Name: treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination
Uploaded: 2015-08-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
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1. 박테리아 서스펜션 준비 : <ol><li> 스트리킹 배양 플레이트로부터, 멸균 무균 접종 루프로서 적절한 성장 배지 (표 1) 100 ㎖을 함유하는 250 ㎖의 멸균 병에 단일 콜로니를 접종한다. </li><li> 정기적으로 성장에 대한 검사 1 ~ 2 일 동안 적절한 조건 (표 1)에서 궤도 진탕 배양기에 병을 놓습니다. 140 rpm으로 진탕 속도를 설정합니다. </li><li> 무균는 23 ℃에서 20 분 동안 3,000 XG에서 두 멸균 50 ML 원뿔 튜브와 원심 분리기 튜브에 세균 현탁액을 전송합니다. </li><li> 뜨는을 기음과 멸균 펩톤 물 15 ㎖로 각 박테리아 펠렛을 재현 탁. 소용돌이 필요. 하나의 튜브 / 용기에 중단 박테리아 문화를 결합합니다. </li><li> 주식 문화의 역가를 결정하는 제 4 당 중으로 주식 문화를 역가. </li><li> 냉장 이주까지 4에 대한77; 2 ° C 필요할 때까지. 다시 역가 사용시에 배양 단계 4.8 참조. </li></ol> 2. 혈소판 제품 준비 : <ol><li> 공인 혈액 은행에서 표준 성분 채집 술 인간의 혈소판 제품을 수집합니다. 혈소판 제품은 다음 컬렉션 스펙을 충족해야 90에서 3백60까지 mL의 부피와 -3.8 0.8 × 106 혈소판 / μL 농도. <ol><li> 혈소판 제품이 병원균 감소를위한 사전 처리에 2 시간의 최소 휴식되었는지 확인합니다. 이 2 시간 동안 교반없이 혈소판 인큐베이터에서 22 ± 2 ℃에서 제품을 보관하십시오. 모 ✲가 2 시간 동안 지속 되 혈소판 제품 혈소판 인큐베이터에서 22 ± 2 ℃에서 교반되도록. 최대 22 시간 게시물 컬렉션 제품을 사용합니다. </li></ol></li><li> 3 ㎖ 주사기를 2 mL의 샘플을 사용하여 제거 혈소판 제품의 pH (22C)를 측정한다. 제품을 위해 혈액 가스 분석을 사용하여 pH가&gt; 6.6 갖는다. 혈액 분석기를 사용하여 제품의 혈소판 혈소판 농도를 측정하기 위해 동일한 샘플을 사용한다. 제품이 0.80-3.8 × 106 혈소판 / μL 수집 농도 요구 사항을 만족해야합니다. </li><li> 시각적으로 혈소판 제품의 소용돌이를 평가한다. 생성물이있는 경우 &quot;0&quot;제품이 폐기 될 것이다 소용돌이 친다. </li><li> 직접 백색 광원에서 혈소판 가방을 잡고 짧게 혈소판 가방을 짠다. 시각적 혈소판 샘플의 소용돌이 패턴을 관찰한다. 다음 스케일을 사용하여 제품의 점수. 참고 : 2 - 긍정적 소용돌이 : 강한 콘트라스트 전체 가방을 통해 볼 수 불균일성을 소용돌이. 1 - 중간 소용돌이 : 일부 불균일 볼 수 있지만, 몇 곳에서 가난한 대비. 0 - 음의 소용돌이 : 이전과 혈소판 가방을 압박하고 남은 혼탁 동질성 </li></ol> 3. 리보플라빈과 자외선 프로세스 : <ol><li> 트란멸균 튜브 도킹 장치를 사용 리보플라빈 및 UV 광 조사 및 저장 가방 혈소판 제품 sfer. 전송 후 튜브 실러를 사용하여 빈 혈소판 단위 컬렉션 가방을 제거하고 생물학적 폐기물로 빈 가방을 버리십시오. </li><li> 그 빛 보호 바깥 랩에서 원액을 리보플라빈 500 μM의 35 ml의 주머니를 제거합니다. 멸균 독 처리 및 저장 백의 입구 라인 상 리보플라빈 키트. 내용이 혈소판 단위로 배출 허용합니다. </li><li> 리보플라빈 주머니에서 설정 리보플라빈 파우치 / 처리 및 저장 가방을 끊고 부드럽게 처리 및 저장 가방에서와 리보플라빈의 가방에 잔류 공기를 표현한다. 혈소판 생성물 소량을 보장하는 것이 아니라 혈소판 제품에 잔류하는 린스 리보플라빈 리보플라빈 파우치로 표현된다. 리보플라빈 및 혈소판 용액 처리 및 저장 백에 다시 배출 허용하고 유입 라인 클램프. 빈 리보플라빈 가방 우리를 제거튜브 실러를 보내고 및 생물학적 위험 폐기물로 빈 가방을 버리십시오. </li><li> 무균 독 조명 및 스토리지 가방의 입구 라인 상에 여성 주사기 커넥터 6 &quot;튜브 라인. 여성 주사기 커넥터에 10 ML의 주사기 배럴 (플런저 제거)에 연결합니다. </li><li> 무균 피펫을 통해 주사기 배럴에 재고 박테리아의 5 mL를 추가 할 수 있습니다. 입구 라인에 클램프를 열고 세균이 혈소판 제품에 배출 할 수 있습니다. 