The experiments were supported by a grant from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada to CMSP. We thank Koppert Canada for their bumblebee colony donations. Portions of this manuscript, including some figures and tables have been published in Naturwissenschaften11, and reproduced here with permission from Springer.

오타와 대학의 동물 관리위원회는 꿀벌 작업 인원의 안전 절차를 묘사 우리의 실험 프로토콜을 승인했다. 1. 테스트 환경 준비 <ol><li> 2 MX 2 MX 2m의 빈 공간 (격리 방, 또는 금속 스크린 덮여 비행 케이지)를 준비합니다. 주 : 방은 테스트 공간으로 선택하면, 꿀벌은 창문을 통해 탈출 할 수 있도록, 문에서 공백 및 공기 교환 덕트. </li><li> 꿀벌 입력하고 방해없이 시험 공간을 종료 할 수 있습니다 비행 케이지에 작은 진입 점 (예를 들어, 약. 2cm 직경의 구멍)를 추가합니다. 유지 보수 및 장비 구성을 위해 예약 된 기간 동안 시험 공간이 꿀벌 유지 액세스 포인트를 차단하는기구를 디자인. 참고 : 우리는 뒤이 Cresson 근로자 봉선화 사용. </li><li> 커넥터를 사용하여 테스트 공간에 하나 또는 두 개의 식민지 박스를 연결합니다. 죽은 꿀벌 BLO 할 수 있는지 확인커넥터 CK. NOTE : 유리 윗 덮개와 나무 &quot;다리&quot;구조, 및 와이어 메쉬 튜브 : 여기서, 접속 구조의 두 가지 유형을 사용한다. 그들은 청소하기 쉽고 그들은 꿀벌에 대한 견인을 제공합니다. </li><li> 테스트 공간 안에 두 개의 인공 꽃 홀더를 놓습니다. <ol><li> 시험 공간의 중앙에 꽃 홀더를 배치하거나 벽에 부착합니다. </li><li> 마스킹 테이프를 사용하여 인공 꽃의 원통 부의 상단에 &quot;2K6 헤드&quot;RFID 리더를 연결 (위치 결정도 1을 참조). 인공 꽃을 첨부 할 수있는 1.2 m 높이 나무 스탠드를 사용합니다. 참고 : 스탠드의 상단이 조화를 연결할 수 첨부 메커니즘을 특징으로한다. 개략도는 그림 2를 참조하십시오 </li></ol></li><li> 고주파 (분. 200 Hz에서) 추가 형광등을 적절하게 테스트 공간에 불을. 그 LIG되도록 고주파 전자식 안정기를 사용HT 깜박임 현상이 땅벌 &#39;시각적 플리커 융합 임계 값을 6 이상입니다. 참고 : 여기에, 2 × 2 × 2m의 공간을 약 1,200 룩스의 빛의 강도를 생산 (12) 일광 형광 전구를 사용합니다. </li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/52033/52033fig1highres.jpg" /> 그림 1. RFID 인공 꽃 디자인. 실험 1. RFID 리더에 사용되는 RFID 기반 인공 꽃의 개략도 꽃의 중심을 오픈 실린더의 상단에 휴식. 자극 패턴과 위치 :. 주변-동심, B. 중앙 동심, C. 주변 레이디 얼 및 D. 중앙 반경. 이 수치는 오르 반 등. (11)에서 수정되었습니다. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/52033/52033fig2highres.jpg" /> <strong&gt; 그림 2. 자극 디스플레이 스탠드. 인공 꽃 자극 스탠드의 디자인 및 첨부 파일 클립을 보여주는 개략도. 첨부 클립은 인공 꽃에 붙어하고 신속과 자극 스탠드에서 자극을 연결하고 분리하는 데 사용됩니다. 이 구성은 움직임에 민감한 비디오 실험에 사용되었다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52033/52033fig2highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 2. 꿀벌 식민지 준비 <ol><li> 상업적으로 주문 식민지의 도착, 비행 케이지에 식민지 상자를 연결합니다. </li><li> 테스트 세션의 시작 때까지 (부피 기준 1) 광고 무제한 (식물의 다양한 꿀벌에 의해 수집) 꽃가루와 설탕 물을 제공합니다. <ol><li> 물 1 L를 삶아 및 설탕 수용액을 만드는 설탕의 동일한 부피 섞는다. </li><li> 양보가 또는 COM에서 꽃가루를 구입꿀벌 식민지의 상업 협력 업체. 박격포와 유 봉 꽃가루를 갈기, 그리고 습한 붙여 넣기로 그것을 만들기 위해 꿀 (필요에 따라) 물과 혼합. </li></ol></li><li> 실험이 시작되면, 일일 당 물 15-40 ㎖ (콜로니 크기에 비례하는 양)을 제공한다. 꽃가루 수의를 제공하기 위해 계속합니다. 꿀 냄비에 저장 수준에 따라 설탕 물 양을 조절합니다. 참고 : 유지 식품 저장하고 낮은 수준의 노동자가 더 많은 음식을 추구하는 둥지를 떠날에 대한 인센티브를 제공한다. </li><li> 단계 1.3에 기재된 바와 같이 꿀벌, 커넥터 비아 구조 테스트 환경을 시작하도록 허용. 참고 : 꿀벌 둥지와 실험을하는 동안 테스트 환경을 자유롭게 이동합니다. </li></ol> 무선 주파수 식별 정보를 이용하여 관측 3. 준비 <ol><li> 식민지가 도착하자마자 노동자의 가슴에 RFID 태그를 붙이기 시작하고 새로운 작품으로, 실험을하는 동안 계속ERS이 등장. </li><li> 접착 기술 <ol><li> 초기 태그 중 개별 용기에 모든 근로자를 놓습니다. 냉장고 (약 12 ° C)에서 약 1 시간 동안 차가운 노동자 다운을 느리게합니다. 참고 : 태그에 앞서 근로자를 냉각 적극적인 식민지가 더 관리 할 수​​ 있도록하는 데 도움이됩니다. 이것은 독침의 기회를 최소화한다. </li><li> (태그 제공자에 의해 제공되는) 태깅 장치 및 무독성 접착제를 사용하여, 작업자의 흉부에 RFID 태그를 부착. (그들은 비행 할 수있는 전)가 풋내기 단계에 아직도있는 동안 근로자에​​ 접착제 RFID 태그는 그들이 등장으로. </li><li> 작업자에 의해 제거 될 수없는 RFID 태그를 보장하기 위해 식민지에서 다시 노동자를 배치하기 전에 10 분의 최소 기다립니다. </li></ol></li><li> (접착제 잔류 물 또는 흉부에 대머리 패치와 같이) 자신의 RFID 태그를 잃은 자신의 풋내기 단계에서 태그도 포함되지 않은 근로자 또는 근로자 폐기하십시오. 참고 :이 꿀벌 있었다 경험을 outsid 수 있습니다식민지 전자. </li><li> RFID Reader 소프트웨어 <ol><li> RFID 리더 소프트웨어를 구성하는 퍼스널 컴퓨터 (PC)를 사용한다. YYYY-MM-DD HH에 운영 체제의 날짜 형식 변경 : mm : ss로 다운로드 된 RFID 데이터가 정확하게 인코딩되도록. 쉼표로 구분 된 값 (CSV)와 같은 RFID 리더에 데이터를 익스포트하도록 C ++ 프로그래밍 언어를 사용하여 RFID 판독기와 함께 공급 된 프로그램을 조정한다. </li><li> RS-232에 USB 커넥터를 이용하여 컴퓨터에 RFID 리더를 연결한다. 