이 연구는 보건 부여 R01HL086939 (NCC)의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

Tuchscherer 외,이 프로토콜에서 우리는 이전에 타악기 폐의 혈관 압력 유량의 관계에 대한 폐 emboli과 만성 hypoxia의 영향을 (Tuchscherer, 웹스터, &amp; Chesler 2006 년 계량하는 데 사용되었습니다 절연, 환기, perfused 마우스 폐 준비를 보여줍니다 ., 2007). 간단히 마우스 폐는 수술 가열 챔버에 배치, 주변 조직으로부터 격리 (IL - 1, 하버드 장치, 홀리스튼, MA)하고 통풍 (Ventilatory 제어 모듈 (VCM) - R 타이머 카운터 모듈 (TCM)를, 하버드 장치). 폐 vasculature은 지속적인 흐름 파형 또는 고주파 oscillatory 펌프 (보스 - 전기 힘, 에덴을 생성하는 주사기 펌프 (콜 - 파머, 버논 힐스, IL)를 사용하여 3.5 %의 Ficoll 온수 RPMI 1640 세포 배양 매체와 perfused입니다 타악기 폐 혈관 흐름 파형을 만들 수있는 주사기 펌프와 병행하여 프레리, MN). 압력 트랜스 듀서 (P75, 하버드 장치)는 순간 폐동맥 압력 (PAP)와 왼쪽 심방 압력 (무릎)를 측정합니다. 순간 유량 (Q)는 인라인 유량계 (천음속 시스템즈, 이타카, 뉴욕)와 측정됩니다. 타악기 압력 - 유량 관계가 폐 혈관 생리학 및 병리학과 오른쪽 심실 afterload에 대한 통찰력을 제공합니다 이러한 측정에서 파생됩니다. 1. 장비 : <ol><li> 설정 마우스 환풍기를 포함한 절연 폐 </li><li> 데이터 수집 시스템 및 LabView 프로그램과 컴퓨터 </li><li> perfusate 흐름에 대한 두 개의 압력 변환기 및 유량계 </li><li> 기도 흐름에 대한 압력 변환기 및 유량계 (pnemotachometer) </li><li> 승 테스트 프로그램과 함께 높은 주파수 oscillatory 펌프 및 컴퓨터 </li><li> 붐 / 줌 현미경, 램프 </li><li> IL - 1 시스템에 대한 높은 출력 펌프 난방 목욕탕 </li></ol> 2. IL - 1 시스템을 준비 <ol><li> 증류수는 ° C IL - 1 시스템의 내부로 순환되는 난방 목욕탕에 의해 37 가열. </li><li> 모든 펌프, 트랜스 듀서 및 IL - 1 정맥은 깨끗한 튜브를 통해 연결되며 모든 튜브는 37 가열 증류수 ° C.로 플러시됩니다 폐 및 원인 부종으로 여행할 수 기포는 제거되어야합니다. 흐름 센서에 oscillatory 흐름 펌프로부터 유량 센서에서 폐동맥의 정맥에 튜브가 1% PBS로 플러시됩니다. </li><li> P75 압력 트랜스 듀서는 정맥에 밸브를 닫는 분위기에 밸브를 열고 다음 PLUGSYS 증폭기에있는 자동 제로 버튼을 눌러서 제로 있습니다. 그런 다음 대기 밸브가 닫히고 정맥에 밸브가 열립니다. </li><li> IL - 1 시스템의 환기 경로의 세라믹 다공성 조각은 습기를 제공하기 위해 침수입니다. </li></ol> 3. 솔루션 <ol><li> 볼륨 Ficoll - RPMI 솔루션과 살균 필터 미디어의 3.5 %를 준비합니다. 미디어를 필터링하는 것은 본의 아니게 폐를 embolize 수있는 더 큰 입자가 없다 보장합니다. 멸균 미디어를 사용하면 폐암의 개발 갑자기 부종의 가능성을 줄여줍니다. 각 실험 재판 RPMI로 수술 한 60 ML의 주사기에 대한 RPMI 한 10 ML의 주사기를 채우십시오. 37 ° C의 물을 욕조에 perfusate을 가열. </li><li> 마우스 (대략)의 헤파린 500IU/100g 체중 1ml를 준비합니다. 헤파린 소금 158IU/mg입니다. ~ 25g의 마우스, 작은 microcentrifuge 관에서 1ml PBS 솔루션 1.25 MG 헤파린 소금을 섞는다. </li></ol> 4. 환기 마우스 <ol><li> 마우스로 kg 당 솔루션 pentobarbital 150 MG, 발에서 하드 핀치를 수행하여 깊은 마취를 보장의 intraperitoneal 주사 후. 아무런 반응이 없다면, 안정성 corkboard하기 위해 앞 발톱을 달아하여 수술 마우스를 준비합니다. 참고 : 실험 마취 깊이를 통해 신중하게 동물을 관찰하여 감시하고 있습니다. 발톱과 자주 incisions에 핀은 유해 자극, 동물 마취의 수술 비행기에 남아있는 것을 확인하기 위해 응답의 부족으로 작동합니다. </li><li> 모피를 습식 및 목의에서 피부를 잡아 바로 집게를 사용하여 95 % 알코올로 가슴 스프레이. 바로 가위를 사용하여 피부에 개방 1cm 컷. </li><li> 목 안쪽이 노출되면, 식도 및 호흡 관을 찾는 모든 하얀 선의 조직과 피상적인 근육을 제거하십시오. 양쪽 및 후부로의 조직에서 식도와 기관을 분리. </li><li> 기관에서 작은 벤트 포셉를 삽입하고 반대쪽에 봉합 한 조각을 들고. 기관에서 봉합사를 당겨하고 느슨한 외과의 매듭을 짓고. 