일부 제품은 혈소판 10 ㎖ 주사기 배럴로 다시 흐르게하여 시린지 외통을 헹군다. 10 ML의 주사기 배럴을 제거합니다. </li><li> 이 무균 30 ㎖ 주사기를 부착 혈소판 제품 혼입 스톡 박테리아 있도록 유입구 두 번 최소 플러쉬. 제품이 잘 혼합 한 후, 깨끗한 50-10 mL의 주사기를 사용하여 2 ml의 전처리 샘플을 제거한다. 접종 단계에서 도입 된 모든 공기를 보장 새 주사기를 사용하거나 단계를 샘플링이 제거된다. <ol><li> 제 4 항에 따라 전처리 샘플 역가. </li></ol></li><li> 처리 및 보관 가방에서 입구 라인을 제거하고 제품의 무게. </li><li> 조명에 제품을 놓고 표준 혈소판 치료를 시작 화면의 명령을 따르십시오. <ol><li> 운영자 ID를 입력합니다. </li><li> 안전하고 조명기의 플래 튼에 가방을 탑재합니다. </li><li> 바코드 리더 또는 수동 입력 키패드를 사용하여 조명기로 샘플 ID를 입력합니다. </li><li> 스캔 제품 유형. </li><li> 석영 클램프를 닫습니다. </li><li> 조명 장치가 자동으로 에너지의 6.24 J / ㎖를 제공합니다. 일반적인 처리 시간은 5 ~ 10 분 소요됩니다. </li></ol></li><li> 치료 및 스토리지 가방의 샘플 전구 라인 상에 여성 주사기 커넥터 6 &quot;튜브 라인 처리 멸균 독에 따라. 제품이 잘 혼합 확인 후 5 ML의 주사기를 연결하고 2 ㎖의 후 처리 샘플을 제거합니다. <ol><li> 후 처리 샘 역가제 4 당 PLE. </li></ol></li></ol> 4. 세균 역가 <ol><li> 전처리 및 후 처리 샘플의 역가를 추정하고, 각 샘플의 종점 일련의 희석을 수행하는 데 필요한 5 mL로 희석 튜브의 적절한 수를 준비한다. 무균 펩톤 물 1.8 ml의 필요한 튜브를 입력합니다. </li><li> 역가가 10 배 일련 희석 방식을 사용하여 각 샘플. 무균는 제 희석 관 (10-1)에 희석 시료 0.2 mL를 옮긴다. 이 희석 와류 튜브 및 전송 다음 희석 튜브에 0.2 ml의. 희석의 필요한 수를 통해 일련의 희석을 계속합니다. <ol><li> 무균 전송 각 희석액 100 ㎕은 적절한 한천 판 (표 1)에 도금 될 수 있습니다. </li></ol></li><li> 멸균 셀 스프레더를 사용하여 균등하게 각 한천 플레이트에 샘플을 배포 할 수 있습니다. </li><li> (반전과 적절한 조건에서 판을 품어 <stroNG&gt; 주기적으로 성장 검사 1-2일 표 1). </li><li> 30-300 식민지로 번호판을 계산합니다. 보다 큰 300 식민지를 포함하는 플레이트는 (TNTC)을 계산하는 너무 많은 간주됩니다. 30 개 미만의 식민지가 포함 된 플레이트는 정량 한계 (LOQ) 이하로 간주됩니다. </li><li> 각 시료의 역가를 계산 CFU / ㎖로 결과를 기록한다. <ol><li> CFU / ㎖를 계산하기 위해 다음 식을 사용하여 <img alt="식 (1)" fo:content-width="2.5in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq1.jpg" width="250" /></li><li> 최저 희석 플레이트에는 콜로니가없는 경우, 검출 (LOD)의 한계를 계산하기 위해 다음 식을 사용 <img alt="식 (2)" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq2.jpg" width="100" /> 과 <img alt="식 (3)" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52820/52820eq3.jpg" width="100" /> 장소 : N은 P 입자 (CFU)의 낮은 수를 =자신감을 검출 할 수는 roduct. 미생물이 발견되지 않은 것이라고 P는 = 확률; 미생물을 검출하는 95 % 신뢰 위해, P는 = .05. 용액에 V = 전체 제품의 부피 판의 V = 부피 도금 (ML) × 희석 수준 </li></ol></li><li> 음성 대조군을 위해, 두 개의 한천 플레이트 각각에 계열 희석에 사용 펩톤 물 0.5 mL로 접시. 샘플을 테스트 할 같은 플레이트 유형을 사용합니다. 반전 1-2 일 정기적으로 성장을 확인하기위한 적절한 조건에서 접시를 품어. <ol><li> 성장은 어느 한천 플레이트에서 관찰되는 경우, 사용 펩톤 물 병은 폐기되어야하며 연구의 결과는 무효화됩니다. </li></ol></li><li> 양성 대조군 재 역가 사용 된 세균 배양 용 스톡. 반전 1-2 일 정기적으로 성장을 확인하기위한 적절한 조건에서 접시를 품어. 역가 기록 CFU / ㎖를 기록 ± 1.0이어야한다연구를위한 에드 재고 역가가 (섹션 1.5 참조) 유효한 것으로 간주합니다. </li></ol>

