著者は、ここで利用実験的組織を収集するための機会を提供するためのライアン·チャップリン、ケンタッキー肉ラボと動物と食品科学科の大学の博士グレッグRentfrowを認める。

全く生きた動物を使用しなかったため、この研究で使用した手順は、ケンタッキー州動物実験委員会の大学からの承認を必要としませんでした。本明細書中で使用される任意の試料の採取前に、すべての動物は、キャプティブボルトを唖然と放血させた。これは、ケンタッキー大学の連邦政府の検査食肉処理施設で行った。米国農務省食品安全検査局の公式代表がカーカスの生きた動物や取り扱いに対処するすべての活動を観察した。 計装の調製<ol><li>実験の開始に組織サンプルの収集の間の時間、セットアップ機材を最小限にし、（追加の人員が利用可能である場合、または、これらのタスクが同時に発生する可能性があります）は、実験の組織を収集する前にバッファを準備するには。 注：これは組織が実験を行うために生存し続ける時間の最大量を提供していますが、一部だけでなく、したがって、それが早くも実現可能なように使い始めることが通常望ましいが、実験が長時間にわたって実行することができます（または、一日に複数の実験を完了することが望まれている）。 </li><li>パワーアップに関連するコンピュータ、データ取得装置、水浴（バッファ（複数可）用）およびミオグラフユニット（複数可）。ミオグラフユニット（複数可）上で校正装置を配置し、温度をプリセットに温めユニットと校正装置を（37.5℃にプリセット）ミオグラフ熱をオンにして可能にします。 <ol><li>コンピュータ上で以前に作成したグラフのソフトウェアの設定ファイルを開き、実行を開始する（ただし、データを取得していない）。 </li></ol></li><li> 10分のための機器をウォームアップ。 <ol><li>データの取得を開始します。 </li><li>ゼロすべてのチャンネル。 </li><li>確認し、認定された重量によって供給された2-G力に、そのチャンネルに関連するそれぞれの力変換器から供給される電気信号を標準化するために、各チャネル（multimyographあたり4チャネル）上で（必要な場合）、キャリブレーションを実施しています。 </li><li>キャリブレーションと単位変換後のグラムとして、後続のすべてのデータを格納する、完成されている。各個別の研究室の要望に基づいて、それに応じて変更します。機器およびソフトウェアは、ミリニュートンやボルトのような他のユニットの使用を可能にする。 </li></ol></li><li>ガスラインは、閉塞の明確であることを確認し、（複数の）単位をミオグラフへのガス供給（95％O 2/5％CO 2）をオンにします。継続的に全体の手順の間（ミオグラフチャンバー内の）すべてのバッファをガス。 </li><li> 70％エタノールですべてミオグラフチャンバーを記入し、10分間浸し、エタノールを除去し、ソーク第10分間繰り返します。 <ol><li>エタノールを除去した後、チャンバ内のバッファの第三の加算を残して、準備されたバッファ（バッファを調製するための第2節を参照）で3回リンスに続いて脱イオン水で3回リンス。 注：バッファおよび組織が準備されるまで、この時点で機器がこの状態のアイドル状態を維持することができ、スタッフはexperimenを続行する準備ができているトン。 </li></ol></li></ol>バッファの調製<ol><li> 11.1 mMのD-グルコースの最終濃度を達成するために、組織サンプルの輸送および処理に使用するための1 Lクレブス - ヘンゼライト緩衝液を準備し; 1.2 mMの4を硫酸マグネシウム; 1.2mMのKH 2 PO 4; 4.7のKCl; 118.1のNaCl; 3.4のCaCl 2; 24.9のNaHCO 3。 <ol><li>撹拌プレート上に約900ミリリットルの脱イオン水にクレブス塩9.6グラムを混ぜる。 </li><li>必要なバッファー1L当たり2.1グラムの重炭酸ナトリウムに続いて0.373グラムの塩化カルシウム水和物で混ぜる。 </li><li> 95％O 2/5％CO 2で20分間ガス緩衝液。 </li><li> L.及び1に音量を調節;ガス処理後、7.05のpHを調整（最終目標pHは7.4であるべきバッファの濾過は、pHを増加させる） </li><li>フィルターは使用するまで4℃でクリーンなオートクレーブ処理1 L培地ボトルとストアバッファにバッファを滅菌する。 </li></ol></li><li>独立したクレブス-Hを準備ミオグラフ実験で使用するためのenseleit緩衝溶液収縮実験に関連する追加の化合物との交通クレブス - ヘンゼライトバッファにステップ2.1で説明したように。 注：一般的に、2Lは、この資料に記載された実験のために十分であろうが、このボリュームは、実験の長さに基づいて増減する必要があるかもしれない、ミオグラフ室の数、および（治療の追加に関して）番号バッファの交換。 <ol><li>ガス発生段階（ステップ2.1.3）の前に、バッファリングするデシプラミン塩酸の9.1 mgの（バッファ1L当たり準備中）を追加します。 </li><li>プロプラノロール塩酸1.0μMの溶液を調製し、クレブス - ヘンゼライト緩衝溶液にこの溶液（バッファー1L当たり準備中）1ミリリットルを追加します。利用当日にこのバッファを作成し、ミオグラフ動作温度（ミオグラフに37.5℃の温度が得温度）で維持する。 NOTE：デシプラミンは、生体アミンの再取り込み機構を阻害するために添加されそしてより急速に起こることが、血管の入浴バッファからの実験の追加のクリアを可能にする。プロプラノロールの追加は、βアドレナリン受容体をすることが、治療化合物の非特異的結合を防ぐことができます。 </li></ol></li></ol>血管系の3。収集と準備<ol><li>できるだけ早く、死体からの消化管を取り外します。動物はもはや不随意反射を呈すると、頭を削除せず、非表示にしてから縦にカーカスを上げる。死体からの胃腸内臓（肛門まで食道）の除去は、（素晴らしい時から&lt;20分）承認された食肉処理場の担当者が完了する必要があります。 注：どのくらいで、一般的に腸管から採取し、標準作業手順や施設の担当者に続いて連邦政府が義務付け手続きされている場所/施設によって制限されます。 <ol><li>ほとんどの施設では、消化管の操作を行って食料供給を入力するように運命づけられているカーカスの処理とは別の場所にある。消化管を採取し、検査のために展開することができ、近くの便利な場所に使用します。 </li></ol></li><li>消化管が広げられると、小腸、盲腸に小腸を接続回盲倍、回盲倍（ 図1A）の近位に延びる回腸フランジを識別する。 <ol><li>メスまたはナイフを使用して、非常に軽く回腸フランジの中心部にある腸間膜膜に切開する。 2つのインデックスの指を使って、ぶっきらぼうに腸間膜血管系（ 図1B）を露光脂肪および結合組織を離れて解剖。 </li></ol></li><li>腸間膜内のこのフランジまたは膨らみから、回腸（ 図1C）のこの部分をサポートして露出した腸間膜動脈と静脈の束の複数のブランチ（長さ約2センチ）を解剖する。 <ol><li> uの場合は組織を把持する鉗子を歌う、直接把握したり損傷し、否定的に組織のパフォーマンス14に影響を与え得るストレッチの任意の並べ替えとして、それらを除去しながら、全くの血管を引っ張らないように注意してください。血管除去が最良除去すべき部分のそれぞれの端を横断してから、今孤立セクションに沿って配置したり、平行に切断することによって、行われます。簡単にするために、ピンセットで把握するいくつかの組織を提供するために、船と一緒に周囲の組織の一部を削除。 </li><li>ピンセットで、氷冷クレブス - ヘンゼライト緩衝液を含むチューブ内に組織サンプルを沈め、処理が、実験室で発生する可能性まで氷上で保存する。 </li></ol></li><li>切断面やペトリ皿に組織サンプルを配置し、部分的に氷冷クレブス - ヘンゼライトに水没。 <ol><li>スコープ＃5宝石商鉗子、ノイスアイリスはさみを使用して、ランプを拡大または解剖、慎重に周囲の脂肪とconnectiを離れて解剖（5.0X倍率に2.5で十分です）組織をVEの動脈と静脈を分離する。部分の一端で容器開口部を特定し、慎重に鉗子で血管の周囲の筋膜を把握する。 </li><li>ハサミでカットが提起筋膜の下にはさみの先端をスライドさせて、容器に平行にしてください。最初の切開の後、脂肪および結合組織をさらにハサミでいずれかの側を下に切断することによって容器から取り外すことができる。血管がベンチに費やす時間の量を最小限に抑えながら、船は、可能な限りクリーンであることを確認します。 </li><li> （サンプルは採取後、最大24時間保存され、まだ有効な収縮データを作成されたまますることができます）、4℃で新鮮なクレブス - ヘンゼライトバッファとストアのチューブに血管を返します。 </li><li>カミソリの刃を使用して、スライス容器は2mmの断片の所望の数にミオグラフに使用する（これは、一貫した断面を得るために、組織スライサーを使用すると便利である）。 </li><li>解剖SCOの下で、各セクションを調べますPE（12.5X倍率）は、各セクションが誤って解剖し、洗浄中に行わない異常、枝、バルブ、あるいは表面的な損傷がないことを確認します。異常、支店、バルブ、あるいは表面的な損傷がある場合には、血管部分を交換してください。 </li></ol></li><li> （クレブス - ヘンゼライト緩衝液中に沈め）お店許容可能なスライス血管セクション氷の上または4℃でミオグラフ室（通常は&lt;30分）に取り付ける直前まで、。 </li><li>静かに2〜3グラムの読みの上血管を伸ばさないように注意しながら（ミオグラフにマイクロポジショナーを使用して）管腔を通って支柱を挿入することによりミオグラフに容器をマウントし、緊張を高める。 </li><li>すべてのチャンバが覆われると、全てのチャンバからバッファ真空とバッファの5.0ミリリットルを補充し、平衡期間、実験を開始するために、15分のタイマーを開始する。 </li></ol> 4。実験<ol><li>安定した解像度を達成するために1.5時間、すべての血管のセクションを平衡化1.0グラムのティン張力。 <ol><li>クレブス - ヘンゼライトインキュベーション緩衝液を15分毎に交換してください。 </li><li>平衡時には、常に2グラムまでの血管セクションの張力を調整した後、約0.80グラムまで緩和することを可能にする。血管が（彼らはマウントを滑り落ちる場合があります）あまりリラックスすることができないようにしてください。容器は、調整を必要とせずに1グラム張力を保持している安定したベースラインの張力を達成してみてください。 </li></ol></li><li>平衡時には、基準となるのKCl水溶液1.32 M溶液を調製。 </li><li>満足な平衡が完了した後、容器の入浴5.5ミリリットル溶液中の0.12モル溶液をもたらすと1.32 MのKCl溶液500μlを加える。 <ol><li>この添加から最大応答は、組織の生存率を評価するために使用され、治療データを正規化するために使用することができるように1.32 M KClを添加した後、a側に（手動で例えば、濃度応答の張力を調節しないgonist）。 </li><li>張力が1.0グラムのベースライン値に戻るまで15分間隔でバッファを交換してください。 </li></ol></li><li>ベースラインに到達すると、バッファを変更すると同時に、1分タイマーを開始する。開始時間の驚異を回避するために、同時に全てのチャンバのためにこれを行います。 <ol><li>追加される標準をボルテックスし、1分間のカウントダウン中にチャンバ1のコメントを準備します。 </li><li> （これは全体積の0.5％以下の治療を続ける）実験おもむくまま、各チャンバーに25μlのアリコートに基準を追加します。 </li><li>最後の規格が追加されている場合には、9分タイマーを開始します。 </li><li> 9分、標準インキュベーションの最後に、チャンバーから治療を含む緩衝液を除去し、新鮮な緩衝液5.0mlのを追加し、2.5分タイマーを開始します。 </li><li>繰り返し手順4.4.4。 </li><li>第2.5分すすぎの最後に、チャンバーを真空、新鮮な緩衝液を追加し、seconの開始をカウントダウンするために1分間のタイマーを開始dの標準添加。 </li></ol></li><li>一日の標準添加のすべてについて、このサイクルを繰り返します。 </li><li>最終基準の添加およびその後の9分間のインキュベーションの間に500μlに実行参照用量添加の終わりのための1.32 MのKCl参照化合物を準備します。 </li><li>最終処理を添加した後1分間隔の後に、塩化カリウムを追加し、9分タイマーを開始します。 注：塩化カリウムの添加は、実験の終了時に組織生存を確認することであり、無視できる応答をもたらす治療を施す場合に便利です。 </li><li>最後の9分間の参照化合物のインキュベーションの終了時に、真空またはチャンバーのすべてのバッファを削除します。新鮮なバッファーを追加しないでください。実験を締結。 </li><li>チャートファイルを保存し、血管のセクションを削除し、適切に処分する、とミオグラフ機器にクリーンアッププロトコル（製造業者によって提供され、実験室に特異的であり得る）に従う。 </li></ol>

