Edith Suss-Toby is thanked for her assistance in the time-lapse microscopy and image analysis. Nofar Rada is thanked for the artistic work.

6 주 된 여성 C57BL / CJ 마우스에 네살 (할란은, 예루살렘, 이스라엘) 평가 및 실험 동물 관리 사양의 인증을위한 협회에 따르면 실험에 사용 하였다. 모든 실험 절차는 기관 동물 관리 및 사용위원회 농업 규정의 부에 따라 수행 하였다. 1. 수확 척수 <ol><li> 공동이 챔버를 사용하여 마우스를 안락사. 이 전단력에 의한 신경절 뿌리에 손상을 줄 수 있습니다로 자궁 전위를 피하십시오. 여기부터, 멸균 조건에서 모든 단계를 수행합니다. </li><li> 70 % 에탄올로 동물을 담근다. 이 단계는 살균 및 내부 기관을 통해 끌어으로부터 모발을 방지하는 것이 중요하다. </li><li> 에탄올 건조 마우스를 둡니다. 신경 독성에 의한 내부 장기와 에탄올의 접촉을 방지합니다. </li><li> 마우스를 건조시킨 후,하기 쉬운 위치에 핀을 사용하여 위치(면 아래로). 각각의 뒷다리와 앞다리의 핀을 배치합니다. </li><li> 집게를 사용하여 요추의 후방 목 craniocaudally 연장하는 중간 선 절개를합니다. 다음, 집게를 사용 양자 피부 플랩을 올리고 피하 조직을 노출. </li><li> craniocervical 접합에 도달 할 때까지 마우스 두개골을 만져. 무거운 집게를 사용하여 craniocervical 접합 (7 번째 경추)에서 자궁 근육과 척추를 잘라 동물, 수직 가위를 사용하여. 꼬리 쪽 척추를 해부 및 요추 수준 (뒷다리 레벨)에 도달 할 때까지 무거운 집게로 척추를 절제. </li><li> 무거운 집게를 사용하여 요추 수준 (5 번째 요추 척추)에서 완벽한 꼬리 절개를 수행합니다. </li><li> (직시) 마우스를 롤오버. DRG는 자궁을 하부 척추 레벨에서 추출되어 있지 않기 때문에 절개를 커버 할 필요는 없다. </li><li> 복부에 목의 중간 선에서 삭감의 철회피부는 측면 후 복막을 엽니 다 잘라. </li><li> 일괄 복막 내부의 내부 장기 (간, 비장, 췌장, 위, 그리고 소장)를 제거합니다. 다음으로, 복막 기관 (즉, 신장 및 췌장)를 제거합니다. 두개쪽으로는 가슴 벽을 엽니 다. </li><li> 집게 및 수술 블레이드를 사용하여, 양자 떨어져 척추에서 갈비의 5mm를 떠나, 갈비뼈를 잘라. 이때, 척추가 몸의 나머지로부터 분리된다. </li><li> 두 번 감기 (4 °에 C) 신선한 인산염 완충 생리 식염수 (PBS)으로 혈액의 척추을 씻으십시오. </li></ol> 2. 격리를 등쪽 뿌리 신경절 (DRG) <ol><li> 4 배의 배율을 가진 실체 현미경을 사용합니다. </li><li> 비 부착 비 흡수 플랫폼 (Telfa / 나일론)에 척추를 놓습니다. 같은 부교감-꼬리 방향에서 척추의 얼굴을 놓습니다. </li><li> 모든 척추 근육과 결합 조직을 제거합니다. 그들은 같은 신경 랜드 마크로서 리브를 사용하여척추를 둡니다. 리브는 수술 도구에서 신경을 보호합니다. DRG는 척추의 경추, 흉추, 요추 사이트에 있습니다. </li><li> 다음으로, 사용 가위는 중간 선에서 척추 몸을 절감하고 척추 신체의 부드러운 측면 후퇴하여 척수 및 DRG 뿌리를 노출합니다. </li><li> 늑간 공간에서, DRG에 리브 측면을 따라 내측 주변 신경을 따르십시오. </li><li> DRG를 확인합니다. 그것은 신경에 누워 &#39;기름에 튀긴 된 계란&#39;의 노른자처럼 보인다. </li><li> 신경절에 신경 말단의 2-3mm 떠나 DRG에 늑간 신경 말단을 잘라 후퇴에 사용합니다. 