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이 논문의 모든 저자는 현재 데루 BCT, 미라 솔 PRT 시스템의 개발 및 제조 업체에 의해 사용된다. 이 비디오 기사에 대한 출판 비용은 데루의 BCT가 지불되었다.

세균 검사는 혈액 금융 기관에서 일반적인 관행이되었다 많은 위치에 대한이 세균 오염 된 혈소판의 수혈을 방지하기 위해 기본 방법 역할을합니다. 세균의 스크리닝은 일반적 S. 같은 빠른 성장 그람 음성 박테리아의 대부분을 interdicts 있지만 티아 균, E. 대장균 및 E. 박터 클로 아카에 균, 이는 S. 같은 느리게 성장하는 그람 양성 세균을 검출하기 위해 분투 구균, 연쇄상 구균 SPP. 및 S. 표피 8. 불행히도, 이러한 세 그람 양성 세균은 환자 사망률 1 이끌었다 오염 된 혈소판이 세 단위를 함유하는 유기체 혈소판 수혈 제품의 50 %의 위쪽에 연루되어있다. 적어도 하나의 유기체가 전형적인 4-8 ml의 선별 시료 내에 포함되도록 세균의 스크리닝에 충분히 높은 것으로 혈소판 생성물 세균 역가에 의존. 세균은 4-8 ㎖의 샘플 볼륨에 캡처하는 세균 역가가 충분히 높지 않으면, 장치는 잘못 부정적인 것으로 플래그되며 이것은 수혈을 위해 해제된다. 세균 검사에 대한 대안 접근 방식은 모든 혈소판 단위에서 수행 할 수 있으며, 그 이외의 기능과 오염 생물을 렌더링 할 수있는 능동적 인 프로세스를 사용하는 것이 될 수있다. 본 연구에서는, 박테리아의 높은 역가 의도적 리보플라빈 및 UV 광 병원체 환원 공정의 총 용량을 감소 테스트 유닛 혈소판에 첨가 하였다. 박테리아 하중이 본 연구에서 테스트되었지만까지 정상적으로 기부시 혈액 제제에서 발견 초과, 본 연구는 리보플라빈 및 UV 광 프로세스가 대폭으로 오염 된 혈소판 부에서 생균의 역가를 감소시킬 수 있음을 입증하는 데 도움 5.4 로그 (세균 오염의 99.7-99.9996 % 감소) (그림 2) 2.6. ACCURA를 얻으려면TE 대수 감소 값은, 그 세균 역가 단계를 수행 할 때 작업자가 정밀 피펫 기술과 함께 양호한 무균 기술을하는 것이 중요하다. 연속 희석을 수행 부정확 한 피펫 오류의 축적, 따라서 부정확 한 역가 측정 될 수 있습니다. 본 연구에서 수집 된 데이터는 낮은 수준의, 임상 적으로 관련 균혈증 (&lt;20 CFU / 단위)에 대해 시스템을 도전 리보플라빈 및 UV 빛과 이전 작업을 지원합니다. 이전의 연구는 실제 임상 오염 이벤트를 모방하도록 설계 결과 리보플라빈 보여 UV 광은 7 일 혈소판 저장 기간 동안 박테리아의 성장을 방지하는데 효과적이었다. 선행 연구로부터의 데이터에 기초하여 모델링 혈소판 제품의 세균 오염의 현재 위험 추정치는 현재 수준에서 8만큼 98 %까지 감소 될 수 있음을 시사한다. 리보플라빈 및 자외선 공정은 세균 화면에 호의적으로 비교유일한 임상 적 세균로드 8 도전 때 혈소판 단위 세균 오염 물질을 검출하기 위해 66 %의 효과를 입증 ING. 모든 기술과 같이, 혈소판의 제품 PRT 치료는 세균 오염 혈소판 유닛으로 한계를 가지고 연관된 합병증을 방지 할 수있다. PRT 시스템은 박테리아 포자에 대해 유효하지 않으며 PRT 시스템이 여전히 남아있는 독소 수신자에 혈성 쇼크를 유발할 수 그람 음성 세균의 높은 역가를 비활성화 할 수 있더라도 따라서, 엔도톡신을 불 활성화하지 않는다. 박테리아가 높은 역가에 전파하기 전에 PRT 가장 잘 보관시 초기에 수행된다. 이 두 연구의 조합에 의해 입증 된 바와 같이 결론적으로, 리보플라빈과 자외선 과정은 모두 그람 음과 그람 양성균의 세균 부하를 감소 시키는데 효과적이며, 세균 검사에 대한 대안을 제공 할 수 있습니다. 정기적으로 가공용리보플라빈 및 UV 빛 G 혈소판 제품은 바이러스 및 기생충과 같은 다른 혈액 매개 에이전트의 잠재적 인 전송을 줄일 수 있다는 이점이 있습니다.

