その技術支援の応用生物科学部、東洋大学、群馬県農業技術センターの谷口広大の村上彰氏に感謝しております。東洋大学、博士 Uma Maheswari 医教授庄作柏田へ彼らの提案に感謝しております。本研究は、生活と環境科学、東洋大学の研究センター部分で支えられました。

注: 内因性ホルモンの分析を容易にするため、トコン (C. トコン) はこの研究で使用されました。
1 トコンの不定芽を誘発する成長条件
<ol><li>PH 5.710、調整無料の植物ホルモンの B5 培地を準備し、0.2% ジェランガムを追加します。オートクレーブに入れることによって殺菌しなさい。</li>
	<li>オートクレーブの中の 25 mL を滅菌シャーレ (90 × 20 mm) に注ぐ。</li>
	<li>手術のメスを用いた滅菌アクリル板に刃号 22 トコン苗木の 8 mm 節セグメントを切り取り、媒体 (図 1)。</li>
	<li>15 µmol m− 2の− 1 5 週間 14 h/10 h の光暗いサイクルの光の下の 24 の ° C で植物ホルモン無料 B5 培地で培養。</li>
	<li>地域を識別する私 (根尖部) から IV (基底) の各セグメント (図 1B)。週に一度顕微鏡下で地域ごとに不定芽 > 0.3 mm 長さの数をカウントします。</li>
</ol>2. 抽出と植物ホルモンの精製
<ol><li>それぞれ 4 つの 2 mL のサンプル チューブの 5 mm ジルコニア ビーズを入れてください。</li>
	<li>セグメントを切る地域 IV (各 2 mm 長さ) 滅菌アクリル板に手術のメスを使用します。</li>
	<li>別のサンプル チューブ (10-30 mg の新鮮な重量) の各地域の 8 つのセグメントを収集します。</li>
	<li>量る、そして液体窒素でサンプルを凍結します。</li>
	<li>ビーズ ベースのホモジナイザーを用いた凍結試料を粉砕します。</li>
	<li>オーキシンの各内部標準の 500 pg 及び CKs (d5独立行政法人、d5tZ、d5最も息、6d iP、d6知的財産権) を含む 1 mL のアセトニ トリルに押しつぶされたサンプルを中断渦のミキサーを使用しています。</li>
	<li>室温で 5 分間 3,500 × gで遠心分離後 1 h、4 ° C で保持します。</li>
	<li>1% (v/v) 酢酸を含む 80% (v/v) アセトニ トリルでペレットを洗浄します。3,500 × gで再度遠心して、室温で 5 分間。(手順 2.7 および 2.8) から使い捨てのガラス管の培養上清を組み合わせます。</li>
	<li>追加 600 μ L 各複合培養上清に含まれる 1% (v/v) 酢酸を水し、真空濃縮を用いたアセトニ トリルを蒸発させます。</li>
	<li>アセトニ トリル、メタノール、および 1% (v/v) 酢酸を含む水の各 1 mL を適用することによって、親水性・親油性-バランス (HLB) 列カートリッジを平衡します。</li>
	<li>平衡の HLB カートリッジあたり 1 つのサンプル ソリューションを適用します。</li>
	<li>1% (v/v) 酢酸を含む水を 1 mL でカートリッジを洗浄します。</li>
	<li>ガラス管に 1% (v/v) 酢酸を含む 2 mL 80% (v/v) アセトニ トリルのすべてのホルモンを溶出します。</li>
	<li>取得真空濃縮を使用して 1% (v/v) 酢酸を含む水で抽出する溶出液にアセトニ トリルを蒸発させます。 注: は、これを完全に乾燥しないでください。</li>
	<li>混合モードでは、強い陽イオン交換 (MCX) 列カートリッジを 0.5 mL、1 mL のメタノール 1 mL のアセトニ トリルを適用することによって平衡 0.1 M HCl と 1% (v/v) 酢酸を含む水を 1 mL。</li>
	<li>平衡の MCX カートリッジあたり 1 つのサンプル ソリューションを適用します。</li>
	<li>1% (v/v) 酢酸を含む水を 1 mL でカートリッジを洗浄します。</li>
	<li>IAA をガラス管に 1% (v/v) 酢酸を含む 2 mL 30% (v/v) アセトニ トリルで溶出します。</li>
	<li>1% (v/v) 酢酸を含む 2 mL 80% (v/v) アセトニ トリルでカートリッジを洗浄します。</li>
	<li>2 mL の水と 5% アンモニア水を含む水を 1 mL のカートリッジを洗ってください。</li>
	<li>ガラス管にアンモニア水 5% を含む 2 mL 60% (v/v) アセトニ トリル、CKs を溶出します。</li>
	<li>真空濃縮を使用して各ホルモンの分画の溶剤を蒸発し、クロマトグラフィー-タンデム質量分析まで +30 ° C で保存します。</li>
</ol>3 独立行政法人及び CKs の LC ・ MS/MS 分析
<ol><li>メタノールの 600 μ L で管内各ホルモン エキスを溶解し、ソリューションをねじ首総復旧時バイアルに転送します。真空濃縮を使用して溶媒を蒸発させます。</li>
	<li>20 μ L 30% (v/v) アセトニ トリル中で IAA 分数と CK 分数スクリューバイアル首総復旧時の 1% (v/v) 酢酸を含む 20 μ L の水に溶解します。</li>
	<li>高速液体クロマトグラフィー システムを搭載したトリプル四重極 MS システムで肯定的なイオン モードでサンプルを分析します。 注: 我々 は、表 1に記載されている HPLC 条件を設定します。<ol>
<li>IAA 溶出の 5%-50% 溶剤 B 7 分以上のバイナリのグラデーションを使用し、98% 溶剤 B 増し、1 分間保持巣注入による 5% 溶剤 B で 2 分間、平衡します。</li>
		<li>CK 溶出 2-40% 溶剤 B 5 分以上 7 分で 40-70% 溶剤 B のバイナリのグラデーションを使用し、95% 溶剤 B 増し、1 分間保持によって 2% 溶剤 B で 2 分間、平衡注入を入れ子にします。</li>
		<li>エレクトロ スプレー イオン化 (ESI) を設定-MSの表 2に掲げるイオン源のパラメーター。</li>
	</ol>
</li>
	<li>複数の反応 (MRM) 遷移表3 各試料の定量化のための監視を使用します。</li>
	<li>重水素標識基準にラベルの比の標準曲線に対して内因性 IAA と CK のレベルを定量化します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Haberlandt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kulturversuche+mit+isolierten+Pflanzenzellen.">Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen.</a> Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).</li><li>Skoog, F., Miller, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+regulation+of+growth+and+organ+formation+in+plant+tissues+cultured+in+vitro.">Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro.</a> Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).</li><li>Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N., Khachatourians, G. G., McHughen, A., Scorza, R., Nip, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Transgenic plants and crops. , 69-84 (2002).</li><li>Teshima, D., Ikeda, K., Satake, M., Aoyama, T., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+emetic+alkaloid+by+in+vitro+culture+of+Cephaelis+ipecacuanha.">Production of emetic alkaloid by in vitro culture of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 278-280 (1988).</li><li>Chatterjee, S. K., Nandi, R. P., Ghosh, N. C., Atal, C. K., Kapur, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+and+utilixzation+of+medicinal+plants.">Cultivation and utilixzation of medicinal plants.