이 &quot;꼬리&quot;수확 후 제거됩니다. </li><li> 집게를 사용하여 신경을 잡고. DRG 본체 자체를 곤란하게하는 신경 세포 손상의 원인이됩니다 피해야한다. </li><li> 그 전방 및 후방 뿌리를 통해, 근위 척수에 첨부 파일을 따라 DRG 접근. </li><li> EF의를 당겨 DRG에 부드러운 철회를 적용ferent 신경 (늑간 신경 루터) 측면 및 DRG에 가까운 전방 및 후방 뿌리를 잘라. </li><li> 10 % 소 태아 혈청 (FCS)이 보충 된 신선한 빙냉 DMEM, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신, 1 % 비 필수 아미노산, 1 % 나트륨 피루 베이트로 가득 35mm 페트리 접시에서 DRG 유지. </li></ol> 페트리 접시 3. 주입 <ol><li> ECM의 응고를 방지하기 위해 사전 냉각 피펫 팁을 사용하여 얼음에 다음 단계를 수행합니다. </li><li> 2-4X 배율의 실체 현미경에서 종이 그리드에 35mm의 유리 바닥 배양 접시를 놓습니다. 중요 : 액체 상태의 ECM을 유지하기 위해 얼음 작업. 격자의 중심에서 성장 인자 제거 된 ECM을 1mm 직경의 스폿 (약 20 μL)을 만든다. </li><li> 직접 시각화 하에서, 접시의 바닥에 가까운 ECM 스폿의 중심에 DRG를 배치했다. 주 :이 프로토콜에서 사용하는 암 세포는 뮤린 췌장암 세포 (KPC) establis다른 곳에서 19 설명 된대로 KPC 쥐에서 갓 격리 된 종양 표본에서을 hed. </li><li> 융합 문화에서 수확 40,000 암 세포는 PBS로 한번 씻어, 얼음에 40 μL의 ECM에서 그들을 재현 탁. </li><li> DRG에서 각 방향에서 입체 측정 500 μm의를 사용하여 그리드의 직접 시각화에서. 이 시점에서 천천히 10,000 세포 / 10 ㎕의 ECM을 시드. 행렬의 행렬 또는 분리 자신의 확산을 방지 접시 바닥에 가까운 세포를 주입하는 2-10 μl의 예비 냉각 팁을 사용합니다. (그림 1). </li><li> 응고하기 10 ~ 15 분 동안 층류 후드 내에서 접시를 남겨주세요. ECM 건조하지 마십시오. </li><li> 천천히 플레이트의 측벽에 대하여, 앞서 언급 한 바와 같이 제조 된 DMEM을 추가한다. 전자 재료 (약 2 ㎖)에 충분한 매체를 추가합니다. </li><li> 37 ° C에서 다시 인큐베이터에 접시를 넣습니다. </li><li> 다음 날에 신선한 매체와 매체를 교체합니다. </li><li> 2 일마다 배지를 교체합니다. &lt;/ 리&gt; </ol> 4. 데이터 수집, 시간 경과 Videomicroscopy <ol><li> 이식 후 7 일째에, 시간 경과 현미경을위한 요리를 취할. 특정 세포로 인해 빠르게 마이그레이션 이전에 획득을 필요로 할 수 있습니다. </li><li> 라이브 이미징 동안 37 ± 0.1 ° C, 5 % CO 2의 평균 온도에서 폐쇄 된 환경에서 접시를 놓습니다. </li><li> 현미경에 배치 된 전하 결합 소자 카메라를 사용하여 셀을 기록한다. </li><li> 3 ~ 6 가지 세포에서 세포 운동을 수행하는 72 시간까지에 대한 디지털화 된 이미지마다 10 분 가져 가라. </li><li> 24 시간 후 배지를 교체합니다. </li><li> 데이터 수집 및 현미경 소프트웨어를 이용하여 간단한 분석을 수행한다. </li></ol> 5. 데이터 분석 <ol><li> 고급 응용 프로그램 (즉, 2D 또는 3D 세포 추적) (예 : Imaris 4D 등) 전문 소프트웨어를 사용하십시오. 참고 :이 소프트웨어에서 셀의 XY 좌표를 결정한다모든 움직임의 원점으로부터의 거리, 및 속도와 함께, 시간 지정. </li><li> 10 분 간격으로 연속적인 위치 사이의 주행 거리를 측정하여 평균 속도를 계산한다. 신경 돌기의 셀 전면의 거리이며 DRG 향한 세포의 방향성 움직임을 설명하는 전달 마이그레이션 지수 (FMI)를 계산한다. </li></ol>