리더는 저장 용량 (최대 32,000 레코드)에 도달하기 전에, 주기적으로 RFID 리더로 ​​데이터를 다운로드. 날짜, 시간 및 각 태그와 연관된 열세 문자 고유 한 문자열을 기록하는 RFID 리더를 사용합니다. 관계형 데이터베이스 관리 시스템 (RDBMS)에 다운로드 한 CSV 파일을 가져. </li></ol></li></ol> RFID 판독기 4. 인공 꽃 준비 <ol><li> 지역 공예 저장소에서 파란색과 노란색 빵 점토를 구입하십시오. </li><li> BL 만들기UE 1.5 cm의 직경을 갖는 실린더, 및 측면에 1.5 cm × 3 센티미터 구멍 잘라. NOTE : 실린더 측 구멍 RFID 리더에 대한 저장소의 역할을한다. </li><li> 일단에 8cm, 타단에 1.5 cm의 직경을 갖는 청색 원뿔 만들기. </li><li> 실린더와 콘을 병합합니다. </li><li> 노란색 점토의 20cm 길이 0.5 cm 폭 가닥을 만듭니다. </li><li> 크기에 노란색 가닥을 잘라, 청색 원뿔과 실린더로 작동합니다. 참고 : 방사형 모양이 5cm 긴 직선이 필요합니다, 동심원 모양 4-8cm 긴 원형의 선이 필요합니다. </li><li> 완전히 경화 될 때까지 130 ° F에서 점토를 구워. </li></ol> 모션 감지 비디오 녹화에 의한 관측 5. 준비 <ol><li> 즉시 식민지가 도착하는대로 일벌의 가슴에 컬러 플라스틱 숫자 태그를 붙이기 시작하고 새로운 노동자 등장으로 실험을하는 동안 계속합니다. </li><li> 초기 taggi 동안 모든 근로자를 제거세션을 ng를하는 것은 모든 개인이 다수의 태그를 받도록합니다. 다시 식민지에서 바로 태그 후 장소 노동자. 참고 : RFID 태그와는 달리, 숫자 태그 노동자 제거하기가 더 어렵습니다. </li><li> 새로운 노동자 등장으로 그들은 여전히​​ 애송이하는 동안, 그들에 태그를. 주파수 태그를 붙이려면 2-3 일마다 7-10 노동자들에게 식민지 사이클의 상태에 따라 다르지만 평균. 더 이상 꽃 순진한 없을 수 있기 때문에 자신의 풋내기 단계에서 태그도 포함되지 않은 근로자 폐기하십시오. </li><li> 가능한 태그 숫자보다 더 많은 근로자를 태그에 대한 시스템 NOTE : 실험 개월간 계속 복수 콜로니가 관련된 경우, 가능한 태그 번호가 소진했을 가능성이있다. 693 동시에 태그 노동자까지 허용 각각 1부터 99까지 번호가 매겨진 약 7 구별 태그 색상이있다. 훨씬 넘는 693 총 근로자, 그러나 결코 동시에 살아있을 것이다 3-4 식민지를 사용하여 3 개월 실행 실험. &lt;OL&gt; <li> 특히 다음과 같은 숫자, 숫자 태그가 체계적으로 위치 (예를 들어, 태그 번호의 상단은 항상 꿀벌의 머리와 정렬) 있는지 확인하십시오 : 6, 9, 66, 69, 99. </li><li> 죽은 노동자를 제거하고, &quot;자유 로워&quot;로 자신의 태그 번호를 기록한다. &quot;가능&quot;이다 태그 번호와 색상의 데이터베이스를 유지 또는 &quot;사용&quot;고유 태그가 동시에 여러 꿀벌에 사용되지 않도록 보장한다. NOTE : 추가 태그 조합이 색이 이미 존재하는 컬러를 첨가함으로써 제조 될 수있다. 예를 들어, 샤피 펜으로 블루 태그에 노란색 점을 추가하는 것은 새로운 조합을 만들 수 있습니다. </li></ol></li><li> 비디오 데이터 처리 <ol><li> 테스트 환경 외부에서 (도 3 참조), 각각의 꽃 디스플레이 앞의 두 개의 인터넷 프로토콜 (IP) 캠코더 (최소 1 MP 화상 해상도)를 놓는다. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/52033/52033fig3highres.jpg" /> <st룽&gt; 그림 3. 테스트 환경. 포 그라운드에서 두 정면 캠코더를 보여주는 테스트 환경의 사진, 조명기구, 그리고 자극 사이의 천장 캠코더는 방 가운데에 샘플 자극을 의미합니다. 참고 : IP 캠코더와 인공 꽃 사이에 유리 칸막이는 인공 꽃은 명확하게 볼 수 있습니다 보장합니다. IP 캠코더 멀리 자극에서 5m까지 할 수있다. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52033/52033fig3highres.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> </li><li> 1.8 mm 다 초점 렌즈와 주식 렌즈를 교체합니다. 이 렌즈는 충분한 줌을 허용하고 인공 꽃에 초점을 맞 춥니 다. </li><li> 인공 꽃의 앞에 지역 1~2m에 초점을 맞추고, 직접 인공 꽃 위에 추가 IP 캠코더를 놓습니다. 이 캠코더는 유혹과 antennation 행동을 캡처합니다. </li><li> IP 캠코더를 연결합니다<html> 보조 네트워크 인터페이스 컨트롤러 (NIC), 및 이더넷 허브를 통해 PC에 관한 것이다. </li><li> 동적 IP 캠코더에 IP 어드레스를 분배 할 PC의 동적 호스트 구성 프로토콜 (DHCP)를 구성. </li><li> PC상의 파일 전송 프로토콜 (FTP) 서버를 구성. </li><li> 자동으로 PC에 비디오 클립을 증착 FTP 클라이언트 프로세스를 구성. </li><li> 마다 움직임 감지 10 초 비디오 클립을 기록하는 IP 캠코더를 구성. </li></ol></li><li> 비디오 클립 분석 <ol><li> 비디오 클립을 열고 선택의 비디오 뷰어를 사용하여 내용을 프레임 별을 볼 수 있습니다. </li><li> 꿀벌의 플라스틱 태그 번호, 날짜와 스프레드 시트 나 RDBMS에 기록 시간을 기록한다. 여기에, 꿀벌의 다리가 인공 꽃과 접촉으로 착륙을 정의합니다. 참고 : (다른 꿀벌이 자극에 존재하는 상태에서 착륙을) 사회적으로 영향을받는 선택을 폐기하십시오. </li></ol></li></ol>비디오 감시를위한 전자 &quot;&gt; 6. 인공 꽃 준비 <ol><li> 그래픽 편집 소프트웨어를 사용하여 시각적 속성을 디자인합니다. 참고 : 인쇄 된 패턴을 잘라 콘으로 접을 수 있는지 확인합니다. 8cm 직경 콘 결과 컷 아웃 형상을 생성하는 기하학적 인 계산을 사용한다. </li><li> 인쇄, 절단, 및 콘에 시각적 속성을 접습니다. </li><li> 접착제 부착 클립 (도 2 참조)를 자극한다. </li></ol> 7. 통계 분석 <ol><li> 두 실험에서, 각 꿀벌에 대한 선택 비율 계산 (예를 특정 꿀벌 Y의 총에서 하나의 꽃의 X의 선택을). </li><li> 맞춤 테스트 (7)의 복제 세상에 이러한 비율을 분석합니다. 참고 : 복제 된 G-테스트의 전반적인 의미를 나타냅니다 복제물의 변화 (즉, 각 벌)의 양을 나타내는 이질성 값 (G의 시간) 및 풀링 된 값 (G의 p)를 계산모든 선택 비율. G 값은 의미의 시험에서이 값을 χ 비교됩니다. </li></ol> 8. 자극 프리젠 테이션 순서 <ol><li> 시험 공간 내부의 꽃 스탠드에 인공 꽃을 연결합니다. 위치 효과를 피하기 위해 (매일, 예) 일정한 시간 간격의 조합과 표시되는 자극의 위치를 변경한다. </li></ol> 9. 연구 종료 <ol><li> 삼일은 꿀벌을 죽일 -10 ° C에서 깊은 냉동고에 식민지를 놓습니다. </li></ol>

