著者は、動物飼育のリネア Tankred とダイアナの Rydholm をありがとうございます。

どちらの性別の BALB/c マウスの子犬は、Ophthalmologic とビジョンの研究における動物の使用のためステートメントに従って使用され、プロトコルは、倫理的な動物の研究のための委員会によって承認されました。マウスが一緒に 12 時間昼/夜サイクル、食料と水への無料アクセスと、看護の母の仔で収容され、毎日監視します。
注: 外科的処置マウスと揮発性のイソフルレン麻酔下で保たれました。眼軟膏は眼の処置中に推奨されません彼らは治療に使用される物質を妨げる可能性があります。必要に応じて、ドライ眼を防ぐために滅菌生理食塩水一滴適用できます。脈絡膜穿刺が自己治癒が、された脈絡膜穿刺中ように注意不妊手術器具で。手術後の治療と生理食塩水を皮下、含まれて、テトラカイン塩酸塩の眼局所投与による鎮痛効果。子犬は、胸骨の横臥加熱パッドの上にきれいなケージで看護の母に返される前に回復を許されました。リットルは、ストレスを避けるために同じ看護母と保たれました。
1. 麻酔
<ol><li>イソフルラン麻酔の管理、マウスの小さなマスクをまた結合することを確認し、麻酔誘導室を準備します。 注: は、すべての該当する倫理的な許可に一致してすべての動物実験を実行します。</li>
	<li>3-4% 大気中揮発性イソフルランと誘導室を自動設定します。 注: 別の麻酔物質をイソフルランよりも他に従って使用する、倫理的な許可。揮発性麻酔薬の手順は、換気のベンチやヒューム フードに行われるべき。</li>
	<li>場所誘導室で産後 (P) 12.5 日古い BALB/c マウス子犬。麻酔器誘導室にイソフルランを提供する準備ができたことを確認します。 注: マウスの子犬は、壊れやすいと襟首最高処理。ストレスを避けるために看護の母、ごみとして子犬を一緒に保ちます。</li>
	<li>麻酔が完全に子犬を許可します。</li>
	<li>そっと首筋をマウスの子犬を拾います。 注意: 安全で安定した誘導のすべての回で閉じた誘導室。</li>
	<li>齧歯動物のマスクにマウスを転送します。マウスを移動するときに誘導室からの麻酔の流れをマスクに切り替えることを確認します。</li>
	<li>つま先ピンチ麻酔を確認するを実行します。</li>
</ol>2. 穿刺手術万国実体写真の下のプロシージャ
<ol><li>横臥床位置にマウスを配置します。マウス眼、万国実体写真のビューのフィールドでは、マスクはよく配置を確認します。</li>
	<li>優しく、万国実体写真へ目が向いているのでマウスの頭を回転させます。 注: での株分け業目の明確な焦点を達成べきであります。40 X を使用して、手術の手順を実行する必要がありますがの位置決めは 16 X の倍率をお勧めします。倫理的な許可許可されている場合、ひげの先端をトリミングで目の可視化を促進できます。</li>
	<li>背側と腹側の目にまぶたに下向きの圧力を適用することによって子犬の目を突出する小さな抱き合わせ鉗子を使用して、慎重に。</li>
	<li>小鉗子で子犬のまぶたの優しいがしっかりホールドを保ちます。 注: 眼球突出を実行し、非支配的な手で押し蓋の利き手は穿刺の手順を実行する必要があります、それをお勧めします。</li>
	<li>株分け業を使用して、角膜の輪部を探します。アルビノ BALB/c 角膜は、角膜の後方循環の血管叢によって簡単に識別できます。</li>
	<li>0.25 mm 直径 (30 G) 斜め針でブドウの後方の輪部の限界近くの小さな脈絡膜穿刺を実行します。針の先端のみを使用・ (0.5 mm 相当)、以上 2 のベベル穿刺ブドウ。脈絡膜穿刺、セルフシール、正常に実行された場合はまだ研究物質の眼内注射は同じの刺し傷を介して管理できます。 注: マウス眼球解剖を経験、鋸状の毛様体と脈絡膜穿刺が実行されます。注意が必要脈絡膜穿刺を行っている間、レンズの破裂を避けるために。</li>
	<li>最初の穿刺部位から目の反対側のサイトの 2 番目の脈絡膜穿刺を実行します。穿刺の位置や距離を最適化します。できるだけ背側にされている 12 の 12 と 6 刺し傷を検討してください。</li>
	<li>P24.5 まで 4 日毎脈絡膜穿刺の手順を繰り返します。すべての連続した脈絡膜穿刺前に脈絡膜穿刺または明白な減少の眼圧の基礎値の間にレンズの損傷による外傷性白内障の存在に特に注意を払って動物の状態を監視します。最適な効果の前のパンクと同じ位置に繰り返し穿刺の実行を目指してください。</li>
</ol>3. 非侵襲体内監視
<ol><li>穿刺や各実験日に注射の前に上記で実行としてマウスを麻酔します。</li>
	<li>横臥床位置にマウスでそっと目を突出します。</li>
	<li>手術万国実体写真虹彩血管に焦点を当てます。</li>
	<li>手術万国実体写真に合うカメラで虹彩血管の写真を撮る。 注: 必要のない、減数分裂を誘導できますアイリス動物面積を正規化します。減数分裂誘導剤を選択する際は、倫理的な許可を検討してください。慎重にフォーカス虹彩血管のいる場合は、さらに定量分析が容易になります。40 倍の大きさをお勧めします。</li>
</ol>4. 手術後のケア
<ol><li>齧歯動物のマスクから BALB/c 子犬を外し、優しく手術マット層加熱パッドに転送。</li>
	<li>パンクの目に 1% テトラカイン溶液の一滴を適用します。 注: 他の鎮痛ソリューション使用できます、倫理的な許可によると。</li>
	<li>200 μ L の滅菌生理食塩水の皮下注入で動物をメタンハイド レートします。</li>
