We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

모든 실험은 생체 내에서 수행 IACUC 프로토콜을 전체에 따른다 수술 및 비수술 절차를 포함하여 공식 동물의 규정을 준수합니다. Polymalic 산 1. 생물 생산 <ol><li> 한천에 소 구체에서 시드 문화를 성장 보육 및 기초 배지 8,9 진술 열 25 ° C를 사용하여 100 ㎖의 배양 배지에 변형체를 전송할 수 있습니다. </li><li> 포자 형성을 방지하기 위해 빛의 배제하에 중력 포장 500 ㎖ 마이크로 변형체의 양을 생성한다. </li><li> 10 L 생물 반응기 용기에 8 L의 기초 배지에 현탁 80g의를 CaCO3를 준비합니다. 장착 된 반응 용기에 500 ㎖의 포장 마이크로 변형체를 전송하고 25 ° C, 여과 된 공기와 세그먼트 교반 150 rpm으로 교반의 10 L / min의 유량에서 75 시간 동안 생물 공정을 할 수 있습니다. </li><li> 배양액은 PMLA의 생산의 끝을 나타내는 pH가 4.8이 될 때 종료 및 T에 의하여 PMLA 함량을 측정그 / 철 (III) 분석법 히드. </li><li> 17 ° C로 국물을 냉각하고 세포가 중력에 의해 해결 할 수 있습니다. </li><li> 4 ° C로 냉각하고는, pH를 7.5로 조정 2 M NaOH를 사용합니다. (5 ° C에서 20 mM 트리스 - 염산의 pH 7.5와 평형을 거친 곡물 DEAE) 위쪽으로 방향을 바닥에 DEAE-셀룰로오스 1.5 L로 채워진 칼럼을 통해 상층 액을 펌프. </li><li> 위쪽에서 아래쪽으로 방향을 변경 한 후 0.3 M의 NaCl을 포함하는 버퍼의 3 열 세척하고 0.7 M 염화나트륨의 존재에 PMLA을 용출. </li><li> 0.1 M 염화칼슘 2로 조정하고 80 %의 얼음 냉 에탄올로 PMLA 칼슘을 침전. 50 kDa의 버퍼와 소금이없는 상태에서 물을 사용 - 300 kDa의 50 - - 80 kDa의, 10 (80)의 PMLA 칼슘에 세파 덱스 G25을 통해 분별. </li><li> 앰버 IR의 120H + 칼럼을 통해 각 부분을 통과하고, 즉시 동결 건조 용 액체 질소의 흐름을 통해 polymalic 산을 동결. </li><li> 건조 아세톤에 용해. 여과 후, 용매를 제거마이너스 20 ℃에서 건조 공기의 흐름, 냉동 건조 및 저장에 </li></ol> 2. Polymalic 산 기반의 나노 의약품의 합성 <ol><li> 무수 아세톤 1 ㎖를 2 ㎖의 디메틸 포름 아미드 (DMF)의 1 밀리몰 N-히드 록시 숙신이 미드 및 1 밀리몰 디시 클로 헥실 카르 보디이 미드에서 PMLA-H의 116 mg의 (1 밀리몰 malyl 단위)를 혼합함으로써 PMLA (P)의 카르복실기를 활성화. 3 시간 동안 20 ℃에서 교반 하였다. 을 mPEG 5000-NH 2 0.05 밀리몰 트리 에틸 아민 (TEA) 다음에 1 ㎖의 DMF에 (malyl 단위 0.05 몰 %)의 0.05 밀리몰을 추가합니다. </li><li> 현명한 DMF 0.4 밀리몰 류신 에틸 에스테르 (LOEt) (malyl 단위의 40 몰 %)에 용해 드롭 추가 0.1 밀리몰 2 - 티올 일 - 에틸 아민 (2-MEA) (malyl 단위의 10 몰 %) 및 ​​0.5 밀리몰 TEA, 모든 DMF에 용해시켰다. 각 첨가 한 후, 1 시간을 허용하고 응답 (박층 크로마토 그래피, TLC) 닌히 드린 음으로 반응 완료를 확인합니다. </li><li> 인산염 완충 생리 식염수 (30 분, 산도 6.8)와 자연 가수 분해에 의해 남은 NHS-에스테르를 제거 마십시오. PD를 통해 탈염-10 열, 동결 건조하여 백색 분말로서 &quot;preconjugate&quot;를 얻을 수 있습니다. 마이너스 20 ℃에서 보관 건조 </li><li> 100 MM의 인산 나트륨, 150 mM의 염화나트륨, pH를 5.5 4.5 ㎖에 30 밀리그램의 항체 (단클론 항체,의 IgG2a-κ)를 녹입니다. </li><li> 5 mM의 트리스 (2 - 카르복시 에틸) 20 ° C에서 30 분 동안 포스 염산염과 이황화 결합을 줄이고 PD-10 칼럼을 통해 정화. </li><li> 같은 버퍼의 2 ml의 말-PEG 3400 - 말을 녹이고 10 ㎖의 최종 부피의 감소 단클론 항체를 추가하고 4 ℃에서 밤새 교반 Vivaspin 20, 30 kD의 배제에 2.5 ml로 농축하고, 세파 덱스 G75을 통해 정화. 초 HPLC를 통해 제품을 확인하고 photometrically 280 nm 파장에서 양을 측정합니다. </li><li> 말 - PEG - 말 - 단클론 항체를 연결 &quot;preconjugate&quot;P / PEG 5000 (5 %) / LOEt (40 %) / 단클론 항체 (0.2 %) / 2-MEA (10 %)를 획득 티올. 위의 버퍼의 pH 5.5에서 50 밀리그램 (P /을 mPEG 5000 / LOEt/2-MEA) 200 nmol의 단클론 항체-PEG 3400 - 말의 5 ㎖를 혼합하여이 작업을 수행 할 sulfhy의 농도를 조정2 mm로 dryl 3 시간 (수율 98 %) 20 ° C에서 알을 품다. </li><li> 용해 3&#39;-H 2 N-AON DMF / PBS에서 테스트 닌 하이 드린 (1:1 V / V) DMF / 메탄올 (에 (산도 7.2)과 반응 N-숙신 3 - (2 - 피리 딜) 프로 피오 네이트 (SPDP) ) 후, 물 및 냉동 건조에, 메탄올 세파 덱스-LH20에 AON-PDP를 정화. </li><li> 이황화 교환 반응이 종료 될 때까지 밤새 상기에서 제조 된 말-PEG 3400 - 말 - 단클론 항체 - preconjugate와 5.5 pH 완충 800 nmol의 활성화 AONs을 품어. </li><li> 통합 형광 알렉사 플 루어 680 - 말레이 미드 고분자-2-MEA-SH와 티오 형성한다. 3 - 피리 딜 - 프로 피오 네이트 (PDP)를 초과 sulfhydryls을 차단하고 세파 덱스 G75을 통해 정화. 4 ° C에서 저장 또는 추가로 사용할 때까지 -80 ° C에서 냉동 스냅. </li></ol> 3. 