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This research was supported by the ICRF Barbara S. Goodman endowed research career development award (2011-601-BGPC) and a grant from the US-Israel Binational Science Foundation. No other financial disclosures from the authors are to be made.

이 문서에서는 신경 틈새에서 암의 미세 환경의 DRG 모델을 되풀이되었습니다 체외 모델을 제시한다. 비디오는 같은 마우스에서 DRG, 그 추출 및 ECM의 마지막으로, 그 배양으로 해부학 적 랜드 마크를 인식에서 시작하여 모든 단계를 보여줍니다. 공동 배양 암세포 나란히 DRG 또한 제공된다. 체외에서 신경초 틈새 미세 환경 연구를위한이 모델은 필수적 만드는 문헌에 기재된 체외 신경초 침윤 연구를위한 다른 모델이 없습니다. 비디오에 제시된 프로토콜은 두 가지 중요한 단계가 있습니다. DRG 본체 (프로토콜의 단계 2.7)에 인접한 신경을 파악 첫째,주의를 기울여야합니다. 파악 또는 DRG 곤란하면 DRG에 돌이킬 수없는 기계적 또는 허혈성 손상이 성장하고 페트리 접시에 시드 때 돋아에서 방지 될 수 있습니다. 두번째 중요한 단계이다 주입전자 재료 내부의 페트리 접시에 암세포. 천천히 그리고 신중하게 세포를 배정하는 세포의 부동과 페트리 접시 위에 자신의 확산을 방지하는 것이 중요하다. 주입의 목적은 이동 (거리와 방향)을 추적하기 용이 한 곳에 세포 지역화한다. 확립되면 모델 미세는 가설 테스트에 따라 변경 될 수있다. 예를 들어, 페트리 접시 (예를 들어, 비 - 암세포)에 제 세포 배양 물을 첨가하여 다른 세포의 neurotropic 마이그레이션 기능을 비교하는 연구를 가능하게한다. 또한, 연구원은 서로 다른 조건 (즉, 온도, 습도, 수용성 요소 등)을 적용하고 세포의 침윤 능력에 미치는 영향을 검사 할 수 있습니다. DRG 모델은 암 세포와 신경 사이의 상호 작용을 연구하기 위해 연구를 가능하게한다. 또한 시간 경과 실험에 사용되는 형태의신경초 틈새 시장의 변화는 시간적인 방식으로 입증된다. 또한, neuroinvasive 세포는 다양한 치료를 실시 할 수 있고, 신경의 신경 돌기과의 상호 작용에 대한 영향이 평가 될 수있다. 아니 모든 세포주는 DRG 모델에 적합하다. 그들은 신경을 통해 침입하고 ECM을 저하 고유 능력을 가진 암세포해야합니다. 또한, 각각의 암 세포 유형이 상이한 내습 특성을 가지며, 따라서 시간이 셀이 DRG 신경 돌기가 변화와 접촉 예정 참고. 예를 들어, KPC 세포가 우리가 접촉하도록 단지 72-96 시간이 필요 MiaPaca 세포 (인간 췌장 선암 세포) 반면 DRG 향해 ECM 통해 침입하는 약 7 일 필요가 사용된다. 이 모델의 한계는 인간의 세포와 가능한 호환성을 포함한다. DRG 인해 마우스의 사용에있어서의 마우스 - 인간 단백질 - 단백질 상호 작용을 항상 증명 될 수없는 경우 후인간 암 세포가 사용된다. 두 가지 종 모델을 사용하고자 할 때마다 검사 단백질의 상 동성을 테스트해야 높은 상 동성이있는 경우, 분석은 단백질 - 단백질 상호 작용을 평가하기에 적합한 것으로 가정한다. 뿐만 아니라,이 프로토콜에 제안 된대로 DRG 분석은 다른 세포뿐만 아니라 신경 세포 (즉, 슈반 세포, 섬유 아 세포, 대 식세포 등)을 포함하는 신경 미세 환경을 나타내는 명심해야한다. 따라서, 특정 세포 집단을 구체적 시험 될 수 없다.

