다른 적혈구 ( 표 3참조)에 걸쳐 4-fold 낮은 titer에서 B/매사 추세 츠/02/2012에 대 한 분을 보여주었다. 관심의 기니 돼지 혈액 않았다 하지 제대로 hemagglutinate 혈액에서 설명한 A/H3N2/텍사스 떨어져 상대적 낮은 분으로 hemagglutinate 가능성이 높은 titers를 보여주는 최선을 인플루엔자 B. 터키와 / 스위스 변종입니다.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>터키</td>
			<td>기니 돼지</td>
			<td>치킨</td>
			<td>인간의 유형 O</td>
		</tr>
<tr>
<td>B/브리즈번</td>
			<td>1024</td>
			<td>-</td>
			<td>1024</td>
			<td>1024</td>
		</tr>
<tr>
<td>B/매사 추세 츠</td>
			<td>1024</td>
			<td>384</td>
			<td>768</td>
			<td>1024</td>
		</tr>
<tr>
<td>A/H3N2/스위스</td>
			<td>1024</td>
			<td>1024</td>
			<td>-</td>
			<td>1024</td>
		</tr>
<tr>
<td>A/H3N2/텍사스</td>
			<td>1024</td>
			<td>1024</td>
			<td>512</td>
			<td>1024</td>
		</tr>
<tr>
<td>A/H1N1/캘리포니아</td>
			<td>1024</td>
			<td>1024</td>
			<td>768</td>
			<td>768</td>
		</tr>
</tbody></table>표 3: 다른 종에 걸쳐 각각 인플루엔자 HA 항 원에 대 한 긍정적인 제어 titers.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>아니요</td>
			<td>A/H3N2/텍사스/2012 스트레인</td>
			<td>A/H3N2/스위스/2013 스트레인</td>
			<td>위치</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>아스파라긴 (N)</td>
			<td>알라닌 (A)</td>
			<td>128</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>알라닌 (A)</td>
			<td>떠들고 (S)</td>
			<td>138</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>이소류신 (I)</td>
			<td>Arginine (R)</td>
			<td>140</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>Arginine (R)</td>
			<td>글리신 (G)</td>
			<td>142</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>아스파라긴 (N)</td>
			<td>떠들고 (S)</td>
			<td>145</td>
		</tr>
<tr>
<td>6</td>
			<td>페닐알라닌 (F)</td>
			<td>떠들고 (S)</td>
			<td>159</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>글리신 (G)</td>
			<td>Valine (V)</td>
			<td>186</td>
		</tr>
<tr>
<td>8</td>
			<td>프롤린 (P)</td>
			<td>떠들고 (S)</td>
			<td>198</td>
		</tr>
<tr>
<td>9</td>
			<td>떠들고 (S)</td>
			<td>페닐알라닌 (F)</td>
			<td>219</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>아스파라긴 (N)</td>
			<td>Aspartate (D)</td>
			<td>225</td>
		</tr>
<tr>
<td>11 *</td>
			<td>리 (K)</td>
			<td>Arginine (R)</td>
			<td>326</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">*는 조류 cutted 잔류물 325에 있기 때문에 그림 8에서, 결정 구조에 표시 되지 않습니다.</td>
		</tr>
</tbody></table>표 4: A/H3N2/텍사스/2012 그리고 A/H3N2/스위스/2013 긴장 사이 조류의 다른 아미노산의 목록

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An Optimized Hemagglutination Inhibition HI Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

제시 프로토콜 인플루엔자 백신 받는 사람 혈 청 샘플에서 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 hemagglutination 억제 시험을 수행 하는 방법을 설명 합니다. 첫 번째 분석 결과 hemagglutination에 의해 최적의 바이러스 성 항 원 농도를 결정합니다. 두 번째 분석 결과 hemagglutination 저해 하 여 인플루엔자-특정 항 체 titers 단정.

인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과

Antibody titers are commonly used as surrogate markers for serological protection against influenza and other pathogens. Detailed knowledge of antibody ...

an-optimized-hemagglutination-inhibition-hi-assay-to-quantify

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

An Optimized Hemagglutination Inhibition (HI) Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

35.6K 조회수.  University of Basel. 제시 프로토콜 인플루엔자 백신 받는 사람 혈 청 샘플에서 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 hemagglutination 억제 시험을 수행 하는 방법을 설명 합니다. 첫 번째 분석 결과 hemagglutination에 의해 최적의 바이러스 성 항 원 농도를 결정합니다. 두 번째 분석 결과 hemagglutination 저해 하 여 인플루엔자-특정 항 체 titers 단정.

