著者貴重な支援とこの原稿を編集アンディ Poczobutt、博士 Jori Leszczynski を感謝したいです。 国立心臓、肺および血の協会 (NHLBI RO1 HL078929、PPG HL014985 と RO3 HL095439) 退役軍人省問題 (メリット レビュー) から受け取った補助金によってサポートされています。

ケアと動物 (マウス) の使用のためのすべての該当する国際、国家、および/または制度ガイドラインは、本稿に記載されている実験に続いていた。
このメソッドは、FVBN アダルト マウス、本研究の目的のために最適なこと判明した 16-20 週、高齢者を使用します。日 1、手順 1-5、日 2 には手順 6-7 (図 1) が含まれます。
1. 機器の準備
<ol><li>(推奨) とケタミン ・ キシラジンは麻酔薬として使用される場合は、滅菌、使い捨ての注射器や針の十分な供給を確保します。イソフルラン麻酔薬として使用する場合は、酸素タンクとイソフルラン麻酔開始前に実験のための十分な供給があることを確認するための流体のレベルを確認します。また、ノーズ呼吸回路を組み立てるし、誘導ボックスにそれらを添付新しい炭缶を呼吸回路に接続します。第二段階が約 50 psi を読み取っていることを見極め、酸素をオンして誘導ボックスを準備します。</li>
	<li>37 ° C に加熱パッドをオンに</li>
	<li>手術用直腸温度プローブを準備します。</li>
</ol>2. マウス作製
この手順には、麻酔、脱毛、(大人 FVBN マウス-年齢 16-20 週) の配置が含まれます。
<ol><li>マウスの重量を量る、重量を記録します。</li>
	<li>マウスを麻酔します。<ol>
<li>ケタミン ・ キシラジンの IP を管理 (80-100 mg/kg と 7.5-16 mg/kg、それぞれ)。ただし、低用量ケタミン ・ キシラジンで始まるお勧め (30 mg/kg の 6 mg/kg、それぞれ)。</li>
		<li>約 0.1 で麻酔を維持する-0.25 倍初期用量ケタミン ・ キシラジン手術中の。ケタミン ・ キシラジンより再現性と生存性が認められたこの特定の研究の選択の麻酔エージェントをだった。他の研究で選択の麻酔エージェントは異なることが見つけられるかもしれません。 イソフルランを使用する場合、誘導の部屋にマウスを置くし、マウスは完全な意識を失うまでに 5% にイソフルランをオンに。設定手順の残り 1.5 2.5% イソフルラン鼻ノーズを使用します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>適切な麻酔深度をチェックするつま先ピンチしてマウスすべての 2 〜 3 分を監視します。</li>
	<li>マウスの腹側頸部領域を剃る。</li>
	<li>予熱のパッドの上に仰臥位にマウスを配置します。足とテープで手術の表面には、マウスの足を保護します。</li>
	<li>手術中に完全に乾くことを防ぐために目の上に人工涙軟膏を配置します。</li>
</ol>3. 手術の詳細
<ol><li>頚静脈上右腹側の首で 1 cm の切開を行います。</li>
	<li>痛みの管理と血管拡張を促進するために切開領域にリドカイン (1-2%) の 1 つまたは 2 つの滴を適用します。有効にするリドカイン 2 分を待ちます。</li>
	<li>公開、鈍的切離を介して右内頚静脈を隔離します。4-0 縫合糸で静脈を縛るし、優しく、止血の容器の吻側端を撤回します。静脈径の中ほど高級はさみ、約 3 mm 以下または、ネクタイに尾を使用して、穴を開けます。</li>
	<li>太陽光発電 1 ポリビニル カテーテル端から 1.5 cm をマークし、容器散大を使用して穴を頸静脈に挿入スレッドの容器、約 1.5 cm の尾側に向かってカテーテル。</li>
	<li>4-0 絹と尾部 (カット) ・下容器の内で安全にカテーテルを結ぶ。手順 3.3 では、吻側の頚静脈を縛るに使用された縫合糸の宙ぶらりんでカテーテルの外側を容器の吻側部を結ぶ。</li>
	<li>鋲皮は緩く体熱の損失と組織の乾燥を防ぐために 4-0 絹とカテーテルの周り再び一緒に。</li>
	<li>ヘパリン生理食塩水 (10 U/mL) の入った注射にカテーテルを接続し、カテーテルをフラッシュします。</li>
</ol>4. 注射
<ol><li>続いてラインをフラッシュするヘパリン生理食塩水の量が少ない、頸静脈カテーテルにエバンス ブルー溶液 (0.9%、通常の unheparinized 生理食塩水、または約 50 mg/kg で 30 mg/mL の溶液 50 μ L) を注入します。</li>
	<li>2 分後、サブスタンス P (0.9%、通常の unheparinized 生理食塩水、または 1 nmol/kg で 0.3 μ M 溶液 100 μ L)、続いてラインをフラッシュするヘパリン生理食塩水の少量を注入します。サブスタンス P 増強内皮層による血漿タンパク質の血管外漏出このプロトコルではそれは日常的に血管外漏出の値を簡単に測るプラズマを作るプラズマ血管外漏出値の約 1.5 倍の増強を誘導します。</li>
	<li>サブスタンス P を注入後、18 分を待ちます。この間、エバンス ブルー色素は平衡、循環します。</li>
	<li>サブスタンス P (エバンス ブルー注射後 20 分) の注入後頚部転位とマウスを犠牲にして 18 分実験を終了します。マウスが直接占拠にすることができます、そうだ脱臼、最初は麻酔薬の過剰摂取を与えることがなくマウスとしてはおそらくまだよく麻酔手術から。しかし、それが必要な場合、麻酔薬ケタミン ・ キシラジン、イソフルラン、またはペントバルビ タールの過剰摂取が与えられる、頚部転位が続きます。</li>
</ol>5. 器官の分離
<ol><li>マウスの胸の空洞を開いてカットし、重力-灌流 (約 51 cm または 20 インチの高さ) から心臓や血管 50 mM クエン酸ナトリウム、pH 3.5 の 50 mL の。pH 3.5 はおそらくアルブミンにエバンス ブルー バインドを保持します。</li>
	<li>1-5 関係機関 (組織) を (例えば膀胱、腎臓、胃、肝臓、膵臓、近位または遠位結腸、回腸、十二指腸、側面皮膚、耳、尾、心、および/または肺) 解剖メスを消費税し、任意の残留の内容を削除する場合現在。</li>
	<li>部屋の温度 (RT) リン酸緩衝生理食塩水 (PBS; ナ2HPO4、KH2PO4、8.0 g 0.24 g, 塩化ナトリウムの 1.44 g と 1 L、pH 7.4 の KCl の 0.20 g) で臓器をすすいでください。</li>
	<li>しみの組織と臓器、各器官は、半分にカット、それぞれの半分の重量を量る (g の重みを濡れている)。</li>
	<li>1 つを乾燥乾燥オーブン 150 ° C、箔、48 h で組織の半分。</li>
	<li>半分、および microfuge を順にフォルムアミドの一貫性のあるボリューム (最大 200 μ L) でチューブ 48 h (と最大 72 h) 他のティッシュを置きエバンス ブルーを抽出します。</li>
</ol>6. 組織外径の測定
<ol><li>および microfuge の管場所からポリスチレン 96 ウェル プレートの 1 つのウェルにエバンス ブルー注入フォルムアミド (48-72 時間 RT 培養) の後の 50 μ L を削除します。ホルムアミドと共に組織部分を転送しないように注意します。</li>
	<li>空白の 96 ウェル プレートの 2 つの空井戸のそれぞれに新しい、純粋なフォルムアミドの場所 50 μ L。</li>
	<li>測定し、各ウェルの吸光プレート リーダーに 96 ウェル プレートの外径620を記録します。620 nm 吸光度は、エバンス ブルーの最大。</li>
</ol>7. 血漿漏出の計算
<ol><li>乾のティッシュ ペーパーの重さ半分の 48 時間のオーブンでされています。</li>
	<li>特定臓器それぞれ個々 のマウス、半分この組織の湿重量で始まる (で得られたステップ 5.4) からの興味の半分この同じ組織の乾燥重量で割った値 (7.1 で得られたステップ) のぬれた重量/乾燥重量比を計算します。</li>
	<li>組織の乾燥重量 (g) の前に、半分は濡れてフォルムアミド (ステップ 5.4 で得られた) に置かれていた組織の湿重量で割ってホルムアミドの半分を計算: (7.2 の手順で計算される) 興味の特定の臓器の乾燥重量比。</li>
	<li>外径620の補正値を計算します。外径620から始まる (6.3 の手順で得られた各組織からエバンス ブルー注入フォルムアミドを含んでいる) 96 ウェル プレートの各実験の井戸から値減算空白も OD620値 (外径620の平均値純粋なフォルムアミド、6.2 の手順で準備を含んでいる 2 つの井戸は、6.3 の手順で取得した値は620 OD) 各実験値から。</li>
	<li>フォルムアミド (7.3 で計算されるステップ) で半分修正外径620 (7.4 で計算されるステップ) を組織の乾燥重量で除してプラズマ血管外漏出値を計算します。血漿漏出の単位は外径620/g 乾燥重量になります。</li>
	<li>データを分析し、平均 ± SEM. 統計的に比較 Scheffé の複数比較テスト (lycofs01.lycoming.edu)、適切な一方向の分散分析や t 検定によってグループを表現します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substance+P.">Substance P.</a> Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).</li><li>Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+neutral+endopeptidase+attenuates+substance+P-induced+plasma+extravasation+in+the+guinea+pig+skin.">Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig skin.</a> Int Arch Allergy Appl Immunol. 91 (3), 232-238 (1990).</li><li>Szabo, A., Menger, M. 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著者が明らかに何もありません。

