Fast Protein Liquid Chromatographyシステムを用いた6X-Hisタグ付きタンパク質のアフィニティー精製(英語)

本研究では、アフィニティークロマトグラフィーを用いて、重要なDNA複製タンパク質である皮弁エンドヌクレアーゼ1またはFEN1を精製することを目指しています。これにより、制御されたin vitro環境下でのDNA複製・修復におけるFEN1の機能を調べることが可能となり、その機能や生物学的役割の理解が深まります。DNA結合タンパク質の精製にはさまざまな種類のクロマトグラフィーが使用され、最も一般的なのはアフィニティークロマトグラフィーです。

アフィニティークロマトグラフィーの中で、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーは、Hisタグ付きタンパク質を精製するための最も強力なツールの1つです。Hisタグと金属イオンとの間の相互作用は、通常、ニッケルまたはコバルトは非常に強いです。タンパク質精製プロセスを成功させるための2つの重要な要素は、タンパク質の収量とタンパク質の純度です。

タンパク質の使用目的に応じて、収量または純度のいずれかが他方よりも優先される場合があります。私たちの調査結果は、Hisタグ付きタンパク質の精製に適した樹脂を選択することで、タンパク質の下流アプリケーションにとって望ましい結果が得られる可能性があることを示しています。