Murine 원심 인공 인간의 전환 colitis, 지저분한 스트림에서 제외 콜론 세그먼트에서 주로 림프 colitis 위한 murine 모델을 제공 합니다.

양 대 장 염 (DC)는 환자에서 발생 하는 diverting enterostomy의 결과로 지저분한 스트림에서 제외 장 세그먼트와 자주 임상 조건입니다. 이 질병의 병 인 병이 정의 남지만 크 론 병과 궤 양성 대 장 염 같은 클래식 선 동적인 장 질병의 차이가 나타납니다. 이 질병의 개발을 선도 pathophysiological 메커니즘을 해독 하기 위한 연구는 적절 한 murine 모델의 부족에 의해 심각 하 게 방해 되었습니다. 이 프로토콜은 면역 체계의 역할 및 DC의 개발에 미생물와의 상호 작용의 연구를 용이 하 게 하는 DC의 murine 모델을 생성 합니다. C57BL/6 동물을 사용 하 여이 모델에 콜론의 원심 부분 원심 인공 항문을 만들어, 약한 염증 제외 장 세그먼트에 보통의 개발 트리거링 및 인간의 전형적인 병 변 재현으로 지저분한 stream에서 제외 됩니다. 적당 한 조직의 염증 반응으로 Dc입니다. 쥐 모델 달리 많은 유전자 변형 murine 모델 C57BL/6 배경에 사용할 수 있습니다. 우리의 모델이 동물의 조합 수 있습니다 개별 cytokines, 발산, 또는 생리 활성 분자 (예를 들어, 인터 루 킨 (IL)-17;의 수용 체의 잠재적인 역할을 IL-10, chemokine CXCL13, CXCR5 및 CCR7, chemokine 수용 체 그리고 sphingosine 1 인산 염 수용 체 4) DC의 병 인에 평가. C57BL/6 백그라운드에 congenic 쥐 긴장의 가용성은 크게 다른 종류의 세포는 병 인에 관련 된 DC의 역할을 설정 하는 전송 실험 용이. 마지막으로, 모델 및 비 영향을 영향을 받는 장 세그먼트에서 점 막 면역에 지역 개입 (예를 들어, 로컬 미생물 또는 로컬 염증 치료의 수정)의 영향을 평가 하기 위해 기회를 제공 하 고는에 조직의 면역 항상성입니다.

최근 몇 년 동안, 고아 한 선 동적인 장 질병 (IBDs; 다른 비 감염 성 대 장 염 엔터티의 상당수 즉., Crohn의 질병 또는 colitis ulcerosa)는 임상 및 histopathologically 특징 되었습니다 인간에서. 이러한 colitis 형태의 개발을 선도 병 태 생리 기계 장치는 완전히 이해 되지 부분적으로 적절 한 동물 모델은 부족 때문에. 양 대 장 염이 최근 설명된 엔터티 중 하나입니다. 기간 Glotzer¹에 의해 1980 년에 화폐로 주조 되었다, 비록 비슷한 표현 형의 초기 설명 Morson²에 의해 1972 년에 주어졌다. 질병 개발 50%에 enterostomy, 우회 환자의 91%에 그리고 그것의 임상 강도 다릅니다^3,4. 아메리카 합중국에서에서 약 120000 인공 환자의 연간 발생률을 감안할 때,이 질병 엔터티는 중요 한 건강 문제를 구성 합니다.

이 프로토콜을 개발의 전반적인 목표는 인간 DC에서 본 비슷한 colitis 트리거에 의존 하 고 하는 인간 질병의 기본 histopathological 기능을 재현 murine DC 모델을 제공 했다. 다른 murine colitis 모델 달리 우리의 모델에서 colitis 유도 유전자 변형된 동물 (예를 들어, 일리노이-7 유전자 변형 마우스, N cadherin 지배적인 부정적인 쥐, 또는 TGFβ^/- 생쥐), 필요 하지 않습니다 응용 프로그램의 화학적 자극 물질 (예, dextran 황산 나트륨 (DSS)-유도 대 장 염, 또는 trinitrobenzene 술 폰 산 (TNBS)-유도 대 장 염), 또는 특정 세포 인구 (CD45RB^높은 전송에서 면역 결핍 생쥐에서의 전송 colitis의 모델) (검토,⁵참조). 다른 모델과 달리 우리의 DC 모델의 그대로 면역 시스템은 면역 메커니즘의 평가 DC 개발에 관련 된 있습니다. 제외 된 장 세그먼트에 점 막 염증의 제한 위장, 창 자의 다른 면역 구획에 면역 항상성에의 다른 부분에 점 막 면역의 돌아옴의 평가 수 (예: , Peyer의 패치 및 mesenteriale 림프절), 및 전체 유 기체의 면역 항상성. 마지막으로, 우리의 모델 모두는 지역 미생물으로 영양 항 일반 로컬 환경 변화에서 발생 하는 로컬 염증 성 자극을 제어 하는 메커니즘을 조사에 적합 한 도구를 구성 합니다.