前述したように、血漿漏出に関する研究が最終的の原因に関する新しい知識や抑制または血漿漏出を治療する新しい方法に します。(上記)、血漿の血管外漏出プロトコルの使用の成功は、現在原稿で実証されているエバンス ブルー色素を用いたします。示されているデータもバックアップにネップが血管を保護するかもしれないこと仮説血漿漏出に対してこれは、第二の目的現在、主要目的の平均研究室で容易に使用できる最適化されたプロトコルを提示するが、血漿漏出の今後の研究。ここ報告プロトコル別の目標、動物、臓器、その他の条件と今後の研究への適応性に焦点を当てたこのプロトコルは使いやすく、信頼性の高い、経済的で、特に便利で、考慮一般一般的な材料、試薬、有能な人材の可用性。それは、ただし、このプロトコルが動物 (8-12 繰り返し提案) のグループあたりの繰り返しのかなりの量を要求する統計的に有効な結果を取得します。
多数の研究と血管透過性、血漿漏出を測定する試みを詳述した報告書がありました。はるかに、これらのレポートのほとんどの詳細を血漿漏出と血管透過性2,3,6,11,を調査するエバンス ブルー色素法の併用の方法の組み合わせ12,13。エバンス全3,13,15,24; 青を内蔵していないメソッドは血管透過性の少ないレポートがずっとあります。これらのメソッドは一般的な平均の所のアクセスしにくい複雑な方法、専用の装置と人員を必要とするのには、一般的に高価。
上記のエバンス ブルーのプロトコルの開発は、多くの異なった順列と修正のテスト関与しています。初期の実験は、エバンス ブルー マウス尾静脈を注入する試みに集中しました。ただし、尾静脈注射証明した技術的に挑戦し、一貫性のない結果、頚静脈注射の包含を施行した結果および上記ターミナル手技。多くの予備実験が完了を青と物質 p. エヴァンスの適切な濃度を見つけようとしてもエバンス ブルーの正確な量が約 200 mg/kg (50 mg/kg 現在使用と比較して)、以下だったが、これらの実験で使用されるサブスタンス P 量は重要な限り、強制する見つかりませんでした。多くの実験の後 1 nmole/kg の 1.5 倍増強の結果 (およびこうしてより容易に測定可能な) 追加外因物質 P の理想的な濃度に発見された血漿の血管外漏出時の値。また、平衡にエバンス ブルーの十分な時間を許可する必要があることが分かった (> 10 分)。この灌流ステップ4を含まないその他のプロトコルではなく、現在のプロトコルの重要なコンポーネントであるとマウスが臓器隔離前の犠牲の後余分なエバンス ブルーを削除する血管の灌流が見つかりました。(優しい重力勾配で配信) 出納が (これはエバンス ブルーとアルブミンの結合を励ます) pH 3.5 溶液; 50 mLパラホルムアルデヒド、多く他エバンス ブルー プロトコル6,10,25で普及している、この議定書で省略されます。このプロトコルでは、解決されたもう一つの要因は、ドキシサイクリンの食事に使われる染料が体内で消化トラックからエバンス ブルーの OD620 nm の測定と干渉することです。したがって、上記の実験で亜麻ドキシサイクリン チョウを使用する必要があります。また、重要かつ有用な見つけることはマウスのほぼすべての臓器が十分に分離され現在のプロトコル経由で検査します。

