Name: organotypic hippocampal slice cultures as a model to study neuroprotection and invasiveness of tumor cells
Uploaded: 2017-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells at JoVE.com

저자는 크리스틴 Auste 그의 우수한 기술 지원에 대 한 비디오 녹화 및 종합 Ghadban 그녀의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. Urszula Grabiec 루 프로그램 FKZ 29/18에 의해 지원 되었다.

에 의해 유럽 공동체 위원회 지침 2010/63/EU 유럽 의회의 승인으로 동물 실험 윤리 정책 및 신경 과학 연구에 있는 동물의 사용에 정책에 따라 수행 했다 고 과학적 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 유럽 연합의 위원회.
 1. 준비의 악기와 문화 미디어 <ol><li>OHSC의 준비에 대 한 사용의 다음 세트: 2 개의 작은 위, 두 곡선된 핀셋, 좋은 팁, 한 트위터 (크기 11, 하나 크기 15의 2), 3 개의 블레이드 세 메스 홀더, 필터 종이 라운드 (직경: 35mm), 한 천, 한 면도날 하나 수정 파스퇴르 피 펫, 그리고 한 파스퇴르 피 펫 팁 없이 수정. ( 그림 1) 사용 전에 압력솥에 모든 재료를 소독.</li>
	<li>한 천 5 g의 무게와 증류수 100 mL 물에 용 해. 압력솥에 210.8 kPa에서 121.7 ° C에서 20 분에 대 한 솔루션을 소독. 60 mm 페 트리 요리를 멸 균 유리 피 펫을 사용 하 여 3 mL 액체 agar 솔루션 배포, 5 h에 대 한 강화, 오염을 방지 하 고 더 사용 될 때까지 4 ° C에서 저장 플라스틱 파라핀 영화 커버 수 있습니다. 한 블록 조각화 절차 동안 두뇌를 안정화 하는 데 필요한.</li>
	<li>미디어 <ol><li>준비 매체 (pH 7.35)의 게 200 mL로 구성 된 198 mL 최소한의 필수 매체 (MEM)와 2 mL L-글루타민 솔루션 (최종 농도 2 m m). 미디어 준비의 날에는 솔루션을 준비 하 고 4에서 저장 ° c.</li>
		<li>준비 49 mL MEM, 25 mL 행 크 스의 구성 된 문화 매체의 100 mL &#39; 균형 소금 솔루션 (HBSS), 25 mL (v/v) 정상 말 혈 청 (NHS), L-글루타민 솔루션 1 mL (최종 농도 2 m m), 100 µ g 인슐린, 혈당 120 mg, 10 mg 스 10000 U 페니실린과 800 µ g 비타민 C로 이전 보고. 따뜻한 매체 (37 ° C), pH 값 pH 7.4와 살 균 필터 (0.2 µ m 기 공 크기)을 조정. 매체를 변경 하기 전에 모든 둘째 날 (워밍업, pH 조정, 등.) 하는 절차를 반복 합니다. 1 주일 동안 매체를 가장 사용 하는 방법 4에 저장 될 때 ° c.</li>
	</ol></li> <li>준비 중간 두뇌를 저장 한 35 mm 페 트리 접시를 채워. 작업 영역에서 냉각 팩에 조직을 수집 하기 위해 두 개의 빈 접시를 놓습니다.</li>
</ol> 2. 준비 하 고는 Vibratome와 썰 <ol><li>사용 두뇌 4-5 일 또는 7-9 일 오래 된 쥐에서 Stoppini 동부 표준시 알에 따르면 OHSC 준비에 대 한 오래 된 쥐. 4 후 동물의 잘린, 제거 피부 두개골에서가 위.</li>
	<li>구멍 매그넘으로 좋은 시저의 블레이드를 소개 하 고 꼬리 (다시) rostral (프론트) 축 따라 절단 하 여 두개골을 엽니다. 두 게가 위가 각각 왼쪽과 오른쪽 귀 쪽으로 포인트를 첫 번째 수직 인하 (&#34; T-절 개 &#34;).</li>
	<li>주목 하지 뇌 손상 미세 집게와 신중 하 게 두개골을 엽니다. 메스 (블레이드 크기 11)를 사용 하 여 정면 극과 소 뇌의 가장 rostral 부분을 잘라.</li>
	<li>주걱의 두뇌를 제거 하 고 신중 하 게 준비 중간 ( 그림 2)으로 가득 페 트리 접시에 배치에 의해 의미 합니다. 두뇌 견본 홀더를 놓고 의료 cyanoacrylate 접착제로 그것을 수정 합니다. 한 천 조각을 사용 하 여 기계적인 안정화 보장.</li>
	<li>350 µ m에 가로 조직 해 부 슬라이딩 vibratome를 사용 하 여 두꺼운 OHSC.</li>
	<li>광학 쌍 안 현미경을 사용 하 여 분할 영역을 평가 합니다. 낮은 품질의 OHSC를 즉시 삭제 합니다. 만 그 조각 그대로 cytoarchitecture 해 마의 중간 부분에서 고립 된 데는 것이 중요 하다 (그림 3 및 4 참조)는 지 느 러 미 및 복 부 해 마 사이.</li>
	<li>Hippocampal 지역과 entorhinal 외피 (둥근 블레이드 크기 15; 메스를 사용 하 여 분리 그림 3)입니다. Perforant 통로 entorhinal 외피를 유지 해야 합니다.</li>
	<li>6 ~ 8 OHSC 각 뇌에서 얻을 수 있습니다. 한 셀 문화 삽입 (기 공 크기 0.4 µ m)에 2-3 조각을 전송 하 고 잘 당 1 mL 문화 매체를 포함 하는 6-잘 문화 접시의 한 잘에.</li>
	<li>5% (v/v) 공동 2 완벽 하 게 습도 분위기에서 35 ° C에서 6-잘 요리를 품 어 및 변경 세포 배양 매체 마다 둘째 날. 
	참고: 6 일간에 체 외에서 (div)에서 실험을 실시 합니다. 조각화 절차와 관련 된 염증 성 반응 하루 6 사라집니다. 이 단계에서 microglial 셀 다시 없는 형태 표시 고 시 냅 스 연결 성숙 했다.</li>
</ol> 3. 조직의 품질의 평가 <ol><li>고정, 라벨 및 OHSC 서에서 degenerating 신경의 시각화 <ol><li>실험을 수행한 후에 5 µ g/mL propidium 요오드 화물 (PI) 이전에 고정, 2 h와 OHSC를 품 어 degenerating 신경 세포의 핵을 얼룩 순서. 
		주의: PI는 의심 되는 발암 물질, 장갑 등 개인 보호 장비 (PPE)를 항상 착용.</li>
		<li>0.1 M 인산 버퍼 (pH 7.4)와 OHSC를 세척 하 고 24 헤 대 한 paraformaldehyde (PFA)의 4% (v/v) 솔루션으로 해결 
		주의: PFA 의심과 독성 발암 물질 이다. 증기 두건에서 작업 및 보호구 착용.</li>
		<li>1 mL PBS와 삽입에는 OHSC를 세척 하 고 찡그린 브러시 막에서 분할 영역을 사용 하 여.</li>
		<li>24-잘 접시 ( 그림 5)에 IB 4 염료와 OHSC 라벨.</li>
	</ol></li> <li>붙일 사용 하 여 종양 내 습 실험의 전도 라는 단일 셀 <ol><li>실험의 시작에 앞서 24 h 형광 염료 Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl를 사용 하 여 종양 세포를 라벨 에스테 르 (CFDA SE).</li>
		<li>분리 Neubauer 챔버를 사용 하 여 종양 세포를 계산 하 고.</li>
		<li>매체에 셀 서 스 펜 션의 10 µ L 원하는 휴대폰 번호 (일반적으로 50000 또는 100000 세포) 포함 되도록 resuspend.</li>
		<li>슬라이스 문화에 세포 현 탁 액의 10 µ L을 적용 하 고 3 일에 대 한 침략을 세포 허용.</li>
		<li>실험의 끝에, 4% (v/v) PFA 24 h를 사용 하 여 슬라이스 문화를 수정 하 고는 cytoarchitecture를 시각화 하기 위해 또 다른 24 h에 대 한 PI와 공동 문화를 라벨. 
		주의: PFA 의심과 독성 발암 물질 이다. 증기 두건에서 작업 및 보호구 착용.</li>
		<li>설치 미디어를 사용 하 여 추가 분석을 위해 커버 슬립에 공동 문화를 탑재.</li>
	</ol></li></ol> 4. OHSC 실험의 평가 는 OHSC confocal 레이저 스캐닝 현미경 (CLSM) 분석. PI의 감지 표시, 신경 세포를 변질 또는 파장 λ의 단색 광을 사용 하는 cytoarchitecture를 표시 하는 PI = 543 nm 및 방출 밴드 파장 λ에 대 한 필터를 통과 = 585-615 nm. CFDA 레이블이 종양 세포 또는 IB 4 microglia는 여기 파장 λ의 사용 = 488 nm. 두 실험 종류에 대 한 z-스택 2 µ m 두께 광 조각으로 기록 하 고 평가 대 한 사용.