봉합사를 강화하거나 매듭하지 마십시오. </li><li> 작은 가위로기도에있는 작은 직각 &quot;V&quot;를 절단하고,기도를 통해 모든 방법을 깎지 않아. 온수 IL - 1 시스템에 코르크 보드와 마우스를 이동합니다. 두 무딘 집게를 사용하여 tracheal 정맥과 &#39;V&#39;아래의기도를 잡아. 그런 다음 trach에 tracheal 정맥을 슬라이드&quot;V&quot;오프닝을 통해 EA. 기관 주위 봉합과 기관 내부의 정맥을 확보하기 tracheal 정맥를 조이십시오. 매듭을 묶게. </li><li> 실내 공기와 환기 (50 % 영감, 깊은 영감과 90 숨을 / 분) 시작합니다. </li></ol> 5. 통풍 마우스 Perfusing 5.1. 헤파린을 주입하기 위해 우심실에 액세스 <ol><li> 또 알코올 스프레이 마우스 가슴 모피를 다시 서부 유럽 표준시합니다. 직선과 직선 포셉 가위를 사용하여 갈비뼈 위에 가슴에 피부의 모두 제거합니다. 흉골을 따라 위쪽으로 잘라. 양쪽에있는 피부를 리프트 다음 낮은 갈비의 선을 따라 피부를 잘라. </li><li> 핀셋으로 흉골의 하단에있는 칼 모양의 프로세스를 파악하고 바로 가위를 사용하여 횡경막에 구멍을 뚫고. 핀셋으로 피임기구를 잡고 갈비에서 버려야. </li><li> 족집게로 다시 칼 모양의 프로세스를 파악 (왼쪽)와 흉골을 자르고 갈비뼈를 통해 볼 - 팁, 직각 가위를 사용하여 폐를 잘라하지 않도록주의하고, 심장이나 혈관은 (에있는 볼 - 팁을 사용하여 가위)는 당신을 안내합니다. 이 피가되지만 한 가위의 최첨단이 흉골 반대로 심장과 폐가 절단되지 않습니다. </li><li> 왼쪽에있는 갈비뼈를 파악하고 많은 갈비의 마음을 노출 필요 버려야. 천천히 0.1 ML의 헤파린 솔루션 우심실을 주입. 이 단계는 내피 세포를 손상과 재관류에 악영향을 줄 것이다 폐에 혈전을 방지하는 것이 중요합니다. 심장 박동 아직도있는 동안 헤파린을 주입해야합니다. </li></ol> 5.2. 주 폐동맥을 Cannulate <ol><li> 부드럽게 떨어져 갈비뼈 벽에서 폐를 밀어 다시 (반올림) 포셉 끝을 사용하여 갈비의 나머지 부분 (왼쪽과 오른쪽)을 버려야. 폐 잡아 자체가 섬세한 조직을 손상합니다. 가위 도움말 및 폐 조직 사이의 부수 접촉은 또한 손상을 일으 킵니다. </li><li> 폐 이상의 장소에 현미경을 이동합니다. 심장의 상단에있는 선의와 지방 조직을 버려야. 동맥과 정맥에서 떨어져 끌어와 조직이 긴장에있는 동안 다음 봄 가위로 잘라 핀셋을 사용합니다. </li><li> 핀셋 다른 무딘 설정 아트리움 / 대동맥과 폐동맥 (PA)에서 핀셋의 끝부분을 얻기 위해서는 뇌실 왼쪽 아래에 심장의 상단에서 오른쪽에서 왼쪽으로 특종을 사용합니다. 이렇게 조심스럽게 - 거기에 핀셋으로 저항해서는 안됩니다. 무딘 핀셋을 사용하면 실수로 폐동맥이나 대동맥을 펑쳐링의 가능성을 줄여줍니다. </li><li> 트위터 팁은 대동맥과 PA 미만되면 봉합의 한 조각을 잡고 이겨낼. 느슨한 외과의 매듭을 묶게. 봉합사를 강화하거나 매듭하지 마십시오. </li><li> 선택 사항 : 신체의 아래쪽 절반을 제거하는 직각 가위를 사용합니다. 갈비뼈와 척추를 통해 아래를 잘라, 대동맥을 절단하고 베나 카바이 흐름에 혈액의 상당량을 초래하게됩니다 - 물이 새지 않는 흐​​름에 Q - 팁을 사용합니다. 처분에 대한 봉투에 넣습니다. </li><li> RPMI의 10 ML의 주사기에서 4 ML과 수상 PA 정맥. 모든 튜브 기포가 무료입니다 있는지 확인을 두 번. 증류수 또는 거품과 폐의 재관류은 부종을 초래합니다. </li><li> 오른쪽 심실 무료 벽에 작은 노치 잘라 PA 정맥을 삽입, 아래 목표로하고 오른쪽으로. 정맥의 끝은 PA의 투명한 벽을 통해 볼 수 있습니다. 당신의 위치를​​ 확인하기 위해 RPMI의 작은 금액을 달이다. 정맥, 대동맥 및 PA 주변의 봉합사를 강화하고 매듭을 묶게. 좌심방이 cannulated 때까지 실제 재관류 시작해서는 안 그럼이 시점에서, 대동맥도 해제 매듭입니다. </li></ol> 5.3. 좌심방을 Cannulate <ol><li> 좌심실의 하단 부분에 노치를 잘라 불활성 왼쪽 심방 (LA) 정맥, 위쪽 목표. 약간의 압력이 방향으로 승모판를 열 필요가있을 수 있습니다. 올바른 위치에서 정맥 팁 통과 실수 봉합하지 않고 안전합니다. </li></ol> 5.4. 재관류를 시작 <ol><li> RMPI가 유출 관 (맑은 PBS 달리 핑크색 봐야죠 색상)에서 확연히 때까지 수동으로 분당 0.3 ML에서 10 ML의 주사기에서 RPMI를 달이다. 유출 관, 다시 위치 LA 정맥에 흐름이없는 경우. 아무 유출을 다시 위치와 함께 얻을 수 없습니다 경우, 폐동맥에 누출이 있는지 확인합니다. 폐동맥의 누출이나 눈물은 복구할 수 없습니다,이 실험을 중단에 대한 원인이됩니다. </li><li> IL - 1 시스템을 통해 PA 정맥에 60 ML의 주사기를 연결하고 누수 확인 및 폐 RPMI가 폐에 혈액을 교체는 것을 보여주는, 흰색으로 바뀝니다 확실히 만드는 perfusate의 1ml/min 주입을 시작합니다. 