</a> Regional Research Laboratory, Council of Scientific and Industrial Research. , 295-301 (1982).</li><li>Yoshimatsu, K., Shimomura, K., Bajaj, Y. P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biotechnology in Agriculture and Forestry 21, Medicinal and Aromatic Plants IV. , 87-103 (1993).</li><li>Ideda, K., Teshima, D., Aoyama, T., Satake, M., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+propagation+of+Cephaelis+ipecacuanha.">Clonal propagation of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 288-291 (1988).</li><li>Yoshimatsu, K., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+shoot+formation+on+internodal+segments+and+alkaloid+formation+in+the+regenerates+of+Cephaelis+ipecacuanha+A.+Richard.">Efficient shoot formation on internodal segments and alkaloid formation in the regenerates of Cephaelis ipecacuanha A. Richard.</a> Plant Cell Rep. 9 (10), 567-570 (1991).</li><li>Koike, I., Taniguchi, K., Shimomura, K., Umehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+endogenous+indole-3-acetic+acid+and+cytokinins+during+adventitious+shoot+formation+in+ipecac.">Dynamics of endogenous indole-3-acetic acid and cytokinins during adventitious shoot formation in ipecac.</a> J. Plant Growth Regul. , (2017).</li><li>Gamborg, O. L., Miller, R. A., Ojima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutrient+requirements+of+suspension+cultures+of+soybean+root+cells.">Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells.</a> Exp. Cell Res. 50 (1), 151-158 (1968).</li><li>Watad, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adventitious+shoot+formation+from+carnation+stem+segments:+a+comparison+of+different+culture+procedures.">Adventitious shoot formation from carnation stem segments: a comparison of different culture procedures.</a> Scientia Hortic. 65 (4), 313-320 (1996).</li><li>Ajithkumar, D., Seeni, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+clonal+multiplication+through+in+vitro+axillary+shoot+proliferation+of+Aegle+marmelos+(L.)+Corr.,+a+medicinal+tree.">Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (L.) Corr., a medicinal tree.</a> Plant Cell Rep. 17 (5), 422-426 (1998).</li><li>Tiwari, V., Tiwari, K. N., Singh, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+studies+of+cytokinins+on+in+vitro+propagation+of+Bacopa+monniera.">Comparative studies of cytokinins on in vitro propagation of Bacopa monniera.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 66 (1), 9-16 (2001).</li><li>Rao, M. S., Purohit, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+shoot+bud+differentiation+and+plantlet+regeneration+in+Celastrus+paniculatus+Willd.">In vitro shoot bud differentiation and plantlet regeneration in Celastrus paniculatus Willd.</a> Biol. Plant. 50 (4), 501-506 (2006).</li><li>Sanikhani, M., Frello, S., Serek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TDZ+induces+shoot+regeneration+in+various+Kalancho&#235;+blossfeldiana+Poelln+cultivars+in+the+absence+of+auxin.">TDZ induces shoot regeneration in various Kalancho&#235; blossfeldiana Poelln cultivars in the absence of auxin.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 85 (1), 75-82 (2006).</li><li>Yoshimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+negatively+regulates+cell+death+by+controlling+NPR1-dependent+salicylic+acid+signaling+during+senescence+and+the+innate+immune+response+in+Arabidopsis.">Autophagy negatively regulates cell death by controlling NPR1-dependent salicylic acid signaling during senescence and the innate immune response in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 21 (9), 2914-2927 (2009).</li><li>Schaller, G. E., Bishopp, A., Kieber, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+yin-yang+of+hormones:+cytokinin+and+auxin+interactions+in+plant+development.">The yin-yang of hormones: cytokinin and auxin interactions in plant development.</a> Plant Cell. 27 (1), 44-63 (2015).</li></ol>

