著者は、彼女の技術支援のためのクリスティPahrmannに感謝します。この研究は、ドイツ財団fuer Herzforschung（F / 28/14）で賄われていました。 DWは、心臓や肺移植のための国際社会からの旅行賞によってサポートされていました。 TDはエルス・クローネ - フレゼニウス・財団（2012_EKES.04）からエルスクローネ優秀給付金を受け取りました。 SSはドイツ学術協会（; DE2133 / 2-1、TDおよびSCHR992 / 3 1、SCHR992 / 4-1、SS DFG）からの研究助成金を受けました。

動物は、実験動物資源研究所が作成し、国立衛生研究所が発行し、実験動物の原則のためのガイドに準拠した人道的なケアを受けました。全ての動物プロトコルは責任を負う地方自治体（「AMTのエリーゼお大事にウントVerbraucherschutz、Hansestadt（保健・消費者保護のためのオフィス）ハンブルグ」）によって承認されました。 1.動物ケア<ol><li>実験動物研究所から300〜350グラムの重さのLewisラット（LEW / CRL）ラットおよびROSA /ルシフェラーゼ - LEWトランスジェニックラットを入手します。 </li><li>換気キャビネットに従来の条件の下でラットを維持し、それらを標準ラット飼料およびオートクレーブ処理水を自由に食べます。 </li><li>ドナーとレシピエントとして同系LEW / CrlをラットなどROSA /ルシフェラーゼ - LEWトランスジェニックラットを用いて、移植片移植を行います。 </li></ol>ドナーラットの作製<ol><li>入会を使用してくださいイソフルラン（2.5から3パーセント）でラットをanaesthetizeするイオンチャンバー。 </li><li>その背中にラットを置き、口と鼻を覆うフェイスマスクで麻酔を維持します。後肢の足をつまんや反射の不在を確認することにより、麻酔の十分な深さを確認してください。麻酔下ながら乾燥を防ぐために、目にいくつかの獣医軟膏を適用します。 </li><li>後ろ足を広げ、テープを使用して自分の位置を固定します。 </li><li>ヘアトリマーと鼠径部の毛を剃ると、80％エタノールに続いてポビドンヨードを使用して領域全体を消毒。二回消毒手順を繰り返します。 注：手術領域、ガーゼ、および手術器具を滅菌する必要があります。作業中は無菌領域を維持し、単回使用、無菌手術用手袋、マスク、帽子を着用してください。 </li><li>顕微鏡下で、リネアの鼠径沿って垂直切開を行います。優しく皮下組織を分離するために2つの鉗子を使用し、そのORIから浅腹壁静脈を公開大腿静脈にジン。慎重に周囲の組織から浅腹壁静脈を分離します。 </li><li> 2つのマイクロクランプを使用して、浅腹壁静脈の血流を停止します。 </li><li>慎重にピンセットで分離された静脈を持ち上げ、microscissorsで血管を切断することにより、静脈の約0.5〜1センチセグメントを収穫。血液の損失を防止するために、容器の切り株上のマイクロクランプを残します。滅菌ガーゼ上の静脈の除去された作品を配置します。注意深く採取静脈の一端の内側に30 G針を配置し、ヘパリンと容器（50単位/ ml）をフラッシュします。 注：注意して静脈を処理し、持ち上げる時の損傷を避けるため、切削、フラッシング。ヘパリンの適切な量の移植片をフラッシュすることを確認します。 </li><li>血管のけいれんを防ぐために、レシピエントラットに移植するまで氷上で1％のリドカインに血管部分を保管してください。 </li><li> 5％イソフルランに麻酔を増加させることにより、ドナーラットを安楽死させます。 2-3分後、オペアンプ白線に沿って腹部途中、横隔膜を切断し、循環を停止するように心を取り除きます。 </li></ol>受信者のラットの調製<ol><li>ドナーラットと同様に、受信者のラットを麻酔し、固定します。 </li><li>ヘアトリマーと脚の内側を剃るし、ポビドンヨードおよび80％エタノールで3回消毒。 </li><li>麻酔深度を監視し、それが後足をつまんときに反射がないことを確認することによって十分であることを確認してください。 </li><li>鼠径倍に膝から正中大腿切開を行います。顕微鏡下で、その周囲から大腿動脈を分離するために2鉗子を使用しています。 </li><li>血液の流れを止めるために、マイクロクランプを使用してください。遠位クランプ続いて第1の近位のクランプを配置します。 </li><li> microscissorsとクランプ大腿動脈の短いセグメントを切り取って、それを捨てます。