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商品名、独自の製品、または指定された機器に関する記述は、米国農務省が保証または保証するものではありませんし、利用可能である他の製品を除外して承認を意味するものではありません。

このバイオアッセイの開発における最初の課題は、腸間膜血管系のための反復可能な収集場所の設立だった。回腸を通じて空腸からの進行の間の小腸の変化と、その結果腸間膜の機能のいくつかは同じようなパターンで変化するように、サンプルサイトの一貫性は、非常に重要です。腸間膜動脈と静脈の回腸枝は最も容易に解剖学的なランドマークを介して同定された。盲腸の位置を特定し、腸間膜の左側に、その末端に回盲倍以下では、これは頭蓋腸間膜動脈15の終端付近である。長い間膜の面積はと回盲倍の延長（ウシ動物に特有の）非常に再現性の非常に多くの動物間で16からなるサンプリング（フランジと呼ばれる）。することができ、より大きな落とし穴の一つは、バイオアッセイのこの段階にある。機械的伸張は、その後の血管p上の大きな負の影響を与えているerformance 14と研究者が過度に除去し、その後の洗浄中に操作したり引き伸ばされ血管が使用されている基準化合物に応答しないことがわかります。これは残念ながら、真に機能レベルで信頼性の高いデータの生成にさらに考慮されるべきではないのKClに応答しない船舶での血管の準備の品質を評価する唯一の方法です。 本明細書に提示最後の方法につながった他の二つの方法の検証ステップ（図示せず）を基準化合物のような他の化学物質の使用であり、24時間保存後の血管の生存能力を試験する。ノルエピネフリンおよびセロトニンは、参照化合物として評価が、それらを正常に使用するための腸間膜動脈と静脈による応答は、船種間や動物間であまりにも変数であった。逆に、120mMのKClを添加すると、両方の動脈と静脈の製剤全体で非常に再現性のある応答を生じた。 ALSOは、動脈と静脈の応答は、コレクションの日を評価し、24時間後に収集を再評価し、動脈または静脈のいずれかにより、アゴニスト応答に差は認められなかった。そこに適用することができる治療（またはさま​​ざまな治療の組み合わせ）が多数あることが多いが、研究者ミオグラフと時間上のスペースによって制限され、これは、バイオアッセイの重要な側面であった。コレクションから24時間から生存性の期間を延長することにより、さらなる実験のための時間が大幅に増加する。 研究者は、このバイオアッセイに適用される治療構造の柔軟性を理解することが重要である。研究者は、クロッツらの場合には、彼または彼女が慢性的に生物学的関連性のあるものを制御するために、または治療として血管を露出させることに興味があり、インキュベーション緩衝液に任意の化合物を（追加できる。17は 、これを用いて行った継続的にKEにさらさ横伏在静脈興味のあるセロトニン受容体に拮抗tanserin、）。腸間膜血管収縮応答実験を行う前に目的の化合物で前処理することができる。バイオアッセイは、提示され、アゴニストとしておよび血管反応18に影響を与えた麦角アルカロイドの前に食事暴露かどう麦角アルカロイドを見て、累積濃度応答実験を行うために設計されました。代表的な結果は、この方法は、測定可能な血管応答を生成することができるだけで4つの濃度は、これを達成するために使用されたことを示している。 Egert ら 18の場合には、応答曲線を構築するために使用される最大10の異なる濃度であった。この方法は、時間の小さなウィンドウに単一の動物とは異なる化合物または血管に対する受容体の大きな数を評価する方法です。