2 분 동안 느린 흐름 Perfuse. </li></ol> 6. 타악기 및 꾸준한 폐 압력 흐름 관계를 측정 <ol><li> 타악기 흐름 연구, 처음에는 oscillatory 펌프 피스톤 변위를 설정이전 실험에 기초하여 WinTest 프로그램의 각 주파수에 대해 원하는 수준. 폐 구조와 역학에 인해 변화는 변위 각 마우스에 따라 조정해야합니다. 원하는 수준의 지속적인 흐름을 설정합니다. oscillatory 펌프에 밸브를 열고 바로 oscillatory 흐름 프로필 (Wintest 프로그램)을 실행하기 전에 녹화 데이터를 시작합니다. 데이터 파일을 열고 Excel에서 실험 흐름 (Q)를 플롯. Q 맥스와 Q 분이 원하는대로되도록 각 주파수에서 oscillatory 펌프 피스톤 변위를 조정 (Wintest 프로그램). </li><li> 꾸준한 흐름 재판은 oscillatory 펌프에 밸브를 닫습니다. 이 밸브가 열려 남아있는 경우, oscillatory 펌프 또 다른 하나의 유량의 변화를 댐퍼닝, 커패시터 역할을합니다. 각각의 유속이나 PA의 압력까지 최소 10 초 동안 데이터를 수집 이상 5 % 변경되지 않습니다. </li><li> 타악기 또는 지속 중 유량 측정, 데이터 수집하기 전에 일정한 압력에서 오래된 환기. 즉시 데이터 수집 후 통풍을 재개하라. </li><li> 기도 튜브에 RPMI 살펴보십시오,이 부종의 증거이며 실험을 중단에 대한 원인이됩니다. 또한,이 트랜스 듀서를 손상시킬 수 있기 때문에 RPMI은기도의 압력 또는 유량 센서에 도달해서는 안된다. </li></ol> 7. 대표 결과 : 대표 스테디 결과 : 격리 폐에서 설정 실험자들은 독립적으로 제어뿐만 아니라 폐의 흐름 Q 능력뿐만 아니라기도 압력 P 공기와 왼쪽 심방 압력 랩 있습니다. Q, P 공기와 무릎이 폐동맥 vasculature하고 그 결과 폐동맥 압력 PAP에 영향을 미치는 때문에 유리한 것입니다. 또 다른 장점은 얻은 결과는 교감 신경계 톤 1 볼륨 상태 및 마취 2 무관한 것입니다. 고정 P 공기에 대한 Q의 계단 단계의 변화에 의해 유발하거나, 고정 또는 무릎 다양한 PAP 변경은 그림 1에 표시됩니다. 격리된 폐 준비에 랩 정맥은 일반적으로 폐기물 컨테이너에 perfusate을 이끌고 튜브에 연결합니다. 장소에이 튜브로, 무릎은 Poiseuille 흐름으로 인해 Q에 선형적으로 의존한다. 그러나, 콘센트 및 폐기물 컨테이너의 높이를 수동으로 상수가 아닌 제로 무릎을 제공하도록 조정하거나 튜브는 Q.의 독립 영 무릎을 허용하도록 제거할 수 있습니다 대표 타악기 결과 : 임의의 타악기 흐름 파형이 시스템을 생성할 수 있지만, 우리는 일반적으로 양식의 흐름을 생성 Q = 3 + 2 죄 (2 F πt) ML / F = 1, 2, 5, 10, 15 및 20 Hz의 주파수에서 분 폐동맥 vasculature (맨 위 패널 그림 2)의 선형 임피던스를 평가합니다. 결과 PAP, 무릎 및 Q 측정에서 폐동맥 혈관 임피던스 크기 (Z) 및 위상은 (θ) 먼저 일련의로 각각 부과 사인 유량 주파수에서 ΔP = PAP - 무릎 및 Q 중 하나 가득 사인 사이클을 분해하여 계산 푸리에 변환을 사용하여 사인 하모닉스. 압력의 비율 변환 수율에게 진도 Z 및 위상 θ가있는 폐동맥 vascualar 임피던스, PVZ = FFT (ΔP) / FFT (Q)를 흐름 변환. 입력 임피던스 Z 0, 특성 임피던스 Z C 및 전파 반사 R W의 인덱스는, 임피던스 크기의 계산됩니다. 특히, Z 0 모든 주파수 이상, Z C가 첫 번째 최소 (5 Hz에서) 20 Hz에서 사이에 Z의 평균으로 계산 평균하고, R W 계산됩니다 0번째 조화 (F = 0 Hz에서)에서 Z부터 계산됩니다 로 (Z 0 - Z C) / (Z 0 + Z C) 3. <img src="/files/ftp_upload/2690/2690fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 꾸준한 흐름 파형 (맨 윗줄)과 결과 압력. (두 번째 행 : PAP, P 공기, 무릎) 무릎 및 P 공기의 다른 조합과 시간의 함수로. 아래 행은 (A)와 (B), Q와 무릎이 증가와 감소가 유출 관이 자리에 있기 때문에 Q. 대에서 PAP를 보여줍니다. 이 튜브는 그 무릎가 지속 및 Q. 독립되도록 (C) (D)와 무릎이 이상하지만 Q. P 공기의 독립이되도록 (E) 아울렛 튜브의 높이를 수동으로 조정했다 예전에 어느되었습니다 위해 제거되었습니다 최종 inspiratory (A, C, D) 또는 최종 날숨 (B, E) 압력. <img src="/files/ftp_upload/2690/2690fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 타악기 흐름 파형 Q (맨 위 패널) 및 결과 압력 (하단 패널 : PAP, 무릎 및 P 공기.) 시간의 함수로. 이러한 타악기 폐동맥 압력 유량 관계에서 PVZ는 총 오른쪽 심실 afterload를 반영하는, 계산하실 수 있습니다.