여기에 설명 된 모든 방법 수의 정부 기관 (Landesamt에 Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit 및 Fischerei 메클렌부르크-포어 폼 머 른, (LALLF M-V))에 의해 승인 되었습니다가지고.

1. 수술 전 치료와 동물의 준비

1. 동물 시설에 도착, 비슷한 크기의 그룹으로 동물 (C57Bl/6)를 분할 하 고 각 그룹을 함께, 케이지 그룹 실험 내내 일정 하 게 유지.
   참고: 같은 섹스의 동물을 사용 합니다. 설명 결과 남성 쥐와 함께 얻은 했다.
   참고: 남성 동물 사용 되는 경우, 케이지 그룹 함께 시작 하는 때 그들은 나이의 7 주 계층 구조를 설정할 수 있도록, 따라서 위험을 최소화 공격적인 행동의 실험 중.
2. 적어도 1 주일 전에 수술, 높은 에너지로 전환 (> 14 MJ/kg) 및 고 단백 (> 20%) 모든 필수 미 량 원소와 비타민을 포함 하는 피드 (자세한 자료의 목록 참조).
   참고: 수술을 수행할 때 모든 마우스 무게 이상 25 g을 확신 합니다.
3. 케 타 민 (i.p. 87 mg/kg) 및 xylazine 염 산 염 (i.p. 13 mg/kg)의 복 주사로 마 취 및 진통 유발. 마우스는 기계적 자극, 예를 들면 발가락 피치, 모터 응답 없이 허용 될 때까지 기다립니다.
4. 작업 데스크, 안정적인 작업 중 위치 및 체온의 압도적인 손실 방지를 보장에 위치 열 언더레이에 부정사 위치에 테이프와 함께 narcotized 마우스를 보안 합니다.
   참고: 열 언더레이 36 ° C ~ 40 ° C;의 표면 온도가 있어야 합니다. 수술 실 온도 21 ° c.는 이어야 한다

2. 원심 인공 작업

1. 복 부 머리를 면도. 시작 하기 전에 수술, 세 번 사용 하 여 알코올 70% 작업 필드와는 iodophor 소독. 무 균 조건에 대 한 보장을 작업 필드에 드러 워 진.
2. 복 부 근육과는 교육에 따라 복 incising 15 m m 중간 개복 술 수행 알바, 혈액 손실이 최소화.
3. 2 기금 atraumatic 집게를 사용 하 여, 신중 하 게 맹, 터미널 회장 및 오름차순 및 가로 결 장 복 막 구멍에서.
   참고: 엄격 하 게 제한 mesenteric 구조에 부상을 방지 하기 위해 내장의 기계 조작에 주의 해야 합니다.
4. Cecal 극, 오름차순 결 장 및 작은 창 자 (그림 1a 및 1b)을 확인 합니다.
   참고: 오름차순 콜론의 올바른 식별은 인공의 올바른 배치에 대 한 근본 이다. Ileocecal 지역의 해부학 모호한 경우에 Peyer의 패치의 존재 확인 소장, 그리고 형성된 된 대변의 존재는 콜론 특징.
5. 눈금자를 사용 하 여 미래의 인공의 위치를 결정. 그것은 배치 되어야 한다 20 mm 원심 원심 인공 ileocecal 밸브.
6. 상단 오른쪽 사분면에서 복 벽에 두 번째 3-m m 절 개를 확인 합니다. 루프를 왜곡 하지 않도록 주의 되는 루프를 형성 하기 위하여이 절 개를 통해 이전 확인된 콜론 세그먼트를 당기십시오.
7. 신중 하 게는 mesocolon 통해 22 게이지 유연한 i.v. 정 통과. 알아서 하지 mesenteric 혈관 구조를 손상.
8. 내장 복 막 구멍을 반환 합니다.
9. 간단한 스티치와 resorbable 봉합 (예를 들어, polyglactin 910 또는 polyfil 4-0 1/2 c)를 사용 하 여 피부에 유연한 튜브의 양쪽 끝을 수정 합니다.
10. 개복 술을 닫기 전에 유체 소생 0.5 mL 0.9% 염 분의 복 주사를 사용 하 여 수행 합니다.
11. Resorbable 봉합 (예: polyglactin 910 또는 polyfil 4-0 1/2 c)를 사용 하 여 연속 봉합으로 복 막과 근육 층을 닫습니다. 예를 들어, polyglactin 910 (polyfil 4-0 1/2 c) resorbable 봉합 사를 사용 하 여 연속 봉합으로 피부를 닫습니다.
12. 좋은 위를 사용 하 여 부분합 transection 수행 하 여 exteriorized 콜론 루프를 엽니다. 피하는 mesentery에 모든 부상. 콜론을 완전히 transect 하지 마십시오.
13. 각 인공 여 복 하 3 단일 전체 두께 바늘을 사용 하 여 수정 하 고 monofil, 흡수 되기 쉬운 봉합 사를 사용 하 여 피부 (예를 들어, polydioxanone 또는 monofil 6-0 3/8s). 기능 끝-인공 인 성의 루프 및 점액 누 인 원심 루프 (그림 1c)이이 시점에서 명확 하 게 구분 됩니다.
    참고: 작업 시간 해야 20 분 미만 유체 및 열 손실을 제한 합니다.
14. 후 악기 제조업체의 지시에 따라 초음파 목욕에 알데하이드 무료 살 균 솔루션을 사용 하 여 소독, 수술을 마무리.