あるギャップを作成し、microscissorsと残りの動脈断端を短くしてください静脈グラフトよりも大きい1〜2ミリメートル。 30 Gの針を用いてヘパリンを動脈切り株をフラッシュします。 注：外膜がわずかに血管断端を越えて突出している場合は、容器の端の上にわずかにそれを引っ張って曲を削除するために鉗子を使用しています。 </li><li>動脈断端との間にステップ2.8から採取した静脈を置き、隙間に適切に収まるように長さを調整します。静脈の方向に注意してください。 </li><li>第10-0プロレン縫合糸を使用して、近位吻合を実行します。 （ 図1D）に示すために、単一のステッチを実施します。腹側に3以上の縫合糸を追加する前に、各横側に縫合糸で起動します。その後、吻合を完了するために、容器の背側にある3つのステッチを配置します。 </li><li>ステップ3.8で説明した近位吻合についてと同じ技法を使用して移植片と遠位血管を接続します。ここでも、各横側に縫合糸で起動し、腹sidの上の3つの縫合糸を配置eと背側。 </li><li>フィブリン糊成分1及び2と負荷2 1 mLのシリンジは慎重にピンセットで移植片を持ち上げ、コンポーネント2に続いて、移植片の下にフィブリン糊成分1の約100μLをドロップします。 注：1の比率：コンポーネント1と2が1に適用されていることを確認します。 </li><li>バックの位置に移植片を配置し、移植片の上に部品1および2の追加の100μLをドロップします。接着剤は、移植片と吻合不全および静脈グラフトの過膨張を防ぐために吻合の両方をカバーすることを確認してください。 </li><li>慎重に近位に続いた遠位クランプを開きます。 </li><li>移植静脈グラフトの遠位の動脈に可視パルスをチェックして手術の成功を確認してください。 </li><li>皮膚閉鎖を妨げる過剰な接着剤を、削除します。硬化した接着剤を持ち上げ、microscissorsと過剰分を除去するために鉗子を使用してください。 5-0プロレン縫合糸で皮膚層を閉じます。 </li><li> 4〜5メートルを注入グラム/キログラムカルプロフェン皮下ラットが目を覚ますを許可する前に。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。それは完全に回復するまで、単一のケージに動物を保管してください。 </li><li>次の3日間、鎮痛薬としての飲料水（100ミリリットルあたり50mgのメタミゾール）にメタミゾールを追加し、毎日動物を監視します。 </li></ol> 4.二重超音波検査注：使用したラット14で非侵襲的に血液の流れを可視化するduxplex超音波検査。 <ol><li>導入室（イソフルラン2％）にラットをAnaesthetize。その背中にラットを置き、鼻をカバーするフェイスマスクで麻酔を維持します。 </li><li>太ももの領域の周りの毛を除去するために、バリカン及び脱毛クリームを使用してください。 </li><li>太ももに超音波ゲルを適用します。気泡がないことを確認します。 MS 400変換器を使用して、二重超音波検査画像を取得（中心周波数：30 M230〜400フレーム/秒のフレームレートでヘルツ）。 </li></ol> 5.組織病理学注：形態学的分析15のためのマッソンの三重染色で容器を収穫し、染色します。 <ol><li>一晩、4％パラホルムアルデヒドで収穫された容器を修正し、エタノールの濃度を増加させ、それを脱水。パラフィン中にサンプルを埋め込み、ミクロトームを用いて5μmの厚さにスライスにカット。 注：パラホルムアルデヒドは毒性があり、特別な注意を払って取り扱ってください。 </li><li>トリクローム染色液でそれらを染色する前に、スライドを脱パラフィン。 、染色したスライドを脱水キシレンでそれらをクリアし、メディアをマウントするには、それらをマウントします。スライドを乾燥させた後、顕微鏡でサンプルを表示します。 </li></ol> 6.生物発光イメージング（BLI） 注：術後の移植片は、生物発光信号1を測定することにより、生体内で時間をかけて追跡しました6。 <ol><li> PBS 22 ml中にD-ルシフェリンカリウム塩1gを溶解し、腹腔内ラット（375 mg / kg体重）にそれを注入します。ルシフェリンは、動物において循環するために15分を待ちます。 </li><li>リアルタイム生物発光定量システムにラットを置き、生物発光信号にアクセスします。 </li></ol>