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	<li>Pace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+control+of+pulmonary+vascular+impedance+in+anesthetized+dogs.">Sympathetic control of pulmonary vascular impedance in anesthetized dogs.</a> Circ Res. 29, 555-568 (1971).</li><li>Ewalenko, P., Stefanidis, C., Holoye, A., Brimioulle, S., Naeije, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vascular+impedance+vs.+resistance+in+hypoxic+and+hyperoxic+dogs:+effects+of+propofol+and+isoflurane.">Pulmonary vascular impedance vs. resistance in hypoxic and hyperoxic dogs: effects of propofol and isoflurane.</a> J Appl Physiol. 74, 2188-2193 (1993).</li><li>Nichols, W. W., O'Rourke, M. F., Hartley, C., McDonald, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> McDonald's blood flow in arteries : theoretical, experimental, and clinical principles. , (2005).</li><li>Tuchscherer, H. A., Webster, E. B., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+Vascular+Resistance+and+Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs:+Effects+of+Pulmonary+Emboli.">Pulmonary Vascular Resistance and Impedance in Isolated Mouse Lungs: Effects of Pulmonary Emboli.</a> Annals of Biomedical Engineering. 34, 660-668 (2006).</li><li>Tuchscherer, H. A., Vanderpool, R. R., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vascular+remodeling+in+isolated+mouse+lungs:+Effects+on+pulsatile+pressure-flow+relationships.">Pulmonary vascular remodeling in isolated mouse lungs: Effects on pulsatile pressure-flow relationships.</a> Journal of Biomechanics. 40, 993-1001 (2007).</li><li>Vanderpool, R., Naeije, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs+for+the+Determination+of+Site+of+Action+of+Vasoactive+Agents+and+Disease.">Impedance in Isolated Mouse Lungs for the Determination of Site of Action of Vasoactive Agents and Disease.</a> Ann Biomed Eng. , (2010).</li><li>Vanderpool, R., Kim, A., Molthen, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+rho+kinase+inhibition+on+chronic+hypoxia-induced+changes+in+proximal+and+distal+pulmonary+arterial+structure+and+function.">Effects of acute rho kinase inhibition on chronic hypoxia-induced changes in proximal and distal pulmonary arterial structure and function.</a> Journal of Applied Physiology. , (2010).</li><li>El-Bizri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smooth+muscle+protein+22alpha-mediated+patchy+deletion+of+Bmpr1a+impairs+cardiac+contractility+but+protects+against+pulmonary+vascular+remodeling.">Smooth muscle protein 22alpha-mediated patchy deletion of Bmpr1a impairs cardiac contractility but protects against pulmonary vascular remodeling.</a> Circ Res. 102, 380-388 (2008).</li><li>Champion, H., Michelakis, E., Hassoun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+invasive+and+noninvasive+approach+to+the+right+ventricle-pulmonary+circulation+unit:+state+of+the+art+and+clinical+and+research+implications.">Comprehensive invasive and noninvasive approach to the right ventricle-pulmonary circulation unit: state of the art and clinical and research implications.</a> Circulation. 120, 992-1007 (2009).</li><li>Gan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasively+assessed+pulmonary+artery+stiffness+predicts+mortality+in+pulmonary+arterial+hypertension.">Noninvasively assessed pulmonary artery stiffness predicts mortality in pulmonary arterial hypertension.</a> Chest. 132, 1906-1912 (2007).</li><li>Mahapatra, S., Nishimura, R., Sorajja, P., Cha, S., McGoon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+pulmonary+arterial+capacitance+and+mortality+in+idiopathic+pulmonary+arterial+hypertension.">Relationship of pulmonary arterial capacitance and mortality in idiopathic pulmonary arterial hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 47, 799-803 (2006).</li><li>Bogaard, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+pulmonary+artery+pressure+elevation+is+insufficient+to+explain+right+heart+failure.">Chronic pulmonary artery pressure elevation is insufficient to explain right heart failure.</a> Circulation. 120, 1951-1960 (2009).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