臓器に血管漏出は、血管外漏出、または血漿の血管内皮細胞で生産の隙間からの漏れは臓器の毛細血管細静脈を投稿します。この血漿漏出、または炎症性応答のいくつかのタイプから生じる、増加の血管透過性重大な結果があります。したがって、この現象、その原因、変調器、および結果は、研究し、理解と同様に、調査官が良い持っているツールやプロトコルが重要ですそれらを勉強します。内皮ギャップ数刺激によって作られるが、通常、ペプチド神経伝達物質タキキニン、内皮細胞上のアクションによって生成されます。Undecapeptide タキキニン神経ペプチド、サブスタンス P1増加血漿漏出の結果、このプロセスの主要な自然発生するメディエーターの一つです。
エバンス ブルー色素のアルブミン結合プロパティを使用して、調査し、血管透過性亢進や血漿漏出を測定する方法が開発されているし、通常その精度、シンプルさ、経済、安全と許可する機能のために知られている、一度に、いくつかの組織から血漿漏出による場合は希望2,3,4,5,6,7,8,9.FVBN マウスの臓器に血漿漏出を評価するためには、このエバンス ブルー プロトコルはこれらのすべてを使用しますが、一般的に役に立つと、又は平均の実験室を含む、将来の研究に適応できるように、いくつかの重要な変更を追加血漿漏出または血管透過性と関連因子の重要な研究を実施します。このプロトコルでは、サブスタンス P が 1 nmol/kg、1.5 倍による血漿の血管外漏出を強化するマウスを紹介します。これはより簡単に観測し、得られる結果の結果、プロトコルの感度を増加します。その他種々 のペプチドを化学物質、毒性傷害のいくつかのフォームなどの透磁率に影響を与えるその他の要因を使用または必要に応じて、その他の研究所で研究します。頚静脈注射は、ターミナルの手術を必要とする全身、エバンス ブルーとサブスタンス P を紹介するこのプロトコルで使用されます。ただし、頚静脈注射5,7,10、必要なターミナル手術手技を考慮した後も易くマスター、他よりもより一貫した結果の生産につながる尾を含む静脈注射、静脈注射4,9。レトロな軌道静脈洞注射によって配信されるブルー ・ エヴァンスのそれは可能ですが、参照文献の見つかっていないこのエバンス ブルーの配信方法を使用します。ただし、尾静脈注射については高度な専門知識と再現性をもって大きくこのテクニックをマスターする練習は成功したエバンス ブルー注射での使用を制限します。対照的に、代替の頚静脈注入法のプロトコルで説明するようソリューションを提供技術的に得られる。マウスの静脈の血流の重要な手順は、エバンス ブルー潅流マウスの犠牲余分なエバンス ブルー色素を削除し、このプロトコルで標準化された直後後に実行されます。灌流の上記の方法は注意深く検討され現在の手順を取得するように変更します。ここで説明したその他の変更はすべて最適化された、簡単で安価です。
エバンス ブルー色素法のいくつかの重要な制限事項があります。たとえば、低感度時このメソッドに関連付けられているは、いくつか追加総病理組織学的および組織学的検討エバンス ブルーを注入した動物からのティッシュを防ぐことができます。ただし、これらやその他の制限は、別の方法と、それにもかかわらず、まだエバンス ブルーを使用するモデルの開発につながっています。エバンス ブルーの測定 (視覚範囲ではなく) 蛍光分光法は方法の感度を高める可能性があります。さらに、複数の別個の場所11血管漏出の観察を許可するエバンス ブルー染色組織の蛍光顕微鏡が開発されました。また、全身イメージングし生きている動物のスキャン以前エバンス ブルー12により継続的に、エバンス ブルーの濃度の調査のための注入ではなく実験の時点で 1 つの特定の時間を選択。ただし、このメソッドは適切なイメージング施設の可用性を必要とする、非常に高価になることがあります。エバンス ブルー、モデルの体外型で行われますを含む変更などセルの文化またはニワトリ漿モデル13 (CAM) も記載されています。これらのモデル蛍光と生体14顕微鏡によって監視されると時間をかけて血管透過性変化の定量化を許可するが、生体内での条件の正確なモデリングに関する質問を上げるかもしれないし、もあります。高価です。
他のメソッドは、エバンス ブルーの管理を伴わない決定し、血管漏出または透過性を定量化するために開発されています。これらのメソッドを使用するかもしれません (アルブミン、フルオレセインなど)、適切な蛍光分子または生きている動物に、同位体標識あるいはタグ分子 (または文化または漿 (CAM) をセルにモデル13、非侵襲的に続いてイメージング (PET スキャン、MRI、生体顕微鏡観察、全身スキャン) または侵襲的イメージング (蛍光顕微鏡)3,12,15。これらの技術は、青いメソッド エヴァンス他上の利点の多数を提供可能性がありますがまた彼らのかなりの複雑さ、必要な専門知識、リソース、および金銭的コストが高いなど欠点があります。
ネプリライシン16 (ペプチダーゼ酵素ネップ、cd 10、MME、またはエンケファリナーゼとして知られている) 酵素代謝や内因性物質 p の不活性化の部分で少なくとも血漿漏出を抑制に関与することが示唆されています。したがって、セル表面ペプチダーゼ ネップが発生した組織でありますネップのペプチダーゼの活動によっておそらくのサブスタンス P の効果の減衰
当初、このエバンス ブルーの修正されたプロトコル FVBN 野生型 (WT) とネップ ノックアウト (KO) マウスを用いたサブスタンス P 誘発される血漿漏出テスト。これらの初期の研究からサブスタンス P 増強血漿漏出にネップの関与が疑われ、これらについて説明を行い, さらに血漿漏出に伴うネップの役割を実験.しかし、本稿の焦点ではないネップまたは血漿漏出におけるその役割、血漿漏出が彼ら自身を実験ではなく。ネップの結果がこの修正されたプロトコルの使用によって得られる結果の種類です。血漿漏出を測定するエバンス ブルー メソッドを最適化されており、FVBN マウスの下に詳細の記載に従って変更します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:687px;" width="686">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">isoflurane</td>
			<td style="width:167px;">Vet One</td>
			<td style="width:119px;">200-070</td>
			<td style="width:185px;">inhaled anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ketamine</td>
			<td style="width:167px;">Vet One</td>
			<td style="width:119px;">200-055</td>
			<td>injectable anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">xylazine</td>
			<td style="width:167px;">Lloyd Laboratories</td>
			<td style="width:119px;">139-236</td>
			<td>injectable anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">syringes (10,3 &#38; 1 cc)</td>
			<td style="width:167px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309604, 309657, 309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">needles (20G1,23G1 &#38; 26G1/2)</td>
			<td style="width:167px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305178, 305193, 305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">isoflurane induction chamber</td>
			<td style="width:167px;">VetEquip</td>
			<td style="width:119px;">941443</td>
			<td>1 Liter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">nosecone breathing circuits&#160;</td>
			<td style="width:167px;">VetEquip</td>
			<td style="width:119px;">RC2</td>
			<td>Rodent Circuit Controller 2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">oxygen tank</td>
			<td style="width:167px;">Airgas</td>
			<td style="width:119px;">UN 1072</td>
			<td>100% medical</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">heating pad</td>
			<td style="width:167px;">CWE Inc.</td>
			<td style="width:119px;">TC-1000</td>
			<td>temperature controller</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">rectal temperature probe</td>
			<td style="width:167px;">CWE Inc.</td>
			<td>10-09012</td>
			<td>mouse</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">balance (for rodents)</td>
			<td style="width:167px;">Ohaus</td>
			<td style="width:119px;">CS 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">surgical tools-scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td style="width:185px;">Vannas Spring scissors 3mm straight blade (cutting vessels)&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11151-10</td>
			<td style="width:185px;">Graefe extra fine forceps (isolating mouse vessels)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">surgical tools-hemostats</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>13009-12</td>
			<td style="width:185px;">Halstead-mosquito hemostats (blunt dissect, hold tissue)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools -suture drivers</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>12502-12</td>
			<td style="width:185px;">Olsen-Hegar suture drivers (suturing)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11627-12</td>
			<td style="width:185px;">Adson-Brown alligator forceps (tissue grasping suturing, rat)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">surgical tools-scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>14110-15</td>
			<td style="width:185px;">Mayo tough cut scissors 15 cm (surgery, dissection, bones, rat)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>18025-10</td>
			<td style="width:185px;">suture tying forceps (used for Millar cath)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>14078-10</td>
			<td style="width:185px;">Lexer Baby scissors straight (surgery, mouse)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td style="width:185px;">Dumont #5 fine-tip forceps (rat vessels, dissection)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>14082-09</td>