組織床への血流の変化は、臓器の機能に大きな影響を持つことができる。小腸の主な機能は、栄養吸収である。腸の吸収面への動脈血流が面1に沿って移動する消化物として栄養吸収を助けるために、栄養吸収、血液の流れが増加するために必要とされる。血流の減少は、経上皮勾配2の減少に栄養吸収の低下を引き起こす可能性がある。栄養素に加えて、小腸はまた、腸間膜における局所血流量に対して効果を発揮する二次代謝産物、薬物、または毒素に曝露することができる。反芻動物の場合、化合物は、前腸の発酵過程を経て飼料（例えば、アミノ酸、またはそのような麦角アルカロイドなどの毒素として、例えば 、栄養素）から遊離させることができる。これらの化合物は第一胃発酵の微生物代謝を生き残るならば、彼らは今、吸収のために利用可能であるまたは相互作用それらは動物の胃腸管を通過する。 in vivoでの血流を測定するために利用可能多くの異なる方法がある（ 例えば 、ドップラー超音波、血液流量計、放射性標識ミクロスフェア、およびインジケータ希釈技術留置）は、さまざまな実験的なシナリオまたは治療の評価を可能にする。 Mulvanyおよびアルペルン3は、ワイヤを用いる技術を記載する物品はミオグラフにおける血管リング標本をマウント公開までは、血管平滑筋の機械的または薬理学的特性に関する情報を得るためには、この方法は、大きな血管に制限されなかった。この技術の開発以来、改変は、管状構造を評価するためのさまざまなアプリケーションを可能に関連付けられたミオグラフシステムに対して行われ続ける。システムはまた、ここで灌流大きな血管4を取り付けるための固定されたロッドを利用するように適合されている技術が望まれていません。 容器や動物型とは異なる動物の種、データから同じ血管内の異なる解剖起源との区別から血管内の非類似性のなので簡単に別の容器又は異なる動物タイプ5で同じ容器全体に外挿することはできない。このため、個別のバイオアッセイを開発し、これらの側面を変更した、いつでも検証する必要があります。最近、いくつかのバイオアッセイは、牛の横伏在静脈と右第一胃動脈と静脈6,7で使用するためのこれらの技術で開発されてきた。 このバイオアッセイは、麦角アルカロイドが小腸を支える血管系に与える具体的影響を調査するために開発されました。これは、供給アルカロイドの50〜60％が第四胃の内容に表示されることが報告されたが、わずか5％が糞8で回収される。ストリックランドら 9は 、麦角アルカロイドのレビューで、その利用可能なデータsuggを表明ESTは、小腸はergopeptine吸収のための最も重要な部位であり得ること。エッカートら麦角アルカロイドの10件のバイオ医薬品の態様およびそれらが上皮関門を通過後は、麦角アルカロイドが鎖骨下静脈または腸間膜静脈と門脈血液中にリンパ系のいずれかによって輸送されると述べた。ローズら 11は、高エンドファイト感染（高麦角アルカロイド）の食事を消費する去勢牛十二指腸、大腸への血流の減少を報告した。右第一胃動脈と静脈バイオアッセイを用いて、フットら 12は、麦角アルカロイドは、第一胃血管系内の血管作動性であることを実証した。フットら 13は、続いて、in vivoで実証し減少し、第一胃上皮の血流の麦角アルカロイド結果と第一胃の暴露。第一胃の吸収面への血流の減少は、同時に栄養（揮発性脂肪酸）フラックスの減少を引き起こした。屈原を考える前腸から小腸への継承麦角アルカロイドのantity;それは小腸血管系および栄養吸収に対する同様の効果が発生するという仮説が立てられた。これはウシの近位回腸腸間膜動脈と静脈バイオアッセイの開発を必要とした。

<table><tbody><tr><td>Multi Myograph</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>610M</td><td>A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Powerlab 8/sp</td><td>ADIntruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>LabChart 7</td><td>ADInstruments</td><td>Version 7</td><td></td></tr><tr><td>Force Calibration Kit</td><td>Danish Myo Technologies</td><td>100055</td><td>Specific to DMT myographs</td></tr><tr><td>Bottle-top Filter</td><td>Nalgene</td><td>595-4520</td><td>0.22 &amp;#956;m pore size; 45 mm neck size</td></tr><tr><td>#5 Jewler&amp;rsquo;s Forceps</td><td>Miltex</td><td>555008FT</td><td>Any brand of forceps can be used</td></tr><tr><td>Noyes Iris Scissors</td><td>Miltex</td><td>18-1510</td><td>Any brand of scissors can be used</td></tr><tr><td>Dissecting Scope</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C</td><td>Any brand of dissecting light microscope will suffice</td></tr><tr><td>Adjustable Tissue Matrice</td><td>Braintree Scientific</td><td>TM C12</td><td>This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly</td></tr><tr><td>Krebs-Hensleit Buffer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K3753-10x1L</td><td>It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house</td></tr><tr><td>Calcium chloride dehydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Desipramine-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3900-5G</td><td></td></tr><tr><td>Propranolol-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0884-1G</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>95% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;/5% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Scott Gross</td><td>UN3156</td><td></td></tr></tbody></table>

isolating and using sections of bovine mesenteric artery and vein as a bioassay to test for vasoactivity in the small intestine