분석 실험 및 속성 <ol><li> 초 HPLC 분석에 의해 4 ° C와 37 ° C에서 순도와 안정성 PBS의 혈청에 대한 테스트를 수행합니다. molec 폴리스티렌 술폰산을 사용신경근 무게 기준. 나노 크기 분포 및 제타 전위를 측정한다. 상용 시스템을 사용합니다. </li><li> 320 μL의 시료에 10 %의 160 μL (w / v)의 히드 록실 암모늄 클로라이드 및 10 %의 160 μL의 NaOH (V / W)를 추가합니다. 15 분 후, (W / V) 철 (III) CL 3 12 %에서 5 %의 160 μL와 혼합 (V / V) 염산 및 히드 / 철의 540 읽기 (III). PMLA가 1 ㎎ / ㎖ PMLA 2.5 (540)에 해당하는 가정 계산합니다. </li><li> 110 ° C에서 2 M 염산 하룻밤 나노 약물을 가수 분해 및 샘플을 참조하여 역상 크로마토 그래피에 대한 분석 사과산은 사과산 표준 스파이크. 100 mM의 디티 오 트레이 톨로 나노 약물을 베기 및 모르 폴리 노 AON 표준에 대한 정량적 인 역상 HPLC에 의해 모르 폴리 노 - AON을 측정합니다. </li><li> 절단하지 않고 나노 약물을 가지고 단백질 분석 키트를 사용하여 항체를 측정합니다. 암모늄 ferrothiocyanate과의 반응을 허용하여 mpeg 및 정량화, 클로로포름으로 추출하여 510 nm 파장 (10)에서의 흡광도를 읽고 </SUP&gt;. </li><li> 잘 항체 활동 및 colligation 테스트 당 나노 약물 (1-10 μg의 단클론 항체)의 5 ㎕ 씩 ELISA를 수행합니다. 판 코팅 항원 및 과산화 효소 결합 차 항체로 각각 0.5 ㎍ / 잘 트랜스페린 수용체 및 HER2를 사용합니다. </li><li> (예보기 표 1 및 표 2 참조), 사과산 (100 %)에 관해서 AON, mpeg 및 단클론 항체에 대해 달성 %를 계산하고 설계된 의도 %와 비교한다. </li></ol> 4. 시험 관내 시험 <ol><li> (4,5 - 디메틸 티아 졸 -2 - 일) -5 - - (3 - carboxymethoxyphenyl) -2 - (4 - 설포 페닐 옐로우 시약 [3을 줄이기 위해 자신의 활동에 의해 시간이 지남에 따라 세포 생존 배양 암세포와 메이저 나노 약물 부화 )-2H-테트라 졸, 내부 소금 (MTS) 청색 염료 및 광도계 상대 흡광도를 참조하십시오. 장비 공급 업체의 지시 사항을 따르십시오. </li><li> 체외 또는 웨스턴 블롯에 대한 생체의 세포 추출물을 준비합니다. 얼음처럼 차가운 추출 B를 사용SDS 및 프로테아제 억제제 칵테일이 포함 uffer. SDS-폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동을 감소 시켜서 별도의 단백질. </li><li> 샘플 추출에 대한 관심의 단백질을 웨스턴 블로 팅 작업을 수행합니다. 알칼리성 인산 가수 분해 효소에 접합 된 차 항체를 사용합니다. </li><li> 형광 라벨을 사용하여 세포의 이해와 나노 약물 폴리머 플랫폼, AON과 엔도 좀의 공동 현지화을 보여주기 위해 공 초점 현미경을 사용합니다. 형광 레이블로 AONs에 나노 복합 플랫폼과 리사 민 알렉사 플 루어 680을 연결합니다. 표지 된 분자의 분포를 시각화하는 현미경 5X 스펙트럼 스캐너와 살아있는 암세포를 사용 </li><li> 얼룩 엔도 좀의 스티 릴 빨간 형광 염료 막과 엔도 좀의 colocalization을하거나 릴리스를 보여줍니다. </li></ol> 5. 생체 내 테스트 <ol><li> 인간의 HER2-양성 유방암의 마우스 모델 (: 크롬 : (MCR) Foxnnm 누드 마우스 전술)을 준비합니다. 펠렛을 방출 0.72 밀리그램의 17β-에스트라 디올을 삽입 (90 일 발매)의ubcutaneously 각 마우스의 목. </li><li> 그런 피하 오른쪽 측면에 1 × 10 7 BT-474 종양 세포를 주입하고 종양이 성장하자. </li><li> 종양이 꼬리 정맥에 각 항체의 2.5 ㎎ / ㎏ AON 및 / 또는 4.5 ㎎ / ㎏을 함유하는 150 ㎕의 나노 복합체를 주입하여 크기가 120mm 3 때 치료를 시작합니다. 처리를 위해, 일주일에 두 번 완전히 여섯 번을 주입. </li><li> 두 번 약한 캘리퍼스와 종양의 크기를 측정하고 식 (길이 x 높이 x 폭) × (π / 6)를 사용하여 볼륨을 계산합니다. 2 주 마지막 주사 후 자궁 전위 다음 케타민과 Dexmedetomidine의 솔루션을 진정 후 동물을 안락사. </li><li> 형태 학적 평가를 위해 H &amp; E와 종양과 얼룩 부분을 분리합니다. </li><li> 동물 규모에 약물 분포를 평가, 형광 이미징 시스템을 사용한다. 24 및 48 시간에 알렉사 플 루어 680 레이블 나노 약물 및 이미지를 주입한다. </li><li> 동물을 안락사와 불소를 검출격리 및 관류 종양 및 장기에 escence. </li></ol>