<ol>
	<li>Sabik, J. F., 3rd, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+saphenous+vein+graft+patency.">Understanding saphenous vein graft patency.</a> Circulation. 124, 273-275 (2011).</li><li>Goldman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+patency+of+saphenous+vein+and+left+internal+mammary+artery+grafts+after+coronary+artery+bypass+surgery:+results+from+a+Department+of+Veterans+Affairs+Cooperative+Study.">Long-term patency of saphenous vein and left internal mammary artery grafts after coronary artery bypass surgery: results from a Department of Veterans Affairs Cooperative Study.</a> J Am Coll Cardiol. 44, 2149-2156 (2004).</li><li>Fitzgibbon, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+bypass+graft+fate+and+patient+outcome:+angiographic+follow-up+of+5,065+grafts+related+to+survival+and+reoperation+in+1,388+patients+during+25+years.">Coronary bypass graft fate and patient outcome: angiographic follow-up of 5,065 grafts related to survival and reoperation in 1,388 patients during 25 years.</a> J Am Coll Cardiol. 28, 616-626 (1996).</li><li>O'Brien, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+around+and+within+saphenous+vein+bypass+grafts.">Wound healing around and within saphenous vein bypass grafts.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 114, 38-45 (1997).</li><li>El-Kurdi, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovine+femoral+artery+bypass+grafting+using+saphenous+vein:+a+new+model.">Ovine femoral artery bypass grafting using saphenous vein: a new model.</a> J Surg Res. 193, 458-469 (2015).</li><li>Yuda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+receptor+antagonist,+L-158,809,+prevents+intimal+hyperplasia+in+dog+grafted+veins.">Angiotensin II receptor antagonist, L-158,809, prevents intimal hyperplasia in dog grafted veins.</a> Life Sci. 68, 41-48 (2000).</li><li>McCann, R. L., Hagen, P. O., Fuchs, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin+and+dipyridamole+decrease+intimal+hyperplasia+in+experimental+vein+grafts.">Aspirin and dipyridamole decrease intimal hyperplasia in experimental vein grafts.</a> Ann Surg. 191, 238-243 (1980).</li><li>Thomas, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+vein+graft+failure+and+therapeutic+interventions.">Animal models for studying vein graft failure and therapeutic interventions.</a> Curr Opin Pharmacol. 12, 121-126 (2012).</li><li>Hu, Y., Xu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+mouse+model+of+vein+bypass+graft+atherosclerosis.">New mouse model of vein bypass graft atherosclerosis.</a> Heart Lung Circ. 11, 182-188 (2002).</li><li>Salzberg, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+neointimal+formation+after+surgical+vein+grafting+in+a+murine+model+of+type+2+diabetes.">Increased neointimal formation after surgical vein grafting in a murine model of type 2 diabetes.</a> Circulation. 114, I302-I307 (2006).</li><li>Abbott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+animals:+the+Renaissance+rat.">Laboratory animals: the Renaissance rat.</a> Nature. 428, 464-466 (2004).</li><li>Lindblad-Toh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequencing:+three's+company.">Genome sequencing: three's company.</a> Nature. 428, 475-476 (2004).</li><li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Campagna, C., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rationale+and+practical+techniques+for+mouse+models+of+early+vein+graft+adaptations.">Rationale and practical techniques for mouse models of early vein graft adaptations.</a> Journal of vascular surgery. 52, 444-452 (2010).</li><li>Olver, D. T., Lacefield, J. C., Shoemaker, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+bidirectional+flow+in+the+sciatic+vasa+nervorum.">Evidence of bidirectional flow in the sciatic vasa nervorum.</a> Microvascular research. 94, 103-105 (2014).</li><li>Stubbendorff, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+myointimal+hyperplasia+versus+atherosclerosis+in+mice:+an+introduction+of+two+valid+models.">Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2014).</li><li>Conradi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+fibrin-based+engineered+heart+tissue.">Immunobiology of fibrin-based engineered heart tissue.</a> Stem cells translational medicine. 4, 625-631 (2015).</li><li>Dashwood, M. R., Tsui, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='No-touch'+saphenous+vein+harvesting+improves+graft+performance+in+patients+undergoing+coronary+artery+bypass+surgery:+A+journey+from+bedside+to+bench.">'No-touch' saphenous vein harvesting improves graft performance in patients undergoing coronary artery bypass surgery: A journey from bedside to bench.</a> Vascular Pharmacology. 58, 240-250 (2013).</li><li>Bekler, H. I., Rosenwasser, M. P., Akilina, Y., Bulut, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+an+absorbable+collagen+cover+(NeuraWrap)+improves+patency+of+interpositional+vein+grafts.">The use of an absorbable collagen cover (NeuraWrap) improves patency of interpositional vein grafts.</a> Acta orthopaedica et traumatologica turcica. 44, 157-161 (2010).</li><li>Geurts, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockout+rats+via+embryo+microinjection+of+zinc-finger+nucleases.">Knockout rats via embryo microinjection of zinc-finger nucleases.</a> Science. 325, 433 (2009).</li><li>Moreno, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+and+characterization+of+a+renin+knockout+rat.">Creation and characterization of a renin knockout rat.</a> Hypertension. 57, 614-619 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するための基礎となる病理学的プロセスの探求、新しい薬や治療法の選択肢のテストを可能にするために、ラットの静脈介在モデルを示しています。 麻酔は外科的処置の重要な側面です。これは、特に長時間の操作中に、安全で簡単な方法であるような連続吸入麻酔システムは、推奨されます。この操作は1時間以上を要する場合には、トレーニング段階中に非常に重要であることができます。 外科手術に関しては、収穫し、移植17の間に静脈グラフトを損傷しないように重要です。血管の外膜を把持すると、静脈グラフトの損傷を防止し、その後の血栓形成および移植の失敗を回避することができます。移植片の開存性は、静脈グラフトまたはDISTAの血流の脈動の観察により直ちに静脈グラフト構成後に決定することができますリットル動脈だけでなく、二重超音波検査を経て。 手順のもう一つの重要な側面は、静脈グラフトの過膨張を防止するためです。動脈圧システムに静脈グラフトの突然の暴露が増加し、壁張力、過膨張後に、フローパターンの変化をもたらします。これらは、血栓症、吻合不全、および早期グラフト不全の源です。フィブリン糊付き静脈グラフトをサポートすることが制御されていない風船を防止し、機械的破壊から内膜とメディアを保護することができます。吸収性コラーゲンカバーは、フィブリン糊の代替であり、静脈周囲18を覆うように使用することができます。 このプロトコル内で最も重要なステップは、間違いなく静脈グラフトと動脈間吻合です。これは、移植片の初期故障につながる可能性がある、吻合部の狭小化につながるようにケアは、容器の二つの壁を貫通しないように注意する必要があります。また、特別attentionが縫合糸の局在に支払わなければなりません。動脈と静脈における縫合位置の一致は、グラフト開存を保証し、不足を防ぐことができます。これを容易にするために、縫合糸は、 図1（d）に示す順序で実行することができます。 初心者が最初に顕微機器や解剖学的構造の小さなサイズに慣れなければならないため、技術的な難易度は、技術の限界とみなすことができます。しかし、使用される他のモデルは、同じ困難を呈し、そして私たちは、このビデオは、短い時間内にこのテクニックをマスターする初心者外科医を助けると信じています。 静脈移植不全のための多数の小動物モデルが文献に記載されています。しかし、ほとんどのモデルは、解析のみ13のための組織の非常に少量を提供しています。この方法の利点を得ることができる組織の比較的大きい量です。一グラフトは複数の部分に分割することができNDそれによって必要な実験動物の数を減少させる、別のアッセイに使用しました。 ジンクフィンガーヌクレアーゼ技術における最近の進歩は、ノックアウトラット19の生成を可能にしました。適切なノックアウトラットを選択することにより、移植片の開存性の喪失は、異なる疾病状態で研究することができます。例えば、レニンノックアウトラットは高血圧20を研究するために利用することができます。これらの遺伝的背景が異なる設定での静脈グラフト不全のメカニズムのかmyointima過形成の発達における特定の遺伝子の影響に関する情報を収集するために、この動物モデルと組み合わせることができます。 結論として、このビデオで説明したモデルは、再現可能な、安価、かつ実施が容易であり、迅速かつ確実に確立することができます。静脈グラフト不全の主な原因であるMyointima過形成は、進行性の管腔閉塞の結果、4週間にわたって急速に発展します。正常にテスト治療このモデルのオプションは、さらに大型動物モデルにおいて確認することができます。