	<li>子犬をマウスのきれいなケージで看護の母に戻ります。</li>
	<li>リカバリ ・ プロセスを監視します。子犬は、deambulate、くずに戻るはずです。</li>
</ol>5. 眼球摘出
<ol><li>頚部転位によって、動物を安楽死させます。プロシージャのより良い視覚化の摘出と堅実の下郭清を実行します。 注: 異なる安楽死プロシージャを使用できます。倫理的な許可を遵守することをお勧めします。</li>
	<li>目に露出を改善するまぶたを離れて引っ張る。</li>
	<li>眼蓋の外眼角近く湾曲したボン目はさみで小さなカット (約 0.5 cm) を作る。</li>
	<li>軌道に (下) 世界の背後にあるマイクロ抱き合わせ鉗子を挿入するのに露出眼周囲スペースを使用します。</li>
	<li>目を囲む組織をつかむし、そっと上に引き上げます。眼球に保持しないでください、目のソケットを使って、周囲の組織に近い。</li>
	<li>軌道で、眼球の後ろに湾曲したボン目はさみを挿入します。</li>
	<li>目がソケットから外れるまで、周囲の組織をカットします。 注: この手法の目の解剖学を維持し、その後の分析の利点します。</li>
	<li>目から余分な組織の除去に進みます。好ましい場合、固定した後余分な組織の除去を実行できます。 注: BALB/c マウスは、メラニン欠乏、したがって、コントラスト、暗い背景勧め術を容易にします。</li>
	<li>簡単に滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 満ちているペトリ皿でリンス全体目。</li>
	<li>目を 4% 緩衝ホルマリン溶液 1.5 mL を含む 2 mL チューブに転送します。</li>
	<li>室温で 6 時間目を修正します。 注: 固定組織の剛性を付与して虹彩の解剖が容易になります。時間を修正する必要がありますテストおよび調整するさまざまなアプリケーション。</li>
</ol>6 万国実体写真下アイリス術
<ol><li>固定液をチューブ 1.5 mL プラスチック パスツール ピペット (または類似した) から外し、新鮮な PBS の 3 回目を洗います。</li>
	<li>上向き、前房内で滑らかな乾燥表面 (解剖台) に固定の目を配置します。</li>
	<li>ベベル 30 G 針と角膜の後方のエントリ ポイントを実行します。</li>
	<li>小さな抱き合わせ鉗子で前部を持ち、以前に作成したオープニングに clayman 氏による Vannas ストレートはさみの先端を挿入します。 注: 非支配的な手で、鉗子と、支配的なシザーを制御することをお勧めします。</li>
	<li>回転させながら抱き合わせ鉗子が付いている目は目の後方のセグメントを削除する角膜の周りカット。 注: に部分的なカットを実行する組織と大きく継続するハサミの内側先端プロセスを容易になります。</li>
	<li>下向き、レンズを公開する前のセグメントを配置します。</li>
	<li>小鉗子でつかんで、上に引き上げ、レンズを慎重に削除します。 注: ベベル針は穿刺し、レンズをプルする使用できます。</li>
	<li>下向き角膜とビューのフィールドに垂直カット前のセグメントを配置します。</li>
	<li>優しく小さな抱き合わせ鉗子で後部毛様体組織をつかみます。</li>
	<li>Clayman 氏による Vannas まっすぐハサミ小柱網を外し、虹彩を分離する毛様体にちょうど前方トリムに進みます。小柱網が削除されたことを確認します。虹彩は角膜内移動する必要があります。</li>
	<li>200 μ L の PBS を含む 96 ウェル プレートに、角膜を押さえ、小さな抱き合わせ鉗子で前方のアイカップを慎重に転送します。</li>
	<li>井戸に角膜を保持し続けるそしてピペットで PBS でフラッシュして虹彩を解剖します。 注: 現在・ 30 G 針の傾斜面にいくつかの小柱網、角膜にアイリスのまま付着可能性がある場合は、虹彩を置換する使用できます。</li>
	<li>小さな抱き合わせ鉗子で 96 ウェルから角膜を削除し、孤立したアイリスをおいてさらに分析用の井戸。</li>
	<li>4 ° C でフローティング虹彩サンプルを格納します。 注: 固定されているにもかかわらずアイリス浮遊サンプルの長期保存は推奨されません。</li>
</ol>7. 可能な実験的読み出し
<ol><li>切り裂かれたアイリスの血管を可視化、フローティング ホール マウント免疫血小板内皮細胞接着分子 (PECAM)-1 のようなマーカーのための染色法を使用して、または isolectin B4。また、蛍光標識高分子量 dextrans などの血管の染色と全身灌流を使用します。</li>
	<li>インシリコフラット マウントを実行し、適切なイメージング ソフトウェアにおける虹彩血管を定量化する生体内で非侵襲的画像を使用します。 注: 血管を定量化することができます、両方との in vitro、デンシトメトリーを使用してまたは血管解析ソフトウェア9。</li>
	<li>核酸とタンパク質抽出、PCR または免疫ブロット方法、パンクした目の分子生物学的解析を実行する全体の眼球を処理します。 注: 組織の分子解析は、非固定ティッシュ最高実行行われますが非固定アイリスの解剖が非常に挑戦的な全体の目の使用が以前の研究8で統計的に有意な結果を表示しました。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