수술의 중요 단계 이것은 폐 떨어져 갈빗대를 절단하면 치료가 함락되는 것이 중요합니다. 폐 완전히 노출과 노골적인 주변 조직에 의해 인플레이션 중에 있지만 고립의 과정에서 손상되지해야합니다. 포셉의 백 엔드와 같은 평면 객체의 사용은 줄일 가위에 대한 명확한 경로가되도록 가슴 벽 가까이 폐를 개최하는 데 사용할 수 있습니다. 또 다른 중요한 단계는 폐동맥과 대동맥 주위 봉합의 위치입니다. 무딘 직선 핀셋을 사용하면 폐동맥을 펑쳐링의 위험을 줄일 수 있습니다. 수술 중에 마지막 중요한 단계는 cannulas의 위치입니다. cannulas들이 마음을 출구로 큰 혈관의 비행기 위에 너무 높은 경우, cannulas는 폐동맥이나 폐동맥 혈관 중 하나를 당겨 수 있습니다. 좌심방에있는 정맥이 너무 낮으면, 그것은 왼쪽 폐에 흐름을 차단할 수 있습니다. 그 결과, 더 많은 흐름 PAP 증가하고 오른쪽 폐 부종의 발전을 hastening, 오른쪽 폐로 이동합니다. 데이터 수집 중 중요 단계 꾸준한 흐름 데이터 수집은 높은 유체 전단 응력에 대한 폐 vasculature의 노출이 최소화되도록, 특히 높은 흐름 속도에 대해 신속하게 수행하여야한다. 우리의 경험에서 높은 전단은 폐 부종을 초래할 강조합니다. 또한, 전단 응력의 급속한 증가는 폐 부종이 발생할 수 있습니다. 꾸준한 흐름 조건 6의 흐름의 증가 ML / 분 / 분 부종이 발생하지 않습니다. 5 ML / 분 이상의 지속적인 흐름 속도는 특정 조건 부종없이 구할 수 있습니다. 우리는 10 ML / 분 성공적으로 같이 높은 지속적인 흐름 속도 제어 폐, 만성 hypoxic 쥐를 perfused 있습니다. 주파수 제한 우리가 흐름을 사용하기 때문에 우리의 테스트에서 가장 높은 주파수는 일반적으로 20 Hz에서입니다 파형 Q = 3 + 2 죄 (2 F πt) ML / 분. 우리가 여기서 설명하는 펌프가 높은 주파수 (적어도 50 Hz에서)에서 oscillations를 생성할 수 있지만, 트레이드 오프는 스트로크 길이, 즉, 유동 진동의 크기가 증가 주파수 감소하는 Q. 많은 생리 흐름 파형의 변화를 감소합니다 가능성이 시스템을 시뮬레이션 할 수 있습니다. 또는 사용자 지정 재관류 펌프는 동일한 수술 격리하고 여기에 설명된 환기 절차와 함께 사용할 수 있습니다. 압력 트랜스 듀서의 주파수 범위는 (P75, 하버드 장치, 홀리스튼, MA) 000-100 Hz에서로보고됩니다. 트랜스 듀서의 실제 주파수 응답은 PA와 LA cannulas에 트랜스 듀서를 연결하는 데 사용되는 튜브의 강성 및 크기에 따라 달라집니다. 대신 폴리에틸렌 튜브의 금속 튜브를 사용하면 시스템의 응답을 증가 것입니다. 그러나 그것은 정맥의 위치 및 배치의 유연성이 수술 도중 필요하기 때문에 완전히 딱딱한 튜브를 사용할 수 없습니다. 그럼에도 불구하고, 높은 주파수 응답 변환기 및 / 또는 더 단단한 튜브가 압력 측정에 신호 대 잡음을 증가시키고 PVZ 더 높은 주파수에서 얻을 수 있도록합니다. 애플 리케이션 이 격리된 폐 준비는 타악기 폐동맥 압력 유량 관계에서뿐만 아니라 만성 hypoxia 5 폐 색전증 4의 효과를 조사하기 위해 사용되었습니다. 또한 폐동맥 순환 6 vasoactive 요원의 영향을 조사하고 급성 rho 키나제 억제 7 근위 및 말초 폐동맥 혈관 효과를 계량하는 데 사용되었다. 이 기술은 마우스의 근친이나 outbred 종자에서 폐동맥 혈관 생리학 또는 유전자 조작 생쥐 8 계량하는 데 사용할 수 있습니다. 이 격리된 폐 준비로 얻은 압력 흐름 데이터의 해석은 심장 박동이나 마우스의 변종 사이에 심장 출력의 차이에 의해 복잡하지 않습니다. 그것은 바로 정상적인 심장 박동에 대한 응답으로 생체내 준비에서에서 얻은 것과 비교해서는 안됩니다, 임피던스 스펙트럼은 고립에서 얻은 점에 유의하는 것이 중요 아닌 생리적 파형에 대응 perfused 폐를 환기. 또한 생체내에서 환기 부정, 긍정 아니라, 압력에 의해하고 혈액의 점도는 약 Ficoll과 RPMI 4 배 점도있다. 의미 절연, 환기, perfused 마우스 폐 준비를 사용하여, 우리는 크게 충격 RV의 afterload 7 큰 도관 동맥의 준수에 아무런 직접적인 영향을 미치지 않습니다 급성 rho - 키나제 억제함으로써 평활근 세포 드 활성화를 보여줄 수있다. 근위 동맥 준수의 임상 중요성은 점점 9-11을 인정하고 있습니다. 또한 감소 주요 폐동맥 준수는 폐 동맥 고혈압 10,11에서 사망률의 훌륭한 예언자로 표시되었습니다. 죽음의 주요 원인폐동맥 고혈압에서 H는 오른쪽 심실 장애되지만 혼자 의미 폐동맥 압력을 증가 실패 12 일으킬 충분하지 않습니다. 총 오른쪽 심실 afterload의보다 효과적인 조치는 근위 준수 및 말초 저항 모두에 따라이 절차를 마우스 폐에서 얻을 수와 같은 타악기 폐동맥 압력 유량 관계로부터 계산 PVZ입니다.