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Methods to Quantify Pharmacologically Induced Alterations in Motor Function in Human Incomplete SCI

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating disorder, which produces profound deficits in volitional motor control. Following medical stabilization, recovery from SCI typically involves long term rehabilitation. While recovery of walking ability is a primary goal in many patients early after injury, those with a motor incomplete SCI, indicating partial preservation of volitional control, may have the sufficient residual descending pathways necessary to attain this goal. However, despite physical interventions, motor impairments including weakness, and the manifestation of abnormal involuntary reflex activity, called spasticity or spasms, are thought to contribute to reduced walking recovery. Doctrinaire thought suggests that remediation of this abnormal motor reflexes associated with SCI will produce functional benefits to the patient. For example, physicians and therapists will provide specific pharmacological or physical interventions directed towards reducing spasticity or spasms, although there continues to be little empirical data suggesting that these strategies improve walking ability.
In the past few decades, accumulating data has suggested that specific neuromodulatory agents, including agents which mimic or facilitate the actions of the monoamines, including serotonin (5HT) and norepinephrine (NE), can initiate or augment walking behaviors in animal models of SCI. Interestingly, many of these agents, particularly 5HTergic agonists, can markedly increase spinal excitability, which in turn also increases reflex activity in these animals. Counterintuitive to traditional theories of recovery following human SCI, the empirical evidence from basic science experiments suggest that this reflex hyper excitability and generation of locomotor behaviors are driven in parallel by neuromodulatory inputs (5HT) and may be necessary for functional recovery following SCI. 
The application of this novel concept derived from basic scientific studies to promote recovery following human SCI would appear to be seamless, although the direct translation of the findings can be extremely challenging. Specifically, in the animal models, an implanted catheter facilitates delivery of very specific 5HT agonist compounds directly onto the spinal circuitry. The translation of this technique to humans is hindered by the lack of specific surgical techniques or available pharmacological agents directed towards 5HT receptor subtypes that are safe and effective for human clinical trials. However, oral administration of commonly available 5HTergic agents, such as selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs), may be a viable option to increase central 5HT concentrations in order to facilitate walking recovery in humans. Systematic quantification of how these SSRIs modulate human motor behaviors following SCI, with a specific focus on strength, reflexes, and the recovery of walking ability, are missing.
This video demonstration is a progressive attempt to systematically and quantitatively assess the modulation of reflex activity, volitional strength and ambulation following the acute oral administration of an SSRI in human SCI. Agents are applied on single days to assess the immediate effects on motor function in this patient population, with long-term studies involving repeated drug administration combined with intensive physical interventions.

This video demonstrates modulation of reflex activity, volitional strength and ambulation through clinical and quantitative assessments in individuals with motor incomplete SCI as a result of acute oral administration of a serotonin reuptake inhibitor (SSRI).

인간의 불완전 SCI에 모터 기능에 Pharmacologically 유도 수선을 계량하는 방법

Spinal cord injury (SCI) is a debilitating disorder, which produces profound deficits in volitional motor control. Following medical stabilization, ...

연구

의학

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

<em&gt; 생체 내</em혈관 투과율을 테스트하려면&gt; 분석

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

경쟁 손쥐 골수 이식 모델에서 기증자 세포 Engraftment를 확인하려면 수량 실시간 PCR을 사용하여

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

A Sensitive Method to Quantify Senescent Cancer Cells

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. Several cellular mechanisms, such as telomere shortening and abnormal expression of mitogenic oncogenes, have been shown to cause senescence. Senescence is not restricted to normal cells; cancer cells have also been reported to senesce.
	Chemotherapeutical drugs have been shown to induce senescence in cancer cells. However, it remains controversial whether senescence prevents or promotes tumorigenesis. As it might eventually be patient-specific, a rapid and sensitive method to assess senescence in cancer cell will soon be required.
	To this end, the standard &beta;-galactosidase assay, the currently used method, presents major drawbacks: it is time consuming and not sensitive. We propose here a flow cytometry-based assay to study senescence on live cells. This assay offers the advantage of being rapid, sensitive, and can be coupled to the immunolabeling of various cellular markers.

Whether senescence prevents or promotes tumorigenesis remains controversial. Since chemotherapeutical drugs can induce cancer cells to senesce, studying senescence is essential for proposing new therapies. However, the standard and broadly used &beta;-galactosidase assay presents major drawbacks. We propose here a rapid and sensitive flow cytometry-based assay to quantify senescence.

노화 암 세포를 정량화하는 민감한 방법

Human cells do not indefinitely proliferate. Upon external and/or intrinsic  cues, cells might die or enter a stable cell cycle arrest called senescence. ...