저자 공개할 게 없다

현재 프로토콜 OHSC의 준비를 설명합니다. 이 모델은 내장 기능 및 뇌 조직의 반응의 생리 및 병리학 자극의 적용 후 테스트 수 있습니다. Electrophysiological 매개 변수 분석, 외 OHSC lesioned 수와 모든 세포 유형에 손상의 효과 확인할 수 있습니다. 다른 물질 및 lesioning 프로세스 또는 대 식 세포와 림프 톨의 부재에서 치유의 자세한 설명과 함께 치료 가능 하다.
The most 중요 한 단계는 성공적인 준비와 자란 있습니다: 1) 무 균 조건 하에서 작동, 2) 준비 미디어 제대로, pH, 온도 고려 하 고 3) OHSC의 처리 동안에 필요한 수동 손 재주를 개발.
OHSC의 특성
신경 세포의 변형된 형태 때문에 그들의 vivo에서-조직 같이, 조각 organotypic 불린다. 지층 pyramidale 및 지층 granulosum, 피라미드 뿔 ammonis (CA1, CA2, CA3)와 DG 세분화 된 셀으로 구성 된 OHSC에 의하여 이루어져 있다. 해 마의 일부는 매우 주문 하 고 구심 섬유 예측 겹치지 않는 방법으로 명료한 층에서 종료. Entorhinal 외피 (perforant 통로), DG, 사이 efferences CA3 및 CA1 신경 준비 후 그대로 유지 하 고 그 비보를 기능적으로 유사한 행동. 이전 표시, 수지상 나무의 개발 OHSC에 세분화 된 세포의 시 냅 스 형성 및 네트워크 활동 시간 일치 컨트롤14,,1516에서 얻은 심각한 슬라이스를 비교할 수 있습니다.
Oligodendrocytes 고 이다 OHSC에는 빛과 전자 현미경에 의해 연구 되었습니다. Oligodendrocytes는 organotypic 공간 분포, 다른 형태학 하위17,18를 포함 하 여 표시 합니다. 또한, 축 삭 될 첫 번째 이주 체 외동안 myelinated. 일부 저자 가정 이다의 레이어 특정 지역화는 슬라이스 문화에서 결 석 하 고는 이다는 완전 성숙에 체 외에도달 하지 않습니다 믿습니다. 이 측면 수 없습니다 완전히 답변, 이다의 모든 활성화 단계에 대 한 특정 마커는 아직1,,1920실종 이후.
준비 후 첫 3 일 이내에 microglial 셀 마이그레이션 및 확산 반응 하 고 그들은 함께 이다 glial 흉터를 형성 하는 어디 조각 표면에 축적. 모든 셀 매우 활성화 상태에 있을 것 같다. 그러나, 내부 레이어 OHSC 고 3 및 6 div 사이에서 microglial 셀 작은 세포 시체 및 모든 방향21에서 긴 분기 잘 세포질 돌출 특징 없는 형태, 그들의 amoeboid 형태 변경 ,22.
유사한 식 및 글루타민 산 염 수용 체의 성인 조직 및 OHSC2,23에 보고 되었습니다. 시 냅 스 전류, 미니어처 시 냅 스 전류 및 전류 OHSC (7, 14 및 21 div)에 크게 다른 출생 후 일 14 또는 15에 각각 급성 준비에 비해 GABAergic의 주파수의 주파수. 대조적으로, glutamatergic 신호 주파수 급성 조각15보다 OHSC에서 높은 수준 이다.
다른 준비 방법의 비교
배아 및 조기 산 후 조직의 준비 매우 쉽습니다, 좋은 세포 생존 율 시험관에 때문에. 그것은이 초기 단계에서 신경 세포는 여전히 철새와 활성을 잃게 organotypic 조직 조각1의 것을 고려해 야 합니다. 생 후 7-9 일 후 쥐에 어떤 시 냅 스 연결 설정 됩니다. 다음 2-3 주에 동안 생체 외에서 시 냅 스13성숙. 제시 모델의 장점 중 하나는 준비와 동물 (7-9 일)1,,1424의 나이 높은 소성 동안 기계적인 외상에 그것의 저항입니다. 그것은 해야 합니다 언급 슬라이스는 기계적 조작에 매우 민감한 악기에 의해. 슬라이스도 잘못 각도 신경 섬유 참가자 또는 퇴행 성 신경 죽음에 대 한 책임의 경사 절단을 발생할 수 있습니다. 장기 목적을 위해 성인 동물에서 슬라이스 문화의 준비 도전 이며 아직 설립 하지. 이러한 OHSC 소성1의 손실로 인해 아마도 준비 직후 대규모 변성을 보여줍니다. 그럼에도 불구 하 고, 거기 이다 강한 성인 조각 작업에 대 한 허용 하는 준비 방법에 대 한 필요.
몇 가지 준비 방법에 대 한 갓 삭제 조직 조직 헬기를 사용 하 여 격리 된 해 마를 300-400 µ m의 두께로 슬라이스는. 이 빠른 메서드는 광범위 한 조직 손상에 자주 발생할 수 있습니다. OHSC의 품질에 대 한 중요 한 요소는 그들의 마지막 두께 그들은 체 외에보관 되는 시간입니다. 300-400 µ m 두꺼운 조각에 대 한 생존 률이 높은 최상의 결과 달성 되었습니다. 두꺼운 조각에서 상위 계층 확산 제한1인 문화에 타락 한. 과학 질문, 따라 OHSC 준비 후 직접 또는 문화에 몇 일 후에 사용 됩니다. 따라서, 수 년에 걸쳐 여러 재배 기술, 설치 되었다 롤러 튜브 기술1,13 또는 정적 슬라이스 기법4.