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	<li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li><li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma.">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li><li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., Gerlinger, M., Rowan, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumor+heterogeneity+and+branched+evolution+revealed+by+multiregion+sequencing.">Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing.</a> N. Engl. J. Med. 366, 883-892 (2012).</li><li>Yap, T. A., Workman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+cancer+genome:+strategies+for+the+discovery+and+clinical+development+of+targeted+molecular+therapies.">Exploiting the cancer genome: strategies for the discovery and clinical development of targeted molecular therapies.</a> Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 549-573 (2012).</li><li>Chatterjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Biomarkers:+Knowing+the+Present+and+Predicting+the+Future.">Cancer Biomarkers: Knowing the Present and Predicting the Future.</a> Future Oncol. 1, 37-50 (2005).</li><li>Suh, K. S., Sarojini, S., Youssif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Banking,+Bioinformatics,+and+Electronic+Medical+Records:+The+Front-End+Requirements+for+Personalized+Medicine.">Tissue Banking, Bioinformatics, and Electronic Medical Records: The Front-End Requirements for Personalized Medicine.</a> J. Oncology. , (2013).</li><li>Ljubimova, J. Y., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+nanopolymers:+the+next+generation+of+breast+cancer+treatment.">Biocompatible nanopolymers: the next generation of breast cancer treatment.</a> Future Medicine, Nanomedicine. 7, 1-4 (2012).</li><li>Lee, B. -. S., Vert, M., Holler, E., Steinb&#252;chel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Water-soluble aiphatic polyesters: poly(malic acid)s. Biopolymers 3a. , 75-103 (2002).</li><li>Lee, B. -. S., Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycefin,+a+new+prototype+of+multifunctional+nanoconjugate+based+on+poly(beta-L-malic+acid)+for+drug+delivery.">Polycefin, a new prototype of multifunctional nanoconjugate based on poly(beta-L-malic acid) for drug delivery.</a> Bioconjugate Chem. 17, 317-326 (2006).</li><li>Nag, A., Mitra, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+colorimetric+assay+for+estimation+of+polyethylene+glycol+and+polyethylene+glycolated+protein+using+ammonium+ferrothiocyanate.">A colorimetric assay for estimation of polyethylene glycol and polyethylene glycolated protein using ammonium ferrothiocyanate.</a> Analytical Biochem. 237, 224-231 (1996).</li><li>Ding, H., Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+brain+tumor+growth+by+intravenous+poly(beta-L-malic)+acid+nanobioconjugate+with+pH-dependent+drug+release.">Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic) acid nanobioconjugate with pH-dependent drug release.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li><li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2/neu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment.">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li><li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs,+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS.">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. Release. 74, 47-61 (2001).</li><li>Ljubimova, J. Y., Fujita, M., Ljubimov, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(malic+acid)+nanoconjugates+containing+various+antibodies+and+oligonucleotides+for+multitargeting+drug+delivery.">Poly(malic acid) nanoconjugates containing various antibodies and oligonucleotides for multitargeting drug delivery.</a> Nanomed. 3, 247-265 (2008).</li><li>Inoue, S., Patil, R., Portilla-Arias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+nanobioconjugate+inhibiting+EGFR+expression+in+triple+negative+breast+cancer.">Novel nanobioconjugate inhibiting EGFR expression in triple negative breast cancer.</a> PLoS One. 7, 1-9 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly(&#946;-L-malic+Acid).">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(&#946;-L-malic Acid).</a> Int. J. Mol. Sci. 13, 11681-11693 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temozolomide+delivery+to+tumor+cells+by+a+multifunctional+nano+vehicle+based+on+poly(&#946;-L-malic+acid).">Temozolomide delivery to tumor cells by a multifunctional nano vehicle based on poly(&#946;-L-malic acid).</a> Pharm. Res. 27, 2317-2329 (2010).</li><li>Ljubimova, J. Y., Portilla-Arias, J., Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+efficacy+evaluation+of+multiple+targeted+polymalic+acid+conjugates+for+triple-negative+breast+cancer+treatment.">Toxicity and efficacy evaluation of multiple targeted polymalic acid conjugates for triple-negative breast cancer treatment.</a> J. Drug Target. 21, 956-967 (2013).</li></ol>