A High Throughput, Multiplexed and Targeted Proteomic CSF Assay to Quantify Neurodegenerative Biomarkers and Apolipoprotein E Isoforms Status

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be important in the development of future novel therapies. Often&#160;potential new biomarkers do not make it&#160;into the clinic&#160;due to limitations&#160;in their development and&#160;high costs.&#160;However,&#160;targeted proteomics using Multiple Reaction Monitoring Liquid Chromatography-tandem/Mass Spectrometry (MRM LC-MS/MS), specifically using triple quadrupole mass spectrometers, is one method that can be used to rapidly evaluate and validate biomarkers&#160;for clinical translation into diagnostic laboratories. Traditionally, this platform has been used extensively for measurement of small molecules&#160;in clinical laboratories, but it is the potential to analyze proteins, that makes it an attractive alternative to ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)-based methods. We describe here how targeted proteomics can be used to measure multiplexed markers of dementia, including the detection and quantitation of the known risk factor apolipoprotein E isoform 4 (ApoE4).
In order to make the assay suitable for translation, it is designed to be rapid, simple, highly specific and cost effective. To achieve this, every step in the development of the assay must be optimized for the individual proteins and tissues they are analyzed in. This method describes a typical workflow including various tips and tricks to developing a targeted proteomics MRM LC-MS/MS for translation.
The method development is optimized using custom synthesized versions of tryptic quantotypic peptides, which calibrate&#160;the MS for detection and then spiked into CSF to determine correct identification of the endogenous peptide in the chromatographic separation prior to analysis in the MS. To achieve absolute quantitation, stable isotope-labeled internal standard versions of the peptides with short amino acid sequence tags and containing a trypsin cleavage site, are included in the assay.

We describe a high-throughput, multiplex, and targeted proteomic cerebrospinal fluid (CSF) assay developed with potential for clinical translation. The test can quantitate potential markers and risk factors for neurodegeneration, such as the apolipoprotein E variants (E2, E3 and E4), and measure their allelic expression.

높은 처리량, 멀티 플렉스 및 대상 단백체 CSF 분석은 퇴행성 신경 바이오 마커 및 아포 지단백 E 이소 상태를 정량화하기

Many neurodegenerative diseases are&#160;still lacking effective treatments. Reliable biomarkers for identifying and classifying these diseases will be ...

Determination of the Relative Potency of an Anti-TNF Monoclonal Antibody (mAb) by Neutralizing TNF Using an In Vitro Bioanalytical Method

This protocol shows the measurement of the apoptotic activity neutralization of TNF&#945; in a mouse fibroblast cell model (WEHI 164) using an anti-TNF&#945; mAb. In addition, this protocol can be used to evaluate other anti-TNF&#945; molecules, such as fusion proteins. The cellular model employed here is sensitive to TNF&#945;-mediated apoptosis when an additional stress factor is induced in cell culture conditions (e.g., serum deprivation). This procedure exemplifies how to execute this analytical assay, highlighting the key operations relating to the sample preparation, cell dilution, apoptosis induction, and spectrophotometric measurements that are critical to ensure successful results. This protocol reveals the best-performance conditions relating to apoptosis induction and efficient signal recording, leading to low uncertainty values.

Determination of the Relative Potency of an Anti-TNF Monoclonal Antibody mAb by Neutralizing TNF Using an In Vitro Bioanalytical Method

A protocol for the determination of the relative anti-apoptotic activity of an anti-TNF&#945; mAb using a neutralization mechanism with WEHI 164 cells is presented here. This protocol is useful for comparing the neutralization strength of different molecules with the same biological functionality.

상대적인 힘의 안티-TNF 단 클론 항 체 (mAb) 중화 방 청 TNF는 시험관에서 생물 메서드를 사용 하 여의 결정

This protocol shows the measurement of the apoptotic activity neutralization of TNF&#945; in a mouse fibroblast cell model (WEHI 164) using an ...

An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ultimately lead to new knowledge concerning the causes of or new ways to inhibit or treat plasma extravasation. It is important that researchers have the proper tools, including the best methods available, for studying plasma extravasation. In this article, we describe a protocol, using the Evans blue dye method, for assessing plasma extravasation in the organs of FVBN mice. This protocol is intentionally simple, to as great a degree as possible, but provides high quality data. Evans blue dye has been chosen primarily because it is easy for the average laboratory to use. We have used this protocol to provide evidence and support for the hypothesis that the enzyme neprilysin may protect the vasculature against plasma extravasation. However, this protocol may be experimentally used and easily adapted for use in other strains of mice or in other species, in many different organs or tissues, for studies which may involve other factors that are important in understanding, preventing, or treating plasma extravasation. This protocol has been extensively optimized and modified from existing protocols, and combines reliability, ease of use, economy, and general availability of materials and equipment, making this protocol superior for the average laboratory to use in quantifying plasma extravasation from organs.