3. 가짜 작업 (Colotomy)

1. 1.1 단계를 수행 합니다. 2.4 through.
2. 눈금자를 사용 하 여 미래 colotomy 위치를 결정. colotomy 실험 그룹에서 인공으로 ileocecal 밸브 로부터 같은 거리 위치 한다.
3. 콜론을 열고 적어도 2/3 잘가 위를 사용 하 여 그것의 둘레.
4. 닫기 단일 층으로 colotomy, 전체 두께 중단 monofil, 흡수 되기 쉬운 봉합 사를 사용 하 여 봉합 (예를 들어, polydioxanone, monofil 6-0 3/8s).
   참고: 작업 시간 실험된 외과 의사, 유체 및 열 손실 제한에 대 일 분 미만 이어야 한다.
5. 2.10 단계를 수행 합니다. 2.11. 그리고 2.14입니다.

4. 수술 후 관리

1. 그들의 감 금 소에 동물을 반환 합니다. 37 ° C (예를 들어, 적외선 램프로)의 잘 단련 된 분위기를 제공 마우스는 완전히 깨어 때까지. 다음, 온도 및 습도 통제 환경 (21 ° C, 상대습도 30% ± 10%)에서 마우스를 유지. 음식과 식 수를 무료로 이용할을 수 있습니다. 유체 이해를 촉진 하기 위하여 추가 물에 젖은 사료를 제공 합니다.
2. 0.1 mg/kg 몸 무게 buprenorphine를 주입 하 여 수술 후 진통 시작 때 동물 기계적 자극에 반응을 보여 사우스 캐롤라이나. 호흡을 하지 않도록 주의 해야 합니다.
3. 수술 후 첫 주 동안 지속적인된 진통에 대 한 1 mg/mL tramadol와 식 수를 보충 한다.
4. 로 인해 감소 액체 섭취 량에 대 한 보상 이동성 감소, 수술 후 첫 주 동안 장에 단단한 음료 패드를 공급.
5. 첫 주, 첫 달의 나머지 동안 매초 마다 하루 그리고 Kleinwort 외 에 설명 된 질병 심각도 점수를 사용 하 여 두 번째 달 동안 모든 3 일 동안 매일 동물과 동물 행동 점수를 무게 ⁶.