著者は、利害の対立があるないことを宣言します。

植物ホルモンの分布を識別するために器官形成に関与することが重要です植物ホルモンを誘導するための植に外に適用されるため、器官形成植物ホルモン フリー培地で観察できる植物材料を使用枝や根、細胞分化と器官形成における植物の固有の可塑性を評価するが難しく、全体外植体に影響します。カーネーション・ l ・11、エグレ marmelos (l.) Corrêa12、オトメアゼナ(l.) 事業13、など他の植物種の植物ホルモン自由な文化媒体の不定芽を誘起することツルウメモドキ paniculatusアマランサス。14、およびKalanchoë 対新。15. これらの植物種のプロトコルに適用することが可能でしょう。
独立行政法人、tZ、最も息、iP、およびアセトニ トリル中で知的財産権を抽出し、固相抽出によってそれらを精製しました。元のメソッドは、すべての植物ホルモン、ジベレリン、アブシジン酸、ジャスモン酸とサリチル酸) (を含む精製16 のためカートリッジ列 (HLB、MCX、弱陰イオン交換 (ワックス)) の 3 種類を使用します。HLB 列高分子逆相吸着剤を使用して、MCX 列は陽イオン交換グループと同じを使用して、ワックス列は弱陰イオン交換グループと同じを使用します。元のメソッドは、2 番目のステップの MCX 列にアンモニアを含む 60% アセトニ トリル (基本) CKs とし、最後のステップでイチ押しの 1% の酢酸を含む 80% アセトニ トリル (酸性) 独立行政法人をた。私たちの焦点は、オーキシンと拮抗植物成長17を規制する対話、CKs 簡易プロトコル使用 HLB と MCX 列のみが対象。IAA は最初のステップで HLB 列に 1% の酢酸を含む 30% アセトニ トリル溶離されます。クロマトグラフィー-タンデム質量分析するサンプル準備から 2 日ほどかかります。
植物ホルモン精製カートリッジ列で中を乾燥させる、アセトニ トリル溶媒はできません。場合は、再懸濁しますサンプル、植物ホルモンを防ぐをアセトニ トリル中でガラス管に固執し、サンプルから失われました。このプロトコルでは、イオン トラップ MS システムで検出限界が 〜 IAA の 10-30 mg の新鮮な組織から CKs 10 pg。少量を分析するには、多くのサンプルを収集するためにまたはより高い感度で MS を使用する必要があります。
植物ホルモンの分析は、植物の成長と開発の評価のための重要な技術です。このメソッドを使用して、我々 ができるかもしれないオーキシンと植物における不定芽形成の CK 治療のタイミングを決定する最適な培養条件はまだ不明。植物ホルモンの定量化がますます重要になると、ここで記述されている LC ・ MS/MS プロトコルは、高感度と解像度小さい試料の分析を有効になります。従来の当社の簡素化精製と分析を容易にし高い汎用性と再現性をもたらします。将来は、このメソッドは、他の植物の器官の中に内生オーキシンと CK のダイナミクスを調べるに適用できます。

ゴットリーブ Haberlandt (1854-1945 年) は、「全能性」、ことができます細胞植物によって分割、区別し大株1で特定の細胞型に分化させ事前後も全植物体を再生の概念を提案しました。組織培養、植物体再生を誘起することまたはないかどうか、組み合わせと成長培地におけるジベレリンの植物ホルモンの濃度によって決まります。培とミラーは、不定根が低比2を含む培地に誘導することが一方 CKs とオーキシンの高い比率を含む培養液中でタバコ由来カルスから不定芽を誘導することが発見しました。その発見以来組織培養行われている遺伝子組換え植物3の再生、経済的に重要な作物の伝播のため。不定芽は、茎頂、葉、根、茎など以外の組織から誘導することができます。植物ホルモン処理は、ほとんどの植物種の不定芽の誘導に必要です。ただし、最適濃度との組み合わせは異なる種と組織外植片として使用中です。したがって、多くの努力は、最適な濃度と植物ホルモンの実験のための組み合わせを決定するのに入ります。
トコン(Brot。)L. アンダーソン (トコン) は、エメチンと根4を中心に、セファエリンなどのアルカロイドが含まれている薬用植物です。ルート エキス、amoebicide5嘔吐、去痰薬として使用されます。トコンは、ブラジルの熱帯雨林に自生、文化では、種子を設定するには消極的だし、寒い気候6を使って、日本の種子貯蔵中に発芽率が低下します。代わりに、組織培養からの伝播が、撮影する不定節の形成は最も効率的な方法7,8。興味深いことに、植物ホルモン治療8なしこの種の不定芽を誘起することができます。
不定芽は、基底部9ではなく親、なし節セグメントの根尖部に表皮に形成されます。この違いは、おそらく ∼ 規制下にある節セグメントで組織の極性を示します。トコン文化システムにより、不定芽形成の間に内生植物ホルモン レベルの変化を分析するユニークな機会です。ここで 1 つオーキシン (インドール-3-酢酸酢酸 (IAA)) と 4 つの CKs の内因性レベルの解析の手法を紹介 (イソペンテニル アデニン (iP)、イソペンテニル アデニン ゼアチンリボシド (iPR)、トランス-ゼアチン (tZ) とトランス-ゼアチンリボシド (最も息))LC ・ MS/MS を使用して節間のセグメント。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:677px;" width="678">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">[2H5]indole-3-acetic acid</td>
			<td style="width:176px;">Olchemlm Ltd</td>
			<td style="width:119px;">031 1531</td>
			<td style="width:167px;">Internal standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">[2H5]trans-zeatin</td>
			<td style="width:176px;">Olchemlm Ltd</td>
			<td style="width:119px;">030 0301</td>
			<td>Internal standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">[2H5]trans-zeatin riboside</td>
			<td style="width:176px;">Olchemlm Ltd</td>
			<td style="width:119px;">030 0311</td>
			<td>Internal standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">[2H6]N6-isopentenyl adenine</td>
			<td style="width:176px;">Olchemlm Ltd</td>
			<td style="width:119px;">030 0161</td>
			<td>Internal standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">[2H6]N6-isopentenyl adenosine</td>
			<td style="width:176px;">Olchemlm Ltd</td>
			<td style="width:119px;">030 0171</td>
			<td>Internal standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">indole-3-acetic acid</td>
			<td style="width:176px;">Wako</td>
			<td>098 00181</td>
			<td>standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">trans-zeatin</td>
			<td style="width:176px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">Z0876 5MG</td>