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		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
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<td>1 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Sci</td>
<td>14-829-10F</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Sci</td>
<td>14-823-2A </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>60 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Sci</td>
<td>13-689-8 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI with GLN 6/PK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Sci</td>
<td>MT10040CV </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bottle Top Filters</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Sci</td>
<td>09-761-57</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ficoll PM 70</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F2878-100g</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Y27632</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>Y0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Angled Ball Iris scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14109-09</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vannas Spring Scissors - 4mm Blades</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>15018-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine Iris Scissors - straight</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14106-09</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11251-35</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dumont Medical Biology Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11254-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lauda E100 ECO-line 003 </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>Comparable to Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IL-1 Isolated perfused mouse lung system </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus </td>
<td>739904 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Blood Pressure Transducer P75 for PLUGSYS Module</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>730020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TS410 Flow Modules</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Transonic </td>
<td>TS410</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ME 4 PXN Precision PXN Inline Flowsensors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Transonic</td>
<td>ME 4 PXN</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cole-Parmer Multi-Syringe Pumps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cole-Parmer </td>
<td>EW-74900-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nembutal 50MG/ML 20ML Vial</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Amatheon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

characterization of the isolated, ventilated, and instrumented mouse lung perfused with pulsatile flow

절연은 환기 및기구 마우스 폐 준비는 안정과 타악기 폐동맥 혈관 압력 유량 관계가 폐 동맥 유량, 유량 파형,기도 압력과 왼쪽 심방 압력 이상의 독립적인 컨트롤과 함께 측정할 수 있습니다. 폐 혈관 저항이 멀티 포인트, 지속적인 압력 - 유량 곡선을 기준으로 계산되며 폐동맥 혈관 임피던스는 주파수의 범위에서 얻은 타악기 압력 유량 곡선에서 계산됩니다. 그것이 무시할 수없는 혈관 준수의 영향, 특히 폐동맥 순환에 포함되어 있기 때문에 현재 임상 인식으로, 임피던스는 저항보다 오른쪽 심실 afterload의 우수한 측정하기위한 한 방법입니다. 임피던스 세 중요한 통계 수치 - 제로 헤르츠 임피던스 Z 0, 특성 임피던스 Z C 및 전파 반사 R W의 색인 - 흐름에 사용할 수 말초 동맥 단면적, 근위 동맥 강성과 상류 - 하류 임피던스에 대한 통찰력을 제공합니다 불일치, 각각. 고립에서 얻어진 모든 결과는, 환기 및 perfused 폐 동정 신경계 톤, 볼륨 상태 및 마취의 효과에 독립적입니다. 우리는 폐의 emboli과 저항 및 임피던스에 대한 만성 hypoxia의 영향을 계량이 기술을 사용 있고, Z C의 압력 의존성을 사용 vasoactive 요원과 질병의 행동 사이트 (즉, 근위 대 말초) 구별할 수 있습니다. 또한, 이러한 기술은 마우스의 유전자 조작 종자의 폐에와 함께 사용하는 경우, 폐의 혈관 구조와 기능에 대한 분자 수준의 결함의 영향을 확인할 수 있습니다.

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Characterization of the Isolated, Ventilated, and Instrumented Mouse Lung Perfused with Pulsatile Flow

다음 프로토콜은 환기를 분리하고 오른쪽 심실 afterload에 혈액의 흐름, 공기 흐름,기도 변화와 혈관 변화의 효과를 계량하기 위해서는 안정이나 타악기 폐동맥 혈관 압력 유량 관계를 측정하는 마우스 폐가 instrumenting 과정을 설명합니다.

절연, 환기 및기구 마우스 폐의 특성화는 타악기 흐름 Perfused

The isolated, ventilated and instrumented mouse lung preparation allows steady and pulsatile pulmonary vascular pressure-flow relationships to be measured ...

characterization-isolated-ventilated-instrumented-mouse-lung-perfused

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Biology

16.2K 조회수.  University of Wisconsin – Madison. 다음 프로토콜은 환기를 분리하고 오른쪽 심실 afterload에 혈액의 흐름, 공기 흐름,기도 변화와 혈관 변화의 효과를 계량하기 위해서는 안정이나 타악기 폐동맥 혈관 압력 유량 관계를 측정하는 마우스 폐가 instrumenting 과정을 설명합니다.

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Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the unique differentiation programs that are manifest during meiosis. Two principal methods have been developed to purify, to varying degrees, various meiotic fractions from both adult and immature animals: elutriation or Staput (sedimentation) using BSA and/or percoll gradients. Both of these methods rely on cell size and density to separate meiotic cells1-5. Overall, except for few cell populations6, these protocols fail to yield sufficient purity of the numerous meiotic cell populations that are necessary for detailed molecular analyses. Moreover, with such methods usually one type of meiotic cells can be purified at a given time, which adds an extra level of complexity regarding the reproducibility and homogeneity when comparing meiotic cell samples.
Here, we describe a refined method that allows one to easily visualize, identify, and purify meiotic cells, from germ cells to round spermatids, using FACS combined with Hoechst 33342 staining7,8. This method provides an overall snapshot of the entire meiotic process and allows one to highly purify viable cells from most stage of meiosis. These purified cells can then be analyzed in detail for molecular changes that accompany progression through meiosis, for example changes in gene expression9,10and the dynamics of nucleosome occupancy at hotspots of meiotic recombination11.

An efficient method to obtain highly purified viable meiotic fractions from mouse testis is described, which combines a refined cell dissociation protocol with fluorescent activated cell sorting (FACS). This method takes advantage of differences in the DNA content and nuclear density of discrete meiotic fractions.

마우스 Meiotic 셀 유동세포계측법의 정제

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

연구

생물학

Micro-Mechanical Characterization of Lung Tissue Using Atomic Force Microscopy

Matrix stiffness strongly influences growth, differentiation and function of adherent cells1-3. On the macro scale the stiffness of tissues and organs within the human body span several orders of magnitude4. Much less is known about how stiffness varies spatially within tissues, and what the scope and spatial scale of stiffness changes are in disease processes that result in tissue remodeling. To better understand how changes in matrix stiffness contribute to cellular physiology in health and disease, measurements of tissue stiffness obtained at a spatial scale relevant to resident cells are needed. This is particularly true for the lung, a highly compliant and elastic tissue in which matrix remodeling is a prominent feature in diseases such as asthma, emphysema, hypertension and fibrosis. To characterize the local mechanical environment of lung parenchyma at a spatial scale relevant to resident cells, we have developed methods to directly measure the local elastic properties of fresh murine lung tissue using atomic force microscopy (AFM) microindentation. With appropriate choice of AFM indentor, cantilever, and indentation depth, these methods allow measurements of local tissue shear modulus in parallel with phase contrast and fluorescence imaging of the region of interest. Systematic sampling of tissue strips provides maps of tissue mechanical properties that reveal local spatial variations in shear modulus. Correlations between mechanical properties and underlying anatomical and pathological features illustrate how stiffness varies with matrix deposition in fibrosis. These methods can be extended to other soft tissues and disease processes to reveal how local tissue mechanical properties vary across space and disease progression.

The stiffness of the extracellular matrix strongly influences multiple behaviors of adherent cells. Matrix stiffness varies spatially throughout a tissue, and undergoes modification in various disease conditions. Here we develop methods to characterize spatial variations in stiffness in normal and fibrotic mouse lung tissue using atomic force microscopy microindentation.

원자 힘 현미경을 사용하여 폐 조직의 미세 기계적 특성

Matrix stiffness strongly influences growth, differentiation and function of adherent cells1-3.  On the macro scale the stiffness of tissues and organs ...