수술은 모두 실험 (인공), 가짜 (colotomy) 그룹에 잘 용납입니다. 수술 및 수술 관리 올바르게 수행 하는 경우 수술 사망률 10%를 넘지 말아야 한다. 첫 수술 후 주에 상당한 체중 감소 실험와 가짜 그룹에서 볼 수 있다. 가짜 그룹의 동물 달성 4 번째 수술 후 날 향해 일반적으로 그들의 체중 최하 하지만 실험 그룹의 뒷부분에 나오는 1 일 발생. 체중 감량은 초기 체중의 21.7%에 도달 하는 실험적인 그룹에 더 발음 됩니다. 반면, 가짜 동물 그들의 초기 몸 무게 (그림 2)⁶의 10.8%를 잃게됩니다. 수술 후 첫 주에 체중 nadir 후 몸 무게 두 실험 그룹에서 하지만 실험적인 그룹에서 느린 경사로 지속적으로 상승. (즉, 피 묻은 방전 또는 어느 실험도 가짜 그룹⁶에서 발생 하는 액체 배변) 심각한 장내 염증의 증상과 첫 번째 60 일 동안 총 사망률 postoperatively 이며 약 인공 그룹에서 40 %colotomy 그룹에서 약 10%. 대부분 사망자 첫 수술 후 주 (실험 그룹에서 61%, 66% 가짜 그룹에) 동안 발생합니다. 죽음의 원인 그림 3에 나와 있습니다.

쥐에 있는 원심 인공 인간 DC의 전형적인 조직학 특징을 재현 하는 주로 림프 colitis의 개발에 결과. 이러한 변경 장 제외 기간 증가. 암호 길이 제외 된 장 세그먼트에 크게 단축 된다. 이 단축 지저분한 전환 (그림 3a)의 14 일 후 통계적 의미에 도달합니다. 잔 셀 베어링 암호 길이 제외 장 세그먼트 (그림 3b)에서 30 일 후에 감소 된다. 절대 잔 셀 번호 14 수술 후 일 (그림 3c) 후 제외 장 세그먼트에 지하실에서 또한 크게 감소 된다. DC, 점 막, 림프 낭의 개발의 전형적인 병 변 자 편차의 더 긴 기간을 요구 한다. 림프 여 포의 수를 증가 빠르면 2 주 동안 관찰 될 수 있다, 하지만 두 달 (그림 5a-c) 후 차이 사항이 중요 합니다. 모든 histopathological 변경 하기 전에 설명 보다 발음은 제외 된 장 세그먼트의 인접 지역에 보다 말 초. 급성 염증의 표시로 전형적인 neutrophilic 침투는 일반적으로 하지 (그림 5-e) 관찰.

지역 창 자 염증의 조직 되 돌아옴의 표시로 호 중구 수는 크게 14 일 수술 후 인공 동물에 증가 됩니다. 이 차이 관찰 기간 (60 일)이 끝날 때까지 유지 됩니다. 혈소판 수는 60 일 (그림 6) 후 저 승 전환 동물에 약간 증가 했다. 헤모글로빈 수준 및 보통 14 일 후 인공 그룹에서 가짜 그룹에 비해 감소 된다.

그것은 설치류 원인에 비타민 결핍 감소 의미 미 립 자 양 (MCH)와 미 립 자 헤모글로빈 (MCV) 값⁷의미 표시 되었습니다. 우리의 모델에서 우리는 14, 30 일 후에 이러한 두 매개이 변수에서 초기 증가 참조 하십시오. MCV와 MCH는 더 이상 후속 (그림 7) 후 일반 값을 반환합니다. 이 원심 인공 장기 속 행 동안 임상적으로 중요 한 비타민 결핍증에 초래 하지 않습니다 보여줍니다.