この議定書でアイリス脈絡膜穿刺による血管反応の誘導手法を提案する.穿刺は、創傷治癒のメカニズムをトリガーし、アイリス10,11血管反応を促進します。これはラオスと NVG、目の後方のセグメントで網膜から悪化血管新生反応が虹彩ルベオーシス、アイリス12 の増加血管新生の臨床状態で絶頂に達するなど、眼の病態と一致しています。 ,13。
角膜は無血管透明で独特のコラーゲン構造を所有しています。これに伴い、虹彩血管の可視化のための目の眼の血管造影は生体に非侵襲的方法13,14虹彩血管の直接可視化によって達成可能であります。大きな目をした動物、複雑な外科的介入が行われた15,16,17、か特定の血管新生物質の眼内注入による虹彩新生血管の以前の動物モデルがいました18,19しますこのメソッドで色素欠乏 BALB/c マウスの使用、虹彩血管の生体内で直接観察でき、虹彩新生血管の非侵襲的定量マウス、従ってを勉強する新しいツールを提供する。生体内で血管新生。
さらに、マウス アイリス解離に対する本手法では、血管の特定のマーカーとアイリスの穿刺による血管新生の分析ができます。ここでは、虹彩血管 illustratively PECAM 1 抗体で染色、蛍光顕微鏡で可視化しました。フローティング、全取り付ける染色プロトコルが容易に達成し、かなりルーチン。さらに、血管の灌流メソッドは、このモデルで実行できます。血管特異染色虹彩血管構造とこのユーザー ベースによる定量化評価または虹彩新生微小9のソフトウェア解析を付与します。前述8、20、虹彩新生微小のイラストは一日 15 ポスト-puncture 誘導で評価されました。それにもかかわらず、虹彩血管新生に及ぼす影響ことができます早ければ 4 日後-puncture-誘導は, 特定のに基づいて、異なる時点で穿刺による虹彩新生血管モデルの評価が実施される観察されました。実験的要件。
このプロトコルは、特に他の動物モデルを基準にしてマウスの目のサイズに関連するいくつかの課題を提示する状態に注目すべきです。目レンズの接触を避けるために、脈絡膜穿刺プロシージャを実行しながら極端な注意が必要です。眼の状態の観察、パラマウント、動物実験関連の白内障を表示または眼の圧力の低下を除外し適切に安楽死する必要があります。マウスのアイリスは非常に壊れやすい、やや粘着性。適切な解剖と組織の分離は、プロトコルの別の重要なステップを提示します。小柱網から正しい分離は、前房からアイリスの変位に必要です。さらに、脆弱性のため虹彩分離下流分子解析を損なう組織の固定が必要です。しかし、固定されていない全体の目の分子分析は提示方法8に正常に適用されています。
要約すると、説明のプロトコルは小説の穿刺による虹彩血管新生マウス モデルを提示します。このモデルは、生体内で血管新生の非侵襲的直接視覚化できるという利点を持っています。さらに、小さい齧歯動物の使用モデルをレンダリングします提示研究虹彩ルベオーシス、魅力的な大きな目をした動物の使用を避けるし、倫理的な制限を伴います。さらに、プロシージャは生体内の血管新生の新しいモデルとしての有用性を高める、セルフシール穴を通してプロまたは抗血管新生物質の注入と組み合わせることができます。