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	<li>Plowright, C. M. S., Evans, S. A., Leung, J. C., Collin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+preference+for+symmetry+in+flower-na&#239;ve+and+not-so-na&#239;ve+bumblebees.">The preference for symmetry in flower-na&#239;ve and not-so-na&#239;ve bumblebees.</a> Learn. Motiv. 42 (1), 76-83 (2011).</li><li>Streit, S., Bock, F., Pirk, C. W. W., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+life-long+monitoring+of+individual+insect+behaviour+now+possible.">Automatic life-long monitoring of individual insect behaviour now possible.</a> Zool. 106, 169-171 (2003).</li><li>Chittka, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+human+are+insects,+and+does+it+matter.">How human are insects, and does it matter.</a> Formosan Entomol. 31, 85-99 (2011).</li><li>Lihoreau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radar+tracking+and+motion-sensitive+cameras+on+flowers+reveal+the+development+of+pollinator+multi-destination+routes+over+large+spatial+scales.">Radar tracking and motion-sensitive cameras on flowers reveal the development of pollinator multi-destination routes over large spatial scales.</a> PLoS Biol. 10 (9), e1001392 (2012).</li><li>Brodbeck, D. R., Shettleworth, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matching+location+and+color+of+a+compound+stimulus:+Comparison+of+a+food-storing+and+a+nonstoring+bird+species.">Matching location and color of a compound stimulus: Comparison of a food-storing and a nonstoring bird species.</a> J. Exp. Psychol. Anim. Behav. 21 (1), 64-77 (1995).</li><li>Srinivasan, M., Lehrer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+resolution+of+colour+vision+in+the+honeybee.">Temporal resolution of colour vision in the honeybee.</a> J. Comp. Physiol. A. 157 (5), 579-586 (1985).</li><li>Sokal, R. R., Rohlf, F. J., Freeman, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> , (2011).</li><li>Lunau, K., Fieselmann, G., Heuschen, B., van de Loo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+targeting+of+components+of+floral+colour+patterns+in+flower-na&#239;ve+bumblebees+(Bombus+terrestris;+Apidae).+.">Visual targeting of components of floral colour patterns in flower-na&#239;ve bumblebees (Bombus terrestris; Apidae). .</a> Naturwissenschaften. 93 (7), 325-328 (2006).</li><li>Lehrer, M., Horridge, G. A., Zhang, S. W., Gadagkar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape+vision+in+bees:+Innate+preference+for+flower-like+patterns.">Shape vision in bees: Innate preference for flower-like patterns.</a> Phil. Trans. R. Soc. B. 347 (1320), 123-137 (1995).</li><li>Thompson, E. L., Plowright, C. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+images+may+or+may+not+represent+flowers:+picture-object+correspondence+in+bumblebees+(Bombus+impatiens).">How images may or may not represent flowers: picture-object correspondence in bumblebees (Bombus impatiens).</a> Anim. Cognit. , (2014).</li><li>Orb&#225;n, L. L., Plowright, C. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+flower-like+and+non-flower-like+visual+properties+on+choice+of+unrewarding+patterns+by+bumblebees.">The effect of flower-like and non-flower-like visual properties on choice of unrewarding patterns by bumblebees.</a> Naturwissenschaften. 100 (7), 621-631 (2013).</li><li>Leonard, A. S., Papaj, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X&#8221;+marks+the+spot:+The+possible+benefits+of+nectar+guides+to+bees+and+plants.">X&#8221; marks the spot: The possible benefits of nectar guides to bees and plants.</a> Funct. Ecol. 25 (6), 1293-1301 (2011).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

RFID 기술은 용이하고 고정밀 도로 개인 노동자 공부 수백 가능하지만, 기록 동작의 특성은 인간과 비디오 녹화에 의한 관측 다르다. RFID에 의해 기록의 선택 동작은, 꽃 탐사로서 설명 될 수있다. 이는 패턴 (11, 12)에 접근 8 미로 아암 9,10 진입, 더듬이 반응 8 또는 방문 같은 다른 연구에 사용 조건에 비해 선호 매우 엄격한 기준이다. 순서 선택 행동 특성 정의의 유효성을 비교하고, 무보수 행동에 대한 새로운 RFID 방식의 유효성을 검사하여, 착륙의 비디오 녹화가 실험 2에서 관찰 된 모든 선택 수단이 동일하지 : RFID 기준 꽃 항목에 의해 측정 한 것으로 나타났다 영상 데이터 패턴 유형의 시각적 속성은 꿀벌의 선택에 더 중요하다는 것을 나타내는 반면, 패턴의 위치의 시각적 속성은 꿀벌의 선택에 더 중요하다. 배우지 못한 선택 동작을 연구의 일반 과​​제 중 하나는 어떤 꽃가루 나 꿀을 제공하지 않는 인공 꽃에 꽃 순진, 훈련받지 않은 꿀벌을 유치하기가 매우 어렵다는 점이다. 실제로, 이전의 많은 실험 테스트 자극에서 선택 동작과 무관 한 것으로 생각되고 자극에 테스트 환경에서 꿀벌 훈련 재 분류. RFID 움직임에 민감한 비디오 녹화는 연구원의 지속적인 감독없이, 그리고 수백 꿀벌에 15 ~ 20 벌의 표본 크기를 증가시켜, 연속 촬영, 24 시간 하루를 허용하여이 장애물을 극복. 훈련받지 않은 꿀벌에 의해 무보수 선택이 드문 남아 있지만, 이러한 새로운 실험 설계 매개 변수는 관찰이 가능합니다. 이 두 가지 기술에 의해 제공되는 다른 개선 사항은 개인차 샘플 편견의 제거, 외부 유효성의 개선 및 추적을 포함한다. SAMPL만 식민지에서 다스 정도의 꿀벌을 연구 할 때 전자 바이어스가 도입 될 수있다. 심지어 만 근로자가 주어진 시간에 연구자와 &quot;협력&quot;일이 관찰되기 때문에 가능성이 놓친 같은 식민지 내의 개별 근로자에​​ 걸쳐 행동 특질에 상당한 차이가 있습니다. 300 개 이상의 꿀벌의 식민지에 15 ~ 20 벌을 공부, 경우 샘플링 바이어스가 중요 할 수있는 총 식민지의 적은 5 % 정도를 나타냅니다. 태깅 및 모든 근로자의 행동을 관찰하는 것은 모두이 문제를 제거합니다. 동시 자극 선택지 번호도 조작 할 수있다. 우리는 기술적 인 문제에 대한 우리의 실험에서 이진 선택을 제공하지만, 단일 선택 또는 여러 선택의 디자인도 가능하다. 외부 타당성의 측면에서, 실험실 환경에서 꿀벌을 공부하는 것은 전통적으로 결과의 일반화를 방해하고있다, 이는 높은 인공있다. 예를 들어, 연구자들은 홍보해야했다데이터 수집 ESENT, 꿀벌 하나 테스트 환경 하나 꼴을했고, 시험은 작은 시간 창으로 제한되었다. 이 문서에 설명 된 새로운 기술은 관찰 자율과 제한함으로써 이러한 인위적인 제한을 제거합니다. 우리는 이러한 하나의 꿀벌에 의해 또는 여러 꿀벌에 의해 선택을 반복 여부를 확인 할 수 있기 때문에 마지막으로, 행동의 개인차를 설명 할 수있다. 모션 감지, 높은 공간 해상도 캠코더는 자극 설계의 유연성 측면에서 RFID 기술을 통해 우위를 가지고 : 시각적 자극의 모양은 거의 모든 형태이거나 피사체의 식별이 적어도에 캡처 할 수있는만큼 형성 할 수있다 몇 프레임. 동영상을 처리하면 좀 더 많은 시간이 걸린다 식별은 각 비디오 클립의 수동 조사를 필요로 연구자에 의해 판독 될 필요가 있기 때문에 RFID 데이터를 처리하기보다는. 시각 자극 설계 R의 제약 조건을 충족 할 수 있다면FID 리더 (즉, 꿀벌 RFID 태그는 RFID 리더의 적어도 3~4mm로 와야) 다음, RFID 기술은 자동화 된 대규모 데이터 수집을 통해 에지를 갖는다. 질적 연구는 가능성이 비디오 분석에 의해 호의를 계속합니다. 이 실험에 나타낸 바와 같이, RFID 리더에는 수동 코딩이 필요없는 매우 큰 데이터 세트를 축적 할 수있다. 각각의 기술과 관련된 약간 다른 장점은 미래들이 상보 방식으로 사용될 수 있음을 시사한다. 두 기술의 미래는 거의 발생하지 행동의 정확한 정량화에 누워있다. 예를 들어, 미래의 애플리케이션을위한 하나의 별개의 가능성이 온실 및 다른 많은 자연 환경에서 이러한 기술을 사용하는 것이다. 자연주의 및 실험 제어의 조합은 이전에 대답 할 수 없었다 문제를 해결 할 수있다. 대체로, 이러한 기술은 엄격한의 행동을 관찰하는 두 가지 새로운 방법을 제공합니다ND 효율적인 방법. RFID 움직임에 민감한 비디오뿐만 아니라 수분 매개자 또는 곤충을 공부하는 연구자 앞으로 중요한 단계이지만, 이러한 기술은 또한 다른 행동 과학자들에게 어필 할 수있다.