다른 준비 방법에서 우리는 vibratome 함께 인터페이스 기술을 사용 하 여 날짜를 OHSC를 준비 하기 위한 가장 정확 하 고 가장 파괴적인 절차는 납득 된다. 이 방법은 다공성 멤브레인을 사용 하 여 더 향상 됩니다. OHSC 그들의 3 차원 구조를 유지, 개월, 형태학 상으로 그리고 기능적으로 그대로 유지 하 고 재배 기간25동안 시각적으로 평가 될 수 있습니다.
응용 프로그램
OHSC 야생 유형 및 유전자 변형 동물14,26에서 준비 될 수 있다. 그들은 달에 대 한 생존 하 고 장기 실험12,13에 대 한 옵션을 제공. OHSC 생리, 약리, 형태학 및 발달 질문14,27 에서 해결 하는 데 사용 됩니다 매우 표준예: neurotherapeutics 또는 줄기 세포 치료26,,2728의 만성 응용 프로그램 화 된 조건. 신경 연결 또는 프로세스의 개발 측면의 조사와 관련 된 시 냅 시스 전송, 시 냅 스가 소성, 피라미드 세포의 수지상 등뼈의 만성 간 질에의 영향 또는 모든 신생 대표 추가 필드 29,30,,3132.
조미료, 기본 흥분 성의 신경 전달 물질, 그리고 ionotropic 글루타민 산 염 수용 체는 중앙에 역할 excitotoxicity. Excitotoxic 병 변 뇌졸중, Alzheimer 질병, HIV neurotoxicity, 외상 성 뇌 손상 및 복구 메커니즘14,24같은 신경 질환 중 발생합니다. 글루타민 산 염 수용 체 주 작동 근 NMDA의 응용 프로그램, α-amino-3-hydroxy-5-methy-4-isoxazolepropionic 산 (AMPA), 또는 kainic 산 OHSC 모방 선택적 및 지역 특정 신경 세포 죽음26,28,33 ,34. 또한, 신경 부상을 예를 들어, microglial 마이그레이션 및 OHSC에 먹어서 glial 세포 반응 분석된3,35되었습니다 이전. Microglia 병 변 중의 영향 bisphosphonate clodronate36에 의해이 세포의 약리 고갈에 의해 예언 될 수 있다.
더 중요 한 응용 프로그램 OHSC를 사용 하 여 종양의 조사 조건 vivo에서 흉내 낸 발생 합니다. Spheroids glioma 셀 라인에 의해 형성 된 조각 문화, 그 종37겹치는 현상이 침입 할 수 있었다. 사용 되는 셀의 확산 침투 무늬37 vivo에서관찰 된 패턴을 닮았다. 또한, 기본 세포종 spheroids OHSC로 이식 그들의 침입을 잠재적인 보관 및 줄기 세포 생체 외에서몇 일38이상의 문자. 따라서, 모델 관찰을 침입 패턴 및 신경 조직 및37,38 vivo에서관찰 하는 그에 해당 하는 종양 세포 사이 상호 작용의 수 있습니다. 콜라겐 또는 젤에 비해 기반된 모델 (예:)39, OHSC 사용 하 여 뇌에 전이 및 종양 침입에 분석에 대 한 더 많은 도움이 보인다. 신경 그리고 glial 세포 유형 및 기질를 포함 하 여 생리 적 환경 그대로 남아 있습니다.
또한, OHSC 단일 종양 세포 및 제어 조건 하에서 뇌 조직 간의 직접적인 상호 작용을 공부 하 고 있습니다. 예를 들어 microglial 셀 침공35에 대 한 기본 구조를 형성 하 여 두뇌를 입력 하는 종양 세포의 기능 향상을 발견 했다.
또한, 내 습 프로세스에 임시 및 영구 셀룰러 변경의 효과 분석할 수 있습니다. 안정적인 표현의 glioma 세포에 전이 관련 된 결 장 암 유전자 1 (MACC1) 증가 확산 및 후속 침공40와 연관 되었다. 세포종 세포 라인에 셀 강성 과도 변경 셀 라인41의 침략 적 속성 직접 상관 했다. OHSC와 종양 세포 공동 문화 따라서 잠재적으로 사용할 수 있습니다 약물 검사, 임상 관찰, 그리고 매우 제어 하 고 표준화 된 조건 하에서 종양 내 습 모델 및 이미지 복제에 대 한.
1 차 셀 문화 연구, 후 OHSC는 vivo에서 조건을 좀 더 복잡 한 시스템에서 실험을 수행 하기 위한 논리 다음 선택. 뇌 조각에 대 한 관심의 또 다른 분야에서 비보를 테스트 하기 전에 잠재적인 치료 약의 심사입니다. 뇌 조각 모니터링 및 관찰자 제어와 동물 수술 없이 부상의 흉내 낸 수 있습니다. 8 OHSC 최대를 얻을 수 있다 고 필요한 동물의 수는 크게 감소. 그것은 비슷한 설정 하지만 다른 같은 동물 또는 여러 조건에서 결과 얻을 수 있습니다. 따라서, OHSC 병 변 기간, 2 차 손상 및 종양 확산의 개발 하는 동안 다른 형태학, 세포, 분자 변화를 관찰 하는 강력한 도구 이다.