虹彩、毛様体と脈絡膜には、目の最も血管柄付きの組織であるブドウが装備されています。虹彩血管は目の前房内の恒常性を維持するために不可欠です。動脈と静脈との間豊富な吻合部の接続の結果として虹彩血管は栄養素自体は、アイリスにだけでなく、目1の全体の前部に酸素の供給を提供します。
新しい血管や既存の物から血管新生の形成が開発や創傷治癒2などの生理学的プロセスの基礎。血管新生は血管内皮増殖因子 (VEGF)、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤 (PAI) などの標準的な要因だけでなく、複数の炎症性要因の多数によって細かく規制されて、これらの因子の不均衡は病理学的につながることができます。新生3。
目の血管新生増殖糖尿病網膜症 (ラオス) と新生血管緑内障 (NVG) などの視力を脅かす疾患の原因であります。これらの眼の疾患に焦点の血管新生は一般的網膜組織まだ炎症性の不均衡に位置し、後方と前方眼両院で目の血管新生因子は虹彩ルベオーシス、関連付けられている、アイリス病理学的促進4臨床用語。これらの病態は、血管新生を受ける成人のアイリスの能力を示しています。マウスで眼の血管は出生後成熟していないと産後の成熟を続けています。開発のこの特徴は、酸素誘起性網膜症、未熟児5の網膜症の臨床症状によく似たモデルのマウスモデルで利用されます。さらに、血管新生と炎症創傷治癒のメカニズム6、極めて重要な役割を果たすし、創傷治癒の自体が血管新生モデル7に関連付けられています。
本研究ではアイリスの穿刺による血管新生のモデルをについて説明します。脈絡膜穿刺は、創傷治癒システムをトリガーすることによって虹彩血管新生を誘導する角膜輪部の外側の限界近く実行されます。角膜の透明性のため虹彩血管をすることができます簡単に生体内で非侵襲的方法で分析します。パンクした目は、プラスミノーゲンを活性化し、炎症マーカー8の増加に関連付けられている虹彩の血管床の増加を提示します。提示されたモデル血管新生と血管新生の化合物をスクリーニング研究するための新しいツールとして大きな可能性がありますでき、直接生体内で血管新生のプロセスの可視化。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bonn eye scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>23060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas curved scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clayman-Vannas straight scissors</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E3383 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective adapter for camera</td>
			<td>Handcrafted</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad 100-110 watts</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Available in pet/veterinarian stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic 30g beveled needle</td>
			<td>KDM GmBH germany</td>
			<td>911914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iphone 4S</td>
			<td>Apple</td>
			<td>Non Applicable</td>
			<td>Or other high resolution image acquistion device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>KDG 9623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>E1815 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro tying forceps</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>63140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minims tetracaine hydrochloride</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 % (w/v) Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral-buffered formalin</td>
			<td>Bioreagens</td>
			<td>0018-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline solution</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>210352</td>
			<td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 10 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 3 cm</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>72.685.200</td>
			<td>Or any eppendorf style tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC plate 96-well</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>83.3924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3.5 mL</td>
			<td>Starstedt</td>
			<td>86.1171</td>
			<td>Or any other Pasteur pipette style</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Univentor 400 anesthesia unit</td>
			<td>Univentor Limited</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild M650 surgical microscope</td>
			<td>Wild Heerbrugg</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