			<td>standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">trans-zeatin riboside</td>
			<td style="width:176px;">Wako</td>
			<td>262 01081</td>
			<td>standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N6-isopentenyl adenine</td>
			<td style="width:176px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:119px;">D7674 1G</td>
			<td>standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N6-isopentenyl adenosine</td>
			<td style="width:176px;">ACROS ORGANICS</td>
			<td style="width:119px;">22648 1000</td>
			<td>standard for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">acetonitrile hypergrade for LC-MS LiChrosolv</td>
			<td style="width:176px;">MERCK</td>
			<td style="width:119px;">1.00029.1000</td>
			<td>solvent for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Water for chromatography LiChrosolv</td>
			<td style="width:176px;">MERCK</td>
			<td style="width:119px;">1.15333.1000</td>
			<td>solvent for LC-MS/MS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC</td>
			<td style="width:176px;">SHIMADZU</td>
			<td style="width:119px;">Prominence</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS</td>
			<td style="width:176px;">Sciex</td>
			<td style="width:119px;">3200QTRAP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oasis HLB 30 mg/1 cc</td>
			<td style="width:176px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">WAT094225</td>
			<td>cartridge column</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oasis MCX 30 mg/1 cc</td>
			<td style="width:176px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">186000252</td>
			<td>cartridge column</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">screw neck total recovery vial</td>
			<td style="width:176px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">186002805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">blue, 12 x 32mm screw neck cap and PTFE/silicone septum</td>
			<td style="width:176px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">186000274</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Acquity UPLC BEH C18, 2.1x100 mm</td>
			<td style="width:176px;">Waters</td>
			<td style="width:119px;">186002350</td>
			<td>UPLC column</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Proshell 120 EC-C18, 2.1x50 mm</td>
			<td style="width:176px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">699775-902</td>
			<td>UPLC column</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Digital microscope</td>
			<td style="width:176px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;">DHS1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">TissueLyser II</td>
			<td style="width:176px;">QIAGEN</td>
			<td style="width:119px;">85300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical blade</td>
			<td style="width:176px;">Feather</td>
			<td style="width:119px;">No. 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Scalpel handle</td>
			<td style="width:176px;">Feather</td>
			<td style="width:119px;">No. 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Savant SpeedVac/Refregerated vapor trap</td>
			<td style="width:176px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">SPD111/RVT4104</td>
			<td>vacuum concentrartor</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Disposable glass tobe (13x100 mm)</td>
			<td style="width:176px;">IWAKI</td>
			<td style="width:119px;">9832-1310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sterile petri dish</td>
			<td style="width:176px;">INA OPTICA</td>
			<td style="width:119px;">I-90-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of endogenous auxin and cytokinin during internode culture of ipecac