저자 줄리아 Y. Ljubimova, 키스 L. 블랙, 및 Eggehard 소리 쳐는 Arrogene 테크놀로지의 주주입니다

생분해 성 천연 고분자에서 나노 약물의 제조를위한 실험적 경로는 맞춤 의학의 합성에 사용될 수있는 제시된다. 설명은 나노 약물 합성을위한 다양한 플랫폼 polymalic 산의 제어 생산 및 정제로 시작합니다. 재현 가능한 기술을 이용하여, 중합체는 고 분자량 및 의약품 합성에 적합한 극단적 순도가 얻어진다. 합성은 효율적 HER2-양성 유방암을 치료하는 도시되어 나노 약물에 대해 설명한다. 설명은 암의 치료를위한 다른 대부분의 나노 의약품의 합성으로 번역 될 수있다. 타겟팅은 HER2 단백질 또는 효율적으로 내면화하는 다른 종양 표지자로 종양 특이 항원에 결합 등 허셉틴과 같은 항체를 포함한다. 나노 약물을 효율적으로 레에서 암의 성장을 억제합니다 안티센스 올리고 뉴클레오티드 및 화학 요법의 선택을 제공합니다atment. 이 예에서, 허셉틴은 HER2와 함께 특정 안티센스 올리고 뉴클레오티드 어닐링에 결합 HER2 코딩의 mRNA는 HER2-신호 및 HER2-양성 유방암의 심각한 감소의 지속적인 차단의 결과. 종양 타겟팅 및 안티센스 올리고 뉴클레오티드에 의한 유전자 발현 억제의 기본 원칙을 바탕으로 우리는 최신의 여러 가지 다른 나노 약물과 성공적으로 억제 전임상 인간 아교 모세포종과 트리플 부정적인 유방암 11,14-18을 합성했다. 합성 작업은 Physarum의 polycephalum ( &quot;점액 금형&quot;가족의 종)의 배양액에서 polymalic 산 고도로 정제 된 나노 약물 플랫폼의 준비를 시작한다. 제제는 수많은 항체, 펩티드, 올리고 뉴클레오티드 및 활성 약물 전달 및 종양 성장 억제에서 기능하는 다른 분자의 부착을 허용하는 원리에서, 중합체의 고 분자량을 강조한다. Followi제어 배양 및 정제를 겨, 예측 가능한 수익률 폴리머의 재현 품질이 생산되고 있습니다. 폴리머는 언제든지 편리한 조건에서 저장된다. 중합체 - 펜던트 카복실 레이트의 화학적 활성화로 시작 PMLA 나노 복합체의 합성은 몇 합성 단계에서 수행된다. 단계 사이에서, 합성 중간체는 선택적으로 임의의 양의 제제를 허용 보류 될 수 있고, 따라서 스케일링을하여 사용할 수있다. 합성의 진행은 TLC 및 HPLC 급 -​​ 뒤에되고, 나노 약물 조성물 및 활성 모두는 그룹 특정 화학 정량 분석​​법, ELISA, 물리적 다양한 측정에 의해 제어된다. 우리의 경험은 이러한 합성이 우수한 수율 및 순도 원활하고 재현성있게 진행되고 있다는 점이다. PE에 필요한 항체 및 안티센스 올리고 뉴클레오티드의 특이성을 선택하여 나노 약물의 변형은 유리하게 합성약을 rsonalized. 인간 HER2-양성 유방암의 성공적인 치료의 양상은 마우스 암 모델의 제조, 나노 약물, 이미징 및 종양 성장 분석에의 응용에 유효 대표이다. 시험 관내 생존 시험의 결과는 세포주 및 동물 실험에 사용되는 주요 약물을 선택하는 데 유용하다. 생체 Xenogen 이미징 나노 약물이 실제로 종양에 전달되는 것을 검증한다. 웨스턴 블랏의 결과는 특정 단백질의 수준은 암 치료 동안 예측 된 방식으로 반응 여부를 보여준다. 종양의 크기를 측정, 즉 억제 후퇴 또는 회귀에 대한 치료의 성공에 대해 알려준다. 한 예는 예측, 재현성 및 주목할만한 독성이없는 높은 정도를 나타내는 다른 polymalic 산 기반의 나노 약물과 우리의 경험을 반영한다. 독성과 여러 t의 효능에 대한 최근 결과트리플 부정적인 유방암 치료를위한 argeted polymalic 산 복합체는이 개념 18의 강력한 지원에 있습니다. 