			<td style="width:185px;">Dissector scissors 12 mm (surgery, rat mouse)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td style="width:185px;">10 cm Graefe forceps (tissue grasping, rat mouse)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td style="width:185px;">Dumont 5/45 forceps (introducer for vessels)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-retractors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>17012-11</td>
			<td style="width:185px;">Weitlaner retractors 2/3 tooth (rat surgical)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11294-00</td>
			<td style="width:185px;">Dumont #4 forceps (vessel isolation rats, mice)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11297-00</td>
			<td style="width:185px;">Dumont #7 forceps (tissue grasping, dissection)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-scissors</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td style="width:185px;">tough cut iris scissors (mouse dissection, bones)</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11009-13</td>
			<td style="width:185px;">serrated, curved Semken forceps (tissue grasping, mouse rat)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-hemostats</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>13003-10</td>
			<td style="width:185px;">Hartman curved hemostats (blunt dissect, hold tissue)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">surgical tools-forceps</td>
			<td style="width:167px;">Fine Science tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td style="width:185px;">Adson serrated forceps (tissue grasping)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">clippers</td>
			<td style="width:167px;">Oster</td>
			<td style="width:119px;">A5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tape</td>
			<td style="width:167px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:119px;">159015G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">artificial tear ointment</td>
			<td style="width:167px;">Akorn Inc</td>
			<td style="width:119px;">13985-600-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">lidocaine</td>
			<td style="width:167px;">Hospira</td>
			<td style="width:119px;">0409-4277-01</td>
			<td>2% injectable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">polyvinyl catheters</td>
			<td style="width:167px;">Tygon</td>
			<td style="width:119px;">PV-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Evans blue</td>
			<td style="width:167px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Substance P</td>
			<td style="width:167px;">Bachem&#160;</td>
			<td style="width:119px;">H-1890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">heparin</td>
			<td style="width:167px;">Sagent Pharmaceuticals</td>
			<td style="width:119px;">25201-400-10</td>
			<td>1000 U/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">saline solution</td>
			<td style="width:167px;">Hospira</td>
			<td style="width:119px;">0409-7138-09</td>
			<td>0.9% sodium chloride</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">phenobarbital&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Vortech</td>
			<td style="width:119px;">0298-9373-68</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">sodium citrate</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP327-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PBS</td>
			<td style="width:167px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P4417-50TAB&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Kimwipes for blotting</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-666A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">formamide</td>
			<td style="width:167px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">47670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">microbalance</td>
			<td style="width:167px;">Denver Instrument</td>
			<td style="width:119px;">APX-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">microfuge tubes</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">07-200-534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">polystyrene 96 well plate</td>
			<td style="width:167px;">Becton Dickenson</td>
			<td style="width:119px;">351172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">absorbance plate reader</td>
			<td style="width:167px;">BioTek</td>
			<td style="width:119px;">Synergy 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">polyacrylamide gels</td>
			<td style="width:167px;">Bio-Rad</td>
			<td>3450014&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">protein molecular weight standard</td>
			<td style="width:167px;">Bio-Rad</td>
			<td>1610374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Protran supported nitrocellulose</td>
			<td style="width:167px;">Amersham (GE)</td>
			<td style="width:119px;">10600015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">gel box</td>
			<td style="width:167px;">Bio-Rad</td>
			<td>1658005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tris</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">BP152-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tween20</td>
			<td style="width:167px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P-1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">sodium chloride</td>
			<td style="width:167px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S271-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">primary NEP polyclonal antibody&#160;</td>
			<td style="width:167px;">R &#38; D Systems</td>
			<td style="width:119px;">AF1182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">doxycycline chow</td>
			<td style="width:167px;">Teklad (HARLAN)</td>
			<td>TD.130750&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FVB/NJ wild type mice</td>
			<td style="width:167px;">Jackson</td>
			<td style="width:119px;">001800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">secondary antibody (goat anti-rabbit)</td>
			<td style="width:167px;">ZyMed</td>
			<td style="width:119px;">81-6120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">ECL solution-Western Lightening Plus</td>
			<td style="width:167px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:119px;">NEL104001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">film</td>
			<td style="width:167px;">Pierce</td>
			<td style="width:119px;">34091</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an optimized evans blue protocol to assess vascular leak in the mouse