직접 침윤, 림프 확산 및 hematogenic 확산 : 고체 종양은 세 가지 방법으로 전파. 그러나, 자주 신경을 따라, 보급을 무시 암 확산의 제 4 수단이있다. 암성 신경 침윤 (CNI)는 특히 두경부 1 전립선 2, 3 및 췌장 암의 암 확산의 공지의 경로이다. 4-8 CNI 선도 췌장 선암 개인의 80 % 이상에서 발생 복강 신경절 신경을 통해 확산 복막 종양. 이러한 neurotropic 암 세포는 중추 신경계 (CNS) 방향으로 신경을 따라 일방향으로 이주 할 수있는 독특한 능력을 가지고있다. (9)이 결과는 신경초 미세이 악성 성장을 지원하는 인자를 제공하는, 암 세포에 의해 이용 될 수 있다는 것을 시사한다. CNI 연구를위한 몇 체외 모델 중 하나는 후근 신경절 (DRG) / 암 세포 모델입니다. 이 모드엘 자주 갓 해리 배양 DRG의 준비에 인접한 세포 외 기질 (ECM)에서 재배되는이 모델, 마우스 또는 인간의 암 세포 라인에 신경 기질 암 세포 사이. 10-18 분비의 상호 작용을 연구하는 데 사용됩니다. 이 비디오 기사는 췌장 도관 선암에서 체외 CNI의 응용 프로그램을 보여줍니다.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Operating microscope</td><td>Leica</td><td>M205</td><td></td></tr><tr><td>Time Lapse System</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Surgical blade</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z309036</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3271</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Petri dishes, glass bottom</td><td>de groot</td><td>60-627860</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&amp;nbsp;&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Materials:&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cold PBS</td><td>Biological industries</td><td>02-023-1A</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Biological industries</td><td>01-055-1A</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Rhenium</td><td>10108165</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin and streptomycin</td><td>Biological industries</td><td>01-031-1B</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate</td><td>Biological industries</td><td>03-042-1B</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Biological industries</td><td>03-020-1B</td><td></td></tr><tr><td>Growth factor-depleted matrigel</td><td>Trevigen</td><td>3433-005-01</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro modeling of cancerous neural invasion: the dorsal root ganglion model

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These neurotropic cancer cells have a unique ability to migrate unidirectionally along nerves towards the central nervous system (CNS). The dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model is a three dimensional (3D) in vitro model frequently used for studying the interaction between neural stroma and cancer cells. In this model, mouse or human cancer cell lines are grown in ECM adjacent to preparations of freshly dissociated cultured DRG. In this article, the DRG isolation protocol from mice, and implantation in petri dishes for co-culturing with pancreatic cancer cells are demonstrated. Five days after implantation, the cancer cells made contact with the DRG neurites. Later, these cells formed bridgeheads to facilitate more extensive polarized, neurotropic migration of cancer cells.