그림 1: cecal 지역 및 수술 해부학. (수술 후 해부학의 a) 그래픽 표현입니다. (b) cecal 폴 및 해부학 적 랜드마크의 지형. 인공 구멍의 (c) 그래픽 표현입니다. 그림 1a 는 Kleinwort 외.⁶에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 2: 몸 무게 개발. 몸 무게는 수술 전 몸 무게의 백분율로 표시 됩니다. 몸과 체중 인공의 곡선 (colotomy) 동물 공개 초기 수술 후 체중 감소 했다 (p < 0.001) 가짜 그룹에 비해 인공 그룹에서 상당히 높은 사기. 값 그룹 당 21-26 동물에 걸쳐 평균 ± 표준 오류는 (21 동물 받은 colostomies; 26 동물 가짜 그룹에 있었다). 이 그림은 Kleinwort 외.⁶에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 3: 죽음의 원인. 합병증 모든 원인의 사망률의 백분율로 표시 되 고 원형 차트 ((a) 인공 그룹, (b) 가짜 그룹)에 나와 있습니다. 수술 후 합병증은 검 시에 의해 결정 되었다. 낭비 증후군은 지속적인 체중 감량 보다 큰 초기 체중의 검 시에 다른 연구 결과 33%로 정의 했다. Ileus 및 anastomotic 누설 검 시에 진단 했다. Stoma 합병증 peristomal 농 양 및 mucocutaneous 분판으로 정의 되었다. 그리고 다른 합병증 구성 상처 dehiscence 개복 술, 맹의 국 소 빈 혈의 경우 검 시에서 명확 하지. 수술 후 합병증의 분포에 중요 한 차이가 그룹 간의 보였다 (p = 0.021, 피셔 정확한 테스트를 사용 하 여 최대 6 × 6 우발 테이블의 2 면 분석을 위한 분석). 인공 그룹에서 39 동물 및 29 가짜 그룹에 있었다. 이 그림은 Kleinwort 외.⁶에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 4: 암호 길이 잔 세포 인구. 암호 길이 잔 셀 숫자는 정기 산 Schiff 얼룩이 후 직장의 파라핀 섹션을 사용 하 여 결정 했다. (a) 토 굴 길이 전환 colitis (DC)와 동물의 직장에서 크게 감소 했다. (b)는 토 굴의 잔 셀 베어링 지역의 길이 측정 하 고 전체 암호 길이를 비율로 설정 되었다. 30 그리고 60 일 postoperatively, 암호 길이 베어링 잔 셀의 백분율은 DC 그룹에서 감소 했다. (c) 잔 셀 번호 DC 동물 가짜 그룹에 비해 크게 감소 했다. 그래프 (a)부터 (c)에 걸쳐 보여 줍니다 방법 및 표준 오류 그룹 당 5 ~ 9 동물 (인공 14와 30 일, 14 일 가짜: n = 8; 인공 60 일: n = 5; 30 그리고 60 일 사기: n = 9); ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01입니다. 이 그림은 Kleinwort 외.⁶에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 5: 림프 낭과 염증 성 침투. (우회 콜론 및 가짜 동물의 a) 림프 모 hematoxylin와 오신 스테인드 직장의 파라핀 섹션에 포함 되었습니다. 그래프 그룹 당 5 ~ 9 동물에서 의미와 표준 오류에 표시 (인공 14와 30 일, 14 일 가짜: n = 8; 인공 60 일: n = 5; 30 그리고 60 일 제어: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01입니다. (b)과 인공 (b)와 (c) 가짜 동물 60 일의 직장의 섹션의 (c) 대표 예 postoperatively hematoxylin와 오신 스테인드. 저명한 림프 여 포 (∗) 인공 마우스의 점 막에 존재 했다. 스케일 바 대표 100 µ m. (d) 및 (e) chloroacetate와 얼룩 esterase 반응 파라핀 섹션에 호 중구 granulocytes 검색 수행 되었다. 우회 직장의 횡단면에는 급성 염증 성 neutrophilic 침투 관찰 되었다 인공 그룹 (d)에 가짜 동물 (e)에서 최대 60 일 postoperatively. 스케일 바 100 µ m을 나타냅니다. 이 그림은 Kleinwort 외.⁶에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 6: Neutrophil 및 혈소판 수. 정 맥 혈액 샘플의 혈액 수 수의 혈액학 분석기에 의해 결정 되었다. (a) 호 중구 조사에 비해 가짜 동물 최대 60 일 postoperatively 인공 그룹에서 크게 증가 했다. (b) 혈소판 수 있었다 약간 상승 된 인공 그룹에서 60 일 postoperatively. 그래프 그룹 당 5 ~ 9 동물에서 의미와 표준 오류에 표시 (인공 14와 30 일, 14 일 가짜: n = 8; 인공 60 일: n = 5; 30 그리고 60 일 사기: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 7: 적혈구 매개 변수. 정 맥 혈액 샘플의 혈액 수 수의 혈액학 분석기에 의해 결정 되었다. (a) 헤모글로빈 및 (b)가 크게 가짜 그룹에 비해 인공 그룹에서 감소 했다. (c) 하지만 말은 미 립 자 양 (MCH) 상당히 높은 14와 postoperatively 인공 그룹에서에서 30 일 가짜 그룹에 비해 60 일 후 정상으로 돌아온. (d) 의미 미 립 자 헤모글로빈 (MCV) 값 30 일 후 하지만 postoperatively 인공 그룹에서에서 60 일 동물을 사기에 비교 하는 후에 더 이상 상승 했다. 그래프 그룹 당 5 ~ 9 동물에서 의미와 표준 오류에 표시 (인공 14와 30 일, 14 일 가짜: n = 8; 인공 60 일: n = 5; 30 그리고 60 일 사기: n = 9), ∗p < 0.05; ∗∗p < 0.01입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