혈소판 수혈, 혈장, 적혈구 및 포장 전혈 제품은 현대 의학에서 주요 역할을하고, 각종 질환을 치료하는 중요한 유체를 교체하고 궁극적으로 생명을 구하기 위해 사용될 수있다. 혈소판은 하나 전혈에서 분리 및 풀링 transfusable 용량으로 또는 혈소판 성분 채집 술의 과정을 통해 수집되는 셀룰러 제품입니다. 몸에있는 혈소판의 주요 역할은 상처 부위에서 출혈을 멈추게하고 지혈을 유지하는 데 도움이하는 것입니다. 낮은 혈소판 세포 수 (혈소판 감소증)을 앓고있는 환자는 자발적 출혈 사건에 취약 그들의 혈소판 세포가 정상 범위로 다시 카운트 가지고 혈소판 수혈된다. 수집 된 혈소판 5-7 일까지 동안 저장되고있는 동안 일정한 교반하에 22 ± 2 ℃에서 보관된다. 혈소판 수혈의 속성을 저장 수명이 때문에 공동으로 수혈받는 사람에게 약간의 위험을 유지에도 불구하고기생충, 박테리아와 바이러스 11에 의한 이러한 제품의 ntamination. 바이러스 핵산 테스팅의 구현 (NAT)이 간염 C 바이러스 (HCV), 간염 B 바이러스 (HBV) 및 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV)와 같은 주요 혈액 매개 제제의 바이러스 전달의 위험을 상당히 감소하고있다 (5). 이러한 에이전트는 HIV 1 8,000,000 당 기부금, HCV 1 6,700,000 당 기부금 및 B 형 간염 바이러스 (15) 1 1,700,000 당 기부를하기 위해서는 캐나다 혈액 서비스에서 최근 출판은 잔여 위험을 추정하고있다. 혈소판 제품의 수백만 매년 수혈 때문에 많은받는 사람이 잠재적으로 생명을 위협하는 합병증에 노출 된 1,000 7 : 박테리아는 일반적으로 일반 대중에 덜 관심을 가너 있지만, 혈소판 제품의 세균 오염의 빈도가 높은 1로로 추정하고있다 패혈증 (6) 등을들 수있다. 연구는 시간에 그 세균 부하를 제안한다오염이 낮은으로, &lt;100 콜로니 형성 단위 (CFU) / 제품 2.16 그러나 영양이 풍부한 환경 상온 저장 전에 수혈에 위험 높은 역가에 증식하는 세균 오염 허용한다. 현재, 혈소판받는 도달 세균 오염을 방지하는 제품을 사용할 수있는 유일한 방법은 배양 승인 기반의 시스템과 치료의 신속한 테스트 포인트의 사용을 통해서이다. 요약하면, 배양 기반 시스템 혈소판 제품 4-8 ml의 샘플 병에 혈소판 생성물로부터 제거 접종이되는 세균이 제품에 증식 할 수 있도록 12 ~ 24 시간, 22 ℃에서 교반에 저장된 영양 배지를 포함. 병은 세균의 성장을위한 병을 모니터링하는 기기에 배치됩니다. 악기가 병에 박테리아의 성장을 감지하면이를 신고하고 해당 혈소판 유닛은 폐기된다. 이 과정은 빠른 촉진제를 검출하기에 합리적으로 성공하지만날개 생물, 느린 성장 종의 많은 따라서 수혈 7,12,14,16,22에 대한 발표 될 위음성 단위의 가능성을 만들어 감지 할 수있을만큼 충분히 높은 역가에 성장하지 않습니다. 세균 부하가 상당히 증가되면 배양 기반 탐지 시스템과 달리, 케어 테스트 포인트는 통상적으로 신속한 혈소판 저장 기간에서 나중에 수행된다. 높은 역가가 관리 시험의 포인트는 문화 기반 시스템보다 덜 민감하기 때문에 필요하고, 그들이 역가 ≥1 × 103 CFU / ㎖ (17)에 도달하면 만 안정적으로 박테리아를 검출한다. 그러나 이러한 테스트는 샘플링 1 시간 이내에 결과를 제공 할 수 있습니다. 이러한 테스트의 성능에 변동성은받는 사람 9 치명적인 패혈증 반응을 일으키는, 허위 부정 제품의 방출을 주도했다. 혈소판 제품의 세균 오염의 문제에 대처하기 위해 다른 방법은 병원체 환원 PROC 루틴의 사용을 통해 인오염 된 세균을 비활성화하는 대신 그들을 감지하는 시도 할 수 있습니다 ESS. UV 광과 함께, 광 증감 제로서 사용 리보플라빈, 리보플라빈 및 박테리아 3,4,8,10,19-21 UV의 국지적 인 사용을 포함한, 혈액 유래 병원균 오염 물질의 넓은 범위의 감염을 감소시키는 것으로 나타났다 병원체 환원 광 비 독성 및 비 돌연변이 유발하며, 리보플라빈 및 UV 광 처리 된 성분은 수혈 수신자뿐 아니라 혈액 제품 (18)을 처리 대 그 안전한 것으로 밝혀졌다. 간단히, 리보플라빈 분자는 박테리아, 기생충, 바이러스, 모든 유핵 세포 (예 백혈구)의 핵산 (DNA 및 RNA)와 연결할 수있다. UV 광에 노출 따라서 핵산의 복제 및 / 또는 전사를 방지하고, 13 비활성화 유기체 떠나는 핵산 (주로 구아닌 염기)의 작용기에 화학적 변화를 일으키는, 리보플라빈 활성화한다. 판 같은 Anucleated 세포수 및 적혈구 인해 핵산의 부족 리보플라빈 화학에 의해 영향을받지 않는다. 리보플라빈과 자외선 기술 이전 작업은 임상 적으로 세균 부하 (&lt;20 CFU / 제품) (8)에 오염 된 혈소판 제품을 모방하기위한 실험 설계를 사용하여 박테리아의 선택 그룹을 평가 하였다. 이 연구의 목적은 높은 역가 세균 오염에 대해 리보플라빈 및 UV 광 처리를 평가 하였다 (&gt; 1.0 × 105 CFU / ㎖) 시스템의 총 세균 환원 능력을 측정하기 플라즈마 처리 혈소판 제품. hemovigilance 연구 (1)로부터 수집 된 데이터에 기초하여, 일반적으로 발생하는 그람 음성 및 그람 양성균의 패널을 대상으로 평가를 위해 선택되고 다음 종 포함 하였다 : 표피 포도 구균, 황색 포도상 구균, 스트렙토 mitis가 각각 1 주 씩으로, 스트렙토 오게 네스, 세라 티아 균, 예 르시 니아 enterocolitica을 ,브루셀라 neotomae, 바실러스 세레 우스 (식물 양식), Esherichia 대장균, 녹농균과 폐렴 간균. B를 제외한 모든 생물, 세레 우스는 ATCC로부터 수득하고, 우선 혈액 성분으로부터 분리되는 것으로서 식별되었던 균주를 얻기에 넣었다. B. 세레 우스는이 연구에서 테스트하는 것은 오염 된 혈소판 제품에서 내부적으로 고립 된 임상 균주이다.