血管漏出または血漿漏出の原因の数があり深刻な結果や炎症反応の症状があります。本研究は、原因に関する新しい知識や抑制または血漿漏出を治療する新しい方法に最終的につながる可能性があります。研究者が血漿漏出を勉強するため、利用可能な最善の方法をなど、適切なツールを持つことが重要です。この記事では FVBN マウスの臓器に血漿漏出を評価するためエバンス ブルー色素メソッドを使用して、プロトコルを説明します。このプロトコルは意図的にシンプルに偉大な可能な限り程度が高品質データを提供します。主に使用する平均の所の簡単だ、エバンス ブルー色素を選ばれています。私たちは、酵素ネプリライシンが血漿漏出に対して血管を保護するかもしれないこと仮説の証拠とサポートを提供するためにこのプロトコルを使用しています。ただし、このプロトコルが実験的に使用されマウスの他の系統や他の種の多くの異なる器官またはティッシュの使用研究の理解、予防、または治療に重要な他の要因を伴う可能性がありますに適合しやすい血漿漏出。このプロトコルは広範囲に最適化されているし、既存のプロトコルと組み合わせた信頼性から変更、使いやすさ、経済、そしてこのプロトコルで使用する平均の所の優れたを作る機材の一般の可用性臓器から血漿漏出を定量化します。