血管新生の非侵襲的評価のための一般的なモデルとしてアイリスの穿刺による血管新生のモデルについて述べる。モデルは血管新生緑内障、糖尿病網膜症の視力を脅かす合併症をターゲットとの関連も。このメソッドは、BALB/c マウスでセルフシール脈絡膜穿刺のシリーズによって虹彩血管反応の誘導に基づいており、マウス眼血管の産後の成熟を活用します。マウスの子犬は、生後 12.5、子犬が当然のことながら生後 24.5 まで彼らの目を開くときから脈絡膜穿刺を受けます。角膜の透明性のため虹彩血管から分析できます簡単に時間生体に非侵襲的方法で。さらに、BALB/c マウスの半透明のアイリスは、最小限の非固有の背景を汚すと詳細な免疫組織学的解析のための flatmounted をすることができます。このモデルで血管新生は、主に炎症によって駆動、プラスミノーゲンの活性化システム。穿刺誘発モデルは小さい齧歯動物、虹彩血管新生を誘導する最初で、直接非侵襲体内血管形成プロセスの解析をできるという利点。また、モデル併用血管新生調節物質、体内視点による血管新生の研究でその可能性を強調します。

P12.5 でアルビノ BALB/c マウスの子犬 4 毎日繰り返される脈絡膜の穿刺を受けた (実験的一日 0、4、8、12)、P24.5 まで。P27.5 でマウスを安楽死させ、アイリス慎重に解剖 (15 日間実験)。マウスの目の絵は、虹彩血管反応の非侵襲的評価を評価する実験的毎日のすべてのパンク シリーズの前に外科的万国実体写真に装着されたカメラで撮影されました。脈絡膜穿刺は、創傷治癒システム (図 1) をトリガーすることによって、アイリスから血管の応答を誘発します。メラニン欠乏 BALB/c マウス角膜の透明性のため増加虹彩血管は実験日 4 (P16.5) から容易に表示し、プロトコルの全期間にわたって激化します。PECAM 1 免疫組織化学画像コントロール (図 2) と比較してパンクの目のアイリスの全体的な血管の増加を示します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig1.jpg"> 図 1: アイリスの穿刺による血管新生の非侵襲的監視します。0、4、8、12、およびコントロールとパンクした目の 15 日の代表的なイメージ。虹彩血管応答パンクチャド目以降の 4 日目から明白であります。スケール バー = 1 mm.<a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57398/57398fig2.jpg"> 図 2: 穿刺による目の虹彩血管応答します。PECAM 1 日 15 アイリスから染色の画像完全なビューとして表示されるコントロールから (正方形)、領域を拡大し、目の穴をあけられます。スケール バー = 400 μ m (下)。200 μ m (下)。パンクチャド虹彩血管枝の増加に注意してください。<a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/57398/57398fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