종양의 중간에 넘쳐에 의한 내피 장벽, 엔도 좀의 흡수에 의한 종양 세포의 막과 류신 에틸 에스테르 또는 trileucine 그룹의 작용에 의해 엔도 좀 막 중단 : 주요 기능은 우리의 나노 약물 바이오 장벽을 통과 할 수 있다는 것입니다. 혈관 외 유출 및 엔도 좀 흡수를 확실 나노 약물에 부착 된 특정 항체에 의해 달성된다. 반대로 마우스 트랜스페린 수용체 항체는 수용체가 가장 종양 혈관에 과발현 아마 때문에, transcytosis에 의해 종양에 효과적인 유입을 중재한다. 다른 항체는 구체적받는 종양 세포에 나노 약물을 연출 같은 나노 복합체 분자의 기능에 부속. 두 항체의 존재는, transcytosis의 하나 엔도 좀의 이해에 대한 다른 하나는, 최적의 작동을 위해 필수적입니다. m의 정량 분석ALIC 산 항체가 높은 나노 약물의 최적의 구성을 제어하기 위해 권장합니다. 마지막으로이 모든 기능을 하나의 공유 결합 나노 약물이받는 사람의 종양 세포에 호스트 혈관을 통해가는 길 화학적으로 연결된 형태로 약을 제공하는 것을 주목해야한다. 그들이 대상 사이트의 나노 복합 플랫폼에서의 분열로 무료 약물로 재구성 될 때까지 화학 첨부 (전구 약물) 대부분의 약물이 비활성 상태로 렌더링합니다. 재 활성화 양상이 전달 및 부작용을 불러 일으킬 수있는 최소한의 기회 동안 고도의 안전을 제공하기 때문에 중요합니다. 다 기능성, 효능과 안전성이 좋은 맞춤 의학의 필수 속성입니다.

암의 게놈이 (생명 공학 및 암 게놈지도 책에 대한 국립 센터) 풀어되었을 때 포스트 게놈 시대에 암 미래의 치료는 종종 같은 종양 1-4에서 종양의 유전 적 다양성을 설명 할 것이다. 생물 정보학 및 비용, 빠른되지 DNA 시퀀싱 할 수있는 개인 수준 2,4,5에 악성 유전자 / 돌연변이의 인수. 유전자가 확인 된 후에, 환자는 악성 유전자 6의 발현을 수정하거나 침묵하는 맞춤 의학으로 취급됩니다. 암세포를 표적으로하고있는 세포로 약물을 전달하기 위해 필요 작용기 전달 시스템을 요구한다. 물론, 나노 약물은이 요구 사항 7을 충족 할 수 있습니다. 발견의 노도에서 나노 입자는 화학 요법 약물, 단백질 및 / 또는 암 세포에 유전자 활성 물질의 페이로드를 가지고 적당한 입증했다. 그러나 부작용은 광고로 남아옷을 입고있다. 생분해의 부재와 관련된 그 중 하나는 질병을 야기 할 수있는 가능성과 건강한 조직과 기관에 자료의 침착의 원인이 될 수 있습니다. 증착을 최소화하기 위해, 우리는 비 독성과 비 면역 원성 polymalic 미생물 유래입니다 산, 그리고 H 2 O와 CO 2 8 생분해을 소개했다. 우리는 나노 약물의 모든 기능을 하나의 공유 유형을 합성 폴리머를 사용합니다. 그런 테모 졸로 미드, 독소루비신, 또는 안티센스 올리고 뉴클레오티드 및 혈관 외 유출, 조직 타겟팅, endosomolytic 배달 서비스를 제공 작용기를 화학적으로 부착 된 화학 요법이 포함되어 있습니다. 그들은 따라서 자신의 모든 제약 활동을 재생, 표적 종양 세포에 도착했을 때 약물은 본질적으로 나노 플랫폼에서 절단됩니다. 우리는 고분자 나노 플랫폼의 미생물 생산 방법, 그 정화 및 암 트라 스투 주 마브 (허셉틴)을 포함 나노 약물의 화학 합성을 서술HER2의 과잉 생산의 억제에 대한 타겟팅 및 안티센스 올리고 뉴클레오티드. 누드 마우스에 이종 인간 HER2가 양성 유방암에 나노 약물을 적용, 우리는 암 치료의 높은 효능을 보여줍니다. polymalic 산 나노 약물 여기 소개 종양 타겟팅 및 유전자 침묵의 원칙은 암의 다른 경우의 치료에 적용 할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