虚血性心疾患およびこれらの合併症は、世界中の主要な死因の一つです。現在の治療戦略が狭く、血管を拡張するか、またはバイパスを作成することによってのいずれかで、再確立の血流に焦点を当てます。静脈自家移植片を用いて、冠動脈バイパス術（CABG）は、最初1968年に記載されたし、長年にわたって洗練されています。離れて左冠動脈前下行枝の血行再建から、伏在静脈導管は、最も一般的に1を使用しています。しかし、グラフト開存は、伏在静脈グラフト（SVG）のアキレス腱のまま。一年間手術後、グラフト開存は、10年2,3後に61％に低下、85％です。 SVGの開存損失の病態生理学的メカニズムと原因を発表することが重要な作業です。 このビデオでは、静脈グラフトの損失を調査するため、ラットの静脈介在モデルを示しています。この方法の全体的な目標は、基礎となる病理生物学を探求していますそして、-physiologicalプロセス疾患の進行中に、薬剤や治療法の選択肢のテストに適したモデルを開発します。動脈系への浅腹壁静脈に移植することにより、このモデルは、厳密に、冠状動脈バイパス移植の臨床状況を模倣します。外科的外傷、虚血、および壁応力は、病理学的な血管の変化の重要なトリガーであると説明したモデルで模倣されています。 異なるモデルと種が静脈グラフト開存損失を調査するために利用可能です。このような豚4、ヒツジ5、犬6、およびサル7などの大型動物モデルは、人間の血管との解剖学的構造に似ているので、8をテストするために、このようなバイパスステント留置術または新しい外科技術のような複雑な治療戦略を可能にします。しかし、特別な住宅、設備、スタッフが必要とされています。また、高コストと手術中の追加の麻酔医の必要性は、そのより広範な適用を妨げます。 Smのラットを含めたすべての動物は、特別な住宅を必要としない、取り扱いが容易で、かつ管理コストを持っています。マウスモデル9,10に比べて、ラットのモデルは結果より良い操作性、したがってより少ない可変性という利点を有します。ラットは、生理学的および遺伝的にマウス11,12よりヒトに類似しています。さらに、ほとんどの野生型マウスは、IIエラーを入力しやすいマウスモデルを作る限定myointima 13を 、開発します。このような下大静脈などの主要なマウスの静脈の組織学は、わずか数細胞層で構成され、13難しい早期評価をレンダリングします。さらなる欠点は、移植片回収後のその後の分析のために利用可能な組織の少量です。 このビデオで説明したモデルは、再現可能な、安価、かつ実施が容易であり、迅速かつ確実に確立することができます。このようなウイルスベクターのような高価な実験的な治療薬を評価するために特に適しています経済的な様式で、遺伝子治療のために。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:236px;">Rat LEW/Crl</td>
			<td style="width:183px;">Charles River</td>
			<td style="width:145px;">Stock number 004</td>
			<td style="width:156px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:236px;">Rat LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor- 1 
			luc)11Jmsk</td>
			<td style="width:183px;">Institute of laboratory animals, Kyoto University, Japan</td>
			<td style="width:145px;">NBPR rat number 0299</td>
			<td style="width:156px;">http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PFA 4%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#157135S</td>
			<td align="right">20%</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">hair clipper</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>8786-451A ARCO SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Forene</td>
			<td>AbbVie</td>
			<td style="width:145px;">PZN 10182054 Art.Nr.: B506</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">microsurgical clamp</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td>Micro-Serrefine - 4mm</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">clamp applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18056-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">hair removal creme</td>
			<td>Rufin cosmetic</td>
			<td align="right">27618</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-Iodine</td>
			<td>Betadine Purdue Pharma</td>
			<td>NDC:67618-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10-0 Ethilon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>2814G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">5-0 prolene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>EH7229H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Rimadyl</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td style="width:145px;">400684.00.00</td>
			<td>Carprofen</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Novaminsulfon</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>PZN 03530402</td>
			<td>Metamizole</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Heparin</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>PZN: 3862340</td>
			<td>25.000 I.E./mL</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylocain 1%</td>
			<td>AstraZeneca</td>
			<td>PZN: 1137907</td>
			<td>Lidocain</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">EVICEL</td>
			<td>J&#38;J Med.Ethicon Biosur</td>
			<td style="width:145px;">PZN 7349697 Art. Nr.:EVK01DE</td>
			<td>fibrin glue</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37" style="height:37px;">NaCl 0,9%</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td style="width:145px;">PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:236px;">Vevo 770 high-resolution in vivo micro-imaging system</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td></td>
			<td>duplex sonography</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ecogel 100 ultrasound gel</td>
			<td>Eco-med</td>
			<td>30GB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L-8220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PBS pH 7,4</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xenogen Ivis 200</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>bioluminescence imaging</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Weigerts iron hematoxylin Kit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.15973.0002</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Resorcine-Fuchsine Weigert</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>2.00E-30</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Acid Fuchsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8129-25G</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ponceau S solution</td>
			<td>Serva Electrophoresis</td>
			<td>33427</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Azophloxin</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-103</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:236px;">Molybdatophosphoric acid hydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.00532.0100</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Orange G</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-221</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Light Green SF</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>1B-211</td>
			<td>Trichrome staining</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vitro-Clud</td>
			<td>Langenbrinck</td>
			<td>04-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Glacial Acetic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">537020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">37% HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H1758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylene</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td align="right">3410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Paraffin</td>
			<td>Leica biosystems</td>
			<td>REF 39602004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ethanol absolute</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td align="right">2246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ethanol 96%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td align="right">2295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ethanol 70%</td>
			<td>Th. Geyer</td>
			<td align="right">2270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Slide Rack</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td align="right">21057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Staining dish</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td align="right">21075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Bepanthen Eye and Nose ointment</td>
			<td>Bayer</td>
			<td align="right">1578675</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