이 프로토콜에 안정적으로 제공 하는 DC의 murine 모델 (예를 들어, 드 노 보 개발 염증이 대 장 세그먼트, 단축, 토 굴 및 절감 submucosa 림프 낭의 인간 DC의 histopathological 기능을 재현 잔 셀 번호)입니다. 이 이점 이외에도이 모델 매우 비슷한 트리거링 요인에 의해 유발 고 가장 영향을 받는 인간의 경우 가벼운 심각도에 온건한의 임상 과정을 선물 한다.

재현할 결과 및 허용 수술 치, microsurgical 기술에서 연습이 필요 하다. 그러나, 인공 및 가짜 작업 (colotomy) 매우 낮은 수술 mortalities 수행할 수 있습니다 (< 10%). 일부 작업 단계는 매우 중요: 1) 긍정적으로 확인 결 장 그리고 맨끝 회장. 경우 어디 명확 하지 ileocecal 지역의 해부학, Peyer의 패치의 존재에 의해 형성된 된 대변의 존재와 터미널 회장으로 콜론을 확인할 수 있습니다. 2) 때 인공 루프, exteriorizing는 mesentery 하지 뒤틀린 mesenteric 허 혈 및 기계적 ileus 피할 것을 확신 합니다. 3) 때 puncturing 유연한 튜브와 함께 mesentery, 선박 무료 분야 선택, 출혈 및 mesenteric 허 혈 방지 보장. 4) 복 벽에 작은 절 개를 만들 때 충분 한 hemostasis 확인 합니다. 필요한 경우 열 응고를 사용 하 여 근육 혈관에서 출혈을 멈추게. 5) 확신 저 승 루프 오픈 적어도 그것의 둘레의 2/3 이며 그 후부 벽은 충분히 exteriorized, 따라서 원심 창 자 세그먼트에의 자 통로의 완전 한 막힘을 보장 합니다. 6) 인공 양쪽 높은 감염 위험 또는 기계적 ileus 지저분한 스트림 종료 수 없습니다 때문에 발생 하는 복 막 구멍에 열린 통로 피하기 위해 피부에 잘 고정 되도록 하는 것을 확신 합니다. 일반적으로, 모든 외 과적 수술 현미경 또는 확대경 없이 수행할 수 있습니다. 일반적으로,이 소자의 활용 더 훈련이 필요합니다.

수술 절차의 복잡성은 보통만, 경우에 성공적으로 재현 가능한 결과와 실험 종료 간주 많은 필수 요원 및 수술 문제 있다.

마우스는 그대로 맹 영구 인공으로 장기 생존을 위해 필수적 이다. 근 colostomies ileocecal 밸브에 인접 한 있는 실험적인 그룹 돌이킬 수 없는 체중 감소 (데이터 표시 되지 않음) 때문에 수술 후 첫 주에 100%의 사망률을 보였다. 따라서, 그것은 Bauhin의 밸브에서 최소 20 mm 원심 인공 사이트를 선택 가장 중요입니다. 설치류의 소화의 생리학이이 관찰 될 수 있습니다. 맹 근 콜론에서 역행 수송이이 종에서 발생합니다. 맹은 어디 세균 microflora occurs8에 의해 영양분의 합성. 장기 후속 동안 정상 MCV와 MCH 값 나타냅니다 원심 colostomies와 동물 중요 한 비타민 결핍증에서 용납 하지 않는다. 또한, coprophagy 그들의 자연적인 환경에서 설치류의 영양 행동의 필수적인 부분입니다. 모델 때, 우리는 영양 부족, (예를 들어, 비타민 B) 될 수 있습니다 영구적인 인공의 존재 결과로 coprophagy perturbing 매우 우려 했다. 그러나, 그것은 조건 하에서 문제 영양소에 대 한 액세스는 제한 된, 이전 보였다 그의 coprophagy 물과 영양 균형 음식^{9 무료 초과 실험 조건에서의 영양 의미를 잃는다} . 우리의 실험 조건에서 수술 후 영양 섭취의 조건 최적화에 필수적입니다. 우리 사료 했다 높은 단백질 함량, 단백질 품질을 최적화 하 고 에너지 밀도 증가 사용 합니다. 동물 수술 하기 전에 적어도 2 주 동안이이 다이어트에 acclimatized 했다. Postoperatively, 물에 젖은 피드 광고 libidum 촉진 음식과 액체 섭취 량을 제안 했다.