호박벌과 꿀벌에 의해 배우지 선택 동작을 연구의 핵심 문제는 꽃 순진, 훈련받지 않은 근로자가 쉽게 환경을 측정 할 수있는 시험 공간을 입력하지 않아도됩니다. 사전 교육 노동자 연구자들이 실험 자극 다르게하다고 표면 상 중립적 인 자극에서 시험 공간 내부에 공급하는 : 결과적으로, 많은 연구자들은보다 이상적인 기술에 의존하고있다. 그러나, 최근의 실험은 생각했다 자극 중립 (테스트 세션에서 이후의 선택 행동에 영향을하지 않는 즉, 자극을) 할 것으로 나타났습니다 예상치 못한 일에 환경 영향을 미쳤다. 무선 주파수 식별 (RFID)이 움직임에 민감한 비디오 녹화를 포함 자동화 시스템은 기회가 이러한 문제를 해결 제공 할 수있다. 연구의 목적은 두 가지였다 : (1) 주로, 땅벌에 의해 배우지 꽃 기본 설정에 문학에 기여 (2) 이차적 EV 사이두 개의 서로 다른 자동 기록 장치에 의해 기록 된대로, 두 개의 선택 측정 시스템을 aluate. 3은 본 연구에서 구현 된 두 개의 자동화 된 시스템은 배우지 못한 선택의 행동을 관찰하기 : RFID 움직임에 민감한 비디오 녹화. 두 시스템의 두 가지 중요한 요소는 선택이 보상되지 않고, 다른 시각적 큐의 표시를 조작 할 수있다. (1 MP 해상도로 기록 고화질,) 모션에 민감한 비디오뿐만 아니라 비행 방에서 자유롭게 탐험 근로자의 지속적인 관찰을 할 수 있지만 비교적 드문 이벤트 4의 효율적인 관찰 중요하다. 실험 1에서의 연구 문제는 함께 표시 할 때 시각적 속성이 상호 작용하는 방법을 다른에 관한 것이다. 본 연구는 패턴 유형 관련 패턴 위치의 상대적인 중요성을 탐색하고자한다. (즉, 햇살)과 동심, 반경을 2 × 2 디자인을 사용하여 (즉, 황소의 전자너희) 패턴 유형은 인공 꽃 (자극의 예를 그림 1 참조) 중 중앙 또는 주변으로 배치됩니다. RFID 리더는 이러한 특수 설계된 인공 꽃 자극에 내장되며, 땅벌은 우리가 인공 꽃 자극을 입력 각 태그 노동자를 기록 할 수 있도록 RFID 활성화 태그를받을 수 있습니다. RFID 관찰 수동형 태그의 존재에 의해 변조되는 무선 주파수 신호 (이 경우는 13.56MHz)를 보내기 (인공 꽃에 내장) 리더기구에 의해 작동한다. 독자는 감지하고 태그 고유 식별을 가능하게 태그를 통해 약간 다를 이러한 신호 변조를 기록 할 수 있습니다. 실험 2의 질문은 배입니다. 비디오 녹화 등가 선택 기준에 의해 측정 한, RFID 및 방문 의해 측정 먼저, 꽃 항목인가? 선택은 다른 조치로 이어질 수 있습니다 다른 지점 (비디오 착륙, 및 RFID 꽃 항목)에서 측정선호. 둘째, 주변 위치 대 중앙의 효과는 무엇인가? 이 (그림 (b) 참조) 다른 위치에 두 개의 방사형 패턴으로 구성된 조합을 제시 한 경우 근로자는 중앙 패턴을 선택할 것입니다 여부를 알 수 없습니다. 셋째, 패턴 유형 대 패턴 위치의 상대적 중요성은 무엇인가? 즉, 뒝벌은 바람직한 패턴 유형, 또는 바람직한 패턴 위치의 패턴에 착륙 할 것인가? 꿀벌 주변-동심 패턴에 중앙 반경을 선호 할 수 있지만 기본 설정은 패턴 유형 또는 중앙 위치로 인해 수 있습니다. 이 실험에서, 두 변수는 서로 5 (도 4c 참조, d)에 대하여 움푹 들어가게 하였다. 실험 2에서, 우리는 꽃과 같은 자극에 움직임에 민감한 비디오 녹화를 사용했다. 프론에서 꽃이 인공 꽃은 비행 케이지 내부에 배치하고, 움직임에 민감한 고화질 캠코더는 지적했다t 상단. 테스트 공간에서 두 자극의 각각의 정면도를 포착하도록보다 구체적으로, 두 캠코더 배치 하였다. 추가 캠코더 위에서 동작을 유혹 기록하는 자극 사이에 위치, 인공 꽃 모두에서 동작을 캡처했다. 땅벌 고선명 비디오 클립에서 읽을 수 태그 번호를 사용하여 확인 하였다. 유혹, antennation 착륙 행동이 관찰되었다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="708">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:143px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:231px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Miniaturized mic3 tags</td>
			<td style="width:143px;">Microsensys</td>
			<td style="width:119px;">mic3 TAG 64 bit RO</td>
			<td>RFID tags to glue to bee</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RFID reader 2k6 head</td>
			<td style="width:143px;">Microsensys</td>
			<td style="width:119px;">2k6</td>
			<td>RFID readers built into artificial flowers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">IP camcorders</td>
			<td style="width:143px;">Vivotek</td>
			<td style="width:119px;">IP8161</td>
			<td>Motion-sensitive video recorders</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Opalith Plattchen number tags and non-toxic glue</td>
			<td style="width:143px;">Beeworks.com</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Number tags to glue to bees</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bumblebee Colony for Research</td>
			<td style="width:143px;">Koppert Canada</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Artificial flowers</td>
			<td style="width:143px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Developed by campus biology shop</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Artificial flower stand</td>
			<td style="width:143px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Developed by campus biology shop</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Flight room</td>
			<td style="width:143px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Developed by campus biology shop</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laptop with Windows</td>
			<td style="width:143px;">Generic hardware / Microsoft software</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to download RFID data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">RS 232 to USB converter</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Connect RFID reader to computer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Desktop</td>
			<td style="width:143px;">IBM</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transmit video data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Second NIC</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;">10/100M NIC PCI</td>
			<td>Used to transmit video data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Network hub</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;">4-port</td>
			<td>Used to transmit video data</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">High precision tweezer</td>
			<td style="width:143px;">SPI</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to glue number and RFID tags to bees</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sugar</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to mix with water to create sugar-water</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pollen</td>
			<td style="width:143px;">Any local apiarist</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Fed to bumblebees</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Marking cage with plunger</td>
			<td style="width:143px;">Beeworks.com</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Aids tagging process</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Honey</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to mix with water ot create pollen paste</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bake clay</td>
			<td style="width:143px;">Sculpey</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulus for RFID</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clay shaping tools</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulus for RFID</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">White paper</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulus for Video</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Laser printer</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulus for Video</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Wood</td>
			<td style="width:143px;">Generic</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulus for Video -- attachment clip</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