<html> 비디오 현미경 영상을 사용하여, DRG는 암세포가 DRG에 대한 그들의 콜로니로부터 멀리 이주 동안 주입 후 신경 돌기 5-7 일간 발아 알 수있다. 이식 후 7 일째에 의해, 암 세포는 신경 돌기 (도 2)와 접촉. 이 프로토콜에서 사용되는 췌장암 세포의 전방 이동 지수는 다른 세포주 (QLL2, B16F) (도 3a)보다 배 이상 3-4이다.도 3B는 대표적인 X 제시 도표와 Y는 이동 경로를 나타내는 그래프 좌표 신경 접하는 KPC 암 세포; 저속 videomicroscopy 분석은 KPC 세포 및 비 침략 세포 (도 3C-D) 사이의 전방 이동의 차이가 아니라 속도를 보여 주었다. gure 1 &quot;SRC =&quot;/ 파일 / ftp_upload / 52990 / 52990fig1.jpg &quot;/&gt; 그림 1 :. 프로토콜 단계의 도식 그림 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52990/52990fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52990/52990fig2.jpg" /> 그림 2 :. DRG의 뉴런을 따라 암 세포 침략의 (a) DRG (위) 및 (5 배 확대)를 파종 후 0 일에 암 세포 (아래). (b)는 DRG와 (5 배 확대)를 파종 후 암 7 일에 세포를. (c) 종양 세포는 DRG 신경 세포 (화살표)을 따라 이동한다. 모든 바는 50 μm의를 나타냅니다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52990/52990fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 3 :. 등쪽 뿌리 신경절 (DRG) 뉴런은 CNI를 유도 (가) MiaPaCa2 암 세포, KPC 세포, QLL2 및 NIH3T3 세포의 신경 침공 인덱스입니다. (b) 상기 신경 (적색)과 QLL2 셀 (보라색)에 접하는 KPC 암세포의 이동 경로를 나타내는 그래프 좌표. 는 Y와 X 좌표가 표시됩니다. (N = 각 그룹에서 12-20). 축삭 접촉 및 (d) KPC 암세포 (N = 20)와 QLL2 암세포 마이그레이션의 원점으로부터의 거리 (c) 분석. 이주의 방향이 신경 신경절을 향해 끊임없이이었다. (a)는 양면 학생 t 테스트에 의해 계산되었다에서 P 값. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52990/52990fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

등쪽 뿌리 신경절 모델 : 암성 신경 침략의 생체 외 모델링에서

One way that solid tumors disseminate is through neural invasion. This route is well-known in cancers of the head and neck, prostate, and pancreas. These ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

9.0K 조회수.  Rambam Medical Healthcare Campus. This video article shows the use of the dorsal root ganglia (DRG)/cancer cell model in pancreatic ductal adenocarcinoma.

비디오: In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, radiation, and chemotherapy, locoregional recurrences and distant metastases occur at higher rates, and overall survival is decreased by 40% compared to HNSCC without PNI. In vitro studies of the pathways involved in HNSCC PNI have historically been challenging given the lack of a consistent, reproducible assay. Described here is the adaptation of the dorsal root ganglion (DRG) assay for the examination of PNI in HNSCC. In this model, DRG are harvested from the spinal column of a sacrificed nude mouse and placed within a semisolid matrix. Over the subsequent days, neurites are generated and grow in a radial pattern from the cell bodies of the DRG. HNSCC cell lines are then placed peripherally around the matrix and invade preferentially along the neurites toward the DRG. This method allows for rapid evaluation of multiple treatment conditions, with very high assay success rates and reproducibility.

Perineural invasion (PNI) is a common feature of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC), conferring lower survival rates. Its mechanisms are poorly understood. Utilizing neurites generated from murine dorsal root ganglia confined to a semisolid matrix, the pathways involved in the PNI of HNSCC cell lines can be investigated.

머리와 목 편평 ​​세포 암에서 신경초 침략을위한 모델

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

연구

암 연구학

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve microenvironment. This type of invasion is exhibited by a variety of cancer types, and very frequently is found in pancreatic cancer. The microscopic size of nerve fibers within mouse pancreas renders the study of PNI difficult in orthotopic murine models. Here, we describe a heterotopic in vivo model of PNI, where we inject syngeneic pancreatic cancer cell line Panc02-H7 into the murine sciatic nerve. In this model, sciatic nerves of anesthetized mice are exposed and injected with cancer cells. The cancer cells invade in the nerves proximally toward the spinal cord from the point of injection. The invaded sciatic nerves are then extracted and processed with OCT for frozen sectioning. H&amp;E and immunofluorescence staining of these sections allow quantification of both the degree of invasion and changes in protein expression. This model can be applied to a variety of studies on PNI given its versatility. Using mice with different genetic modifications and/or different types of cancer cells allows for investigation of the cellular and molecular mechanisms of PNI and for different cancer types. Furthermore, the effects of therapeutic agents on nerve invasion can be studied by applying treatment to these mice.