실험 및 가짜 그룹 같은 섹스의 마우스를 활용 하는 것이 결정적 이다. 섹스는 크게 조직 염증의 뿐만 아니라 다양 한 화학적으로 유도 된 대 장 염 모델^10,,1112장 염증의 과정에 영향을 보였다. 일반적으로, 남성 동물 큰 염증, 더 많은 암호 손상, 적은 재생, 프로 염증 성 cytokines, 그리고 무게 손실¹⁰에서 느린 회복의 상부와 더 뚜렷한 질병을 개발할 것입니다. 남성 동물을 사용 하 여의 더 이점은 초기 수술 후 체중 감소의 더 나은 보상을 이끌어 더 나은 수술 신체 나이 일치 하는 무게 이다. 그럼에도 불구 하 고, 여성 쥐 경우 사용할 수 있습니다 프로토콜에 특정 질문 (예를 들어, 섹스 다루어야 하는 DC의 형상에 호르몬의 영향. 남자 쥐를 사용 하 여 안정적인 주택 조건 유지에 더 많은 노력이 필요 합니다. 남성 쥐 더 상해 및 죽음에 지도 하는 적극적인 상호 작용 하는 경향이 있다. 남자 쥐 한 지배적인 남성 설립된 계층 구조에 살고 있습니다. 그룹에서 계층 구조 설정 되 면 덜 일반적인^13,14는 계속 싸움입니다. 이러한 이유로, 우리는 수술 전에 적어도 2 주 우리의 동물 시설에 도착 후 쥐의 실험 그룹을 형성 하 고 실험 종료 될 때까지 이러한 그룹을 유지. 일반적으로, 5 ~ 7 동물의 실험적인 그룹은 한 장에 유지 했다. 안정적인 사회 및 주택 조건의 유지 보수 뿐만 아니라 실험 동물의 공격적인 행동을 최소화 하기 위해 매우 중요 했다. 주택 조건 면역 매개 변수^15,,1617으로 체중 증가 영향을 보여왔다.

자화 율 화학적으로 유도 하 고 유전자 변형 colitis 모델 마우스 긴장^18,,1920사이 상당히 다릅니다. 현재 프로토콜 C57Bl/6 마우스는 잘 정의 된 유전 배경과 잘 특징이 면역 시스템^21,22,23 보여주는 강한 중간 마우스 스트레인에서 설립 되었다 염증 응답에는 dextran 황산 나트륨 유도 colitis 모델²⁰ 및 원형 Th1 스트레인²³을 간주 됩니다. 다른 마우스 긴장의 사용은 더 심각한 질병 활동 또는 Th2 환경 필요는 여겨질 수 있다.

요약 하면, 우리의 프로토콜 다양 한 면역 세포 유형, cytokines, 발산, 및 DC의 병 인에 다른 신호 분자의 역할을 평가 하기 위한 유용한 도구를 구성 합니다. 유전자 변형 마우스 모델의 많은 C57BL/6 배경으로 사용할 수 있으며, 우리의 모델 결합 될 수 있다 (예를 들어, 일-17, 결핍 쥐 IL-10, chemokine CXCL13, chemokine 수용 체 CXCR5 및 CCR7, 및 sphingosine 1 인산 염 수용 체 4)입니다. C57BL/6 백그라운드에 congenic 쥐 긴장의 가용성은 크게 다른 종류의 세포는 병 인에 관련 된 DC의 역할을 설정 하는 전송 실험 촉진 한다. 모델에 영향을 받는 및 비-영향을 받는 장 세그먼트에서 점 막 면역 및 조직에 로컬 개입 (예를 들어, 로컬 미생물 및 로컬 염증 치료의 수정)의 영향을 평가 하기 위해 기회를 제공 하는 마지막으로, 면역 항상성입니다.

모든 저자 들은 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.

없음