radio frequency identification and motion-sensitive video efficiently automate recording of unrewarded choice behavior by bumblebees

우리는 폐쇄 된 시험 공간에서 땅벌 선택의 행동을 관찰하기위한 두 가지 방법을 제시한다. 첫 번째 방법은 무선 주파수 식별 (RFID) 다양한 시각적 표시 인공 꽃에 내장 된 리더 및 ​​땅벌 노동자의 가슴에 붙어 RFID 태그 (즉, 수동 트랜스 폰더)로 구성되어 있습니다. 우리의 구현 참신 RFID 리더가 직접 컬러, 패턴 유형, 공간 주파수 (패턴의 즉, &quot;바쁨&quot;), 대칭 (공간 주파수와 같은 여러 가지 별개의 시각적 속성을 표시 할 수있는 인공 꽃에 내장되어 있다는 것입니다 대칭)은이 실험에서 조작되지 않았다. 또한, 자동화 된 시스템과 함께 이들 시각적 디스플레이 보답과 훈련받지 않은 선택 동작을 기록 할 수있다. 두 번째 방법은 움직임에 민감한 고화질 캠코더를 사용하여 인공 꽃에 기록 선택 동작으로 구성되어 있습니다. Bumblebees 고유 식별을 위해 자신의 흉곽에 붙어 번호 태그가 있습니다. RFID 이상이 구현에서 장점 방문 행동을 관찰 외에, 예컨대 호버링 및 antennation 같은 선호도 다른 조치가 관찰 될 수 있다는 것이다. 모두 자동화 방법은 계정의 개인 차이를 고려 큰 규모의 연구를 허용함으로써 실험 제어 및 내적 타당성을 높일 수 있습니다. 꿀벌 자유롭게 입력 및 현장 연구 조교의 가용성 제약없이 테스트 환경을 종료 할 수 있기 때문에 외부 유효성도 개선된다. 실시간 인간 관찰에 비해, 자동화 된 방법보다 비용 효율적이고 아마도 작은 오류가 발생하기 쉬운.