vein interposition model: a suitable model to study bypass graft patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

ラット静脈介在モデルはmyointima過形成および静脈グラフト不全の発達を研究するのに適しています。動物は手術からよく回復し、優れた物理的条件ポスト動作を示しています。 図1は、キーの外科的手順を示しています。リネアの鼠径沿って皮膚切開後、心窩部表在静脈と大腿動脈（ 図1A）が同定されています。これは初期の移植不全と開存性の損失につながる可能性として移植片の収穫は、移植片（ 図1B）を損傷することなく、慎重に行うべきです。レシピエント動物（ 図1C）に移植片を位置決めした後、吻合ステッチは、図1（d）に示す順序で実行されています。完成した静脈介在移植片は、淡い（ 図1E）を表示され、赤になり、再灌流（ 図1F）後の脈動を示すべきです。 成功integrati<html>移植後の大腿動脈とグラフト開存に静脈の上に二重超音波検査（ 図2A）を使用して非侵襲的に確認することができます。同系リュック陰性ラットにリュック陽性ラットの静脈に移植することにより、生物発光イメージングは時間（ 図2B）上にグラフト存在をモニターするために使用することができます。 Myointima過形成は、時間の経過とともに、移植片に漸進的に開発しています。マッソンの三重との組織学的染色は、内弾性板（ 図2C）の内部myointima形成を示しています。 （内弾性板内の面積で内腔の断面積を分割）管腔閉塞の計算は、このようにmyointima過形成の再現性のダイナミクスを確認し、28日目、手術後の7日目からグラフト開存の漸進的な損失を明らかにしましたこのラットモデルにおける（ 図2D）。 1再 &quot;SRC =&quot; /ファイル/ ftp_upload / 54839 / 54839fig1.jpg &quot;/&gt; 図1：手術の手順の詳細なスキーム。 （A）鼠径部の解剖学。 （B）上腹部、表在静脈グラフトを収穫。レシピエント動物の動脈断端の間の静脈グラフトを配置する（C）。 （D）吻合ステッチの順序。静脈グラフト建設後（E）サイト。静脈介在移植片の再灌流後（F）サイト。黒の矢印は、上腹部表在静脈をマーク。スケールバー= 5ミリメートル。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54839/54839fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/54839/54839fig2.jpg" /> 図2：動物モデルの特徴。静脈介在グラフトIMMEDの（A）二重超音波検査<html> iately移植（0D）および28日後の動作（28D）の後。 （B）0日と手術後28日目にリュック陰性ラットに移植リュック陽性移植片からBLI。 （C）代表グラフト断面が日7、14、21、および28の後に収穫し、マッソンの三重で染色しました。 （上パネル：スケールバー= 400μmで、下のパネル：スケールバー= 100μm）と（D）の割合で管腔閉塞は、前者の内腔から新しい内部ルーメンを割ることによって計算されます。群間の差異は、ボンフェローニのポストホック検定で一元配置分散分析（ANOVA）によって評価しました。 P &lt;0.01。エラーバーは、標準偏差（SD）です。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54839/54839fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> _upload / 54839 / 54839Sup1.jpg &quot;/&gt; 補足ファイル1：手術手順の概略図。リネアの鼠径沿って縦切開を下腹壁静脈を露出させ、ドナーラットに対して行われます。血流が2つのマイクロクランプで止め、0.5-1.0センチ静脈セグメントが回収されます。レシピエントラットにおいて、メディアン大腿切開を大腿静脈、動脈、および神経を露出行われます。大腿動脈をクランプした後、血管セグメントを除去し、回収した静脈グラフトで置き換え。 <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54839/Vein_interpostition_3.pptx" target="_blank">補足ファイル1を見るにはこちらをクリックしてください（またはダウンロードするには右クリック）。</a>