<table><tbody><tr><td>Mirasol Illuminator</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mirasol Treatment/Storage Bag</td><td>Terumo BCT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hematology Analyzer</td><td>Beckman-Coulter</td><td>Ac&amp;bull;T diff&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Blood Gas Analyzer</td><td>Siemens</td><td>RapidLab 1265&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Docking Device</td><td>Terumo BCT</td><td>TSCD</td><td></td></tr><tr><td>Platelet Incubator</td><td>Helmer</td><td>PC2200</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Incubator Shaker</td><td>Lab-Line</td><td>4628</td><td></td></tr><tr><td>Dry Incubator</td><td>Fisher</td><td>Iso-temp</td><td></td></tr><tr><td>Class II A/B3 Biosafety Cabinet</td><td>Thermo-forma</td><td>1286</td><td></td></tr><tr><td>Tubing Sealer</td><td>Sebra</td><td>Smart Sealer II</td><td></td></tr><tr><td>Table Top Centrifuge</td><td>IEC</td><td>Centra GP8R</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309650</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Dilution Tube</td><td>VWR</td><td>211-0058</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Conical Tube</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Gilson</td><td>P-200</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td>Rainin</td><td>R-200</td><td></td></tr><tr><td>Repeat Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>4780</td><td></td></tr><tr><td>1-200 &amp;micro;l Filter Tip</td><td>Costar</td><td>4810</td><td></td></tr><tr><td>25 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>5 ml Disposable Serrological Pipette</td><td>Costar</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>35 ml 500 &amp;micro;M Riboflavin</td><td>Terumo BCT</td><td>35 mL 500 &amp;micro;M&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Brucella Agar with 5% Horse Blood</td><td>BBL</td><td>221547</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Teknova</td><td>B9993</td><td></td></tr><tr><td>Peptone Water</td><td>BD</td><td>257087</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth</td><td>BD</td><td>299113</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Agar</td><td>Remel</td><td>R01917</td><td></td></tr><tr><td>Heat Inactivated Horse Serum</td><td>Gibco</td><td>26050</td><td></td></tr></tbody></table>

treatment of platelet products with riboflavin and uv light: effectiveness against high titer bacterial contamination

세균에 의한 혈소판 단위의 오염은 오랫동안 그들의 포스트 기부의 보관 조건에 크게 수혈 위험으로 인정되고있다. 제품은 정기적으로, 교반 진탕 기에서 22 ℃에서 박테리아의 성장을 촉진 할 수있는 조건을 저장됩니다. 혈소판 제품에 도입 될 것으로 박테리아의 총 수는 매우 낮지 만, 이들 박테리아는 잠재적으로 심각한 부작용을 초래하는 매우 높은 역가 이전 수혈로 곱할 수있다. 본 연구의 목적은 혈소판 제품의 일반적인 오염 물질로 확인 된 박테리아의 패널에 대하여 리보플라빈 기반 병원체 환원 공정을 평가하는 것이었다. 이 패널은 다음과 같은 유기체를 포함 : S.을 표피, 황색 포도상 구균, S. mitis가 각각 1 주 씩으로, S. pyogenes의, S. 티아 균, Y. enterocolitica, B. neotomae, 나 세레 우스, 대장균, 녹농균 및 K. 폐렴. 각 유닛은 혈소판 높은 세균 부하를 접종하고, 시료 b를 제거한전과 치료 후 OTH. 콜로니 형성 분석을 종점 희석 방식을 사용하여이 전처리와 후 처리 세균 역가를 결정하는 데 사용되었다. log 감소는 전처리 역가에서 후 처리 역가를 감산하여 계산 하였다. 다음 로그 감소가 관찰되었다 : S. 표피 4.7 로그 (99.998 %), 황색 포도상 구균 4.8 로그 (99.998 %), S. 3.7 로그 (99.98 %) mitis가 각각 1 주 씩으로, S. pyogenes의 2.6 로그 (99.7 %), S. 티아 균 4.0 로그 (99.99 %), Y. enterocolitica 3.3 로그 (99.95 %), B. neotomae 5.4 로그 (99.9996 %), B. 세레 우스 2.6 로그 (99.7 %), 대장균 ≥5.4 로그 (99.9996 %), 녹농균 4.7 로그 (99.998 %)과 K . 폐렴 2.8 로그 (99.8 %). 이러한 연구 결과는 박테리아 오염 프로세스와 관련된 심각한 부작용 수혈 사건의 위험을 낮출 수 도움 제안한다.