哺乳類の胃腸システムが常にそのシステムへの及びからの血流に影響を与えることができる化合物（望ましい、望ましくない）にさらされている。小腸への血流の変化は、臓器の吸収機能への影響をもたらすことができる。発酵や消化過程を経て飼料から遊離する毒素に特に興味が生産的な効率を向上させることができる領域として反芻動物で開発しました。この記事に関連したビデオは、ウシ腸間膜動脈の単離断面の中で血管作用およびmultimyographを使用して静脈化合物をスクリーニングするために開発されたインビトロバイオアッセイを説明しています。血管が取り付けられ、ミオグラフで平衡化されると、バイオアッセイ自体を使用することができる。収縮反応または関心のある化合物の血管作用を評価するためのスクリーニングツールとして;薬理学的に特異的アゴニストでの受容体を標的とすることにより、受容体の種類の存在を決定するS;一つ以上のアンタゴニストの存在と受容体の役割を決定する。またはアンタゴニストで目的の化合物の潜在的な相互作用を決定する。このすべてを介して、データをリアルタイムで収集され、単一の動物から採取した組織は、異なる実験処理多数の（in vitroでの利点）に曝露し、かつ正確に提供するために毛細血管床の両側に脈管構造を表すことができ小腸をサポートする求心性と遠心性の血液供給で何が起こって何ができるかの絵。

含まれる結果を生成するために使用される血管は、3週間の間隔内で6ホルスタインの去勢牛（425±8キロ）から収集した。 KClおよび濃度の増加の治療の追加の典型的な腸間膜静脈収縮反応の例は、応答の大きさは、（ドナー動物の大きさと相関する）を容器のサイズに一部変化する。 図2に提示するだけでなく、缶れる回収·洗浄中に血管の（延伸）不適切な取り扱いによって（負に）影響される。したがって、KClに対する血管の曝露において有意な収縮反応を観察することが重要である。ごくわずかな応答が、この時点で観測されている場合は、その容器とプロシージャにこれ以上進むことはお勧めできません。 図2の9分のインキュベーション期間に見られるように、増加する濃度に対応する応答して増分増加がある。この粒子フィルタにとって望ましいもののウラル実験計画、それは常に発生していないか、他の治療と引っ張りだこする。収集されたデータの処理に使用されていないが、容​​器はいずれにも応答しない場合には（実験期間の終了時に組織の生存を確認し、より重要になると、実験の終了時にKClを添加は、非常に重要であり、治療加算）。 図2に示されるデータは、緊張のグラム単位で記録されている。これは、任意の動物から動物および血管への血管の変化を最小限に抑えるために、これらのデータを正規化することが重要である。したがって、生存能力の指標として使用されることに加えて、最大のKCl応答は、処置の追加の全てを正規化するために使用される。これは、KClの最大値のパーセンテージとして収縮応答データを生成する。これは5ヒドロキシトリプタミンの濃度の増加にどのように腸間膜動脈と静脈の応答曲線である（セロトニン; 図3）、ノルエピネフリン（ <strオング&gt;図4）は提示されている。これらの図のデータは、非線形回帰を用いてシグモイドフィット濃度応答曲線であった。 5 -ヒドロキシトリプタミン（ 図3）とノルエピネフリン（ 図4）の両方に腸間膜静脈応答は、負の値を開始しました。これは、初期のKClの添加前に記録されたベースラインテンションによって各9分間のインキュベーション期間中に記録された最大張力を補正した結果である。このベースライン補正は、張力のわずかな差異が分析に含まれたデータは、張力の変化のみを反映することを可能にしていないことを保証します。血管が弛緩し、次の処理を添加する前に予備のKClベースラインレベルを下回ることから、負の値をもたらす。これは治療またはアゴニストの初期濃度は、収縮反応を引き起こすには低すぎる静脈のサンプルで特に一般的です。これは私にとってそうではありませんでした<html>容器は、治療の追加に反応し始めるまでベースラインより上の緊張を開催し、生体アミン、のいずれかにsenteric動脈応答。この違いは、毛細血管床の両側の船の違いを例示し、なぜ彼らは共に、このバイオアッセイの一部と考えられていた。 このバイオアッセイは、小腸ならびに離れて小腸から吸収された栄養素を運ぶ血管に栄養を供給する血管に対する化合物の血管作用を評価するために使用することができる。 図3および図4のデータは、これが達成され得る方法の簡単な例である。 5 -ヒドロキシトリプタミン（ 図3）の場合には、動脈または静脈の収縮反応の差は無かった。逆に、ノルエピネフリンの濃度を増加する腸間膜静脈による収縮反応は、腸間膜動脈のそれよりも大きかった。 グレ1 &quot;FO：コンテンツ幅=&quot; 3インチ &quot;SRC =&quot; /ファイル/ ftp_upload / 52020 / 52020fig1highres.jpg &quot;幅=&quot; 300 &quot;/&gt; 図1：腸間膜血管の供給源として用いウシ腸管の例は、赤いアスタリスクは、基準点として全ての3つのペインで回盲倍の可視部分を示している。 （A）は血管系のサンプリングが発生した回腸フランジを示す赤い楕円形で全体の道。 （B）腸間膜血管床の暴露。 （C）アイリスはさみは腸間膜静脈（可視）と動脈（見えない）コレクションの直前の露出ブランチの方を向いている。 <img alt="図2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig2highres.jpg" width="500" /> 図2：ノルエピネフリンの濃度の増加に腸間膜静脈の濃度応答の例 （1×10 -7〜1×10 -4 M）。トレースの最初と最後に大規模なイベントは、0.12MのKClの追加への対応である。赤色の四角形は、各治療付加のための9分のインキュベーション期間に対応するデータ収集領域を意味する。これをたどる3細いスパイクは、バッファの交換によって生成されたアーティファクトであり、分析には含まれていません。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52020/52020fig2highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig3highres.jpg" width="500" /> 図3：腸間膜動脈（MA）および静脈（MVはn = 6去勢）の収縮反応の平均5 -ヒドロキシトリプタミン（セロトニン）の増加する濃度に示すラインがS字状にデータを適合するために、非線形回帰分析を使用して生成された。濃度R次式利用esponse曲線：[ - /（1 + 10（logEC 50 - x））の （天地）] Y =ボトム+、上部と下部がプラトーで120のKClの最大収縮応答のパーセンテージであり、そしてEC 50は、KClの最大応答の50％を産生するアルカロイドのモル濃度である。 <img alt="図4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52020/52020fig4highres.jpg" width="500" /> 図4：腸間膜動脈（MA）および静脈（MVはn = 6去勢）の収縮反応の平均ノルエピネフリンの濃度の増加に示される行を利用し、S字状濃度応答曲線をデータに合わせて、非線形回帰分析を使用して生成された。次の式：Y =ボトム+ [（トップ-ボトム）/（1 + 10（logEC 50 - X））]、上部と下部が120のKCl最大cの割合であるプラトーでの応答ontractile、及びEC 50は、KClの最大応答の50％を産生するアルカロイドのモル濃度である。