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An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

この記事で経済的、最適化、および単純なプロトコルは、エバンス ブルー色素法を使用して他の株、種と他の臓器や組織での使用に適応することができます FVBN マウスの臓器に血漿漏出を評価するため説明します。

最適化されたエバンス ブルー マウス血管漏出を評価するためにプロトコル

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

an-optimized-evans-blue-protocol-to-assess-vascular-leak-in-the-mouse

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

26.0K ビュー.  University of Colorado Denver. この記事で経済的、最適化、および単純なプロトコルは、エバンス ブルー色素法を使用して他の株、種と他の臓器や組織での使用に適応することができます FVBN マウスの臓器に血漿漏出を評価するため説明します。

ビデオ: An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

マウスAortocaval瘻の技術的な側面

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

医学

Diagnostic Ultrasound Imaging of Mouse Diaphragm Function

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive surgical procedures. Although this is an effective method of assessing in vitro diaphragm activity, it involves non-survival surgery. The application of non-invasive ultrasound imaging as an in vivo procedure is beneficial since it not only reduces the number of animals sacrificed, but is also suitable for monitoring disease progression in live mice. Thus, our ultrasound imaging method may likely assist in the development of novel therapies that alleviate muscle injury induced by various respiratory diseases. Particularly, in clinical diagnoses of obstructive lung diseases, ultrasound imaging has the potential to be used in conjunction with other standard tests to detect the early onset of diaphragm muscle fatigue. In the current protocol, we describe how to accurately evaluate diaphragm contractility in a mouse model using a diagnostic ultrasound imaging technique.

Diagnostic ultrasound imaging has proven to be effective in diagnosing various respiratory diseases in human and animal subjects. We demonstrate a comprehensive ultrasound protocol utilized by Dr. Zuo's lab to analyze diaphragm kinetics specifically in mouse models. This is also a non-invasive research technique which can provide quantitative information on mouse respiratory muscle function.

マウス絞り機能の診断用超音波イメージング

Function analysis of rodent respiratory skeletal muscles, particularly the diaphragm, is commonly performed by isolating muscle strips using invasive ...