Watch this Scientific Journal Video about Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency at JoVE.com

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

vein-interposition-model-suitable-model-to-study-bypass-graft

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K ビュー.  University Heart Center Hamburg. This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats. 

ビデオ: Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in peripheral arterial bypass surgery as well as in arteriovenous fistulas.1-5 The experimental procedure of vein graft interposition in the common carotid artery by using the cuff-technique has been applied in several research projects to examine the aetiology of neointimal hyperplasia and therapeutic options to address it. 6-8 The cuff prevents vessel anastomotic remodeling and induces turbulence within the graft and thereby the development of neointimal hyperplasia.
Using the superior caval vein graft is an established small-animal model for venous arterialization experiment.9-11 This current protocol refers to an established jugular vein graft interposition technique first described by Zou et al., 9 as well as others.12-14 Nevertheless, these cited small animal protocols are complicated.
To simplify the procedure and to minimize the number of experimental animals needed, a detailed operation protocol by video training is presented. This video should help the novice surgeon to learn both the cuff-technique and the vein graft interposition. Hereby, the right external jugular vein was grafted in cuff-technique in the common carotid artery of 21 female Sprague Dawley rats categorized in three equal groups that were sacrificed on day 21, 42 and 84, respectively. Notably, no donor animals were needed, because auto-transplantations were performed. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice. In addition, the graft patency rate was 60 % for the first 10 operated animals and 82 % for the remaining 11 animals. The blood flow at the time of sacrifice was 8&plusmn;3 ml/min. In conclusion, this surgical protocol considerably simplifies, optimizes and standardizes this complicated procedure. It gives novice surgeons easy, step-by-step instruction, explaining possible pitfalls, thereby helping them to gain expertise fast and avoid useless sacrifice of experimental animals.

Neointimal hyperplasia is the primary cause of stenosis in arterialized veins. We propose a new protocol whereby the right external jugular vein is grafted using the cuff technique in the common carotid artery of Sprague Dawley rats. The survival rate was 100 % at the time point of sacrifice.

ラットの総頚動脈で外頚静脈グラフトの介在：洗練された顕微鏡下手術の訓練

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

医学

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model creating an artificial fistula between the common carotid artery (CCA) and the external jugular vein (EJV) has been widely described and proved technically feasible. This construct provokes a consistent cerebral venous hypertension (CVH), and therefore has helped studying the contribution of venous hypertension to formation, clinical symptoms, and prognosis of brain AVMs and dural AVFs. Equivalent mice models have been only scarcely described and have shown trouble with stenosis of the fistula. An established murine model would allow the study of not only pathophysiology but also potential genetic therapies for these cerebrovascular diseases.
We present a model of arteriovenous fistula that produces a durable intracranial venous hypertension in the mouse. Microsurgical anastomosis of the murine CCA and EJV can be difficult due to diminutive anatomy and frequently result in a non-patent fistula. In this step-by-step protocol we address all the important challenges encountered during this procedure. Avoiding excessive retraction of the vein during the exposure, using 11-0 sutures instead of 10-0, and making a carefully planned end-to-side anastomosis are some of the critical steps. Although this method requires advanced microsurgical skills and a longer learning curve that the equivalent in the rat, it can be consistently developed.
This novel model has been designed to integrate transgenic mouse techniques with a previously well-established experimental system that has proved useful to study brain AVMs and dural AVFs. By opening the possibility of using transgenic mice, a broader spectrum of valid models can be achieved and genetic treatments can also be tested. The experimental construct could also be further adapted to the study of other cerebrovascular diseases related with venous hypertension such as migraine, transient global amnesia, transient monocular blindness, etc.

