Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

私たちは、ドライアイ症候群の信頼できるモデルを確立することに専念しています。私たちは、眼からELGとILGを除去することにより、水性欠乏症ドライアイの病理学的状態を再現することに成功しました。ILG は解剖学的に深い位置にあるため、ELG と ILG の併用切除はより困難で侵襲的です。

また、手術中に出血を引き起こす可能性があるため、当社の手術能力に対する要求が高くなります。私たちのモデルは、動物への損傷を最小限に抑え、外科的処置を大幅に簡素化して、有意な房水性ドライアイを誘発することに成功しました。構築されたマウスモデルは、シェーグレン症候群やスティーブンス・ジョンソン症候群などの重度ドライアイ症候群と非常に類似しており、関連する研究を強力にサポートしています。

この方法は、体系的な注入効果を回避し、局所的な注入効果の耐久性の低さに対処し、ドライアイモデルの欠点を克服し、専用の動物環境の必要性を排除することで実験プロセスを簡素化します。まず、麻酔をかけたマウスを側褥位に置き、手術部位を手術用顕微鏡で露出させます。歯付き鉗子を使用して、マウスの顔の右側に皮膚を固定します。

線の中点で切開を行い、外部甲骨と下顎線を目の内側の角まで交差させます。次に、筋肉組織を露出させ、筋肉にあるELGを慎重に取り除きます。次に、皮膚の切開部を目頭まで伸ばします。

筋肉を鈍く分離し、筋肉の下の明るい赤い腺を見つけます。次に、ILGをはがして取り外します。ニードルホルダー、眼科用手術用ハサミ、鉗子を備えた5-0縫合糸を使用して切開部を縫合します。

感染を防ぐために、手術の最後にオフロキサシン軟膏を塗布します。片側ELGとILGを除去した後、マウスをリズミカルな12時間の明暗サイクルと食物と水への自由なアクセスの環境に置きます。引き裂き物の測定には、適切に包装されたフェノールレッドスレッドを取ります。

水性欠乏性ドライアイマウスに麻酔をかけた後、測定する眼の下まぶたをそっと引き下げます。フェノールレッドスレッドの糸の上部を下まぶたの内側と外側の3分の1に配置し、すぐにタイマーを開始します。割り当てられた時間が経過したら、慎重に下まぶたを引っ込め、フェノールレッドスレッドを下向きに取り外します。

フェノールレッドスレッドの外袋に設けられているスケールを使用して、スレッドの上部からレッド部分全体までを測定します。電子ストップウォッチを使用して、テストの時間を正確に記録します。染色用の組織スライスを準備するには、安楽死させたマウスから抽出した眼球を取ります。

次に、眼球を最適な切断温度のコンパウンドに埋め込み、凍結ミクロトームを利用して、厚さ5〜7マイクロメートルの凍結組織スライスを取得します。角膜mRNAの抽出には、ハサミと鉗子を使用して、顕微鏡下で後極から眼球を切断します。レンズを分離し、余分な強膜と虹彩をきれいにしますが、0.5ミリメートルの白い強膜と角膜全体は残します。

涙腺切除後2週間の期間後、ドライアイマウスの涙液分泌は正常群と比較して著しく減少しました。扁平上皮化生および炎症細胞の蓄積は、ドライアイ群の角膜上皮および間質層において観察された。ケラチン12の発現は、ドライアイ群の角膜上皮細胞で正常群と比較して有意に低かった。

Pax6の発現は、ドライアイ群の角膜上皮細胞で正常群と比較して有意に減少しました。異常分化した角膜上皮細胞のマーカーであるSprr1bの発現は、正常群よりもドライアイ群で有意に高かった。