OHSC는 공부 microglia1, 이다 및 신경 세포의 생리 및 병 적인 속성을 잘 특징이 생체 외에서 모델입니다. Extracellular 환경을 제어 하 고 다양 한 자극 후 셀룰러 및 형태학 상 변화를 모니터링 하는 것이 쉽습니다. Hippocampal 신경의 조직 및 그들의 연결 준비2,3후 잘 보존 되어 있습니다. 여러 장점 중 OHSC 동물 수술 없이 뇌 상해와 종양 내 습의 모니터링 하실 수 있습니다. 6 ~ 8 OHSC 단일 설치류 두뇌에서 얻어질 수 있다. 크게 동물의 수를 줄이고 같은 동물에 여러 약물 농도, 유전자 조작 또는 다른 병 변 모델을 테스트 허용 OHSC 따라서 도움이 될. 분할 영역 기반 분석 실험에서 실험 조건 정확 하 게 제어할 수 있습니다. 또한, 보조 손해 같은 병 적인 상태의 시간 종속 개발 시간 경과 영상에 의해 쉽게 모니터링할 수 있습니다.
Stoppini 그 외 여러분 에 의해 원래 설립 주어진된 프로토콜에서 4, 준비 단계는 설명 하 고 적절 한 조각의 선택에 대 한 중요 한 형태학 랜드마크 강조 표시 됩니다. 생 후 7-9 일 쥐 또는 산 후 4-5 일 쥐의 준비를 좋습니다. 이 기간에서 OHSC 기계적 충격 및 신경 회로의 개편을 위한 높은 잠재력에 강력한 저항을 표시. 반면, 배아 또는 성인 쥐에서 준비 급속 하 게 그들의 구조를 변경 재배 하는 동안 그들의 organotypic 형태를 잃고 고 따라서 덜 공부 하는 기초 연구5,6 장기 프로세스에 적합 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. OHSC의 생존 율에 대 한 또 다른 중요 한 포인트 확산 및 따라서 영양소 공급은 제한 된12,,1314조각 자체의 두께입니다.

<table><tbody><tr><td>6-Well</td><td>Falcon</td><td>35-3046</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fluka</td><td>5040</td><td></td></tr><tr><td>Autoclav</td><td>Systec</td><td>DX-45</td><td></td></tr><tr><td>CFDA</td><td>&amp;nbsp;Thermo Fisher</td><td>V12883</td><td></td></tr><tr><td>Confocal laser scanning microscope (CLSM) LSM700</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eagle&amp;acute;s Minimal Essential Medium&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>32360-034</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescein labeled Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1101</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Merk</td><td>1083371000</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;acute;s Balanced Salt Solution (with Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt; and Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;)</td><td>Invitrogen</td><td>24020-133</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;acute;s Balanced Salt Solution (without Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;&amp;nbsp; and Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;)</td><td>Invitrogen</td><td>14170-138</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>L-ascorbic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>LN229</td><td>Cell-Lines-Service</td><td>300363</td><td></td></tr><tr><td>Medical cyanoacrylate glue (Histoacryl glue)</td><td>B.Braun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Millicell Culture Inserts</td><td>Millipore</td><td>PICMORG50</td><td></td></tr><tr><td>NMDA N-methyl-D-aspartic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>Normal Horse Seum</td><td>Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes (all sizes)</td><td>Greiner</td><td>627160/664160/628160</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>toxic</td></tr><tr><td>Propidium iodid (PI)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81845-25MG</td><td>toxic</td></tr><tr><td>U138</td><td>ATCC</td><td>HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>Leica VT 1200</td><td></td></tr></tbody></table>

organotypic hippocampal slice cultures as a model to study neuroprotection and invasiveness of tumor cells