Isolation &#38; Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor formation. Taken together these studies suggest that resident lung MSC play a role during pulmonary tissue homeostasis, injury and repair during diseases such as pulmonary fibrosis (PF) and arterial hypertension (PAH). Here we describe a technology to define a population of resident lung MSC. The definition of this population in vivo pulmonary tissue using a define set of markers facilitates the repeated isolation of a well-characterized stem cell population by flow cytometry and the study of a specific cell type and function.

Isolation & Characterization of Hoechstlow CD45negative Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells

In this article we demonstrate the isolation of murine resident lung mesenchymal stem cells (lung MSC), their expansion, characterization and analysis of immunomodulatory properties.

Hoechst의 분리 및 특성 낮은 CD45 부정적인 마우스 폐 Mesenchymal 줄기 세포

Tissue resident mesenchymal stem cells (MSC) are important regulators of tissue repair or regeneration, fibrosis, inflammation, angiogenesis and tumor ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also produce a source of patient-matched cells for regenerative therapies. iPSCs may be generated using multiple protocols and derived from multiple cell sources. Once generated, iPSCs are tested using a variety of assays including immunostaining for pluripotency markers, generation of three germ layers in embryoid bodies and teratomas, comparisons of gene expression with embryonic stem cells (ESCs) and production of chimeric mice with or without germline contribution2. Importantly, iPSC lines that pass these tests still vary in their capacity to produce different differentiated cell types2. This has made it difficult to establish which iPSC derivation protocols, donor cell sources or selection methods are most useful for different applications.
The most stringent test of whether a stem cell line has sufficient developmental potential to generate all tissues required for survival of an organism (termed full pluripotency) is tetraploid embryo complementation (TEC)3-5. Technically, TEC involves electrofusion of two-cell embryos to generate tetraploid (4n) one-cell embryos that can be cultured in vitro to the blastocyst stage6. Diploid (2n) pluripotent stem cells (e.g. ESCs or iPSCs) are then injected into the blastocoel cavity of the tetraploid blastocyst and transferred to a recipient female for gestation (see Figure 1). The tetraploid component of the complemented embryo contributes almost exclusively to the extraembryonic tissues (placenta, yolk sac), whereas the diploid cells constitute the embryo proper, resulting in a fetus derived entirely from the injected stem cell line.
Recently, we reported the derivation of iPSC lines that reproducibly generate adult mice via TEC1. These iPSC lines give rise to viable pups with efficiencies of 5-13%, which is comparable to ESCs3,4,7 and higher than that reported for most other iPSC lines8-12. These reports show that direct reprogramming can produce fully pluripotent iPSCs that match ESCs in their developmental potential and efficiency of generating pups in TEC tests. At present, it is not clear what distinguishes between fully pluripotent iPSCs and less potent lines13-15. Nor is it clear which reprogramming methods will produce these lines with the highest efficiency. Here we describe one method that produces fully pluripotent iPSCs and "all- iPSC" mice, which may be helpful for investigators wishing to compare the pluripotency of iPSC lines or establish the equivalence of different reprogramming methods.

Generating induced pluripotent stem cell (iPSC) lines produces lines of differing developmental potential even when they pass standard tests for pluripotency. Here we describe a protocol to produce mice derived entirely from iPSCs, which defines the iPSC lines as possessing full pluripotency1.

유도 만능의 줄기 세포에서 파생 마우스의 생성

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Protein Transfection of Mouse Lung

Increasing protein expression enables researchers to better understand the functional role of that protein in regulating key biological processes1. In the lung, this has been achieved typically through genetic approaches that utilize transgenic mice2,3 or viral or non-viral vectors that elevate protein levels via increased gene expression4. Transgenic mice are costly and time-consuming to generate and the random insertion of a transgene or chronic gene expression can alter normal lung development and thus limit the utility of the model5. While conditional transgenics avert problems associated with chronic gene expression6, the reverse tetracycline-controlled transactivator (rtTA) mice, which are used to generate conditional expression, develop spontaneous air space enlargement7. As with transgenics, the use of viral and non-viral vectors is expensive8 and can provoke dose-dependent inflammatory responses that confound results9 and hinder expression10. Moreover, the efficacy of repeated doses are limited by enhanced immune responses to the vector11,12. Researchers are developing adeno-associated viral (AAV) vectors that provoke less inflammation and have longer expression within the lung13.
Using &beta;-galactosidase, we present a method for rapidly and effectively increasing protein expression within the lung using a direct protein transfection technique. This protocol mixes a fixed amount of purified protein with 20 &mu;l of a lipid-based transfection reagent (Pro-Ject, Pierce Bio) to allow penetration into the lung tissue itself. The liposomal protein mixture is then injected into the lungs of the mice via the trachea using a microsprayer (Penn Century, Philadelphia, PA). The microsprayer generates a fine plume of liquid aerosol throughout the lungs. Using the technique we have demonstrated uniform deposition of the injected protein throughout the airways and the alveoli of mice14. The lipid transfection technique allows the use of a small amount of protein to achieve effect. This limits the inflammatory response that otherwise would be provoked by high protein administration. Indeed, using this technique we published that we were able to significantly increase PP2A activity in the lung without affecting lung lavage cellularity15. Lung lavage cellularity taken 24 hr after challenge was comparable to controls (27&plusmn;4 control vs. 31&plusmn;5 albumin transfected; N=6 per group). Moreover, it increases protein levels without inducing lung developmental changes or architectural changes that can occur in transgenic models. However, the need for repeated administrations may make this technique less favorable for studies examining the effects of long-term increases in protein expression. This would be particularly true for proteins with short half-lives.

Transgenic mice or viral vectors have been used to increase protein expression within the lung. However, these techniques are time-consuming, technically challenging and have off-target effects that can confound results. Our protein transfection protocol uses a lipid based transfection reagent and an ultrafine microsprayer to uniformly deliver active protein to lung cells.