열한 다른 세균 종의 감소는 리보플라빈 및 UV 광 PRT 기반 프로세스를 사용하여 평가 하였다. 이러한 에이전트는 혈소판 제품의 일반적인 오염 물질의 일부​​를 표현하고 긍정적 인 다섯 그람 여섯 그람 음성균을 포함한다. 적어도 6 혈소판 제품은 생물체마다 평가하고, 각 제품은 혈소판 제품에 박테리아의&gt; 1.0 × 105 CFU / ml의 최종 역가를 수득 충분히 균을 접종 하였다. 처리 전 샘플 혈소판 생성물을 신속히 리보플라빈 및 UV 공정으로 처리하고, 그 후에 전처리 역가를 측정하기 위해 제거 하였다. 다음 로그 감소가 관찰되었다 혈소판 제품의 처리를 다음을 S. 표피 4.7 로그 (99.998 %), 황색 포도상 구균 4.8 로그 (99.998 %), S. 3.7 로그 (99.98 %) mitis가 각각 1 주 씩으로, S. pyogenes의 2.6 로그 (99.7 %), S. 티아 균 4.0 로그 (99.99 %), Y. enterocolitica 3.3 로그 (99.95 %), B.neotomae 5.4 로그 (99.9996 %), B. 세레 우스 2.6 로그 (99.7 %), E. 콜라이 ≥ 5.4 로그 (99.9996 %), P. 녹농균 4.7 로그 (99.998 %), K. 뉴 모니 및 2.8 로그 (99.8 %) (도 2). 리보플라빈 및 UV 처리에 대해 전술 한 바와 같이 모든 장치들은 시스템 사양을 충족. 추가의 환원 시험을 행 하였다 S. 버피 코트 유래 혈소판을 사용하여 화농. 큰 차이는 S.의 감소는 관찰되지 않았다 혈소판 성분 채집 대 버피 코트 유도 혈소판에 오게 네스 (데이터는 미도시). <img alt="표 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820table1.jpg" /> 표 1 : 리보플라빈과 UV 광을 사용하여 평가 박테리아 종의 성장 조건. 혈소판 제품을 오염시키는 것으로 나타났다 모두 그람 양성균과 그람의 패널을 본 연구를 위해 선별 하였다. 성장 전파 할 조건 (온도 및 미디어 유형) 및 Tite의R 생물이 표시됩니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig1.jpg" /> 그림 1 : 리보플라빈 및 UV 빛의 병원균 감소 처리. 리보플라빈은 500 μM의 농도에서 공칭 0.9 % 식염수에 용해시켰다. 액 상체는 각 제품에 접속되어 방전 멸균 하였다. 박테리아는 혈소판 각 유닛에 무균 첨가 한 다음 UV 에너지 (약 6-10 분) 6.2 J / ㎖로 처리 하였다. 이 시험 관내에서 처리 후 혈소판 부는 최종 세균 역가를 결정하는 샘플링 공부. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52820/52820fig2.jpg" /> 그림 2. 리보플라빈 및 UV 광으로 처리 리보플라빈 및 UV 광이 혈소판 제품의 일반 세균 오염 박테리아 하중을 감소시키기 위해 사용 된 다른 세균 종의 감소. 로그 감소 10 차이다평균 전처리 역가 평균 후 처리 역가 사이. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52820/52820fig2highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Treatment of Platelet Products with Riboflavin and UV Light: Effectiveness Against High Titer Bacterial Contamination

The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

리보플라빈과 혈소판 제품 및 자외선 치료 : 높은 역가 세균 오염에 대해 효과

Contamination of platelet units by bacteria has long been acknowledged as a significant transfusion risk due to their post-donation storage conditions. ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

13.5K 조회수.  Scientific Affairs. The storage conditions of platelet products create an ideal environment for bacterial contaminants to multiply to dangerous levels. The goal of this study was to use a colony forming assay to evaluate a riboflavin based pathogen reduction process against high titer bacterial contamination in human platelet products.

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Preparation and Pathogen Inactivation of Double Dose Buffy Coat Platelet Products using the INTERCEPT Blood System

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the highest possible level of safety for transfusion patients, including protection from transfusion transmitted diseases. This must be accomplished in a fiscally responsible manner which minimizes operating expenses including consumables, equipment, waste, and personnel costs, among others.
Several methods are available to produce platelet concentrates for transfusion. One of the most common is the buffy coat method in which a single therapeutic platelet unit (&ge; 2.0 x1011 platelets per unit or per local regulations) is prepared by pooling the buffy coat layer from up to six whole blood donations. A procedure for producing "double dose" whole blood derived platelets has only recently been developed.
Presented here is a novel method for preparing double dose whole blood derived platelet concentrates from pools of 7 buffy coats and subsequently treating the double dose units with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. INTERCEPT was developed to inactivate viruses, bacteria, parasites, and contaminating donor white cells which may be present in donated blood. Pairing INTERCEPT with the double dose buffy coat method by utilizing the INTERCEPT Processing Set with Dual Storage Containers (the "DS set"), allows blood centers to treat each of their double dose units in a single pathogen inactivation processing set, thereby maximizing patient safety while minimizing costs. The double dose buffy coat method requires fewer buffy coats and reduces the use of consumables by up to 50% (e.g. pooling sets, filter sets, platelet additive solution, and sterile connection wafers) compared to preparation and treatment of single dose buffy coat platelet units. Other cost savings include less waste, less equipment maintenance, lower power requirements, reduced personnel time, and lower collection cost compared to the apheresis technique.

This article describes the process used by &#214;rebro University Hospital to produce double dose buffy coat platelet concentrates prepared from whole blood donations and treated with the INTERCEPT Blood System for pathogen inactivation. The in vitro quality of the final platelet units are evaluated over 7 days of storage.

차단 혈액 시스템을 사용하여 준비 및 더블 복용 버피 코트의 혈소판 제품의 병원체 불 활성화

Blood centers are faced with many challenges including maximizing production yield from the blood product donations they receive as well as ensuring the ...

연구

의학

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, transmission of antibiotic resistant bacteria between animals and humans, and the high cost of treating infections.
In this study, we disclose a new strategy that may be effective in preventing implant-associated infection based on the potential antimicrobial properties of platelet-rich plasma (PRP). Due to its well-studied properties for promoting healing, PRP (a biological product) has been increasingly used for clinical applications including orthopaedic surgeries, periodontal and oral surgeries, maxillofacial surgeries, plastic surgeries, sports medicine, etc.
PRP could be an advanced alternative to conventional antibiotic treatments in preventing implant-associated infections. The use of PRP may be advantageous compared to conventional antibiotic treatments since PRP is less likely to induce antibiotic resistance and PRP's antimicrobial and healing-promoting properties may have a synergistic effect on infection prevention. It is well known that pathogens and human cells are racing for implant surfaces, and PRP's properties of promoting healing could improve human cell attachment thereby reducing the odds for infection. In addition, PRP is inherently biocompatible, and safe and free from the risk of transmissible diseases.
For our study, we have selected several clinical bacterial strains that are commonly found in orthopaedic infections and examined whether PRP has in vitro antimicrobial properties against these bacteria. We have prepared PRP using a twice centrifugation approach which allows the same platelet concentration to be obtained for all samples. We have achieved consistent antimicrobial findings and found that PRP has strong in vitro antimicrobial properties against bacteria like methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Group A Streptococcus, and Neisseria gonorrhoeae. Therefore, the use of PRP may have the potential to prevent infection and to reduce the need for costly post-operative treatment of implant-associated infections.