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC), 신경 그리고 glial 세포의 형태학 적 및 기능적 특성은 잘 보존 된. 이 모델은 neuroprotection, 뉴런, 신경 네트워크 또는 종양 침입에 electrophysiological 실험 연구를 포함 하는 다양 한 연구 질문을 해결 하는 데 적합 합니다. Hippocampal 건축과 multisynaptic 회로에 신경 활동은 잘 보존 OHSC, 비록 조각화 절차 자체가 처음 병 변 및 glial 흉터의 형성에 이르게. 흉터 형성 아마도 기계적 특성 및 작은 분자, 등의 방산 동작을 변경합니다. 분할 영역 동물 수술, 그리고 다양 한 두뇌 파생 된 셀 형식, 즉 이다, microglia 및 생리 적 및 병 적인 모두에서 뉴런 간의 상호 작용에 대 한 연구 없이 뇌 손상 후 시간 종속 프로세스의 모니터링 허용 조건입니다. 이 모델의 상반 된 측면 혈 및 면역 혈의 부재 이다. 신경 손상의 진행 하는 동안 혈액 재생 중요 한 역할에서에서 면역 세포를 마이그레이션. 그 셀은 조각에, 문화에 본질적인 프로세스 외부 간섭 없이 관찰 될 수 있습니다. 또한, OHSC에서 중간 외부 환경의 구성 정확 하 게 제어 됩니다. 이 방법의 더 이점은 표준 준비에 비해 희생된 동물의 낮은 수입니다. 몇몇 OHSC는 가능한 한 동물에서 여러 치료와 동시 연구를 만드는 하나의 동물에서 얻을 수 있습니다. 이러한 이유로, OHSC는 조직 손상 후 또는 종양 침공 기간 동안 새로운 보호 치료제의 효과 분석 하는 데 적합.
제시 하는 프로토콜 여기 매우 재현할 수 생성을 허용 하는 OHSC의 준비 방법에 설명 합니다, 그리고 잘 neuroprotection 또는 종양 침입 연구 처럼 실험적인 연구의 다양 한 사용할 수 있는 분할 영역을 보존.