虹彩新生血管、網膜虚血性疾患の一般的な合併症は、血管新生緑内障の視力を脅かす可能性があります。ここでは、血管新生調節物質の非侵襲的評価に使用するかもしれない実験虹彩血管新生を誘導するためのマウス プロトコルについて述べる。

虹彩ルベオーシスのマウス モデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K ビュー.  Karolinska Institutet. 虹彩新生血管、網膜虚血性疾患の一般的な合併症は、血管新生緑内障の視力を脅かす可能性があります。ここでは、血管新生調節物質の非侵襲的評価に使用するかもしれない実験虹彩血管新生を誘導するためのマウス プロトコルについて述べる。

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A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

のマウスモデル子宮内で移植

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

医学

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

下大静脈血栓症のマウス完全な停滞のモデル

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the low-molecular-weight-heparin (LMWH), enoxaparin. There are also urgent clinical situations where it would be important if this could be determined rapidly. The present assay is designed to accomplish this. We only assayed human blood samples that were spiked with known concentrations of enoxaparin. The essential feature of the present assay is the quantification of the efficacy of enoxaparin in a patient's blood sample by degrading it to complete inactivity with heparinase. Two blood samples were drawn into Vacutainer tubes (Becton-Dickenson; Franklin Lakes, NJ) that were spiked with enoxaparin; one sample was digested with heparinase for 5 min at 37 &deg;C, the other sample represented the patient's baseline anticoagulated status. The percent shortening of clotting time in the heparinase-treated sample, as compared to the baseline state, yielded the anticoagulant contribution of enoxaparin. We used the portable, battery operated Hemochron 801 apparatus for measurements of clotting times (International Technidyne Corp., Edison, NJ). The apparatus has 2 thermostatically controlled (37 &deg;C) assay tube wells. We conducted the assays in two types of assay cartridges that are available from the manufacturer of the instrument. One cartridge was modified to increase its sensitivity. We removed the kaolin from the FTK-ACT cartridge by extensive rinsing with distilled water, leaving only the glass surface of the tube, and perhaps the detection magnet, as activators. We called this our minimally activated assay (MAA). The use of a minimally activated assay has been studied by us and others. 2-4 The second cartridge that was studied was an activated partial thromboplastin time (aPTT) assay (A104). This was used as supplied from the manufacturer. The thermostated wells of the instrument were used for both the heparinase digestion and coagulation assays. The assay can be completed within 10 min. The MAA assay showed robust changes in clotting time after heparinase digestion of enoxaparin over a typical clinical concentration range. At 0.2 anti-Xa I.U. of enoxaparin per ml of blood sample, heparinase digestion caused an average decrease of 9.8% (20.4 sec) in clotting time; at 1.0 I.U. per ml of enoxaparin there was a 41.4% decrease (148.8 sec). This report only presents the experimental application of the assay; its value in a clinical setting must still be established.

Demonstration of a rapid quantitative assay of the inhibition of blood coagulation by the low-molecular-weight-heparin, enoxaparin. The contribution of enoxaparin is assessed by removing its influence through digestion with heparinase. A fuller description of the assay is detailed in our published paper.1 The assay still requires clinical confirmation.

全血におけるエノキサパリン抗凝固効果の迅速なポイントオブケアアッセイ

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as pre-clinical models to test interventions. In these methods, we describe a technique in which lipopolysaccharide (LPS) is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple, effectively modeling mastitis, or inflammation, of the gland. This simulated infection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, as visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse1.
Our ultimate goal in developing these methods was to study the inflammation associated with mastitis in the lactating gland, which often includes redness, swelling, and immune cell infiltration2,3. Therefore, we were keenly aware that incision or any type of wounding of the skin, the nipple, or the gland in order to introduce the LPS could not be utilized in our methods since the approach would likely confound the read-out of inflammation. We also desired a straight-forward method that did not require specially made hand-drawn pipettes or the use of micromanipulators to hold these specialized tools in place. Thus, we determined to use a commercially available insulin syringe and to inject the agent into the mammary duct of an intact nipple. This method was successful and allowed us to study the inflammation associated with LPS injection without any additional effects overlaid by the process of injection. In addition, this method also utilized an NF-&kappa;B luciferase reporter transgenic mouse and bioluminescent imaging technology to visually and quantitatively show increased NF-&kappa;B signaling within the LPS-injected gland4.
These methods are of interest to researchers of many disciplines who wish to model disease within the lactating mammary gland, as ultimately, the technique described here could be utilized for injection of a number of substances, and is not limited to only LPS.