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

Implant-associated infection is a significant clinical complication. This study describes an approach using platelet-rich plasma (PRP) to prevent implant-associated infections, presents the protocol for preparing PRP with constant platelet concentration, and reports the newly identified antimicrobial properties of PRP and related protocols for examining such antimicrobial properties in vitro.

준비를 한 다음 감염을 방지하기 위해 새로운 접근 방식으로 PRP<em&gt; 체외에서</emPRP의&gt; 항균 속성

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

면역학 및 감염병학

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

미세 유체 흐름 챔버 지혈 및 혈소판 수혈을 모델링하기 위해 재구성 된 혈액을 사용하여<em&gt; 체외</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

생체공학

LED-Based In Vitro Screening for Assessing Photoactivable Molecules in Bacterial Photodynamic Inactivation

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic inactivation of bacteria (aPDI). This process involves the administration of a photosensitizer (PS) activated by a suitable visible light source, producing exacerbated levels of reactive oxygen species (ROS) that damage crucial cellular biomolecules, ultimately causing bacterial cell death. It is crucial to create standardized, easy-to-use, and reproducible initial tests to assess and compare the effectiveness of light-induced phototoxicity of potential photosensitizers. This study introduces a simple and efficient in vitro technique for assessing photodynamic activity against planktonic bacterial cells. By employing a 96-well microplate format along with a large LED panel, the system facilitates the systematic evaluation of various compounds. Such a configuration allows for high-throughput screening of potential photosensitizers in a controlled and consistent environment, simplifying the process of identifying promising candidates for further development. This flexible platform serves as an important step in advancing the development of innovative photodynamic therapies for managing antibiotic-resistant infections.

This protocol describes a straightforward and economical method for evaluating the effectiveness of potential photosensitizers in antibacterial photodynamic inactivation (aPDI), using a 96-well plate format combined with an LED panel light source. This approach enables the simultaneous testing of multiple experimental conditions, including different concentrations, compounds, and bacterial strains.

박테리아 광역학 불활성화에서 광활성 분자를 평가하기 위한 LED 기반 체외 스크리닝

The rise of multi-drug-resistant infections and the lack of new antibiotic classes have renewed interest in alternative therapies like photodynamic ...

생화학

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic growth of C. albicans SN425, the inoculums grew on Yeast Nitrogen Base media. For biofilm formation, RPMI 1640 media, which have high concentrations of amino acids, were applied to help biofilm growth. Biofilms of 48 h were treated twice a day for a period of 1 min with a non-coherent light device (red light; wavelength = 635 nm; energy density = 87.6 J&#183;cm-2). As a positive control (PC), 0.12% chlorhexidine (CHX) was applied, and as a negative control (NC), 0.89% NaCl was applied to the biofilms. Colony forming units (CFU), dry-weight, soluble and insoluble exopolysaccharides were quantified after treatments. Briefly, the protocol presented here is simple, reproducible and provides answers regarding viability, dry-weight and extracellular polysaccharide amounts after red light treatment.

Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth

Here, we present a protocol to assess the outcome of red light application on the growth of Candida albicans biofilm. A non-coherent red light device with the wavelength of 635 nm and energy density of 87.6 J&#183;cm-2 was applied throughout the growth of Candida albicans biofilms for 48 h.

규제 Candida albicans Biofilm 성장에 붉은 빛으로 매일 광선 요법

Here, we present a protocol to assess the outcomes of per diem red light treatment on the growth of Candida albicans biofilm. To increase the planktonic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

혈소판 수혈에 미에 대 한 메서드를 검사 하는 루틴

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can be generated from FMN photolysis upon irradiation with visible light. The ROS generated from FMN photolysis are harmful to microorganisms, including pathogenic bacteria such as Staphylococcus aureus (S. aureus). This article presents a protocol for deactivating S. aureus, as an example, via photochemical reactions involving FMN under visible light irradiation. The superoxide radical anion (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" />) generated during the FMN photolysis is evaluated via nitro blue tetrazolium (NBT) reduction. The microbial viability of S. aureus that is attributed to reactive <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63531/63531eq01v3.png" style="margin: auto;" /> species was used to determine the effectiveness of the process. The bacterial inactivation rate is proportional to FMN concentration. Violet light is more efficient in inactivating S. aureus than blue light irradiation, while the red or green light does not drive FMN photolysis. The present article demonstrates FMN photolysis as a simple and safe method for sanitary processes.

Inactivation of Pathogens via Visible-Light Photolysis of Riboflavin-5&#8242;-Phosphate

Here, we present a protocol to inactivate pathogenic bacteria with reactive oxygen species produced during photolysis of flavin mononucleotide (FMN) under blue and violet light irradiation of low intensity. FMN photolysis is demonstrated to be a simple and safe method for sanitary processes.

리보플라빈-5'-인산염의 가시광선 광분해를 통한 병원체 불활성화

Riboflavin-5&#39;-phosphate (or flavin mononucleotide; FMN) is sensitive to visible light. Various compounds, including reactive oxygen species (ROS), can ...