We describe a method for creating a reliable model of cerebral venous hypertension in the adult mouse. This model has been widely described and tested in the rat. This new counterpart in the mice opens the possibility of using genetic modified animals and thereby broadens the applications of the model.

成体マウス静脈性高血圧モデル：外頸静脈吻合部の総頸動脈。

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic lesions. Mouse models are an important tool to investigate inflammatory processes in atherogenesis, but these models suffer from the phenotypic and functional differences between the murine and human immune system. In vitro cell experiments are used to specifically evaluate cell type-dependent changes caused by a substance of interest, but culture-dependent variations and the inability to analyze the influence of specific molecules in the context of the inflammatory compound in atherosclerotic lesions limit the impact of the results. In addition, measuring levels of a molecule of interest in human blood helps to further investigate its clinical relevance, but this represents systemic and not local inflammation. Therefore, we here describe a plaque culture model to study human atherosclerotic lesion biology ex vivo. In short, fresh plaques are obtained from patients undergoing endarterectomy or coronary artery bypass grafting and stored in RPMI medium on ice until usage. The specimens are cut into small pieces followed by random distribution into a 48-well plate, containing RPMI medium in addition to a substance of interest such as cytokines or chemokines alone or in combination for defined periods of time. After incubation, the plaque pieces can be shock frozen for mRNA isolation, embedded in Paraffin or OCT for immunohistochemistry staining or smashed and lysed for western blotting. Furthermore, cells may be isolated from the plaque for flow cytometry analysis. In addition, supernatants can be collected for protein measurement by ELISA. In conclusion, the presented ex vivo model opens the possibility to further study inflammatory lesional biology, which may result in identification of novel disease mechanisms and therapeutic targets.

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process. This manuscript illustrates an easy to use ex vivo model to investigate fresh carotid or coronary artery plaques. The ex vivo model allows for the investigation of potential substances on the inflammatory milieu in human atherosclerotic lesions and results can be analyzed by various methods.

ヒューマン<em&gt;生体外</em&gt;動脈硬化性プラークのモデルは、病変生物学を研究する

Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the vasculature. There are various methods to study the inflammatory compound in atherosclerotic ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

マウスモデルにおける下大静脈介在移植の移植

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization and for minimizing organ damage resulting from prolonged extracorporal circulation. The goal of this paper was to demonstrate a fully functional and clinically relevant model of cardiopulmonary bypass in a mouse. We report on the device design, perfusion circuit optimization, and microsurgical techniques. This model is an acute model, which is not compatible with survival due to the need for multiple blood drawings. Because of the range of tools available for mice (e.g., markers, knockouts, etc.), this model will facilitate investigation into the molecular mechanisms of organ damage and the effect of cardiopulmonary bypass in relation to other comorbidities.

This paper describes how to perform cardiopulmonary bypass in mice. This novel model will facilitate the investigation of the molecular mechanisms involved in organ damage.

マウス モデルにおける心肺バイパス: 新しいアプローチ

As prolonged cardiopulmonary bypass becomes more essential during cardiac interventions, an increasing clinical demand arises for procedure optimization ...

Surgical Swine Model of Chronic Cardiac Ischemia Treated by Off-Pump Coronary Artery Bypass Graft Surgery

Chronic cardiac ischemia that impairs cardiac function, but does not result in infarct, is termed hibernating myocardium (HM). A large clinical subset of coronary artery disease (CAD) patients have HM, which in addition to causing impaired function, puts them at higher risk for arrhythmia and future cardiac events. The standard treatment for this condition is revascularization, but this has been shown to be an imperfect therapy. The majority of pre-clinical cardiac research focuses on infarct models of cardiac ischemia, leaving this subset of chronic ischemia patients largely underserved. To address this gap in research, we have developed a well-characterized and highly reproducible model of hibernating myocardium in swine, as swine are ideal translational models for human heart disease. In addition to creating this unique disease model, we have optimized a clinically relevant treatment model of coronary artery bypass surgery in swine. This allows us to accurately study the effects of bypass surgery on heart disease, as well as investigate additional or alternate therapies. This model surgically induces single vessel stenosis by implanting a constrictor on the left anterior descending (LAD) artery in a young pig. As the pig grows, the constrictor creates a gradual stenosis, resulting in chronic ischemia with impaired regional function, but preserving tissue viability. Following the establishment of the hibernating myocardium phenotype, we perform off-pump coronary artery bypass graft surgery to revascularize the ischemic region, mimicking the gold-standard treatment for patients in the clinic.