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Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

小腸は、しばしば、血流に影響を与える負栄養吸収に影響を与える可能性が毒素に暴露される。 multimyographおよび腸間膜動脈および静脈の分離株を使用して、目的の化合物または毒素は、血管作用についてスクリーニングすることができる。

バイオアッセイとしてウシ腸間膜動脈と静脈の切片を分離して使用すると、小腸で血管作用をテストするために

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

isolating-using-sections-bovine-mesenteric-artery-vein-as-bioassay-to

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.7K ビュー.  USDA-Agricultural Research Service. 小腸は、しばしば、血流に影響を与える負栄養吸収に影響を与える可能性が毒素に暴露される。 multimyographおよび腸間膜動脈および静脈の分離株を使用して、目的の化合物または毒素は、血管作用についてスクリーニングすることができる。 

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Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

医学

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic response is a key regulator of local blood flow. In isobaric conditions small resistance arteries develop sustained constriction known as myogenic tone (MT), which is a major determinant of systemic vascular resistance (SVR). Hence, ex vivo&#160;pressurized preparations of small resistance arteries are major tools to study microvascular function in near-physiological states. To achieve this, a freshly isolated intact segment of a small resistance artery (diameter ~260 &#956;m) is mounted onto two small glass cannulas and pressurized. These arterial preparations retain most in vivo characteristics and permit assessment of vascular tone in real-time. Here we provide a detailed protocol for assessing vasoactivity in pressurized small resistance mesenteric arteries from rats; these arteries develop sustained vasoconstriction - approximately 25% of maximal diameter - when pressurized at 70 mmHg. These arterial preparations may be used to study the effect of investigational compounds on relationship between intra-arterial pressure and vasoactivity and determine changes in microvascular function in animal models of various diseases.

Pressure myography is used to assess vasoactivity of small arteries that develop sustained constriction when pressurized. This manuscript provides a detailed protocol to assess in isolated segments of small mesenteric arteries from rats, vasoactivity and the effect of intraluminal pressure on vascular diameter.

圧力筋運動記録法を用いた抵抗腸間膜動脈における筋原性応答および血管作用を評価します

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

ex vivoで腸嚢は、胃腸疾患のモデルに粘膜透過性を評価するために

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in vivo [see review papers], which is the dominating form of angiogenesis in human tumors and non-tumor 
tissues, as discussed in invited review papers1,2. Angiogenesis induced in the membranous mesenteric parts by intraperitoneal (i.p.) injection of a pro-angiogenic factor can be modulated
by subcutaneous (s.c.), intravenous (i.v.) or oral (p.o.) treatment with modifying agents of choice. Each membranous part of the mesentery is 
translucent and framed by fatty tissue, giving it a window-like appearance.
The assay has the following advantageous features: (i) the test tissue is natively vascularized, albeit 
sparsely, and since it is extremely thin, the microvessel network is virtually two-dimensional, which allows the entire network 
to be assessed microscopically in situ; (ii) in adult rats the test tissue lacks significant physiologic angiogenesis, which characterizes
 most normal adult mammalian tissues; the degree of native vascularization is, however, correlated with age, as discussed in1; 
(iii) the negligible level of trauma-induced angiogenesis ensures high sensitivity; (iv) the 
assay replicates the clinical situation, as the angiogenesis-modulating test drugs are administered systemically and the responses 
observed reflect the net effect of all the metabolic, cellular, and molecular alterations induced by the treatment; (v) the assay 
allows assessments of objective, quantitative, unbiased variables of microvascular spatial extension, density, and network pattern 
formation, as well as of capillary sprouting, thereby enabling robust statistical analyses of the dose-effect and molecular 
structure-activity relationships; and (vi) the assay reveals with high sensitivity the toxic or harmful effects of treatments in 
terms of decreased rate of physiologic body-weight gain, as adult rats grow robustly.
Mast-cell-mediated angiogenesis was first demonstrated using this assay3,4. The model demonstrates a high level of 
discrimination regarding dosage-effect relationships and the measured effects of systemically administered chemically or functionally closely related drugs and proteins, 
including: (i) low-dosage, metronomically administered standard chemotherapeutics that yield diverse, drug-specific effects (i.e., 
angiogenesis-suppressive, neutral or angiogenesis-stimulating activities5); (ii) natural iron-unsaturated human lactoferrin, which stimulates 
VEGF-A-mediated angiogenesis6, and natural iron-unsaturated bovine lactoferrin, which inhibits VEGF-A-mediated angiogenesis7; and (iii) 
low-molecular-weight heparin fractions produced by various means8,9. Moreover, the assay is highly suited to studies of the combined 
effects on angiogenesis of agents that are administered systemically in a concurrent or sequential fashion.
The idea of making this video originated from the late Dr. Judah Folkman when he visited our laboratory and witnessed the methodology being demonstrated.
Review papers (invited) discussing and appraising the assay
Norrby, K. In vivo models of angiogenesis. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Drug testing with angiogenesis models. Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).