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

We describe an in vivo murine model of perineural invasion by injecting syngeneic pancreatic cancer cells into the sciatic nerve. The model allows for quantification of the extent of nerve invasion, and supports investigation of the cellular and molecular mechanisms of perineural invasion.

Vivo에서 Murine 좌 골 신경의 모델 Perineural 내 습

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each other anatomically, it is important to identify an appropriate model to use for the study of axon regeneration. By using a suitable model, we can formulate a specific treatment based on the severity of injury, the neuronal cell type of interest, and the desired spinal tract for assessing regeneration. Within the sensory pathway, DRG neurons are responsible for relaying sensory information from the periphery to the CNS. We present here a protocol that uses a DRG injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in the lower cervical spinal cord of an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. As demonstrated using a control virus, AAV5-GFP, we show the effectiveness of a direct DRG injection in transducing DRG neurons and tracing sensory axons into the spinal cord. We also show the effectiveness of the dorsal root crush injury in denervating the forepaw as an injury model for evaluating axon regeneration. Despite the requirement for specialized training to perform this invasive surgical procedure, the protocol is flexible, and potential users can modify many parts to accommodate their experimental requirements. Importantly, it can serve as a foundation for those in search of a suitable animal model for their studies. We believe that this article will help new users to learn the procedure in a very efficient and effective manner.

This protocol presents the use of a dorsal root ganglion (DRG) injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. This model is suitable for investigating the use of gene therapy to promote sensory axon regeneration.

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

신경과학

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous cell carcinoma and other cancers. Mechanistic studies have shown that the molecular crosstalk between nerves and tumor cells occurs prior to physical interaction. There are only a few in vivo models to study perineural invasion, especially to investigate early progression, before physical nerve-tumor interactions occur. The chick chorioallantoic membrane model has been used to study cancer invasion, because the basement membrane of the chorionic epithelium mimics that of human epithelial tissue. Here we repurposed the chick chorioallantoic membrane model to investigate perineural invasion, grafting rat dorsal root ganglia and human head and neck squamous cell carcinoma cells onto the chorionic epithelium. We have demonstrated how this model can be useful to evaluate the ability of cancer cells to invade neural tissue in vivo.&#160;

The Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Assess Perineural Invasion in Head and Neck Cancer

Perineural invasion is an aggressive phenotype for head and neck squamous cell carcinomas and other tumors. The chick chorioallantoic membrane model has been used for studying angiogenesis, cancer invasion, and metastasis. Here we demonstrate how this model can be utilized to assess perineural invasion in vivo.

두경부암의 신경성 침윤을 평가하는 생체내 병아리 융모난토암 막

Perineural invasion is a phenotype in which cancer surrounds or invades the nerves. It is associated with poor clinical outcome for head and neck squamous ...

의학

DRG 배양에서 신경 세포 과민증을 연구하기 위한 고급 체외 모델

Harvesting, Embedding, and Culturing Dorsal Root Ganglia in Multi-compartment Devices to Study Peripheral Neuronal Features

The most common peripheral neuronal feature of pain is a lowered stimulation threshold or hypersensitivity of terminal nerves from the dorsal root ganglia (DRG). One proposed cause of this hypersensitivity is associated with the interaction between immune cells in the peripheral tissue and neurons. In vitro models have provided foundational knowledge in understanding how these mechanisms result in nociceptor hypersensitivity. However, in vitro models face the challenge of translating efficacy to humans. To address this challenge, a physiologically and anatomically relevant in vitro model has been developed for the culture of intact dorsal root ganglia (DRGs) in three isolated compartments in a 48-well plate. Primary DRGs are harvested from adult Sprague Dawley rats after humane euthanasia. Excess nerve roots are trimmed, and the DRG is cut into appropriate sizes for culture. DRGs are then grown in natural hydrogels, enabling robust growth in all compartments. This multi-compartment system offers anatomically relevant isolation of the DRG cell bodies from neurites, physiologically relevant cell types, and mechanical properties to study the interactions between neural and immune cells. Thus, this culture platform provides a valuable tool for investigating treatment isolation strategies, ultimately leading to an improved screening approach for predicting pain.