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Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

polymalic 산계 나노 약물의 예는 암에 적용 가능하다 맞춤 의학의 합리적인 디자인으로 제시된다. 그것은 누드 마우스에 HER2가 긍정적 인간 유방암을 치료하는 나노 약물의 합성을 설명한다.

여러 종양 마커의 대상으로하기위한 Polymalic 산 기반의 나노 생물 고분자 물질 : 개인화 된 약을위한 기회?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Chemistry

16.6K 조회수.  Cedars-Sinai Medical Center.  polymalic 산계 나노 약물의 예는 암에 적용 가능하다 맞춤 의학의 합리적인 디자인으로 제시된다. 그것은 누드 마우스에 HER2가 긍정적 인간 유방암을 치료하는 나노 약물의 합성을 설명한다. 

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Glycan Node Analysis: A Bottom-up Approach to Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and extracellular events. Many pathological conditions, notably cancer, affect gene expression, which can in turn deregulate the relative abundance and activity levels of glycoside hydrolase and glycosyltransferase enzymes. Unique aberrant whole glycans resulting from deregulated glycosyltransferase(s) are often present in trace quantities within complex biofluids, making their detection difficult and sometimes stochastic. However, with proper sample preparation, one of the oldest forms of mass spectrometry (gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) can routinely detect the collection of branch-point and linkage-specific monosaccharides ("glycan nodes") present in complex biofluids. Complementary to traditional top-down glycomics techniques, the approach discussed herein involves the collection and condensation of each constituent glycan node in a sample into a single independent analytical signal, which provides detailed structural and quantitative information about changes to the glycome as a whole and reveals potentially deregulated glycosyltransferases. Improvements to the permethylation and subsequent liquid/liquid extraction stages provided herein enhance reproducibility and overall yield by facilitating minimal exposure of permethylated glycans to alkaline aqueous conditions. Modifications to the acetylation stage further increase the extent of reaction and overall yield. Despite their reproducibility, the overall yields of N-acetylhexosamine (HexNAc) partially permethylated alditol acetates (PMAAs) are shown to be inherently lower than their expected theoretical value relative to hexose PMAAs. Calculating the ratio of the area under the extracted ion chromatogram (XIC) for each individual hexose PMAA (or HexNAc PMAA) to the sum of such XIC areas for all hexoses (or HexNAcs) provides a new normalization method that facilitates relative quantification of individual glycan nodes in a sample. Although presently constrained in terms of its absolute limits of detection, this method expedites the analysis of clinical biofluids and shows considerable promise as a complementary approach to traditional top-down glycomics.

This article presents an enhanced form of a novel bottom-up glycomics technique designed to analyze the pooled compositional profile of glycans in unfractionated biofluids through the chemical breakdown of glycans into their constituent linkage-specific monosaccharides for detection by GC-MS. Potential applications include early detection of cancer and other glycan-affective disorders.

글리 칸 노드 분석 : 글리코 믹스에 대한 상향식 접근

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and ...

연구

화학

Highly Stable, Functional Hairy Nanoparticles and Biopolymers from Wood Fibers: Towards Sustainable Nanotechnology

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While metal-based nanoparticles are associated with synthetic and environmental hassles, cellulose introduces a green, sustainable alternative for nanoparticle synthesis. Here, we present the chemical synthesis and separation procedures to produce new classes of hairy nanoparticles (bearing both amorphous and crystalline regions) and biopolymers based on wood fibers. Through periodate oxidation of soft wood pulp, the glucose ring of cellulose is opened at the C2-C3 bond to form 2,3-dialdehyde groups. Further heating of the partially oxidized fibers (e.g., T = 80 &#176;C) results in three products, namely fibrous oxidized cellulose, sterically stabilized nanocrystalline cellulose (SNCC), and dissolved dialdehyde modified cellulose (DAMC), which are well separated by intermittent centrifugation and co-solvent addition. The partially oxidized fibers (without heating) were used as a highly reactive intermediate to react with chlorite for converting almost all aldehyde to carboxyl groups. Co-solvent precipitation and centrifugation resulted in electrosterically stabilized nanocrystalline cellulose (ENCC) and dicarboxylated cellulose (DCC). The aldehyde content of SNCC and consequently surface charge of ENCC (carboxyl content) were precisely controlled by controlling the periodate oxidation reaction time, resulting in highly stable nanoparticles bearing more than 7 mmol functional groups per gram of nanoparticles (e.g., as compared to conventional NCC bearing &#60;&#60; 1 mmol functional group/g). Atomic force microscopy (AFM), transmission electron microscopy (TEM), and scanning electron microscopy (SEM) attested to the rod-like morphology. Conductometric titration, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), nuclear magnetic resonance (NMR), dynamic light scattering (DLS), electrokinetic-sonic-amplitude (ESA) and acoustic attenuation spectroscopy shed light on the superior properties of these nanomaterials.