不定芽形成は経済的に重要な作物の普及のため、遺伝子組換え植物の再生に重要な手法です。植物ホルモン処理は、ほとんどの種の不定芽の誘導に必要です。オーキシンとサイトカイニン (CK) 間のバランスによって決定されます不定芽を誘発することができるかどうかのレベル。多くの努力は、最適な濃度と外植片として使用される各組織、各植物は植物ホルモンの組み合わせを決定するのに入ります。ただし、トコンは培植物ホルモン治療なしで節間のセグメントに不定芽を誘導することができます。これは評価する細胞分化のトコンの固有の可塑性をことができます。トコンの不定芽を誘導して、5 週間 0.2% ジェランガムで凝固した植物ホルモン無料 B5 培地で 14 h/10 h の光暗いサイクルで 15 µmol m− 2の− 1光の下の 24 の ° C で節間のセグメントを培養しました。不定芽形成過程における植物ホルモンの動態を調査するには、計測における内生インドール-3 - 酢酸及び CKs セグメント液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法クロマトグラフィー-タンデム質量による。このメソッドは、単純な方法で解析における内生インドール-3 - 酢酸の CKs レベルをできます。それは、他の植物の器官の中に内生オーキシンと CK のダイナミクスを調べるに適用できます。

1st週不定芽が形成ないです。2nd週間で小さな芽が登場しました。3rdと 4th週間、数シュート頂端領域 (I および II) を中心に増加 (図 2A)。5 週目で番号シュートの地域であった約 7 で私と 5 地域 II (図 2B)。対照的に、いくつかの撮影だけは III と IV の地域で形作られました。
文化の前に IAA レベルだった地域でわずかに高い私 (4.1 pg ユニット/mg, 生体重 (FW)) より地域 II 〜 IV (〜 2.5 pg/mg FW;図 3)。1st週 IAA 含量増加地域 iv (11.4 pg/mg FW) と領域 III (1.5 2.2 pg/mg FW)、幾分低下しました。地域 IV の IAA 含量が減少 2nd週 〜 4.4 pg/mg FW、IAA 基底部に蓄積した非定常であることを示します。文化の 5 週間は、第四地域に地域から私の増加レベルで、IAA 濃度勾配が現れた。
文化の前にほとんど CKs (図 3) のトレース レベルのみがあった。1st週で最も息レベル改善 13.8 pg/mg 領域 II で FW と 18.1 pg/mg 地域 III の FW になりました。レベルには、文化の 5 週間で徐々 にその後減少しました。その一方で、tZ、iP、および知的財産権のレベルが少ししか変更されて培養中。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56902/56902fig1.jpg"> 図 1: トコンの不定芽形成のための準備。節間のセグメント (長さ 8 mm) は、クリーン ベンチを再生トコンからカット、(A)。(B) 第 1 節間は不定芽形成に使われました。(C) セグメントが不定芽を誘発するシャーレで 25 mL 植物ホルモン無料 B5 培地で培養しました。スケール バー = 1 cm.<a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56902/56902fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56902/56902fig2.jpg"> 図 2: 不定の分布撮影節セグメント上に形成されたします。(A) 不定芽が文化の 0 〜 5 週間後に形成されました。スケール バー 5 mm. (B) = (I-iv)、4 つの地域に分割されたセグメントと各地域における不定芽の数が 5 週目で数えられました。データは、平均 ± SEM (n = 3)。10 セグメントは、各実験で使用されました。N. f. = 見つかりません。この図は、小池らから変更されています。9<a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56902/56902fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56902/56902fig3.jpg"> 図 3: 節セグメントにおける植物ホルモン レベルの経時的検討します。セグメントは、4 つの地域 (- 4 世) に分かれていた。内生 IAA および各地域の CKs (tZ、最も息、iP、および知的財産権) は、MS LC/MS による定量化されました。IP と知的財産権のレベルが非常に低い、拡大グラフは、同じグラフ内挿入されました。データは、平均 ± SEM (n = 3)。8 つのセグメントは、各実験で使用されました。この図は、小池らから変更されています。9<a href="//cloudflare-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56902/56902fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>列</td>
			<td>独立行政法人: ACQUITY BEH C18 φ2.1 × 100 1.7 μ m</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>CKs: Poroshell EC C18 φ2.1 × 50 2.7 μ m</td>
		</tr>
<tr>
<td>温度</td>
			<td>40 ° C</td>
		</tr>
<tr>
<td>移動相</td>
			<td>A: 溶剤蒸留水 + 0.05% 酢酸</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>溶剤 b: アセトニ トリル + 0.05% 酢酸</td>
		</tr>
<tr>
<td>流量</td>
			<td>0.35 ml/分</td>
		</tr>
<tr>
<td>注入量</td>
			<td>18 μ l</td>
		</tr>
</tbody></table>IAA と CK 分析表 1: 高速液体クロマトグラフィー条件。
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>カーテン ガス (a.u.)*</td>
			<td>10/40 * *</td>
		</tr>
<tr>
<td>衝突ガス (a.u.)*</td>
			<td>5/3 * *</td>
		</tr>
<tr>
<td>イオン スプレー電圧 (V)</td>
			<td>5500</td>
		</tr>
<tr>
<td>温度 (° C)</td>
			<td>600</td>
		</tr>
<tr>
<td>イオン ソース ガス 1 (a.u.)*</td>
			<td>30</td>
		</tr>
<tr>
<td>イオン ソース ガス 2 (a.u.)*</td>
			<td>40/80 * *</td>
		</tr>
<tr>
<td>解像度</td>
			<td>ユニット</td>
		</tr>
</tbody></table>表 2: イオン源のパラメーターです。* 任意の単位。* * IAA の解析/CK 分析。このテーブルは、小池らから変更されています。9
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>第 1 四半期 (m/z)</td>
			<td>第 3 四半期 (m/z)</td>
			<td>デクラスタ リング電位 (V)</td>
			<td>潜在的な入り口 (V)</td>
			<td>衝突エネルギー (V)</td>
		</tr>
<tr>
<td>独立行政法人</td>
			<td>176</td>
			<td>130</td>
			<td>26</td>
			<td>6.5</td>
			<td>21</td>
		</tr>
<tr>
<td>d5独立行政法人</td>
			<td>181</td>
			<td>134</td>
			<td>36</td>
			<td>4.0</td>
			<td>23</td>
		</tr>
<tr>
<td>tZ</td>
			<td>220</td>
			<td>136</td>
			<td>36</td>
			<td>5.0</td>
			<td>23</td>
		</tr>
<tr>
<td>d5tZ</td>
			<td>225</td>
			<td>137</td>
			<td>31</td>
			<td>5.0</td>
			<td>21</td>
		</tr>
<tr>
<td>最も息</td>
			<td>352</td>
			<td>220</td>
			<td>41</td>
			<td>5.5</td>
			<td>23</td>
		</tr>
<tr>
<td>d5最も息</td>
			<td>357</td>
			<td>225</td>
			<td>51</td>
			<td>5.0</td>
			<td>21</td>
		</tr>
<tr>
<td>iP</td>
			<td>204</td>
			<td>136</td>
			<td>31</td>
			<td>9.0</td>
			<td>19</td>
		</tr>
<tr>
<td>6d iP</td>
			<td>210</td>
			<td>137</td>
			<td>31</td>
			<td>5.5</td>
			<td>21</td>
		</tr>
<tr>
<td>知的財産権</td>
			<td>336</td>
			<td>204</td>
			<td>31</td>
			<td>5.0</td>
			<td>21</td>
		</tr>
<tr>
<td>d6知的財産権</td>
			<td>342</td>
			<td>210</td>
			<td>36</td>
			<td>5.5</td>
			<td>21</td>
		</tr>
</tbody></table>テーブル 3: クロマトグラフィー-タンデム質量分析の IAA および CKs の MRM 遷移。このテーブルは、小池らから変更されています。9

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Quantification of Endogenous Auxin and Cytokinin During Internode Culture of Ipecac

トコンの節間文化の中に内生オーキシンとサイトカイニンの定量化

不定芽は、植物ホルモン治療せずトコンの節間のセグメントに誘導できます。不定芽形成過程における植物ホルモンの動態を評価するには、MS LC/MS による節セグメントにおける内生オーキシンとサイトカイニンを測定しました。

Adventitious shoot formation is an important technique for the propagation of economically important crops and for the regeneration of transgenic plants. ...