실험 1 : RFID 데이터 식민지의 모든 375 노동자는 RFID 태그가되었으며, 이러한 근로자 (85 ​​%)의 (318)는 연구 기간 동안 어떤 시점에서 비행 케이지에 들어갔다. 197의 총 (식민지를 왼쪽 꿀벌의 62 %)는 네 개의 인공 꽃 자극 중 하나 이상을 방문했다. 선택의 정의 선택은 조화 진입 작업자로 하였다 (도 1 참조). 우리는이 문제 표시 &quot;꽃 탐사를.&quot;선택의이 정의는 연구에 따라, 유혹, antennation 또는 착륙의 조합을 사용, 문헌에 사용 된 것보다 더 엄격하다. 이 꿀벌뿐만 아니라 그것을 탐구하여도, 유혹 antennating, 그것에 착륙,하지만하여 자극에 참석해야하기 때문에 꽃 탐사 선택의 엄격한 정의입니다. 데이터 관리 <p class="jove_content"&gt; RFID 기술은 다른 방법에 비해 데이터의 방대한 양을 수집하는 능력을 갖는다. 이 실험은 310,221 기록을 생산했다. MySQL과 같은 데이터베이스 프로그램은 데이터와 연구 질문에 대한 답을 애타게하는 데 사용 똑같이 중요 SQL 쿼리의이 양을 저장하기위한 필수 불가결 한 도구입니다. 예를 들어, 하나의 문제는 선택의 정의이다. RFID 리더는 분 또는 시간 인공 꽃 내부 머문 꿀벌의 경우, 수천 녹화로 번역 할 수, 태그 1msec마다의 존재를 기록하도록 구성 하였다. 선택의 우리의 정의는 적어도 1 밀리 초를 지속 방문했지만, 녹음의 현재 문자열이 적어도 1 분 휴식에 의해 파괴 될 때까지 새로운 방문은 계산되지 않습니다. 실험의 개요 적합 시험의 네 가지 복제 미덕은 꿀벌 &#39; &quot;순진한 세션&quot;선택 페이지를 비교하는 모든 선택에 실시 하였다기회 (7)의 이론 값에 roportions. 꿀벌의 순진한 세션은 꿀벌이 &quot;참여&quot;하는 최초의 테스트 조건을 의미한다. G-테스트는 중앙 위치 (표 1 참조) 및 방사형 패턴 유형을 선호 공개. 동심원은 중앙에 위치 될 때 패턴이 기본 설정이 반대로되어 방사형 패턴 둘레에 위치되는도 4b를 보여준다. 위치는 그림 4a와 D에서와 같이 일정하게 유지되는 경우, 패턴 기본 설정은 방사형 패턴으로입니다. 4 각 조합에 대한 각 패턴에 대한 첫 번째 선택의 상대적 비율은 모든 선택에 대해 표시된 비율과 비교 있다고 보여줍니다. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/52033/52033fig4highres.jpg"/> 그림 4. RFID 실험 결과. t에서 선택 주파수그 네 가지 꽃 조합 실험 1에서 짙은 갈색 막대 그래프 꿀벌의 나이브 세션 (좌측 y 축)에서 모든 선택 사항을 표시하고, 밝은 갈색 막대는 각각의 작업자의 첫번째 선택에게 (우측 y 축을 나타낸다 ). &quot;모든 선택은&quot;유사한 패턴이 &quot;첫 번째 선택&quot;만에 큰 통계의 전원을 켭니다. 막대 차트 패턴의 위치는 패턴의 종류보다 더 중요한 것으로 나타났다. 중앙에 위치하는 패턴은 패턴 유형을 달리 덜 바람직 동심 패턴을 표시하는 경우에도 바람직 하였다. 별표는 기회와 크게 다른 선택 비율을 나타냅니다. 참고. * P &lt;0.05, ** p &lt;.01, *** p &lt;.001. 이 수치는 오르 반 등. (11)에서 수정되었습니다. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> 조건 </td><td colspan="3"> 피ooled </td><td colspan="3"> 이질 </td><td></td></tr><tr><td> GP </td><td> DF </td><td> 피 </td><td> GH </td><td> DF </td><td> 피 </td><td></td></tr><tr><td> 중앙 - 동심 대 중앙 - 레이디 얼 </td><td> 3.96 </td><td> 1 </td><td> 0.047 </td><td> 197.55 </td><td> (41) </td><td> 0.000 </td><td></td></tr><tr><td> 중앙 - 동심 대 주변 레이디 얼 </td><td> 33.77 </td><td> 1 </td><td> 0.000 </td><td> 210.81 </td><td> (42) </td><td> 0.000 </td><td></td></tr><tr><td> 주변-동심 대 중앙 - 레이디 얼 </td><td> 508.31 </td><td> 1 </td><td> 0.000 </td><td> 345.78 </td><td> (30) </td><td> 0.000 </td><td></td></tr><tr><td> 주변-동심 대 주변 레이디 얼 </td><td> 7.42 </td><td> 1 </td><td> 0.000 </td><td> 84.06 </td><td> (24) </td><td> 0.000 </td><td></td></tr></tbody></table> 표 1. </sRFID 데이터의 trong&gt; 추론 통계.이 테이블은 오르 반 등에서 수정 된 실험 1.. (2013) 11. G p를 기회에서 그룹 비율의 상당한 편차를 의미하고, G h를 (개인 차이에 대한 시험을 말한다 즉, 이질성). 통계 테스트에 대한 자세한 사항은 원고를 참조하십시오. 실험 2 : 비디오 데이터 (264) 선택의 총 세 가지 테스트 세션을 통해 네 가지 조건에서 기록되었다. 표 2는 각 식민지에서 기여 노동자와 선택의 수를 보여줍니다. 선택의 정의 유혹, antennation 및 방문 : 비디오 데이터는 선택 행동의 세 가지 유형의 기록을 할 수 있습니다. 행동의 세 가지 유형이 관찰 될 수 있지만, 유혹과 antennation 것은 difficu은LT는 열악한 해상도, 또는 저속 캠코더는 녹화 할 수 없습니다 빠른 움직임에 태그 번호로 연결합니다. 이것은 고화질 캠코더를 사용하는 것이 중요하다 읽을 수있는 적은 수의 프레임에만 나타나는 태그 번호를 확인하기 위해 (이것은 우리에게 제공되지었지만, 이상적으로 높은 프레임 레이트 캠코더 흐려짐을 최소화하는 데 사용되어야한다) . 이 방법은 또한 꽃 탐사를 검출 RFID 기술과 선택 패턴을 비교하기 위해 사용 하였다. 모션 감도 고려 성공적인 실험을 생산하는 주요 문제 중 하나는 움직임에 민감한 캠코더의 구성입니다. 너무 민감 캠코더는 비현실적이고 처리하기가 매우 비싼 될 수 있습니다 너무 많은 데이터를 기록합니다. 예를 들어, 처음에 우리의 캠코더는 건물의 일반 진동에 의해 트리거 된 (예를 들어, 복도, 에어컨 등 지나가는 사람들) 1R 결과,(11) 모든 150-200 녹화 된 비디오 클립이 유효한 데이터를 가리 킵니다. 한편, 더욱 심각한 오류가 키 데이터를 놓칠 수 저감도 구성이다. 그렇지 않으면, 샘플링 오류 결과를 스큐 수, 동일한 방법으로 모든 캠코더를 구성하는 것이 중요하다. 실험의 개요 적합 시험의 네 가지 복제 미덕은 기회가 크게 이탈 세 그룹의 비율, 그리고 하나의 비 상당한 전체 비율 (표 3, 그림 5 참조) 발견했다. (1) 패턴이 중요하다 : 중앙 동심원 패턴을 통해 중앙 방사형의 중요한 환경 설정은 (표 3 참조) 발견되었다. (2) 방사 패턴의 위치는 덜 중요하다 : - 중앙 방사형 및 말초 방사형 조합의 프레젠테이션 기회에서 유의 한 차이를 보이지 않았다. (3) 중앙 레이디 얼 및 주변-동심 조합을 향해 강한 선호도 결과중앙 방사형 패턴이야. - 중앙 동심 및 주변 레이디 얼 조합은 주변 레이디 얼 패턴으로 중요한 환경 설정을 유도. 패턴 위치를 날조. 개인 차이는 네 가지 조합 (표 3 참조)에 비 유의 하였다. <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/52033/52033fig5highres.jpg"/> . 실험 2에서 4 개의 다른 꽃 조합에서 그림 5. 모션에 맞는 동영상 검색 결과 선택 주파수는 결과는 패턴의 위치를 통해 패턴 유형의 중요성을 보여 방사형 패턴 패턴 둘레에 배치 된 경우에도 선호했다. 값은 표시 패턴의 선택의 수를 나타냅니다. 별표는 기회와 크게 다른 선택 비율을 나타냅니다. 참고. ** p &lt;0.01, *** p &lt;0.001. 이 수치는 오르 반 (11)에서 수정되었습니다. <tabl즉 테두리 = &quot;0&quot;의 cellpadding = &quot;0&quot;cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="2"> 조건 </td><td> 세션 1 </td><td colspan="2"> 세션 2 </td><td colspan="2"> 세션 3 </td></tr><tr><td> 식민지 (1) </td><td> 식민지 2 </td><td> 식민지 3 </td><td> 식민지 4 </td><td> 식민지 5 </td></tr><tr><td> 노동자의 번호 </td><td> (45) </td><td> (7) </td><td> 2 </td><td> 8 </td><td> (23) </td></tr><tr><td> 선택의 번호 </td><td> (151) </td><td> (25) </td><td> 2 </td><td> (20) </td><td> (65) </td></tr></tbody></table> 표 2. 모션에 민감한 비디오 데이터의 기술 통계. 총 각 식민지에 대한 실험 2의 인공 꽃에 기록 된 선택의 수, 이러한 선택을하는 노동자의 수. 이 테이블은 오르 반 등. (11)에서 수정되었습니다. 원고를 참조하십시오자세한 사항. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> 조건 </td><td colspan="3"> 풀링 </td><td colspan="3"> 이질 </td></tr><tr><td> GP </td><td> DF </td><td> 피 </td><td> GH </td><td> DF </td><td> 피 </td></tr><tr><td> 중앙 - 동심 대 중앙 - 레이디 얼 </td><td> 17.98 </td><td> 1 </td><td> 0.000 </td><td> 40.72 </td><td> (29) </td><td> 0.073 </td></tr><tr><td> 주변 방사형 대 중앙 - 레이디 얼 </td><td> 1.85 </td><td> 1 </td><td> 0.173 </td><td> 53.63 </td><td> (39) </td><td> 0.060 </td></tr><tr><td> 중앙 동심 대 주변 레이디 얼 </td><td> 6.57 </td><td> 1 </td><td> 0.010 </td><td> 26.31 </td><td> (27) </td><td> 0.500 </td></tr><tr><td> 주변 동심 대 중앙 레이디 얼 </td><td> 18.18 </td><td> 1 </td><td> 0.000 </td><td> 41.92 </td><td> (37) </td><td>0.256 </td></tr></tbody></table> 표 3. 추론 통계 모션에 맞는 비디오 데이터. 실험 2.이 표는 G (P)가 기회에서 그룹 비율의 상당한 편차를 의미한다 (11).. 오르 반 등에서 수정 된, 및 G의 시간은 개인차에 대한 테스트 (을 말한다 즉, 이질성). 통계 테스트에 대한 자세한 사항은 원고를 참조하십시오.

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Radio Frequency Identification and Motion-sensitive Video Efficiently Automate Recording of Unrewarded Choice Behavior by Bumblebees

This video describes Radio-Frequency Identification (RFID) and motion-sensitive video recording methods to monitor choice behavior by bumblebees.

무선 주파수 식별하고 효율적으로 모션에 민감한 비디오 땅벌에 의해 무보수 선택 행동의 기록을 자동화

We present two methods for observing bumblebee choice behavior in an enclosed testing space. The first method consists of Radio Frequency Identification ...

radio-frequency-identification-motion-sensitive-video-efficiently

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.9K 조회수.  University of Ottawa. This video describes Radio-Frequency Identification (RFID) and motion-sensitive video recording methods to monitor choice behavior by bumblebees. 