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, mouth, vagina, and skin. Despite the availability of antifungal medication, the mortality rate of invasive candidiasis remains ~50%. Unfortunately, the incidence of drug-resistant C. albicans is increasing globally. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer an alternative or adjuvant treatment to inhibit C. albicans biofilm formation and overcome drug resistance. Rose bengal (RB)-mediated aPDT has shown effective cell killing of bacteria and C. albicans. In this study, the efficacy of RB-aPDT on multidrug-resistant C. albicans is described. A homemade green light-emitting diode (LED) light source is designed to align with the center of a well of a 96-well plate. The yeasts were incubated in the wells with different concentrations of RB and illuminated with varying fluences of green light. The killing effects were analyzed by the plate dilution method. With an optimal combination of light and RB, 3-log growth inhibition was achieved. It was concluded that RB-aPDT might potentially inhibit drug-resistant C. albicans.

Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy to Inhibit Candida albicans

The growing incidence of drug-resistant Candida albicans is a serious health issue worldwide. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) may offer a strategy to fight against drug-resistant fungal infections. The present protocol describes Rose bengal-mediated aPDT efficacy on a multidrug-resistant C. albicans strain in vitro.

로즈 벵골 매개 광역학 치료 칸 디다 알비칸을 억제하기 위해

Invasive Candida albicans infection is a significant opportunistic fungal infection in humans because it is one of the most common colonizers of the gut, ...

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to eradicate not only due to the emergence of antibiotic-resistant strains but also its ability to form biofilms. Recently, photodynamic therapy (PDT) has been indicated as one of the potential treatments for controlling biofilm infections. However, further studies are required to improve our knowledge of its effect on bacterial biofilms, as well as the underlying mechanisms. This manuscript describes an in vitro model of PDT with 5-aminolevulinic acid (5-ALA), a precursor of the actual photosensitizer, protoporphyrin IX (PpIX). Briefly, mature S. aureus biofilms were incubated with ALA and then exposed to light. Subsequently, the antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilm was quantified by calculating the colony forming units (CFUs) and visualized by viability fluorescent staining via confocal laser scanning microscopy (CLSM). Representative results demonstrated a strong antibacterial effect of ALA-PDT on S. aureus biofilms. This protocol is simple and can be used to develop an in vitro model to study the treatment of S. aureus biofilms with ALA-PDT. In the future, it could also be referenced in PDT studies utilizing other photosensitizers for different bacterial strains with minimal adjustments.

An In Vitro Model to Study the Effect of 5-Aminolevulinic Acid-mediated Photodynamic Therapy on Staphylococcus aureus Biofilm

This manuscript describes a protocol to study the antimicrobial effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy (ALA-PDT) on a Staphylococcus aureus biofilm. This protocol can be used to develop an in vitro model to study the treatment of bacterial biofilms with PDT in the future.

황색 포도상구균 Biofilm에 5-Aminolevulinic 산-중재 Photodynamic 치료의 효과 연구 하는 체 외에서 모델

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common human pathogen, which causes pyogenic and systemic infections. S. aureus infections are difficult to ...

생물학

<meta charset="utf8"></head><body>혈소판 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 및 미세소포 방출 분석

Procoagulant Platelet Characterization by Measuring Phosphatidylserine Exposure and Microvesicle Release from Human Purified Platelets

Activated platelets promote coagulation primarily by exposing the procoagulant phospholipid phosphatidylserine (PS) on their outer membrane surfaces and releasing PS-expressing microvesicles that retain the original membrane architecture and cytoplasmic components of their originating cells. The accessibility of phosphatidylserine facilitates the binding of major coagulation factors, significantly amplifying the catalytic efficiency of coagulation enzymes, while microvesicle release acts as a pivotal mediator of intercellular signaling. Procoagulant platelets play a crucial role in clot stabilization during hemostasis, and their increased proportion in the bloodstream correlates with an increased risk of thrombosis. It has also been shown that platelet microvesicles are rich in growth factors that promote wound healing and inflammatory modulation. Analyzing phosphatidylserine exposure and microvesicle release using flow cytometry poses significant challenges due to their small size and the limited number of positive events for markers of interest. Despite considerable advances in the last decade, methods for assessing phosphatidylserine exposure and microvesicle release remain a work in progress. Unfortunately, no single universally applicable protocol exists, and several factors must be evaluated to determine the most appropriate methodology for each specific application. Here, we describe a detailed protocol for isolating washed platelets from human blood, followed by collagen and/or thrombin activation, to measure the exposure of phosphatidylserine and microvesicle release that characterize procoagulant platelets. This protocol is designed to facilitate the initial preparation of platelet-rich plasma and the isolation of washed platelets. Finally, phosphatidylserine exposure and microvesicle release are quantified by flow cytometry, enabling the identification of procoagulant platelets.

<meta charset="utf8"></head><body>인간 정제 혈소판에서 포스파티딜세린 노출 및 미세소포 방출을 측정하여 응고제 혈소판 특성 분석

Procoagulant platelet formation has been correlated with an increased risk of thrombosis. Presented here is a precise protocol for isolating washed platelets from human blood, intended to quantify the exposure of phosphatidylserine and microvesicle release, which are distinctive features of procoagulant platelets.

인간 정제 혈소판에서 포스파티딜세린 노출 및 미세소포 방출을 측정하여 응고제 혈소판 특성 분석

Activated platelets promote coagulation primarily by exposing the procoagulant phospholipid phosphatidylserine (PS) on their outer membrane surfaces and ...

리보플라빈과 혈소판 제품 및 자외선 치료 : 높은 역가 세균 오염에 대해 효과

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