quantification-endogenous-auxin-cytokinin-during-internode-culture

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Environment

8.9K ビュー.  Toyo University. 不定芽は、植物ホルモン治療せずトコンの節間のセグメントに誘導できます。不定芽形成過程における植物ホルモンの動態を評価するには、MS LC/MS による節セグメントにおける内生オーキシンとサイトカイニンを測定しました。

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EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. I. Collection of Virus Samples

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. The standardized sampling component of the method concentrates viruses that may be present in water by passage of a minimum specified volume of water through an electropositive cartridge filter. The minimum specified volumes for surface and finished/ground water are 300 L and 1,500 L, respectively. A major method limitation is the tendency for the filters to clog before meeting the sample volume requirement. Studies using two different, but equivalent, cartridge filter options showed that filter clogging was a problem with 10% of the samples with one of the filter types compared to 6% with the other filter type. Clogging tends to increase with turbidity, but cannot be predicted based on turbidity measurements only. From a cost standpoint one of the filter options is preferable over the other, but the water quality and experience with the water system to be sampled should be taken into consideration in making filter selections.

EPA Method 1615 uses an electropositive filter to concentrate enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. This manuscript describes the procedure for collecting samples for Method 1615 analyses.

エンテロウイルスと文化およびRT-QPCRによる水中のノロウイルス発生のEPAメソッド1615測定。ウイルスサンプルのI.コレクション

EPA Method 1615 was developed with a goal of providing a standard method for measuring enteroviruses and noroviruses in environmental and drinking waters. ...

環境学

Quantification of Heavy Metals and Other Inorganic Contaminants on the Productivity of Microalgae

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages include high potential yield, use of non-arable land and integration with waste streams. The nutrient requirements of a large-scale microalgae production system will require the coupling of cultivation systems with industrial waste resources, such as carbon dioxide from flue gas and nutrients from wastewater. Inorganic contaminants present in these wastes can potentially lead to bioaccumulation in microalgal biomass negatively impact productivity and limiting end use. This study focuses on the experimental evaluation of the impact and the fate of 14 inorganic contaminants (As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn) on Nannochloropsis salina growth. Microalgae were cultivated in photobioreactors illuminated at 984 &#181;mol m-2 sec-1 and maintained at pH 7 in a growth media polluted with inorganic contaminants at levels expected based on the composition found in commercial coal flue gas systems. Contaminants present in the biomass and the medium at the end of a 7 day growth period were analytically quantified through cold vapor atomic absorption spectrometry for Hg and through inductively coupled plasma mass spectrometry for As, Cd, Co, Cr, Cu, Mn, Ni, Pb, Sb, Se, Sn, V and Zn. Results show N. salina is a sensitive strain to the multi-metal environment with a statistical decrease in biomass yieldwith the introduction of these contaminants. The techniques presented here are adequate for quantifying algal growth and determining the fate of inorganic contaminants.

Integration of microalgal cultivation with industrial flue gas will ultimately introduce heavy metals and other inorganic compounds into the growth media. This study presents a procedure used to determine the end fate and impact of heavy metals and inorganic contaminants on the growth of Nannochloropsis salina grown in photobioreactors.

重金属や微細藻類の生産性に関するその他の無機汚染物質の定量

Increasing demand for renewable fuels has researchers investigating the feasibility of alternative feedstocks, such as microalgae. Inherent advantages ...

Simultaneous DNA-RNA Extraction from Coastal Sediments and Quantification of 16S rRNA Genes and Transcripts by Real-time PCR

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of taxonomic and functional groups in environmental samples. Used in combination with a reverse transcriptase reaction (RT-q-PCR), it can also be employed to quantify gene transcripts. q-PCR makes use of highly sensitive fluorescent detection chemistries that allow quantification of PCR amplicons during the exponential phase of the reaction. Therefore, the biases associated with &#39;end-point&#39; PCR detected in the plateau phase of the PCR reaction are avoided. A protocol to quantify bacterial 16S rRNA genes and transcripts from coastal sediments via real-time PCR is provided. First, a method for the co-extraction of DNA and RNA from coastal sediments, including the additional steps required for the preparation of DNA-free RNA, is outlined. Second, a step-by-step guide for the quantification of 16S rRNA genes and transcripts from the extracted nucleic acids via q-PCR and RT-q-PCR is outlined. This includes details for the construction of DNA and RNA standard curves. Key considerations for the use of RT-q-PCR assays in microbial ecology are included.

A protocol to quantify bacterial 16S rRNA genes and transcripts from coastal sediments via real-time PCR is provided. The methodology includes the co-extraction of DNA and RNA; preparation of DNA-free RNA; and 16S rRNA gene and transcript quantification via RT-q-PCR, including standard curve construction.

リアルタイムPCRによる沿岸堆積物および定量16SのrRNA遺伝子と転写物からの同時DNA-RNA抽出

Real Time Polymerase Chain Reaction also known as quantitative PCR (q-PCR) is a widely used tool in microbial ecology to quantify gene abundances of ...

Capturing Flow-weighted Water and Suspended Particulates from Agricultural Canals During Drainage Events

The purpose of this study is to describe the methods used to capture flow-weighted water and suspended particulates from farm canals during drainage discharge events. Farm canals can be enriched by nutrients such as phosphorus (P) that are susceptible to transport. Phosphorus in the form of suspended particulates can significantly contribute to the overall P loads in drainage water. A settling tank experiment was conducted to capture suspended particulates during discrete drainage events. Farm canal discharge water was collected in a series of two 200 L settling tanks over the entire duration of the drainage event, so as to represent a composite subsample of the water being discharged. Imhoff settling cones are ultimately used to settle out the suspended particulates. This is achieved by siphoning water from the settling tanks via the cones. The particulates are then collected for physico-chemical analyses.