Neuroprotection 연구: 신경 손상, PI 긍정적인 핵과 IB4 가 이랑 (DG)의 립 세포 층 (GCL)의 모든 3 광학 섹션에서 microglia 계산 했다 긍정적인의 수를 결정 합니다. 종양 내 습 실험, 스택의 최대 강도 z 프로젝션 계산 침략의 다른 침입 패턴 (그림 6)를 시각화 하는 측정으로 종양 세포에 의해 커버 된 지역에 대 한 사용 되었습니다.
치료 컨트롤 OHSC (CTL)에서 신경 잘 보존 되 남아 있었다. DG의 GCL에 거의 아무 PI 긍정적인 신경 핵 (그림 5A) 관찰 되었다. 분자 층에서 microglial 셀의 대부분 ramified 했다. 만 년 DG의 GCL에 거의 IB4 긍정적인 microglial 셀 (그림 5A) 감지 했다. 50 µ M N-메 틸-D-aspartic 산 (NMDA)는 강한 부 화 후 PI 긍정적인 신경 핵 (그림 5B)의 수가 증가 하 고 제어 OHSC에 비해 IB4 긍정적인 microglial 셀 (그림 5B) 검색 되었습니다. 낮은 품질의 미리 손상 된 OHSC amoeboid microglia 및 제어 조건 하에서 DG (그림 5C)에서 PI 긍정적인 세포의 더 높은 숫자로 식별할 수 있습니다. NMDA와 사전 손상 된 조각 치료 DG cytoarchitecture와 매우 높은 수가 hilum CA3 영역 (그림 5D)를 확산 하는 PI 긍정적인 죽음 세포의 파괴에 지도 했다.
종양 침입 연구: 조각 (그림 6A) 두 세포종 세포 라인 U138의 50000 셀으로 치료 했다 및 LN229 (그림 6B) 3 일 동안. 두 경우 모두 조각 문화의 cytoarchitecture 그대로 남아 있고 뿔 ammonis와는 DG 유지 했다. 또한, 둘 다 세포 라인 명백한 침략 행동을 보였다. U138 셀 라운드, 명확 하 게 뚜렷한 종양 (그림 6A), 형성 하는 동안 LN229 셀 단일 종양 spheroids 내 종양 네트워크 건설과 자주 구별 하기 단단 했다. 슬라이스 문화에서 종양의 크기에서 볼 때, LN229 세포에 대 한 높은 침해 U138 세포와 비교할 때 발견 되었습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig1.jpg"> 
그림 1: 해 부 도구 및 재료. 조각 문화의 준비, 해 부 도구와 재료의 적당 한 세트가 그림과 같이 필요 합니다. 세트는 포함 3 scalpels 작은 교환 블레이드, 한 주걱, 두 좋은 위, 3 집게, 한 정상적인 파스퇴르 피 펫, 팁 없이 한 파스퇴르 피 펫, 천, 접시, 필터 종이, 냉각 팩와 준비 매체, 의료 cyanoacrylate 접착제입니다. 해 부 도구 사용 전에 압력가 이어야 하며 메 마른 분위기에 그것을 유지 하는 플라스틱 패키지에 배치. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55359/55359fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig2.jpg"> 
그림 2: 쥐 두뇌에서 hippocampal 형성 위치. 검은 점선으로 표시 된 hippocampal 형성, 대뇌 피 질과 시상으로 둘러싸인 양자 구조 이다. 해 마는 측면 뇌 실의 일시적인 경적으로 bulges. 해 마는 다른 내부 뿔 ammonis (해 마 적절 한)와 이랑 (또는 근 막이), 한 lamina 압 연으로 구성 된 bilaminar 이다. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55359/55359fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig3v2.jpg"> 
그림 3: 쥐 OHSC의 시각화. OHSC를 포함 하는 전체 뇌 슬라이스 조직 품질을 평가 하는 눈에 의해 시각 이다. 분할 영역 (A, B) 냉각된 준비 중간으로 가득 페 트리 접시에 보관 됩니다. 뇌 조각의 확대입니다. 그대로 해 (HC) 마 그리고 entorhinal 외피 왼쪽 및 이미지 (C)의 오른쪽에 표시 됩니다. OHSC 두뇌의 나머지에서 분리 된다. DG, 뿔 ammonis 하위 CA1 및 CA3 hilus 지역 (HI), entorhinal 외피 (EC)와 분자 층 (ML)의 립 세포 층 (GCL)는 명확 하 게 구별할 수 (D). C, D: 눈금 막대 = 4 m m.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig4.jpg"> 
그림 4: OHSC에서 종속 변경 시간. 직접 준비, 후 microglia 이다 시작 glial 흉터를 형성 하기 위하여. 1-3 일에서 생체 외에서 (div) gliosis 및 부 종 형성에서 관찰 된다. Hippocampal 형성 및 DG의 층 리 더 이상 표시 됩니다. 세포 수준에서 5 div에 OHSC 활성화 된 셀의 수에 있는 감소를 표시 합니다. 6 div에 거의 없는 부 종 있으면 하 고 슬라이스는 얇은, 내장 신경 회로에 포함 된 지역 살아. OHSC는 실험에 대 한 지금 사용할 수 있습니다. 눈금 막대 = 1 m m. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55359/55359fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig5.jpg"> 
그림 5: CLSM 조직 품질 평가. CLSM 밝혀, 좋은 신경 보존 비 lesioned 제어 OHSC (CTL)에서 관찰 됩니다. 거의 아무 PI 긍정적인 신경 핵 (빨간색)와 몇 가지 IB4 긍정적인 microglial 셀만 (녹색) DG (A)의 립 세포 층 (GCL)에서 발견 된다. 달리 비 lesioned OHSC, PI와 IB4 긍정적인 세포의 수에 있는 강한 증가 NMDA-lesioned OHSC (B)의 GCL에 표시 됩니다. DG, 활성화 된 microglial 세포와 사전 손상 된 OHSC (C, D)에 PI 긍정적인 핵의 많은 수의 형태를 note 하십시오. 바 = 50 µ M. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55359/55359fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55359/55359fig6.jpg"> 
그림 6: CLSM에 의해 종양의 시각화. (빨간색)에 PI 적용 고정 라벨 후 OHSC, cytoarchitecture 동안 CFDA (녹색)에 조각에 침입 종양 세포를 보여 줍니다. U138 셀의 침공 과정 3 일 침공 시간 후 시각 이다. 단일 종양 spheroids명확 하 게 구별할 수 (A)는. 반면, 세포종 세포 라인 LN229 (B) 종양 네트워크 형성. 바 = 400 µ m. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55359/55359fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC) 아주 잘 vivo에서 상황을 시뮬레이션 하는 체 외에서 모델을 나타냅니다. 여기 설명 vibratome 기반 소설 물질의 신경 가능성 또는 종양 세포의 생물학 행동 평가에 사용 하기 위해 고품질 슬라이스를 얻기 위해 프로토콜을 깔 끔 히 개선 합니다.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 연구 Neuroprotection 및 종양 세포의 침입을 모델로

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

organotypic-hippocampal-slice-cultures-as-model-to-study

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.8K 조회수.  Martin Luther University Halle-Wittenberg. Organotypic hippocampal 슬라이스 문화 (OHSC) 아주 잘 vivo에서 상황을 시뮬레이션 하는 체 외에서 모델을 나타냅니다. 여기 설명 vibratome 기반 소설 물질의 신경 가능성 또는 종양 세포의 생물학 행동 평가에 사용 하기 위해 고품질 슬라이스를 얻기 위해 프로토콜을 깔 끔 히 개선 합니다.

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Organotypic Slice Cultures for Studies of Postnatal Neurogenesis

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis in the rodent brain using the organotypic slice culture technique. This method maintains the characteristic topographical morphology of the hippocampus while allowing direct application of pharmacological agents to the developing hippocampal dentate gyrus. Additionally, slice cultures can be maintained for up to 4 weeks and thus, allow one to study the maturation process of newborn granule neurons. Slice cultures allow for efficient pharmacological manipulation of hippocampal slices while excluding complex variables such as uncertainties related to the deep anatomic location of the hippocampus as well as the blood brain barrier. For these reasons, we sought to optimize organotypic slice cultures specifically for postnatal neurogenesis research.

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis using the organotypic slice culture technique. This method allows for in vitro manipulation of adult neurogenesis and allows for the direct application of pharmacological agents to the cultured hippocampus.

출생 후 신경 발생의 연구 Organotypic 슬라이스 문화

Here we describe a technique for studying hippocampal postnatal neurogenesis in the rodent brain using the organotypic slice culture technique. This ...

연구

발생학

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of the hippocampus is relatively preserved 1. The organotypic culture system allows for the examination of neuronal, astrocytic and microglial effects, but as an ex vivo preparation, does not address effects of blood flow, or recruitment of peripheral inflammatory cells. To that end, this culture method is frequently used to examine excitotoxic and hypoxic injury to pyramidal neurons of the hippocampus, but has also been used to examine the inflammatory response. Herein we describe the methods for generating hippocampal slice cultures from postnatal rodent brain, administering toxic stimuli to induce neuronal injury, and assaying and quantifying hippocampal neuronal death.