Described here is a technique in which lipopolysaccharide is injected into the lactating mouse mammary gland via the nipple to simulate mastitis, a condition commonly caused by bacterial infection. Lipopolysaccharide injection results in increased nuclear factor kappa B (NF-&kappa;B) signaling, visualized through bioluminescent imaging of an NF-&kappa;B luciferase reporter mouse.

乳腺炎のモデルマウスとしてのLPS管内注入：シグナリングは、NF-κBレポータートランスジェニックを介して可視化

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for personalized medicine after stratification, explaining the current interest in developing a reproducible and low-cost xenotransplant model for this disease. The chick chorioallantoic membrane is a natural immunodeficient host capable of sustaining grafted tissues and cells without species-specific restrictions. In addition, it is easily accessed, manipulated and imaged using optical and fluorescence stereomicroscopy. Histology further allows detailed analysis of heterotypic cellular interactions.
This protocol describes in detail the in ovo grafting of the chorioallantoic membrane with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines (Saos-2 and SW1353). The chick survival rates are up to 75%. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior. For localized grafting of single cell suspensions, ECM gel provides significant advantages over inert containment materials. The Ki67 proliferation index is related to the distance of the cells from the surface of the CAM and the duration of application on the CAM, the latter determining a time frame for the addition of therapeutic products.

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The in ovo chorioallantoic membrane (CAM) is grafted with fresh sarcoma-derived tumor tissues, their single cell suspensions, and permanent and transient fluorescently labeled established sarcoma cell lines. The model is used to study graft- (viability, Ki67 proliferation index, necrosis, infiltration) and host (fibroblast infiltration, vascular ingrowth) behavior.

ザ<em&gt;卵で</em肉腫のためXenograftmodelとして&gt; CAMアッセイ

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

マウス角膜血管新生のアルカリ熱傷損傷モデル

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

脳Microslicesの興奮毒性刺激<em&gt;インビトロ</em&gt;脳卒中のモデル

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

Tachycardia-Induced Cardiomyopathy As a Chronic Heart Failure Model in Swine

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment methods. Here, we present such a model by tachycardia-induced cardiomyopathy, which can be produced by rapid cardiac pacing in swine.
A single pacing lead is introduced transvenously into fully anaesthetized healthy swine, to the apex of the right ventricle, and fixated. Its other end is then tunneled dorsally to the paravertebral region. There, it is connected to an in-house modified heart pacemaker unit that is then implanted in a subcutaneous pocket. 
After 4 - 8 weeks of rapid ventricular pacing at rates of 200 - 240 beats/min, physical examination revealed signs of severe heart failure - tachypnea, spontaneous sinus tachycardia, and fatigue. Echocardiography and X-ray showed dilation of all heart chambers, effusions, and severe systolic dysfunction. These findings correspond well to decompensated dilated cardiomyopathy and are also preserved after the cessation of pacing.
This model of tachycardia-induced cardiomyopathy can be used for studying the pathophysiology of progressive chronic heart failure, especially hemodynamic changes caused by new treatment modalities like mechanical circulatory supports. This methodology is easy to perform and the results are robust and reproducible.

Here, we present a protocol to produce tachycardia-induced cardiomyopathy in swine. This model represents a potent way to study the hemodynamics of progressive chronic heart failure and the effects of applied treatment.

豚の慢性心不全モデルとして頻拍誘発性心筋

A stable and reliable model of chronic heart failure is required for many experiments to understand hemodynamics or to test effects of new treatment ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

虹彩ルベオーシスのマウス モデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

虹彩ルベオーシスのマウスモデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発