Nutrients present in particulate form can contribute significantly to the overall loads in agricultural drainage waters. This study describes a novel method to capture flow-weighted water and suspended particulates from farm canal drainage over the entire duration of the drainage event.

排水のイベント中に水の流れ加重と農業用水路から浮遊微粒子をキャプチャ

The purpose of this study is to describe the methods used to capture flow-weighted water and suspended particulates from farm canals during drainage ...

The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food safety and to extend the shelf life of meat and meat products, the use of either synthetic or natural preservatives have been applied to control and eliminate foodborne bacteria. A growing interest in the application of natural food additives for meat has increased. Microorganisms, such as Escherichia coli, contaminate meat and meat products, causing foodborne illnesses. Therefore, it is necessary to improve the meat conservation process. However, the use of essential oils when the meat is being dried has not been deeply studied. In this regard, there is an opportunity to increase the value of dried meat and reduce the risk of foodborne illnesses by applying essential oils during the drying process. In this protocol, we present a novel method of applying thyme essential oil (TEO) during meat drying, specifically in vapor form directly in a drying chamber. For evaluation, we use Minimal Inhibitory Concentration (MIC) to detect the number of harmful bacteria in the treated samples compared to raw samples. The preliminary results show that this method is a viable and alternative option to synthetic preservatives and that it significantly reduces microbial load in dried meat.

Microorganisms such as Escherichia coli that contaminate meat products cause foodborne illnesses. The use of essential oils in the meat drying process has not been deeply studied. Here, we present a novel method of applying thyme essential oil to meat during drying to reduce the microbial load in dried meat.

タイムのエッセンシャル オイルのアプリケーションの肉乾燥中の微生物負荷に及ぼす影響

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

Stress Distribution During Cold Compression of Rocks and Mineral Aggregates Using Synchrotron-based X-Ray Diffraction

We report detailed procedures for performing compression experiments on rocks and mineral aggregates within a multi-anvil deformation apparatus (D-DIA) coupled with synchrotron X-radiation. A cube-shaped sample assembly is prepared and compressed, at room temperature, by a set of four X-ray transparent sintered diamond anvils and two tungsten carbide anvils, in the lateral and the vertical planes, respectively. All six anvils are housed within a 250-ton hydraulic press and driven inward simultaneously by two wedged guide blocks. A horizontal energy dispersive X-ray beam is projected through and diffracted by the sample assembly. The beam is commonly in the mode of either white or monochromatic X-ray. In the case of white X-ray, the diffracted X-rays are detected by a solid-state detector array that collects the resulting energy dispersive diffraction pattern. In the case of monochromatic X-ray, the diffracted pattern is recorded using a two-dimensional (2-D) detector, such as an imaging plate or a charge-coupled device (CCD) detector. The 2-D diffraction patterns are analyzed to derive lattice spacings. The elastic strains of the sample are derived from the atomic lattice spacing within grains. The stress is then calculated using the predetermined elastic modulus and the elastic strain. Furthermore, the stress distribution in two-dimensions allow for understanding how stress is distributed in different orientations. In addition, a scintillator in the X-ray path yields a visible light image of the sample environment, which allows for the precise measurement of sample length changes during the experiment, yielding a direct measurement of volume strain on the sample. This type of experiment can quantify the stress distribution within geomaterials, which can ultimately shed light on the mechanism responsible for compaction. Such knowledge has the potential to significantly improve our understanding of key processes in rock mechanics, geotechnical engineering, mineral physics, and material science applications where compactive processes are important.

We report detailed procedures for compression experiments on rocks and mineral aggregates within a multi-anvil deformation apparatus coupled with synchrotron X-radiation. Such experiments allow quantification of the stress distribution within samples, that ultimately sheds light on compaction processes in geomaterials.

岩や放射光 x 線回折を用いた鉱物骨材の冷間圧縮時の応力分布

We report detailed procedures for performing compression experiments on rocks and mineral aggregates within a multi-anvil deformation apparatus (D-DIA) ...

Chemical Isolation, Quantification, and Separation of Skin Lipids from Reptiles

Reptiles signal to conspecifics using lipids in their skin, primarily to enable mate tracking and assessment. The isolation of these lipids has utility in research focused on evolutionary patterns and mechanisms of chemical communication, in addition to understanding the waterproofing role of lipids in the evolution of terrestrial life. In an applied approach, such skin-based cues have potential use for wildlife managers dealing with invasive species. The main steps for quantifying reptile skin lipids in the protocol presented here include extraction, total lipid determination, and fractionation via column chromatography, the latter process resulting in purified eluates of compounds which can then either be analyzed to assign compound identifications (e.g., gas chromatography-mass spectrometry [GC-MS]) and/or used directly in more refined bioassays. Skin lipids can be extracted from living skin, shed skin, or dead whole animals, using nonpolar organic solvents (e.g., hexane, benzene, toluene). Extraction solubilizes the lipids and, then, the solvent can be evaporated to yield a measurable lipid-only extract. Fractionation involves the separation of the total lipid extract into specific eluates via traditional column chromatography. The total lipid extract is first bound to a substrate-based column (e.g., alumina) and, then, individual eluates (&#34;fractions&#34;) of solvent at specific volumes are passed sequentially through the column to elute sets of compounds from the lipid mixture based on common polarity. The fractions progress in polarity at a standardized sequence by increasing the relative amount of polar solvent (e.g., diethyl ether) in nonpolar solvent. In this manuscript, we describe several methods for extracting skin lipids of reptiles and, then, provide a standard protocol for isolating different sets of compounds based on polarity, using traditional column chromatography. Whole lipid extracts or specific fractions can, then, be used in bioassays to determine any biological activity elicited by the compounds therein.