Normal adult vascularized mammalian tissue that lacks physiologic angiogenesis and that has not been exposed to surgical intervention is used to study: (i) the initiation and development of angiogenesis following intraperitoneal administration of test agents; and (ii) modification of angiogenesis following systemic administration of selected test agents.

ラット間膜の血管新生アッセイ

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

生物学

Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA cannulation is more difficult in rats due to small anatomical dimensions. The aim of the study is to describe a surgical technique for cannulation of the SMA in rats to perform long-term infusion of drugs into the SMA vascular bed in unrestricted animals, which will result in a high rate of catheter patency after the post surgical recovery for 24 hours. 
To avoid the risk of SMA thrombosis or bleeding from direct access, a proximal branch of the SMA is isolated, ligated distally and cannulated with a 0.25 mm polyurethane capillary tube whose tip is advanced close to the origin of the SMA from the aorta. The cannula is then tunnelled subcutaneously to the back of the animal's neck and through the skin via an artificial valve. The external portion of the cannula is inserted in a semi-rigid support system and connected to the continuous infusion pump outside the cage where the rat is free to move. 
Correct positioning of the cannula was demonstrated by post-surgical angiography and autopsy findings. Catheter patency after 24 hours of saline infusion into the SMA region was assured in most rats by the total discharge of the pump and recognition of a functional cannula for blood sampling or saline infusion.

Access for long-term infusion in the superior mesenteric artery (SMA) of rats is a surgical procedure that consists of cannulation of a proximal branch of the SMA. The cannula exits from the abdominal wound and is tunneled through the subcutaneous space back to the interscapular fold.

ラットの小腸を標的とする:上腸間膜動脈への長期注入

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA ...

生物工学

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other vessels), and describes techniques for evaluating tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry (LDF) and microvessel density utilizing fluorescently labeled Griffonia simplicifolia (GS1) lectin. Current methods for studying isolated resistance arteries at transmural pressures encountered in vivo and in the absence of parenchymal cell influences provide a critical link between in vivo studies and information gained from molecular reductionist approaches that provide limited insight into integrative responses at the whole animal level. LDF and techniques to selectively identify arterioles and capillaries with fluorescently-labeled GS1 lectin provide practical solutions to enable investigators to extend the knowledge gained from studies of isolated resistance arteries. This paper describes the application of these techniques to gain fundamental knowledge of vascular physiology and pathology in the rat as a general experimental model, and in a variety of specialized genetically engineered &#34;designer&#34; rat strains that can provide important insight into the influence of specific genes on important vascular phenotypes. Utilizing these valuable experimental approaches in rat strains developed by selective breeding strategies and new technologies for producing gene knockout models in the rat, will expand the rigor of scientific premises developed in knockout mouse models and extend that knowledge to a more relevant animal model, with a well understood physiological background and suitability for physiological studies because of its larger size.

This manuscript describes in vitro video microscopy protocols for evaluating vascular function in rat cerebral resistance arteries. The manuscript also describes techniques for evaluating microvessel density with fluorescently labeled lectin and tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry.

分離抵抗性ラットの動脈のビデオ顕微鏡を用いた血管制御機構の評価

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Contraction or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries determines the artery diameter and thereby controls flow of blood through the vessel and contributes to systemic blood pressure. The contraction process is regulated primarily by cytosolic calcium concentration ([Ca2+]cyt), which is in turn controlled by a variety of ion transporters and channels. Ion channels are common intermediates in signal transduction pathways activated by vasoactive hormones to effect vasoconstriction or vasodilation. And ion channels are often targeted by therapeutic agents either intentionally (e.g. calcium channel blockers used to induce vasodilation and lower blood pressure) or unintentionally (e.g. to induce unwanted cardiovascular side effects).
Kv7 (KCNQ) voltage-activated potassium channels have recently been implicated as important physiological and therapeutic targets for regulation of smooth muscle contraction. To elucidate the specific roles of Kv7 channels in both physiological signal transduction and in the actions of therapeutic agents, we need to study how their activity is modulated at the cellular level as well as evaluate their contribution in the context of the intact artery.
The rat mesenteric arteries provide a useful model system. The arteries can be easily dissected, cleaned of connective tissue, and used to prepare isolated arterial myocytes for patch clamp electrophysiology, or cannulated and pressurized for measurements of vasoconstrictor/vasodilator responses under relatively physiological conditions. Here we describe the methods used for both types of measurements and provide some examples of how the experimental design can be integrated to provide a clearer understanding of the roles of these ion channels in the regulation of vascular tone.

Measurements of Kv7 (KCNQ) potassium channel activity in isolated arterial myocytes (using patch clamp electrophysiological techniques) in parallel with measurements of constrictor/dilator responses (using pressure myography) can reveal important information about the roles of Kv7 channels in vascular smooth muscle physiology and pharmacology.