The organoptypic hippocampal slice culture model is an in vitro model used to examine neuronal injury in a variety of paradigms. In this article, we describe the methods for generating slice cultures and quantifying neuronal injury.

의 연결을 부상을 검사에 대한 Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 모델

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

신경과학

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the strength of their connections after brief periods of strong activation. This phenomenon, known as long-term potentiation (LTP) can last for hours or days and has become the best candidate mechanism for learning and memory 2. In addition, the well defined anatomy and connectivity of the hippocampus 3 has made it a classical model system to study synaptic transmission and synaptic plasticity4.
As our understanding of the physiology of hippocampal synapses grew and molecular players became identified, a need to manipulate synaptic proteins became imperative. Organotypic hippocampal cultures offer the possibility for easy gene manipulation and precise pharmacological intervention but maintain synaptic organization that is critical to understanding synapse function in a more naturalistic context than routine culture dissociated neurons methods.
Here we present a method to prepare and culture hippocampal slices that can be easily adapted to other brain regions. This method allows easy access to the slices for genetic manipulation using different approaches like viral infection 5,6 or biolistics 7. In addition, slices can be easily recovered for biochemical assays 8, or transferred to microscopes for imaging 9 or electrophysiological experiments 10.

We describe a method to prepare organotypic hippocampal slices that can be easily adapted to other brain regions. Brain slices are laid on porous membranes and culture media is allowed to form an interface. This method preserves the gross architecture of the hippocampus for up to 2 weeks in culture.

Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in particular the role of the resident (stromal) cells. Studies in primary carcinomas demonstrate the influence of the microenvironment on metastasis, even on prognosis1,2. Especially the tumor associated macrophages (TAM) support migration, invasion and proliferation3. Interestingly, the major target sites of metastasis possess tissue-specific macrophages, such as Kupffer cells in the liver or microglia in the CNS. Moreover, the metastatic sites also possess other tissue-specific cells, like astrocytes. Recently, astrocytes were demonstrated to foster proliferation and persistence of cancer cells4,5. Therefore, functions of these tissue-specific cell types seem to be very important in the process of brain metastasis6,7.
Despite these observations, however, up to now there is no suitable in vivo/in vitro model available to directly visualize glial reactions during cerebral metastasis formation, in particular by bright field microscopy. Recent in vivo live imaging of carcinoma cells demonstrated their cerebral colonization behavior8. However, this method is very laborious, costly and technically complex. In addition, these kinds of animal experiments are restricted to small series and come with a substantial stress for the animals (by implantation of the glass plate, injection of tumor cells, repetitive anaesthesia and long-term fixation). Furthermore, in vivo imaging is thus far limited to the visualization of the carcinoma cells, whereas interactions with resident cells have not yet been illustrated. Finally, investigations of human carcinoma cells within immunocompetent animals are impossible8.
For these reasons, we established a coculture system consisting of an organotypic mouse brain slice and epithelial cells embedded in matrigel (3D cell sphere). The 3D carcinoma cell spheres were placed directly next to the brain slice edge in order to investigate the invasion of the neighboring brain tissue. This enables us to visualize morphological changes and interactions between the glial cells and carcinoma cells by fluorescence and even by bright field microscopy. After the coculture experiment, the brain tissue or the 3D cell spheroids can be collected and used for further molecular analyses (e.g. qRT-PCR, IHC, or immunoblot) as well as for investigations by confocal microscopy. This method can be applied to monitor the events within a living brain tissue for days without deleterious effects to the brain slices. The model also allows selective suppression and replacement of resident cells by cells from a donor tissue to determine the distinct impact of a given genotype. Finally, the coculture model is a practicable alternative to in vivo approaches when testing targeted pharmacological manipulations.

The organotypic brain slice coculture with carcinoma cells enables visualizing morphological changes by fluorescence as well as bright field (video) microscopy during the process of carcinoma cell invasion of brain tissue. This model system also allows for cell exchange and replenishment approaches and offers a wide variety of manipulations and analyses.

뇌의 Organotypic 슬라이스와 암 세포의 3 차원 회전 타원체와 공 배양 시스템

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

의학

The Analysis of Neurovascular Remodeling in Entorhino-hippocampal Organotypic Slice Cultures

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional deficits in the affected patients. Despite intensive research efforts, there is still no effective treatment option available that reduces neuronal injury and protects neurons in the ischemic areas from delayed secondary death. Research in this area typically involves the use of elaborate and problematic animal models. Entorhino-hippocampal organotypic slice cultures challenged with oxygen and glucose deprivation (OGD) are established in&#160;vitro models which mimic cerebral ischemia. The novel aspect of this study is that changes of the brain blood vessels are studied in addition to neuronal changes and the reaction of both the neuronal compartment and the vascular compartment can be compared and correlated. The methods presented in this protocol substantially broaden the potential applications of the organotypic slice culture approach. The induction of OGD or hypoxia alone can be applied by rather simple means in organotypic slice cultures and leads to reliable and reproducible damage in the neural tissue. This is in stark contrast to the complicated and problematic animal experiments inducing stroke and ischemia in vivo. By broadening the analysis to include the study of the reaction of the vasculature could provide new ways on how to preserve and restore brain functions. The slice culture approach presented here might develop into an attractive and important tool for the study of ischemic brain injury and might be useful for testing potential therapeutic measures aimed at neuroprotection.

A protocol for entorhino-hippocampal organotypic slice cultures, which allows reproducing many aspects of ischemic brain injury, is presented. By studying changes of the neurovasculature in addition to changes in the neurons, this protocol is a versatile tool to study plastic changes in neural tissue after injury.

에서 신경 혈관 리모델링의 분석 Entorhino - 해마 Organotypic 슬라이스 문화

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional ...