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and repair damage in simple tissues in the orthopedic and periodontal fields. However, attempts to regenerate the structures and functions of more complex three-dimensional (3D) organs such as lungs have not been very successful because the biological processes of organ regeneration have not been well explored. It is becoming clear that angiogenesis, the formation of new blood vessels, plays key roles in organ regeneration. Newly formed vasculatures not only deliver oxygen, nutrients and various cell components that are required for organ regeneration but also provide instructive signals to the regenerating local tissues. Therefore, to successfully regenerate lungs in an adult, it is necessary to recapitulate the lung-specific microenvironments in which angiogenesis drives regeneration of local lung tissues. Although conventional in vivo angiogenesis assays, such as subcutaneous implantation of extracellular matrix (ECM)-rich hydrogels (e.g., fibrin or collagen gels or Matrigel - ECM protein mixture secreted by Engelbreth-Holm-Swarm mouse sarcoma cells), are extensively utilized to explore the general mechanisms of angiogenesis, lung-specific angiogenesis has not been well characterized because methods for orthotopic implantation of biomaterials in the lung have not been well established. The goal of this protocol is to introduce a unique method to implant fibrin gel on the lung surface of living adult mouse, allowing for the successful recapitulation of host lung-derived angiogenesis inside the gel. This approach enables researchers to explore the mechanisms by which the lung-specific microenvironment controls angiogenesis and alveolar regeneration in both normal and pathological conditions. Since implanted biomaterials release and supply physical and chemical signals to adjacent lung tissues, implantation of these biomaterials on diseased lung can potentially normalize the adjacent diseased tissues, enabling researchers to develop new therapeutic approaches for various types of lung diseases.

Recapitulation of the organ-specific microenvironment, which stimulates local angiogenesis, is indispensable for successful regeneration of damaged tissues. This report demonstrates a novel method to implant fibrin gels on the lung surface of living mouse in order to explore how the lung-specific microenvironment modulates angiogenesis and alveolar regeneration in adult mouse.

肺特異的血管形成を研究するためにマウスの肺にフィブリンゲルの移植

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

マウスの動静脈瘻内皮への管腔内薬物送達

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

大動脈弁移植 - 教則ビデオのマウスモデルでスリーブを用いた

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

An Optimized Hemagglutination Inhibition (HI) Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

Antibody titers are commonly used as surrogate markers for serological protection against influenza and other pathogens. Detailed knowledge of antibody production pre- and post-vaccination is required to understand vaccine-induced immunity. This article describes a reliable point-by-point protocol to determine influenza-specific antibody titers. The first protocol describes a method to specify the antigen amounts required for hemagglutination, which standardizes the concentrations for subsequent usage in the second protocol (hemagglutination assay, HA assay). The second protocol describes the quantification of influenza-specific antibody titers against different viral strains by using a serial dilution of human serum or cell culture supernatants (hemagglutination inhibition assay, HI assay).
As an applied example, we show the antibody response of a healthy cohort, which received a trivalent inactivated influenza vaccine. Additionally, the cross-reactivity between the different influenza viruses is shown and methods to minimize cross-reactivity by using different types of animal red blood cells (RBCs) are explained. The discussion highlights advantages and disadvantages of the presented assays and how the determination of influenza-specific antibody titers can improve the understanding of vaccine-related immunity.

An Optimized Hemagglutination Inhibition HI Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

The presented protocols describe how to perform a hemagglutination inhibition assay to quantify influenza-specific antibody titers from serum samples of influenza vaccine recipients. The first assay determines optimal viral antigen concentrations by hemagglutination. The second assay quantifies influenza-specific antibody titers by hemagglutination inhibition.

インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (HI) 試験

Antibody titers are commonly used as surrogate markers for serological protection against influenza and other pathogens. Detailed knowledge of antibody ...

Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening infections caused by P. vivax and ovale. However, PMQ has unwanted adverse effects that lead&#160;to acute hemolysis in patients with glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency. There is a need to develop simple and reliable methods for PMQ determination with the purpose of dosage monitoring. In early 2019, we have reported an UV-Vis and naked-eye based approach for PMQ colorimetric quantification. The detection was based on a Griess-like reaction between PMQ and anilines, which can generate colored azo products. The detection limit for direct measurement of PMQ in synthetic urine is in the nanomolar range. Moreover, this method has shown great potential for PMQ quantification from human serum samples at clinically relevant concentrations. In this protocol, we will describe the technical details regarding the syntheses and characterization of colored azo products, the reagent preparation, and the procedures for PMQ determination.

This protocol describes a novel colorimetric method for antimalarial primaquine (PMQ) detection in synthetic urines and human serums.

UV-Visに対する最適化されたグリース反応と抗マラリアプリマキンの肉眼判定

Primaquine (PMQ), an important anti-malarial drug, has been recommended by the World Health Organization (WHO) for the treatment of life-threatening ...