비디오: Radio Frequency Identification and Motion-sensitive Video Efficiently Automate Recording of Unrewarded Choice Behavior by Bumblebees

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed in sensory hairs called sensilla, which cover the surface of olfactory organs. The surface of each sensillum is covered with tiny pores, through which odorants pass and dissolve in a fluid called sensillum lymph, which bathes the sensory dendrites of the OSNs housed in a given sensillum. The OSN dendrites express odorant receptor (OR) proteins, which in insects function as odor-gated ion channels4, 5. The interaction of odorants with ORs either increases or decreases the basal firing rate of the OSN. This neuronal activity in the form of action potentials embodies the first representation of the quality, intensity, and temporal characteristics of the odorant6, 7.
Given the easy access to these sensory hairs, it is possible to perform extracellular recordings from single OSNs by introducing a recording electrode into the sensillum lymph, while the reference electrode is placed in the lymph of the eye or body of the insect. In Drosophila, sensilla house between one and four OSNs, but each OSN typically displays a characteristic spike amplitude. Spike sorting techniques make it possible to assign spiking responses to individual OSNs. This single sensillum recording (SSR) technique monitors the difference in potential between the sensillum lymph and the reference electrode as electrical spikes that are generated by the receptor activity on OSNs1, 2, 8. Changes in the number of spikes in response to the odorant represent the cellular basis of odor coding in insects. Here, we describe the preparation method currently used in our lab to perform SSR on Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae, and show representative traces induced by the odorants in a sensillum-specific manner.

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Electrophysiological responses of olfactory sensory neurons to odorants can be measured in insects using single sensillum recordings. In this video article we will demonstrate how to perform single sensillum recordings in the antennae of the vinegar fly (Drosophila melanogaster) and the maxillary palps of the malaria mosquito (Anopheles gambiae).

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

연구

신경과학

Cryopreservation of Cortical Tissue Blocks for the Generation of Highly Enriched Neuronal Cultures

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly enriched neuronal cultures. For this protocol the freezing medium used is 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) diluted in Hank's Buffered Salt Solution (HBSS). Blocks of cortical tissue are transferred to cryovials containing the freezing medium and slowly frozen at -1&deg;C/min in a rate-controlled freezing container. Post-thaw processing and dissociation of frozen tissue blocks consistently produced neuronal-enriched cultures which exhibited rapid neuritic growth during the first 5 days in culture and significant expansion of the neuronal network within 10 days. Immunocytochemical staining with the astrocytic marker glial fibrillary acidic protein (GFAP) and the neuronal marker beta-tubulin class III, revealed high numbers of neurons and astrocytes in the cultures. Generation of neural precursor cell cultures after tissue block dissociation resulted in rapidly expanding neurospheres, which produced large numbers of neurons and astrocytes under differentiating conditions. This simple cryopreservation protocol allows for the rapid, efficient, and inexpensive preservation of cortical brain tissue blocks, which grants increased flexibility for later generation of neuronal, astrocyte, and neuronal precursor cell cultures.

Here, we describe a method for efficient cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly enriched neuronal cultures. This simple protocol provides flexibility for later generation of neuronal, astrocyte, and neuronal precursor cell cultures.

고도의 연결을 강화 문화의 생성을위한 두피 조직 블록의 Cryopreservation

In this study, we outline a standardized protocol for the successful cryopreservation and thawing of cortical brain tissue blocks to generate highly ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of neurons and circuits requires methods with the spatial selectivity and temporal resolution appropriate for mechanistic analysis of neural ensembles in the behaving animal, i.e. recording of representatively large samples of isolated single neurons. Ensemble monitoring of neuronal activity has progressed remarkably in the past decade in both small and large-brained animals, including human subjects1-11. Multiple-site recording with silicon-based devices are particularly effective because of their scalability, small volume and geometric design.
Here, we describe methods for recording multiple single neurons and local field potential in behaving rodents, using commercially available micro-machined silicon probes with custom-made accessory components. There are two basic options for interfacing silicon probes to preamplifiers: printed circuit boards and flexible cables. Probe supplying companies (<a href="http://www.neuronexustech.com/" >http://www.neuronexustech.com/</a>; <a href="http://www.sbmicrosystems.com/">http://www.sbmicrosystems.com/</a>; <a href="http://www.acreo.se/">http://www.acreo.se/</a>) usually provide the bonding service and deliver probes bonded to printed circuit boards or flexible cables. Here, we describe the implantation of a 4-shank, 32-site probe attached to flexible polyimide cable, and mounted on a movable microdrive. Each step of the probe preparation, microdrive construction and surgery is illustrated so that the end user can easily replicate the process.

We describe methods for large-scale recording of multiple single units and local field potential in behaving rodents with silicon probes. Drive fabrication, probe attachment to the drive and probe implantation processes are illustrated in sufficient details for easy replication.

설치류를 행동에 이동 가능한 실리콘 프로브에 의한 뉴런의 대규모 녹화

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated. Thus, simultaneous recordings of neuronal activity and behavior are essential to correlate brain activity to behavior. For such behavioral analyses, the fruit fly, Drosophila melanogaster, allows us to incorporate genetically encoded calcium indicators such as GCaMP1, to monitor neuronal activity, and to use sophisticated genetic manipulations for optogenetic or thermogenetic techniques to specifically activate identified neurons2-5. Use of a thermogenetic technique has led us to find critical neurons for feeding behavior (Flood et al., under revision). As a main part of feeding behavior, a Drosophila adult extends its proboscis for feeding6 (proboscis extension response; PER), responding to a sweet stimulus from sensory cells on its proboscis or tarsi. Combining the protocol for PER7 with a calcium imaging technique8 using GCaMP3.01, 9, I have established an experimental system, where we can monitor activity of neurons in the feeding center &#x2013; the suboesophageal ganglion (SOG), simultaneously with behavioral observation of the proboscis. I have designed an apparatus ("Fly brain Live Imaging and Electrophysiology Stage": "FLIES") to accommodate a Drosophila adult, allowing its proboscis to freely move while its brain is exposed to the bath for Ca2+ imaging through a water immersion lens. The FLIES is also appropriate for many types of live experiments on fly brains such as electrophysiological recording or time lapse imaging of synaptic morphology. Because the results from live imaging can be directly correlated with the simultaneous PER behavior, this methodology can provide an excellent experimental system to study information processing of neuronal networks, and how this cellular activity is coupled to plastic processes and memory.

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, extends its proboscis for feeding, responding to a sugar stimulus from its proboscis or tarsus. I have combined observations of the proboscis extension response (PER) with a calcium imaging technique, allowing us to monitor the activity of neurons in the brain, simultaneously with behavioral observation.

확인된 뉴런과 먹이 행동에서 칼슘 신호의 동시 녹화 Drosophila melanogaster</em

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated.  Thus, ...

Video-oculography in Mice

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for "full-field" image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).
Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system5. Second, the oculomotor system is relative simple6; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture ("single joint") and the three pairs of extra-ocular muscles7. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis8. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes9.
Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels10. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice8.

Video-oculography is a very quantitative method to investigate ocular motor performance as well as motor learning. Here, we describe how to measure video-oculography in mice. Applying this technique on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors.