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these tumors are not easily grown in standard culture conditions. Neurosphere cultures under serum-free conditions and orthotopic xenografts have expanded the range of tumors that can be maintained. However, many types of brain tumors remain difficult to propagate or study. This is particularly true for pediatric brain tumors such as pilocytic astrocytomas and medulloblastomas. This protocol describes a system that allows primary human brain tumors to be grown in culture. This quantitative assay can be used to investigate the effect of microenvironment on tumor growth, and to test new drug therapies. This protocol describes a system where fluorescently labeled brain tumor cells are grown on an organotypic brain slice from a juvenile mouse. The response of tumor cells to drug treatments can be studied in this assay, by analyzing changes in the number of cells on the slice over time. In addition, this system can address the nature of the microenvironment that normally fosters growth of brain tumors. This brain tumor organotypic slice co-culture assay provides a propitious system for testing new drugs on human tumor cells within a brain microenvironment.

Many types of human brain tumors are localized to specific regions within the brain and are difficult to grow in culture. This protocol addresses the role of tumor microenvironment and investigates new drug treatments by analyzing fluorescent primary brain tumor cells growing in an organotypic mouse brain slice. &#160;

약물 치료를 종양 미세 환경을 공부하고 대상에 대한 뇌종양 / Organotypic 슬라이스 공동 문화 시스템

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor invasion into surrounding brain parenchyma represents an enduring therapeutic challenge. To develop anti-migration therapies for GBM, model systems that provide a physiologically relevant background for controlled experimentation are essential. Here, we present a protocol for generating slice cultures from human GBM tissue obtained during surgical resection. These cultures allow for ex vivo experimentation without passaging through animal xenografts or single cell cultures. Further, we describe the use of time-lapse laser scanning confocal microscopy in conjunction with cell tracking to quantitatively study the migratory behavior of tumor cells and associated response to therapeutics. Slices are reproducibly generated within 90 min of surgical tissue acquisition. Retrovirally-mediated fluorescent cell labeling, confocal imaging, and tumor cell migration analyses are subsequently completed within two weeks of culture. We have successfully used these slice cultures to uncover genetic factors associated with increased migratory behavior in human GBM. Further, we have validated the model&#39;s ability to detect patient-specific variation in response to anti-migration therapies. Moving forward, human GBM slice cultures are an attractive platform for rapid ex vivo assessment of tumor sensitivity to therapeutic agents, in order to advance personalized neuro-oncologic therapy.

Current ex vivo models of glioblastoma (GBM) are not optimized for physiologically relevant study of human tumor invasion. Here, we present a protocol for generation and maintenance of organotypic slice cultures from fresh human GBM tissue. A description of time-lapse microscopy and quantitative cell migration analysis techniques is provided.

종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...

Purkinje Cell Survival in Organotypic Cerebellar Slice Cultures

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early postnatal development, cerebellar Purkinje cells are known to go through a vulnerable period, during which they undergo programmed cell death. Here, we provide a detailed protocol to perform mouse organotypic cerebellar slice culture during this critical time. The slices are further labeled to assess Purkinje cell survival and the efficacy of neuroprotective treatments. This method can be extremely valuable to screen for new neuroactive molecules.

Organotypic slice cultures are a powerful tool to study neurodevelopmental or degenerative/regenerative processes. Here, we describe a protocol that models the neurodevelopmental death of Purkinje cells in mouse cerebellar slice cultures. This method may benefit research in neuroprotective drug discovery.

오르가노티픽 소뇌 슬라이스 배양에서 푸르킨제 세포 생존

Organotypic slice culture is a powerful in vitro model that mimicks in vivo conditions more closely than dissociated primary cell cultures. In early ...

A Model of Epileptogenesis in Rhinal Cortex-Hippocampus Organotypic Slice Cultures

Organotypic slice cultures have been widely used to model brain disorders and are considered excellent platforms for evaluating a drug&#8217;s neuroprotective and therapeutic potential. Organotypic slices are prepared from explanted tissue and represent a complex multicellular ex vivo environment. They preserve the three-dimensional cytoarchitecture and local environment of brain cells, maintain the neuronal connectivity and the neuron-glia reciprocal interaction. Hippocampal organotypic slices are considered suitable to explore the basic mechanisms of epileptogenesis, but clinical research and animal models of epilepsy have suggested that the rhinal cortex, composed of perirhinal and entorhinal cortices, play a relevant role in seizure generation.
Here, we describe the preparation of rhinal cortex-hippocampus organotypic slices. Recordings of spontaneous activity from the CA3 area under perfusion with complete growth medium, at physiological temperature and in the absence of pharmacological manipulations, showed that these slices depict evolving epileptic-like events throughout time in culture. Increased cell death, through propidium iodide uptake assay, and gliosis, assessed with fluorescence-coupled immunohistochemistry, was also observed. The experimental approach presented highlights the value of rhinal cortex-hippocampus organotypic slice cultures as a platform to study the dynamics and progression of epileptogenesis and to screen potential therapeutic targets for this brain pathology.

Here, we describe the preparation of rhinal cortex-hippocampus organotypic slices. Under a gradual and controlled deprivation of serum, these slices depict evolving epileptic-like events and can be considered an ex vivo model of epileptogenesis. This system represents an excellent tool for monitoring the dynamics of spontaneous activity, as well as for assessing the progression of neuroinflammatory features throughout the course of epileptogenesis.

라인 피질-해마 오르가노티픽 슬라이스 배양에서 간질 발생의 모델

Organotypic slice cultures have been widely used to model brain disorders and are considered excellent platforms for evaluating a drug&#8217;s ...

Establishing a Brain Tumor in an Organotypic Slice Co-culture Model

Source: Chadwick, E. J. et al. <a href="https://app-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/53304">A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies.</a> J. Vis. Exp. (2015).
This video demonstrates the development of a 3D co-culture system. Mouse brain slices are placed on a membrane, and fluorescently labeled human brain tumor cells are allowed to grow on it. Once the system is ready, it is stained for imaging.

Organotypic Slice 공동 배양 모델에서 뇌종양 확립

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Plating the Slices onto the ...