In this article, an economical, optimized, and simple protocol is described which uses the Evans blue dye method for assessing plasma extravasation in the organs of FVBN mice that can be adapted for use in other strains, species, and other organs or tissues.

최적화 된 에반스 블루 마우스에서 혈관 누출을 평가 하는 프로토콜

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening infections caused by P. vivax and ovale. However, PMQ has unwanted adverse effects that lead&#160;to acute hemolysis in patients with glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency. There is a need to develop simple and reliable methods for PMQ determination with the purpose of dosage monitoring. In early 2019, we have reported an UV-Vis and naked-eye based approach for PMQ colorimetric quantification. The detection was based on a Griess-like reaction between PMQ and anilines, which can generate colored azo products. The detection limit for direct measurement of PMQ in synthetic urine is in the nanomolar range. Moreover, this method has shown great potential for PMQ quantification from human serum samples at clinically relevant concentrations. In this protocol, we will describe the technical details regarding the syntheses and characterization of colored azo products, the reagent preparation, and the procedures for PMQ determination.

This protocol describes a novel colorimetric method for antimalarial primaquine (PMQ) detection in synthetic urines and human serums.

UV-Vis및 말라리아 방지 프리마퀸의 육안 측정을 위한 최적화된 Griess 반응

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening ...

A Simple Pit Assay Protocol to Visualize and Quantify Osteoclastic Resorption In Vitro

Mature osteoclasts are multinucleated cells that can degrade bone through the secretion of acids and enzymes. They play a crucial role in various diseases (e.g., osteoporosis and bone cancer) and are therefore important objects of research. In vitro, their activity can be analyzed by the formation of resorption pits. In this protocol, we describe a simple pit assay method using calcium phosphate (CaP) coated cell culture plates, which can be easily visualized and quantified. Osteoclast precursors derived from human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were cultured on the coated plates in the presence of osteoclastogenic stimuli. After 9 days of incubation, osteoclasts were fixed and stained for fluorescence imaging while the CaP coating was counterstained by calcein. To quantify the resorbed area, the CaP coating on plates was stained with 5% AgNO3 and visualized by brightfield imaging. The resorption pit area was quantified using ImageJ.

A Simple Pit Assay Protocol to Visualize and Quantify Osteoclastic Resorption In Vitro

Here, we present a simple and effective assay procedure for resorption pit assays using calcium phosphate coated cell culture plates.

시험관 내에서 파골세포 재흡수를 시각화하고 정량화하는 간단한 구덩이 분석 프로토콜

Mature osteoclasts are multinucleated cells that can degrade bone through the secretion of acids and enzymes. They play a crucial role in various diseases ...

In Vitro Application of a Wireless Sensor in Flexion-Extension Gap Balance of Unicompartmental Knee Arthroplasty

Unicompartmental knee arthroplasty (UKA) is an effective treatment for end-stage anteromedial osteoarthritis (AMOA). The key to UKA is the flexion-extension gap balance, which is closely related to postoperative complications such as bearing dislocation, bearing wear, and arthritis progression. The traditional gap balance assessment is performed by indirectly sensing the tension of the medial collateral ligament by a gap gauge. It relies on the surgeon's feel and experience, which is imprecise and difficult for beginners. To accurately assess the flexion-extension gap balance of UKA, we developed a wireless sensor combination consisting of a metal base, a pressure sensor, and a cushion block. After osteotomy, the insertion of a wireless sensor combination allows the real-time measurement of intra-articular pressure. It accurately quantifies the flexion-extension gap balance parameters to guide further femur grinding and tibia osteotomy, to improve the accuracy of gap balance. We conducted an in vitro experiment with the wireless sensor combination. the results showed that there was a difference of 11.3 N after applying the traditional method of flexion-extension gap balance performed by an experienced expert.

In Vitro Application of a Wireless Sensor in Flexion-Extension Gap Balance of Unicompartmental Knee Arthroplasty

This protocol presents a cadaveric study of a wireless sensor used in medial unicompartmental knee arthroplasty. The protocol includes the installation of an angle measuring device, standardized Oxford unicompartmental knee arthroplasty osteotomy, preliminary assessment of flexion-extension balance, and application of the sensor to measure flexion-extension gap pressure.