마우스 폐의 단백질 형질

Increasing protein expression enables researchers to  better understand the functional role of that protein in regulating key  biological processes1. In ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in the striated muscle fibers that appear as highly localized Ca2+ release events mediated by ryanodine receptor (RyR) Ca2+ release channels on the sarcoplasmic reticulum (SR) membrane. Proper assessment of muscle Ca2+ sparks could provide information on the intracellular Ca2+&#160;handling properties of healthy and diseased striated muscles. Although Ca2+ sparks events are commonly seen in resting cardiomyocytes, they are rarely observed in resting skeletal muscle fibers; thus there is a need for methods to generate and analyze sparks in skeletal muscle fibers.
Detailed here is an experimental protocol for measuring Ca2+ sparks in isolated flexor digitorm brevis (FDB) muscle fibers using fluorescent Ca2+ indictors and laser scanning confocal microscopy. In this approach, isolated FDB fibers are exposed to transient hypoosmotic stress followed by a return to isotonic physiological solution. Under these conditions, a robust Ca2+ sparks response is detected adjacent to the sarcolemmal membrane in young healthy FDB muscle fibers. Altered Ca2+ sparks response is detected in dystrophic or aged skeletal muscle fibers. This approach has recently demonstrated that membrane-delimited signaling involving cross-talk between inositol (1,4,5)-triphosphate receptor (IP3R) and RyR contributes to Ca2+ spark activation in skeletal muscle. In summary, our studies using osmotic stress induced Ca2+ sparks showed that this intracellular response reflects a muscle signaling mechanism in physiology and aging/disease states, including mouse models of muscle dystrophy (mdx mice) or amyotrophic lateral sclerosis (ALS model).

Described here is a method to directly measure calcium sparks, the elementary units of Ca2+ release from sarcoplasmic reticulum&#160;in intact skeletal muscle fibers. This method utilizes osmotic-stress-mediated triggering of Ca2+ release from ryanodine receptor in isolated muscle fibers. The dynamics and homeostatic capacity of intracellular Ca2+ signaling can be employed to assess muscle function in health and disease.

칼슘의 평가는 그대로 골격 근육 섬유에서 불꽃

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with real time imaging, it becomes feasible to determine permeability changes in individual pulmonary microvessels. Herein we describe steps to isolate rat lungs and perfuse them with autologous blood. Then, we outline steps to infuse fluorophores or agents via a microcatheter into a small lung region. Using these procedures described, we determined permeability increases in rat lung microvessels in response to infusions of bacterial lipopolysaccharide. The data revealed that lipopolysaccharide increased fluid leak across both venular and capillary microvessel segments. Thus, this method makes it possible to compare permeability responses among vascular segments and thus, define any heterogeneity in the response. While commonly used methods to define lung permeability require postprocessing of lung tissue samples, the use of real time imaging obviates this requirement as evident from the present method. Thus, the isolated lung preparation combined with real time imaging offers several advantages over traditional methods to determine lung microvascular permeability, yet is a straightforward method to develop and implement.

The isolated blood-perfused lung preparation makes it feasible to visualize microvessel networks on the lung surface. Here we describe an approach to quantify permeability of single microvessels in isolated lungs using real time fluorescence imaging.

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

An Immunofluorescent Method for Characterization of Barrett&#8217;s Esophagus Cells

Esophageal adenocarcinoma (EAC) has an overall survival rate of less than 17% and incidence of EAC has risen dramatically over the past two decades. One of the primary risk factors of EAC is Barrett&#8217;s esophagus (BE), a metaplastic change of the normal squamous esophagus in response to chronic heartburn. Despite the well-established connection between EAC and BE, interrogation of the molecular events, particularly altered signaling pathways involving progression of BE to EAC, are poorly understood. Much of this is due to the lack of suitable in vitro models available to study these diseases. Recently, immortalized BE cell lines have become commercially available allowing for in vitro studies of BE. Here, we present a method for immunofluorescent staining of immortalized BE cell lines, allowing in vitro characterization of cell signaling and structure after exposure to therapeutic compounds. Application of these techniques will help develop insight into the mechanisms involved in BE to EAC progression and provide potential avenues for treatment and prevention of EAC.

There is a discernible need for improved information on molecular drivers of Barrett&#8217;s Esophagus. Immunofluorescent staining is a useful technique for understanding the effects of cell signaling on cell morphology. We present a simple, effective protocol for the use of immunofluorescent staining to assess therapeutic treatment in Barrett&#8217;s Esophagus cells.

바렛 식도 세포의 특성에 대한 면역 방법

Esophageal adenocarcinoma (EAC) has an overall survival rate of less than 17% and incidence of EAC has risen dramatically over the past two decades. One ...

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods are needed that can quantify the pathologic changes. Furthermore, to provide translational relevance to the mouse models, such measurements should be tests that can easily be done in both humans and mice. Unfortunately, in the present literature few phenotypic measurements of lung function have direct application to humans. One exception is the diffusing capacity for carbon monoxide, which is a measurement that is routinely done in humans. In the present report, we describe a means to quickly and simply measure this diffusing capacity in mice. The procedure involves brief lung inflation with tracer gases in an anesthetized mouse, followed by a 1 min gas analysis time. We have tested the ability of this method to detect several lung pathologies, including emphysema, fibrosis, acute lung injury, and influenza and fungal lung infections, as well as monitoring lung maturation in young pups. Results show significant decreases in all the lung pathologies, as well as an increase in the diffusing capacity with lung maturation. This measurement of lung diffusing capacity thus provides a pulmonary function test that has broad application with its ability to detect phenotypic structural changes with most of the existing pathologic lung models.

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

We describe a means to quickly and simply measure the lung diffusing capacity in mice and show that it is sufficiently sensitive to phenotype changes in multiple common lung pathologies. This metric thus brings direct translational relevance to the mouse models, since diffusing capacity is also easily measured in humans.

표현형 마우스 폐 기능<em&gt; 생체</em&gt; 폐 확산 능력

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

마우스입니다 관류 신장 기법

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...