An In Vitro Hemodynamic Loop Model to Investigate the Hemocytocompatibility and Host Cell Activation of Vascular Medical Devices

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive conjugates was compared to uncoated PVC tubes, latex tubes, and a stent for intravascular application that was placed inside the PVC tubes. Evaluation of hemocompatibility was done using an in vitro hemodynamic loop model that is recommended by the ISO standard 10993-4. The tubes were cut into segments of identical length and closed to form loops avoiding any gap at the splice, then filled with human blood and rotated in a water bath at 37 &#176;C for 3 hours. Thereafter, the blood inside the tubes was collected for the analysis of whole blood cell count, hemolysis (free plasma hemoglobin), complement system (sC5b-9), coagulation system (fibrinopeptide A), and leukocyte activation (polymorphonuclear elastase, tumor necrosis factor and interleukin-6). Host cell activation was determined for platelet activation, leukocyte integrin status and monocyte platelet aggregates using flow cytometry. The effect of inaccurate loop closure was examined with x-ray microtomography and scanning electron microscopy, that showed thrombus formation at the splice. Latex tubes showed the strongest activation of both plasma and cellular components of the blood, indicating a poor hemocompatibility, followed by the stent group and uncoated PVC tubes. The coated PVC tubes did not show a significant decrease in platelet activation status, but showed an increased in complement and coagulation cascade compared to uncoated PVC tubes. The loop model itself did not lead to the activation of cells or soluble factors, and the hemolysis level was low. Therefore, the presented in vitro hemodynamic loop model avoids excessive activation of blood components by mechanical forces and serves as a method to investigate in vitro interactions between donor blood and vascular medical devices.

Presented here is a protocol for a standardized in vitro hemodynamic loop model. This model allows to test the hemocompatibility of perfusion tubes or vascular stents to be in accordance with ISO (International Organization for Standardization) standard 10993-4.

血管医療機器の血球適合性と宿主細胞活性化を調べるインビトロ血球ループモデル

In this study, the hemocompatibility of tubes with an inner diameter of 5 mm made of polyvinyl chloride (PVC) and coated with different bioactive ...

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is a common, noninvasive, repeatable method for assessing blood flow recovery. The technique calculates overall blood flow in the sampled tissue from the Doppler shift in frequency caused when a laser hits moving red blood cells. Measurements are expressed in arbitrary perfusion units, so the contralateral non-intervened upon leg is usually used to help control measurements. Measurement depth is in the range of 0.3-1 mm; for hindlimb ischemia, this means that dermal perfusion is assessed. Dermal perfusion is dependent on several factors&#8212;most importantly skin temperature and anesthetic agent, which must be carefully controlled to result in reliable readings. Furthermore, hair and skin pigmentation can alter the ability of the laser to either reach or penetrate to the dermis. This article demonstrates the technique of LDPI in the mouse hindlimb.

Here, we present a protocol that demonstrates the technique and necessary controls for Laser Doppler perfusion imaging to measure blood flow in the mouse hindlimb.

マウスの後肢におけるレーザードップラー灌流イメージング

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

Isolation of Intrapulmonary Artery and Smooth Muscle Cells to Investigate Vascular Responses

The intrapulmonary artery (IPA) and vascular smooth muscle cells (VSMCs) isolated from rat lungs can be used to study the underlying mechanisms of vasoconstriction and vasorelaxation. After isolating the IPA and VSMCs, the characteristics of vascular responses in physiological and pathological conditions can be assessed in the absence of extrinsic factors such as nerve signals, hormones, cytokines, etc. Thus, the IPA and VSMCs serve as excellent models for studying vascular physiology/pathophysiology, along with various experimental investigations, such as modulation by pharmacological agents, patch-clamp electrophysiological analysis, calcium imaging, etc. Here, we have used a technique for isolating the IPA to investigate vascular responses in an organ bath setup. IPA segments were mounted on the organ bath chamber via intraluminal wires and stimulated by various pharmacological agents. The changes in IPA vascular tone (i.e., vasoconstriction and vasorelaxation), were recorded using an isometric force transducer and physiological data analysis software program. We implemented several experimental protocols, which can be adapted to investigate the mechanisms of vasorelaxation/vasoconstriction for studying the pharmacological activities of phytochemical or synthetic drugs. The protocols can also be used to evaluate drugs&#39; roles in modulating various diseases, including pulmonary arterial hypertension. The IPA model allows us to investigate the concentration-response curve, which is crucial in assessing drugs&#39; pharmacodynamic parameters.

Vascular responses of arterial pulmonary circulation can be explored using intrapulmonary artery (IPA) and vascular smooth muscle cells (VSMCs). The present study describes the isolation of IPA in detail and the protocols used for investigating vasorelaxation in response to physiological stimuli.

最適化されたエバンス ブルー マウス血管漏出を評価するためにプロトコル

最適化されたエバンスブルーマウス血管漏出を評価するためにプロトコル