Synthesis schemes to prepare highly stable wood fiber-based hairy nanoparticles and functional cellulose-based biopolymers have been detailed.

매우 안정, 기능 털이 나노 입자와 목재 섬유에서 생체 고분자 : 지속 가능한 나노 기술쪽으로

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Low-energy Cathodoluminescence for (Oxy)Nitride Phosphors

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and flexibility of their emission properties can be achieved by controlling their composition and dopants. However, a lot of work is still required to improve their properties and to reduce the production cost. A possible approach is to correlate the luminescence properties of the Sialon particles with their local structural and chemical environment in order to optimize their growth parameters and find novel phosphors. For such a purpose, the low-voltage cathodoluminescence (CL) microscopy is a powerful technique. The use of electron as an excitation source allows detecting most of the luminescence centers, revealing their luminescence distribution spatially and in depth, directly comparing CL results with the other electron-based techniques, and investigating the stability of their luminescence properties under stress. Such advantages for phosphors characterization will be highlighted through examples of investigation on several Sialon phosphors by low-energy CL.

Low-energy Cathodoluminescence for OxyNitride Phosphors

An excellent chemical and luminescence stabilities of (oxy)nitride phosphors present it as an promising alternative to currently used sulfide and oxide phosphors. In this paper, we present the way to investigate its local luminescence properties using low-energy cathodoluminescence (CL).

(옥시) 질화물 형광체에 대한 낮은 에너지 음극선

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

준비 및 평가<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal 화학을 사용하여 사전이 타겟팅에 대한 세자리 킬레이트를 Tc를 표지

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples of gadolinium-based contrast agents as a result of incomplete reactions between the ligand and the ion, or as a dissociation product. Since the ion is toxic, its detection is of critical importance. Herein, the design and usage of an aptamer-based sensor (Gd-sensor) for Gd3+ are described. The sensor produces a fluorescence change in response to increasing concentrations of the ion, and has a limit of detection in the nanomolar range (~100 nM with a signal-to-noise ratio of 3). The assay may be run in an aqueous buffer at ambient pH (~7 - 7.4) in a 384-well microplate. The sensor is relatively unreactive toward other physiologically relevant metal ions such as sodium, potassium, and calcium ions, although it is not specific for Gd3+ over other trivalent lanthanides such as europium(III) and terbium(III). Nevertheless, the lanthanides are not commonly found in contrast agents or the biological systems, and the sensor may therefore be used to selectively determine unchelated Gd3+ in aqueous conditions.

An Aptamer-based Sensor for Unchelated GadoliniumIII

The use of polydeoxynucleotide (44-mer aptamer) molecules for sensing unchelated gadolinium(III) ion in an aqueous solution is described. The presence of the ion is detected via an increase in the fluorescence emission of the sensor.

Unchelated 가돌리늄위한 앱 타머 기반 센서 (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control cellular functions. The reversal of DNA methylation, or DNA demethylation, is mediated by the ten-eleven translocation (TET) protein family of dioxygenases. Although it has been widely reported that aberrant DNA methylation and demethylation are associated with developmental defects and cancer, how these epigenetic changes directly contribute to the subsequent alteration in gene expression or disease progression remains unclear, largely owing to the lack of reliable tools to accurately add or remove DNA modifications in the genome at defined temporal and spatial resolution. To overcome this hurdle, we designed a split-TET2 enzyme to enable temporal control of 5-methylcytosine (5mC) oxidation and subsequent remodeling of epigenetic states in mammalian cells by simply adding chemicals. Here, we describe methods for introducing a chemical-inducible epigenome remodeling tool (CiDER), based on an engineered split-TET2 enzyme, into mammalian cells and quantifying the chemical inducible production of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) with immunostaining, flow cytometry or a dot-blot assay. This chemical-inducible epigenome remodeling tool will find broad use in interrogating cellular systems without altering the genetic code, as well as in probing the epigenotype&#8722;phenotype relations in various biological systems.

Detailed protocols for introducing an engineered split-TET2 enzyme (CiDER) into mammalian cells for chemical inducible DNA hydroxymethylation and epigenetic remodeling are presented.