This protocol presents a surgical large animal model of chronic, single vessel ischemia that results in regional abnormalities but does not create infarct, known as hibernating myocardium. Following establishment of chronic ischemia, animals are treated with off-pump LIMA-LAD coronary artery bypass graft surgery to revascularize the ischemic tissue.

冠動脈バイパス移植手術によって治療慢性心筋虚血の外科豚モデル

Chronic cardiac ischemia that impairs cardiac function, but does not result in infarct, is termed hibernating myocardium (HM). A large clinical subset of ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, intimal hyperplasia, and atherosclerosis. The goal of this article is to demonstrate a method for placing bilateral venous interposition grafts in a rabbit, then transducing the grafts with a gene transfer vector that achieves durable transgene expression. The method allows the investigation of the biological roles of genes and their protein products in normal vein graft homeostasis. It also allows the testing of transgenes for the activities that could prevent vein graft failure, e.g., whether the expression of a transgene prevents the neointimal growth, reduces the vascular inflammation, or reduces atherosclerosis in rabbits fed with a high-fat diet. During an initial survival surgery, the segments of right and left external jugular vein are excised and placed bilaterally as reversed end-to-side common carotid artery interposition grafts. During a second survival surgery, performed 28 days later, each of the grafts is isolated from the circulation with vascular clips and the lumens are filled (via an arteriotomy) with a solution containing a helper-dependent adenoviral (HDAd) vector. After a 20-min incubation, the vector solution is aspirated, the arteriotomy is repaired, and flow is restored. The veins are harvested at time points dictated by individual experimental protocols. The 28-day delay between the graft placement and the transduction is necessary to ensure the adaptation of the vein graft to the arterial circulation. This adaptation avoids rapid loss of transgene expression that occurs in vein grafts transduced before or immediately after grafting. The method is unique in its ability to achieve durable, stable transgene expression in grafted veins. Compared to other large animal vein graft models, rabbits have advantages of low cost and easy handling. Compared to rodent vein graft models, rabbits have larger and easier-to-manipulate blood vessels that provide abundant tissue for analysis.

This method describes the placement of interposition vein grafts in rabbits, the transduction of the grafts, and the achievement of durable transgene expression. This allows the investigation of physiological and pathological roles of transgenes and their protein products in grafted veins, and testing of gene therapies for vein graft disease.

耐久性のある遺伝子発現により一般的な頚動脈移植に頸静脈の家兎モデル

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we demonstrate a murine cryoinjury infarct model that generates precise infarct sizes with high reproducibility and replicability. In brief, after intubation and sternotomy of the animal, the heart is lifted from the thorax. The probe of a handheld liquid nitrogen delivery system is applied onto the myocardial wall to induce cryoinjury. Impaired ventricular function and electrical conduction can be monitored with echocardiography or optical mapping. Transmural myocardial remodeling of the infarcted area is characterized by collagen deposition and loss of cardiomyocytes. Compared to other models (e.g., LAD-ligation), this model utilizes a handheld liquid nitrogen delivery system to generate more uniform infarct sizes.

This article demonstrates a model to study cardiac remodeling after myocardial cryoinjury in mice.

マウスの心筋梗塞を研究する凍結傷害モデル

The use of animal models is essential for developing new therapeutic strategies for acute coronary syndrome and its complications. In this article, we ...

A Rabbit Venous Interposition Model Mimicking Revascularization Surgery using Vein Grafts to Assess Intimal Hyperplasia under Arterial Blood Pressure

Although vein grafts have been commonly used as autologous grafts in revascularization surgeries for ischemic diseases, the long-term patency remains poor because of the acceleration of intimal hyperplasia due to the exposure to arterial blood pressure. The present protocol is designed for the establishment of experimental venous intimal hyperplasia by interposing rabbit jugular veins to the ipsilateral carotid arteries. The protocol does not require surgical procedures deep in the body trunk and the extent of the incision is limited, which is less invasive for the animals, allowing long-term observation after implantation. This simple procedure enables researchers to investigate strategies to attenuate the progression of intimal hyperplasia of the implanted vein grafts. Using this protocol, we reported the effects transduction of microRNA-145 (miR-145), which is known to control the phenotype of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from the proliferative to the contractile state, into harvested vein grafts. We confirmed the attenuation of intimal hyperplasia of vein grafts by transducing miR-145 before implantation surgery through the phenotype change of the VSMCs. Here we report a less invasive experimental platform to investigate the strategies that can be used to attenuate intimal hyperplasia of vein grafts in revascularization surgeries.

The present protocol aims to experimentally create venous intimal hyperplasia by subjecting veins to arterial blood pressure for developing strategies to attenuate venous intimal hyperplasia following revascularization surgery using vein grafts.

静脈移植を用いた血管形成術を模したウサギ静脈間位置モデルによる動脈血圧下の内膜過形成の評価

Although vein grafts have been commonly used as autologous grafts in revascularization surgeries for ischemic diseases, the long-term patency remains poor ...