In reptiles, skin lipids from conspecifics are crucial for sexual signaling, with potential use in invasive species management. Here, we describe protocols for extracting skin lipids from shed skin or whole animals, determining and analyzing the total lipid mass, and separating the lipids using fractionation via column chromatography.

爬虫類から皮膚脂質の分離、定量、化学分離

Reptiles signal to conspecifics using lipids in their skin, primarily to enable mate tracking and assessment. The isolation of these lipids has utility in ...

Split Point Analysis and Uncertainty Quantification of Thermal-Optical Organic/Elemental Carbon Measurements

Researchers from myriad fields frequently seek to quantify and classify concentrations of carbonaceous aerosols as organic carbon (OC) or elemental carbon (EC). This is commonly accomplished using thermal-optical OC/EC analyzers (TOAs), which enable measurement via controlled thermal pyrolysis and oxidation under specific temperature protocols and within constrained atmospheres. Several commercial TOAs exist, including a semi-continuous instrument that enables on-line analyses in the field. This instrument employs an in-test calibration procedure that requires relatively frequent calibration. This article details a calibration protocol for this semi-continuous TOA and presents an open-source software tool for data analysis and rigorous Monte Carlo quantification of uncertainties. Notably, the software tool includes novel means to correct for instrument drift and identify and quantify the uncertainty in the OC/EC split point. This is a significant improvement on the uncertainty estimation in the manufacturer&#8217;s software, which ignores split point uncertainty and otherwise uses fixed equations for relative and absolute errors (generally leading to under-estimated uncertainties and often yielding non-physical results as demonstrated in several example data sets). The demonstrated calibration protocol and new software tool enabling accurate quantification of combined uncertainties from calibration, repeatability, and OC/EC split point are shared with the intent of assisting other researchers in achieving better measurements of OC, EC, and total carbon mass in aerosol samples.

This article presents a protocol and software tool for the quantification of uncertainties in the calibration and data analysis of a semi-continuous thermal-optical organic/elemental carbon analyzer.

熱光学有機/元素炭素測定の分割点解析と不確実性定量

Researchers from myriad fields frequently seek to quantify and classify concentrations of carbonaceous aerosols as organic carbon (OC) or elemental carbon ...

Processing Embryo, Eggshell, and Fungal Culture for Scanning Electron Microscopy

Although scanning electron microscopy (SEM) is being widely used for the ultra-structural analysis of various biological and non-biological samples, methods involved in processing different biological samples involve unique practices. All conventional practices described in the literature for processing samples still find useful applications, but subtle changes in the sample preparation can alter image quality, as well as, introduce artifacts. Hence, using a unique sample preparation technique specific to the type of tissue analyzed is required to obtain a good quality image with ultrastructural resolution. The focus of this study is to provide the optimal sample preparation protocols for imaging embryos, rigid eggshells, and fungal cultures using SEM. The following optimizations were recommended to yield good results for the three different delicate biological samples studied. Use of milder fixatives like 4% paraformaldehyde or 3% glutaraldehyde followed by dehydration with ethanol series is mandatory. Fungal mycelium on agar blocks obtained by slide cultures yields a better ultrastructural integrity compared to cultures taken directly from agar plates. Chemical drying of embryos with HMDS provides drying without introducing surface tension artifacts compared to critical point drying. HMDS prevents cracking caused by shrinkage as samples are less brittle during drying. However, for fungal culture, critical point drying provides acceptable image quality compared to chemical drying. Eggshells can be imaged with no special preparation steps except for thorough washing and air drying prior to mounting. Preparation methodologies were standardized based on acceptable image quality obtained with each trial.&#160;

Here, we present detailed processing protocols for imaging delicate tissue samples using scanning electron microscopy (SEM). Three different processing methods, namely, hexamethyl disilazana (HMDS) chemical drying, simple air drying, and critical point drying are described for preparing rigid eggshells, embryos at early developmental stages, and fungal cultures respectively.

電子顕微鏡検査用胚、卵殻、真菌培養の処理

Although scanning electron microscopy (SEM) is being widely used for the ultra-structural analysis of various biological and non-biological samples, ...

Microalgae Cultivation and Biomass Quantification in a Bench-Scale Photobioreactor with Corrosive Flue Gases

Photobioreactors are illuminated cultivation systems for experiments on phototrophic microorganisms. These systems provide a sterile environment for microalgal cultivation with temperature, pH, and gas composition and flow rate control. At bench-scale, photobioreactors are advantageous to researchers studying microalgal properties, productivity, and growth optimization. At industrial scales, photobioreactors can maintain product purity and improve production efficiency. The video describes the preparation and use of a bench-scale photobioreactor for microalgal cultivation, including the safe use of corrosive gas inputs, and details relevant biomass measurements and biomass productivity calculations. Specifically, the video illustrates microalgal culture storage and preparation for inoculation, photobioreactor assembly and sterilization, biomass concentration measurements, and a logistic model for microalgal biomass productivity with rate calculations including maximum and overall biomass productivities. Additionally, since there is growing interest in experiments to cultivate microalgae using simulated or real waste gas emissions, the video will cover the photobioreactor equipment adaptations necessary to work with corrosive gases and discuss safe sampling in such scenarios.

Bench-scale, axenic cultivation facilitates microalgal characterization and productivity optimization before subsequent process scale-up. Photobioreactors provide the necessary control for reliable and reproducible microalgal experiments and can be adapted to safely cultivate microalgae with the corrosive gases (CO2, SO2, NO2) from municipal or industrial combustion emissions.

腐食性煙道ガスを用いたベンチスケール光バイオリアクターにおける微細藻類栽培とバイオマス定量

Photobioreactors are illuminated cultivation systems for experiments on phototrophic microorganisms. These systems provide a sterile environment for ...