저자 스포트라이트: 만성 통증 치료 효능을 향상시키기 위한 In vitro 및 In vivo 모델

This protocol provides a technique to harvest and culture explanted dorsal root ganglion (DRG) from adult Sprague Dawley rats in a multi-compartment (MC) device.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

The most common peripheral neuronal feature of pain is a lowered stimulation threshold or hypersensitivity of terminal nerves from the dorsal root ganglia ...

생체공학

Establishing a Three-dimensional Co-culture Model of Murine Dorsal Root Ganglia and Cancer Cells: An In Vitro Model to Study Perineural Cancer Cell Invasion

Source: Huyett, P. et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/55043" target="_blank">A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.</a> J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the procedure for developing an in vitro perineural cancer cell invasion model by co-culturing mouse dorsal root ganglion and neurotropic cancer cells. The model can be utilized to conduct cancer assays, producing rapid and reproducible results.

쥐 등뿌리 신경절과 암세포의 3차원 공동 배양 모델 구축: 신경주위 암세포 침입을 연구하기 위한 체외 모델

Source: Huyett, P. et al. A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Head and Neck Cancer

Assays & techniques

Murine Perineural Invasion Model: Generating an In Vivo Model to Simulate Perineural Invasion in Mouse Sciatic Nerve

Source: Deborde, S. et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/56857" target="_blank">An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion.</a> J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse model for perineural invasion by injecting pancreatic cancer cells into the sciatic nerve. This model helps quantify the extent of invasion and study the interactions between cancer cells and nerves.

쥐 신경주위 침입 모델: 마우스 좌골 신경에서 신경주위 침입을 시뮬레이션하기 위한 생체 내 모델 생성

Source: Deborde, S. et al. An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion. J. Vis. Exp. (2018)
In this video, we develop an in vivo mouse ...

Cancers of the Nervous System

In vivo studies

Modeling Cancerous Neural Invasion In Vitro: A Method to Co-culture Dorsal Root Ganglia and Cancer Cells

Source: Na&#39;ara, S. et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/video/52990" target="_blank">In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model.</a> J. Vis. Exp. (2016)
In this video, we demonstrate an in vitro method for co-culturing DRG and cancer cells to study neurotropism and neural invasion.

체외에서 암성 신경 침입 모델링: 등뿌리 신경절과 암세포를 공동 배양하는 방법

Source: Na&#39;ara, S. et al. In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion Model. J. Vis. Exp. (2016)
In this video, we ...

등쪽 뿌리 신경절 모델 : 암성 신경 침략의 생체 외 모델링에서

요약

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머리와 목 편평 세포 암에서 신경초 침략을위한 모델

Vivo에서 Murine 좌 골 신경의 모델 Perineural 내 습

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말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

쥐 등뿌리 신경절과 암세포의 3차원 공동 배양 모델 구축: 신경주위 암세포 침입을 연구하기 위한 체외 모델

쥐 신경주위 침입 모델: 마우스 좌골 신경에서 신경주위 침입을 시뮬레이션하기 위한 생체 내 모델 생성

체외에서 암성 신경 침입 모델링: 등뿌리 신경절과 암세포를 공동 배양하는 방법

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말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

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쥐 등뿌리 신경절과 암세포의 3차원 공동 배양 모델 구축: 신경주위 암세포 침입을 연구하기 위한 체외 모델

쥐 신경주위 침입 모델: 마우스 좌골 신경에서 신경주위 침입을 시뮬레이션하기 위한 생체 내 모델 생성

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