화학을 유도할 수 있는 DNA Hydroxymethylation 및 후 리 모델링 설계 분할-TET2 효소

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Co-expression of Multiple Chimeric Fluorescent Fusion Proteins in an Efficient Way in Plants

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent proteins and generation of fluorescent fusion proteins have been wildly used as an effective tool to directly visualize the protein localization and dynamics in cells. It is especially useful to compare them with well-known organelle markers after co-expression with the protein of interest. Nevertheless, classical approaches for protein co-expression in plants usually involve multiple independent expression plasmids, and therefore have drawbacks that include low co-expression efficiency, expression-level variation, and high time expenditure in genetic crossing and screening. In this study, we describe a robust and novel method for co-expression of multiple chimeric fluorescent proteins in plants. It overcomes the limitations of the conventional methods by using a single expression vector that is composed of multiple semi-independent expressing cassettes. Each protein expression cassette contains its own functional protein expression elements, and therefore it can be flexibly adjusted to meet diverse expression demand. Also, it is easy and convenient to perform the assembly and manipulation of DNA fragments in the expression plasmid by using an optimized one-step reaction without additional digestion and ligation steps. Furthermore, it is fully compatible with current fluorescent protein derived bio-imaging technologies and applications, such as FRET and BiFC. As a validation of the method, we employed this new system to co-express fluorescently fused vacuolar sorting receptor and secretory carrier membrane proteins. The results show that their perspective subcellular localizations are the same as in previous studies by both transient expression and genetic transformation in plants.

We have developed a novel method for co-expressing multiple chimeric fluorescent fusion proteins in plants to overcome the difficulties of conventional methods. It takes advantage of using a single expression plasmid that contains multiple functionally independent protein expressing cassettes to achieve protein co-expression.

식물에는 효율적인 방법으로 여러 공상 형광 성 융해 단백질의 공동 식

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent ...

Iron Nanowire Fabrication by Nano-Porous Anodized Aluminum and its Characterization

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and data storage. We demonstrate a fabrication method for iron (Fe) nanowires&#160;via electrochemical deposition into anodic&#160;alumina oxide (AAO) templates. The templates are fabricated by anodization of aluminum (Al) discs, and the pore length and diameter are controlled by changing the anodizing conditions. Pores with an average diameter of around 120 nm are created using oxalic acid as the electrolyte. Using this method, cylindrical nanowires are synthesized, which are released by dissolving the alumina using a selective chemical etchant.

In this work, we describe a&#160;protocol to fabricate iron nanowires, including the formation of the porous alumina membrane that is used as the template, electrodeposition into templates using electrolyte solution, and the release of the nanowires into the solution.

나노 다공성 양극 산화 알루미늄및 그 특성화에 의한 철 나노 와이어 제조

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and ...

Organic Structure-directing Agent-free Synthesis for *BEA-type Zeolite Membrane

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in petroleum and petrochemical fields because of their high thermal, chemical, and mechanical strength. A *BEA-type zeolite is an interesting membrane material because of its large pore size and wide Si/Al range. This manuscript presents a protocol for *BEA membrane preparation by a secondary growth method that does not use an organic structure-directing agent (OSDA). The preparation protocol consists of four steps: pretreatment of support, seed preparation, dip-coating, and membrane crystallization. First, the *BEA seed crystal is prepared by conventional hydrothermal synthesis using OSDA. The synthesized seed crystal is loaded on the outer surface of a 3 cm long tubular &#945;-Al2O3 support by a dip-coating method. The loaded seed layer is prepared with the secondary growth method using a hydrothermal treatment at 393 K for 7 days without using OSDA. A *BEA membrane having very few defects is successfully obtained. The seed preparation and dip-coating steps strongly affect the membrane quality.

A *BEA seed crystal was loaded on a porous &#945;-Al2O3 support by the dip-coating method, and hydrothermally grown without using an organic structure-directing agent. A *BEA-type zeolite membrane having very few defects was successfully prepared by the secondary growth method.

유기 구조 지시 에이전트 무료 합성 *BEA 형 제올라이트 멤브레인

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in ...

여러 종양 마커의 대상으로하기위한 Polymalic 산 기반의 나노 생물 고분자 물질 : 개인화 된 약을위한 기회?

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글리 칸 노드 분석 : 글리코 믹스에 대한 상향식 접근

매우 안정, 기능 털이 나노 입자와 목재 섬유에서 생체 고분자 : 지속 가능한 나노 기술쪽으로

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

(옥시) 질화물 형광체에 대한 낮은 에너지 음극선

준비 및 평가

Unchelated 가돌리늄위한 앱 타머 기반 센서 (III)

화학을 유도할 수 있는 DNA Hydroxymethylation 및 후 리 모델링 설계 분할-TET2 효소

식물에는 효율적인 방법으로 여러 공상 형광 성 융해 단백질의 공동 식

나노 다공성 양극 산화 알루미늄및 그 특성화에 의한 철 나노 와이어 제조

유기 구조 지시 에이전트 무료 합성 *BEA 형 제올라이트 멤브레인