パッチクランプ電気生理学および圧力筋運動記録法を用いた動脈平滑筋KV7カリウムチャネル機能を探る

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Invasive Hemodynamic Characterization of the Portal-hypertensive Syndrome in Cirrhotic Rats

This is a detailed protocol describing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats for the characterization of portal hypertensive syndrome. Portal hypertension (PHT) due to cirrhosis is responsible for the most severe complications in patients with liver disease. The full picture of the portal hypertensive syndrome is characterized by increased portal pressure (PP) due to the increased intrahepatic vascular resistance (IHVR), hyperdynamic circulation, and increased splanchnic blood flow. Progressive splanchnic arterial vasodilation and increased cardiac output with elevated heart rate (HR) but low arterial pressure characterizes the portal hypertensive syndrome.
Novel therapies are currently being developed that aim to decrease PP by either targeting IHVR or increased splanchnic blood flow &#8212; but side effects on systemic hemodynamics may occur. Thus, a detailed characterization of portal venous, splanchnic, and systemic hemodynamic parameters, including measurement of PP, portal venous blood flow (PVBF), mesenteric arterial blood flow, mean arterial pressure (MAP), and HR is needed for preclinical evaluation of the efficacy of novel treatments for PHT. Our video article provides the reader with a structured protocol for performing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats. In particular, we describe the catheterization of the femoral artery and the portal vein via an ileocolic vein and the measurement of portal venous and splanchnic blood flow via perivascular Doppler-ultrasound flow probes. Representative results of different rat models of PHT are shown.

Here we describe a detailed protocol for invasive measurements of hemodynamic parameters including portal pressure, splanchnic blood flow, and systemic hemodynamics in order to characterize the portal hypertensive syndrome in rats.

肝硬変ラットにおけるポータル高血圧症侵襲血行動態評価

This is a detailed protocol describing invasive hemodynamic measurements in cirrhotic rats for the characterization of portal hypertensive syndrome. ...

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Pressure myograph systems are exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized to a suitable transmural pressure. The near physiological condition achieved in pressure myography permits in-depth characterization of intrinsic responses to pharmacological and physiological stimuli, which can be extrapolated to the in vivo behavior of the vascular bed. Pressure myograph has several advantages over conventional wire myographs. For example, smaller resistance vessels can be studied at tightly controlled and physiologically relevant intraluminal pressures. Here, we study the ability of 3rd order mesenteric arteries (3-4 mm long), preconstricted with phenylephrine, to vaso-relax in response to acetylcholine. Mesenteric arteries are mounted on two cannulas connected to a pressurized and sealed system that is maintained at constant pressure of 60 mmHg. The lumen and outer diameter of the vessel are continuously recorded using a video camera, allowing real time quantification of the vasoconstriction and vasorelaxation in response to phenylephrine and acetylcholine, respectively.
	To demonstrate the applicability of pressure myography to study the etiology of cardiovascular disease, we assessed endothelium-dependent vascular function in a murine model of systemic hypertension. Mice deficient in the &alpha;1 subunit of soluble guanylate cyclase (sGC&alpha;1-/-) are hypertensive when on a 129S6 (S6) background (sGC&alpha;1-/-S6) but not when on a C57BL/6 (B6) background (sGC&alpha;1-/-B6). Using pressure myography, we demonstrate that sGC&alpha;1-deficiency results in impaired endothelium-dependent vasorelaxation. The vascular dysfunction is more pronounced in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice, likely contributing to the higher blood pressure in sGC&alpha;1-/-S6 than in sGC&alpha;1-/-B6 mice. 
	Pressure myography is a relatively simple, but sensitive and mechanistically useful technique that can be used to assess the effect of various stimuli on vascular contraction and relaxation, thereby augmenting our insight into the mechanisms underlying cardiovascular disease.

In pressure myography, an intact small segment of a vessel is mounted onto two small cannulas and pressurized to a suitable luminal pressure. Here, we describe the method to measure vasorelaxation response of the mouse 3rd order mesenteric arteries in c57 and sGC&alpha;1-/- mice using pressure myography.

圧力筋運動記録法を用いたマウス抵抗動脈機能を評価

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular mechanisms regulating vascular permeability in cultured endothelial cell monolayers and the functional exchange properties of whole microvascular beds. A method to cannulate and perfuse venular microvessels of rat mesentery and measure the hydraulic conductivity of the microvessel wall is described. The main equipment needed includes an intravital microscope with a large modified stage that supports micromanipulators to position three different microtools: (1) a beveled glass micropipette to cannulate and perfuse the microvessel; (2) a glass micro-occluder to transiently block perfusion and enable measurement of transvascular water flow movement at a measured hydrostatic pressure, and (3) a blunt glass rod to stabilize the mesenteric tissue at the site of cannulation. The modified Landis micro-occlusion technique uses red cells suspended in the artificial perfusate as markers of transvascular fluid movement, and also enables repeated measurements of these flows as experimental conditions are changed and hydrostatic and colloid osmotic pressure difference across the microvessels are carefully controlled. Measurements of hydraulic conductivity first using a control perfusate, then after re-cannulation of the same microvessel with the test perfusates enable paired comparisons of the microvessel response under these well-controlled conditions. Attempts to extend the method to microvessels in the mesentery of mice with genetic modifications expected to modify vascular permeability were severely limited because of the absence of long straight and unbranched microvessels in the mouse mesentery, but the recent availability of the rats with similar genetic modifications using the CRISPR/Cas9 technology is expected to open new areas of investigation where the methods described herein can be applied.

The modified Landis technique enables paired measurement of the hydraulic conductivity of individual microvessels in the mesentery of normal and genetically modified rats under control and test conditions using microperfusion techniques. It provides a convenient method to evaluate mechanisms that regulate microvessel permeability and transvascular exchange under physiological conditions.

ラット腸間膜に微小血管透過性の調節を調査するために、微小灌流法

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...