마우스의 비디오 - oculography

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

Vertical T-maze Choice Assay for Arthropod Response to Odorants

Given the economic importance of insects and arachnids as pests of agricultural crops, urban environments or as vectors of plant and human diseases, various technologies are being developed as control tools. A subset of these tools focuses on modifying the behavior of arthropods by attraction or repulsion. Therefore, arthropods are often the focus of behavioral investigations. Various tools have been developed to measure arthropod behavior, including wind tunnels, flight mills, servospheres, and various types of olfactometers. The purpose of these tools is to measure insect or arachnid response to visual or more often olfactory cues. The vertical T-maze oflactometer described here measures choices performed by insects in response to attractants or repellents. It is a high throughput assay device that takes advantage of the positive phototaxis (attraction to light) and negative geotaxis (tendency to walk or fly upward) exhibited by many arthropods. The olfactometer consists of a 30 cm glass tube that is divided in half with a Teflon strip forming a T-maze. Each half serves as an arm of the olfactometer enabling the test subjects to make a choice between two potential odor fields in assays involving attractants. In assays involving repellents, lack of normal response to known attractants can also be measured as a third variable.

A vertical, T-maze olfactometer is described for assaying the behavioral response of arthropods. The olfactometer allows the experimenter to measure choices performed by test subjects when subjected to two potential odor fields. Both attraction to and repulsion from odorants can be measured with this device.

Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석

Given the economic importance of insects and arachnids as pests of agricultural crops, urban environments or as vectors of plant and human diseases, ...

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling of auditory axons within the VIIIth cranial nerve would enhance the study of central auditory circuit development. This approach is challenging because multiple sensory organs of the inner ear contribute to the VIIIth nerve 1. Moreover, markers that reliably distinguish auditory versus vestibular groups of axons within the avian VIIIth nerve have yet to be identified. Auditory and vestibular pathways cannot be distinguished functionally in early embryos, as sensory-evoked responses are not present before the circuits are formed. Centrally projecting VIIIth nerve axons have been traced in some studies, but auditory axon labeling was accompanied by labeling from other VIIIth nerve components 2,3. Here, we describe a method for anterograde tracing from the acoustic ganglion to selectively label auditory axons within the developing VIIIth nerve. First, after partial dissection of the anterior cephalic region of an 8-day chick embryo immersed in oxygenated artificial cerebrospinal fluid, the cochlear duct is identified by anatomical landmarks. Next, a fine pulled glass micropipette is positioned to inject a small amount of rhodamine dextran amine into the duct and adjacent deep region where the acoustic ganglion cells are located. Within thirty minutes following the injection, auditory axons are traced centrally into the hindbrain and can later be visualized following histologic preparation. This method provides a useful tool for developmental studies of peripheral to central auditory circuit formation.

Here we describe a microdissection technique followed by fluorescent dye injection into the acoustic ganglion of early chick embryos for selective tracing of auditory axon fibers in the nerve and hindbrain.

조류 배아 Vestibulocochlear 신경 청각 섬유의 선택적 추적

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of primary afferent fibers mediated by GABAergic axo-axonal synapses (primary afferent depolarization). The strength of primary afferent depolarization can be measured by recording of volume-conducted potentials at the dorsal root (dorsal root potentials, DRP). Pathological changes of presynaptic inhibition are crucial in the abnormal central processing of certain pain conditions and in some disorders of motor hyperexcitability. Here, we describe a method of recording DRP in vivo in mice. The preparation of spinal cord dorsal roots in the anesthetized animal and the recording procedure using suction electrodes are explained. This method allows measuring GABAergic DRP and thereby estimating spinal presynaptic inhibition in the living mouse. In combination with transgenic mouse models, DRP recording may serve as a powerful tool to investigate disease-associated spinal pathophysiology. In vivo recording has several advantages compared to ex vivo isolated spinal cord preparations, e.g. the possibility of simultaneous recording or manipulation of supraspinal networks and induction of DRP by stimulation of peripheral nerves.

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

GABAergic presynaptic inhibition is a powerful inhibitory mechanism in the spinal cord important for motor and sensory signal integration in spinal cord networks. Underlying primary afferent depolarization can be measured by recording of dorsal root potentials (DRP). Here we demonstrate a method of in vivo recording of DRP in mice.

배근 잠재적 기록하여 생쥐의 척수 시냅스 억제를 측정<em&gt; 생체</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by repeated, time-lapse in vivo imaging in live rodents. These studies were made possible by straightforward surgical procedures, which enabled optical access for a prolonged period of time without repeat surgical procedures. In contrast, analogous studies of the spinal cord have been previously limited to only a few imaging sessions, each of which required an invasive surgery. As previously described, we have developed a spinal chamber that enables continuous optical access for upwards of 8 weeks, preserves mechanical stability of the spinal column, is easily stabilized externally during imaging, and requires only a single surgery. Here, the design of the spinal chamber with its associated surgical implements is reviewed and the surgical procedure is demonstrated in detail. Briefly, this video will demonstrate the preparation of the surgical area and mouse for surgery, exposure of the spinal vertebra and appropriate tissue debridement, the delivery of the implant and vertebral clamping, the completion of the chamber, the removal of the delivery system, sealing of the skin, and finally, post-operative care. The procedure for chronic in vivo imaging using nonlinear microscopy will also be demonstrated. Finally, outcomes, limitations, typical variability, and a guide for troubleshooting are discussed.

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

In this video, we describe a procedure for implanting a chronic optical imaging chamber over the dorsal spinal cord of a live mouse. The chamber, surgical procedure, and chronic imaging are reviewed and demonstrated.

종의 척추 상공 회의소를 주입하는 절차<em&gt; 생체</em&gt; 마우스 척수의 영상

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Quantifying Fish Swimming Behavior in Response to Acute Exposure of Aqueous Copper Using Computer Assisted Video and Digital Image Analysis

Behavioral responses of aquatic organisms to environmental contaminants can be precursors of other effects such as survival, growth, or reproduction. However, these responses may be subtle, and measurement can be challenging. Using juvenile white sturgeon (Acipenser transmontanus) with copper exposures, this paper illustrates techniques used for quantifying behavioral responses using computer assisted video and digital image analysis. In previous studies severe impairments in swimming behavior were observed among early life stage white sturgeon during acute and chronic exposures to copper. Sturgeon behavior was rapidly impaired and to the extent that survival in the field would be jeopardized, as fish would be swept downstream, or readily captured by predators. The objectives of this investigation were to illustrate protocols to quantify swimming activity during a series of acute copper exposures to determine time to effect during early lifestage development, and to understand the significance of these responses relative to survival of these vulnerable early lifestage fish. With mortality being on a time continuum, determining when copper first affects swimming ability helps us to understand the implications for population level effects. The techniques used are readily adaptable to experimental designs with other organisms and stressors.

Measuring the impacts of environmental contaminants on fish behavior is often subjective and challenging particularly when dealing with sublethal endpoints. We describe methods including video technology to quantify swimming behavior of early life stage white sturgeon (Acipenser transmontanus) during and after 96 hr acute exposures to various concentrations of copper.

컴퓨터 원호 비디오 및 디지털 이미지 분석을 사용하여 수성 구리의 급성 노출에 대한 응답에 물고기가 수영 동작을 정량화

Behavioral responses of aquatic organisms to environmental contaminants can be precursors of other effects such as survival, growth, or reproduction.  ...

무선 주파수 식별하고 효율적으로 모션에 민감한 비디오 땅벌에 의해 무보수 선택 행동의 기록을 자동화

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Odorants에 Arthropod 응답을 수직 T-미로 초이스 분석

조류 배아 Vestibulocochlear 신경 청각 섬유의 선택적 추적

배근 잠재적 기록하여 생쥐의 척수 시냅스 억제를 측정

종의 척추 상공 회의소를 주입하는 절차

컴퓨터 원호 비디오 및 디지털 이미지 분석을 사용하여 수성 구리의 급성 노출에 대한 응답에 물고기가 수영 동작을 정량화