Saponification은 일반적으로 복잡한 유기 혼합물에서 지방산 메틸 에스테르를 제거하는 데 사용되는 기술이다.

복잡한 유기 샘플은 종종 개별 성분의 상대적 농도를 결정하는 데 사용되는 가스 크로마토그래피에 의해 분석됩니다.

그러나, 크기와 구조가 유사한 화합물은 계기에 의해 구별될 수 없으며, 결과를 왜곡한다. 따라서 정확한 결과를 얻으려면 중복 신호를 생성하는 원치 않는 화합물을 제거해야 합니다.

이 비디오는 고생물학을 위한 알케논을 정화하기 위해 묘면화를 사용하는 것을 다룹니다. 복잡한 바이오마커 샘플의 정제를 상세히 설명하는 계열 중 최초입니다. 그것은 절차뿐만 아니라 기술의 다른 용도를 다룰 것입니다.

알케네네스라고 불리는 고도 불포화 긴 사슬 알킬 케톤은 과거 해표면 온도에 대한 유용한 정보를 제공하는 것으로 나타났습니다.

그러나, 알케닌을 생성 하는 유기 체는 종종 크기와 화학 구조에서 유사한 지방산 메틸 에스테르를 만들, 알케노아테라고. 이러한 유사성 때문에 정확한 분석을 얻기 전에 알케노아이를 제거해야 합니다.

사포화는 이러한 분자의 동용을 방지하는 데 사용되는 일반적인 기술입니다. 사포화는 에스테르의 분자 결합을 분할하기 위해 물을 활용합니다. 베이스는 알케노아테의 중심에 있는 탄소에 부착됩니다. 이 추가 반응은 불안정한 중간체를 생성하고, 알크옥화물은 추방된다.

새로 형성된 산으로부터의 수소는 추방된 알크옥사이드로 이동하고, 그 결과 카박스실레이트 이온은 기지에서 양이온과 이온 결합을 형성한다. 그 결과 알코올과 지방산 염이 생성됩니다. 강한 산을 추가하면 카복실산을 다시 생성합니다. 이 시점에서, 불쾌한 알케노아트는 더 이상 관심의 알케네와 공동 elutes하지 않는 형태로 변환되었습니다.

이제 묘비화가 유기 혼합물을 정화하는 데 어떻게 사용될 수 있는지 이해되었으므로 절차를 시작할 준비가되었습니다.

먼저, 용매 추출 방법을 사용하여 수득된 건조된 총 지질 추출물(또는 TLE)을 획득하였다. 다음으로 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 새격화 솔루션을 준비합니다. 모든 구성 요소가 순수하고 탄화수소가 없는지 확인하십시오. 용액이 준비되면 말린 TLE를 60mL 의 보로실리케이트 유리 바이알에 추가합니다. 정상 수산화 칼륨 2mL2mL를 추가하고 바이알을 밀봉합니다. 다음으로, 바이알을 60°C로 가열하여 2.5h로 가열하여 에스테르 결합을 갈라냅니다. 이 완료되면 샘플을 실온으로 냉각시키십시오. 시료가 냉각되면 바이알에 염화 나트륨 용액 5%의 2mL를 추가합니다. 바이알을 캡하고 짧게 흔들어 줍니다. pH 용지를 사용하여 테스트할 때까지 6N 염산 드롭와이즈를 2p에 도달할 때까지 넣습니다. 이 산의 첨가는 카박스실레이트 애니메이션을 프로토로 하여 최종 생성물인 안정적인 카복실산을 형성합니다.

이제 산성화 용액이 에스테르가 없는 지금, 헥산 5 mL를 추가하십시오. 물에서 유기 화합물을 추출하기 위해 5 초 동안 격렬하게 흔들어. 유기 및 수성 상이 완전히 분리될 때까지 용액을 쉬게 하십시오. 염, 이온 및 반응되지 않은 염산은 수성 상에 남아 있으며 유기 화합물은 헥산으로 분리됩니다. 위상이 완전히 분리되면 파이펫을 사용하여 헥산의 약 75%를 제거하고 다른 40mL 바이알로 분배합니다. 이 추출 프로세스를 두 번 추가하여 매번 5mL의 헥산을 추가합니다. 이 작업이 완료되면 남은 수중 용액을 적절한 폐기물 용기에 버리십시오. 갓 수액화된 유기상을 포함하는 바이알에 라벨을 부착합니다. 생성된 카복실산은 추가 정화 없이는 알케네 분석에 일반적으로 사용되는 계측기에 주입할 수 없다. 가스 크로마토그래프에 주입된 카복실산은 유입구, 입구 라이너 및 기둥의 프런트 엔드를 빠르게 축적하고 파괴합니다. 이러한 산을 제거하기 위해, 샘플은 먼저 또 다른 정화 기술을 받아야합니다 : 열 크로마토그래피를 통해 분리.

Saponification은 유기 분자의 추출 및 정제에 여러 가지 응용 프로그램이 있습니다.

사포화는 바이오마커를 분리할 뿐만 아니라 상용 제품에 사용하기 위한 개별 성분을 추출하는 데사용할 수 있습니다. 이 예에서, 담배 나무에서 화합물 - 니코티아나 글루카 - 절연 및 연료, 열, 화학 화합물의 배열과 같은 바이오 기반 제품의 다양한 공급 원료로 자신의 잠재력을 조사하기 위해 분석되었다.

잎은 관심있는 분자를 집중하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 농축 된 식물 재료는 그 때 삽화되었다. 추출된 물질은 액체 크로마토그래피 질량 분석법으로 분석되었으며, 토코페롤의 농도를 결정하기 위해 - 식물에서 일반적으로 발견되는 비타민 E 화합물의 가족.

추출된 물질은 또한 원래 의 구성에 시험관 내에서 재구성 될 수있다. 이 예에서, 삽화는 시금치 식물에서 카로티노이드를 추출하는 데 사용되었고, 나중에 시험관내에서재구성되었다. 시금치는 안료 분자를 수확하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 이 분자는 그 때 분리 깔때기에서 수산화 칼륨의 용액에서 중단되었다, 묘충화를 시작. 수피 카로티노이드는 에테르 층으로 분리되어 수집및 건조되었습니다. 일련의 용액 버퍼를 사용하여 카로티노이드 및 기타 색소 침착 분자는 나중에 시험관에서재구성되었습니다. 이 정제는 유사하게 구조화된 유기 화합물의 간섭 없이 이 안료의 분석을 허용했습니다.

에스테르를 가수분해하는 능력 때문에, 수aponification은 그렇지 않으면 거대 분자에 바인딩되는 화합물을 "무료"에 사용할 수 있습니다. 이 예에서, 무수성 수압화 단계는 칼륨4-플루오로벤조이트칼륨4-플루오로벤조에이트의 카복실산 염으로 에틸 4-플루오로벤조아테를 변환하는 데 사용된다. saponification을 통한 이러한 보호는 원유 SFB의 생산을 가능하게 합니다 - 분자가 "붙어"남아 있었다면 불가능할 반응.

당신은 방금 Saponification을 통해 U^k'37 샘플의 정화에 대한 JoVE의 소개를 보았습니다. 이제 새포니화가 어떻게 작동하는지, 그리고 총 지질 추출물에서 알케논을 정화하는 방법을 이해해야 합니다. 후속 비디오에서 추가 정화 프로세스가 시연될 예정입니다.

시청해 주셔서 감사합니다!