著者は、リサーチ＆コラボレーション（SPARC）賞小薬局·アワードを通じて、このプロジェクトの財政支援のために薬局のプレスビテリアンカレッジスクールの研究局に感謝したいと思います。著者は、ジョン·Smink、水生動物研究所のマネージャー、クレムソン大学、クレムソン、彼の技術支援の原稿の改訂のためのSCに感謝。

注：これらのプロトコルは、プレスビテリアンカレッジのIACUCのガイドラインに従ってください。 表1に列挙した材料を取得します。 2.メーカーの指示に従って5シェルフChromeを組み立てます。これは施設を収容するために使用されます。 3.水リザーバ及び濾過システム（図1A及び図2）を構築する。 <ol><li>ガイドとして、図1Aを使用して、最終的な設置場所とサイズを決定するために、18ガロンのバケツ、ポンプ、フィルター、紫外線ランプをレイアウト。 </li><li>部品がレイアウトされると、測定し、組み立てに必要な長さに¾ &quot;PVCパイプをカット。特定のスペースのニーズと制限に応じてすべてのパイプの長さを変更します。 </li><li> PVCプライマーとセメントを使用して、以前にレイアウトとして配管や継手を組み立て、以下の（3.3.2および3.3.3）を参照してください。 <ol><li>サンドサンドペーパーによるパイプの切断端部は、タッチANに滑らかになるまでデブリがないdは。 </li><li>総理パイプの外側と塩ビプライマーから含ま綿棒で購入したPVCプライマーとフィッティングの内側。 </li><li>含ま綿棒を使用してパイプの外側にPVCセメントを適用することにより、一緒にパイプと継手セメント。塩ビセメントを必要とするすべての手順について繰り返します。 </li><li>棚建設の片側に18ガロンのバケツを置きます。 </li><li>リザーバタンクの側面にバルクヘッドコネクタを取り付けます。 </li><li>バルクヘッドに¾ &quot;PVCパイプを取り付けます。 </li><li> ¾ &quot;¾を使用してポンプ入口へのパイプ」のもう一方の端を取り付け金具作るネジ付き。 </li><li> 2 90度の肘と¾ &quot;PVCパイプを使用してポンプにフィルタを接続します。 <ol><li> 1活性炭フィルター、続いて1枚のフィルタがデブリをフィルタし、水に塩素および化学のレベルを減少させるために使用する。 </li></ol></li><li>フィルタaccordiにUVランプを接続します製造元の説明書をngの。 </li></ol></li><li>ワイヤータイを使用して、ラックの最初の棚の上部側にポンプとフィルターシステムを取り付けます。選択した棚/ラックのサイズとレイアウトによるアセンブリおよび添付ファイルの順序を変更します。 </li><li>ポンプとフィルターシステムが組み立てられ、棚に取り付けられた後、水の貯水池への水のガロン当たり1 biobal​​lを追加します。 </li></ol> 4.主電源ライン（図1Bおよび2）を構築する。 <ol><li>測定主電源にUVランプを接続するPVCパイプ」3/4部分を切断し</li><li> UVフィルターから来るのPVC排気」¾にティーを接続することにより、主電源ラインを開始するためのPVCティー」¾を使用してください。 。 <ol><li>システムのメンテナンス洗浄のためのドレインとして機能するPVCティーの底に開閉弁を追加します。 </li><li> 「¾を測定し、切断したPVCティー」3/4上部から主電源ラインを起動し、PVCラックの棚のそれぞれについて、供給管を提供する所望の長さのパイプ。 </li><li>インストール¾ &quot;ラックの各棚に入ります水平線のためのPVCティーを。 </li><li>必要に応じて（提示）、追加¾ &quot;開閉弁各棚供給ライン各棚の単離およびシステムのモジュール設計を可能にする。 </li></ol></li><li>一番上の棚に線を減圧として¾ &quot;PVCパイプを使用してください。この行が棚の裏に実行されている場合は、保存のために、この棚を使用しています。開閉弁¾ &quot;メイン排気ライン（ 図1B）の線減圧を終了する。 </li><li>上記のステップは、プライム完了し、リザーバとろ過システムを構築する際に、以前に行ったように一緒に塩ビ管を固めるされたら。 </li></ol> 5.主排気ライン（図1Cおよび2）を構築します。 <ol><li>ラックfの他方側に主排気ラインの垂直方向の長さを実行する主供給ラインにデキュー。各棚から魚の水槽からトップとドレインラインでの主電源ラインを受け取るために、この垂直線のために2 &quot;PVCパイプを使用してください。 </li><li> 「垂直主排気ライン用の塩ビ管と2を使用する「2の部分をカットし、各棚から水槽のドレイン線を受け取るためにPVCティーを。スポンジフィルター上で再生水を排出するストックタンク内の主排気ラインを終了します。 </li><li> 2「PVCパイプ片の全長を開いて1インチをカットし、水槽からの水平ドレイン線用のPVCティー垂直主排気ラインに接続する。 </li><li> PVCキャップ2」2水平ドレイン線を「キャップ。 </li><li>首相と必要な付属品（コネクタ、乳首や肘）を使用して作品を固める。 </li></ol> 6.水槽（図3）を構築。 <ol><li>ドリルで、ホールソーと上辺以下の「魚タンク1の背面に穴 &quot;1 1/8を切った。 </li><lI&gt;（外部へのタンクの内側から）穴を介して（添付＃18 Oリング付き）のねじ¾ &quot;PVCオスアダプタをスライドさせます。 </li><li> 90度を取り付け、締め3/4「魚タンク排気管を作成するために男性のアダプタにPVC肘をスレッド化。排気システムを通過するゼブラフィッシュを防ぐために、保持ナットをねじ込む前に、細かいメッシュの部分を追加します。 </li><li>その排気管がタンクの後ろに排水ラインのオープンスペースに終わると水槽を置き</li></ol> 7.水システムの起動<ol><li>そのようなリザーバーに使用されるものなど、いくつかの容器中に、システム内に含まれる水の3倍の量を測定する。この水は48時間調整のため室温で放置しましょう​​。 </li><li>システムに水を追加し、3日間の最低循環してみましょう。 <ol><li>汚染物質のTHAのシステムを取り除くために、循環の最初の3日間を通して積極的にシステム内の水を変更tは、パイプ内に存在する。 </li></ol></li><li>スターターゼブラフィッシュを追加し、窒素サイクルの確立を取得することができます。 1.8 Lあたり7ゼブラフィッシュを保持し、かつのLiNbO 4とマクナブ6によって示唆されているように、週末の間、1日1回、週の日の間に1日2回、それらを供給し、一貫性のpHを7に正規化する。 </li><li> 、硝酸塩（&lt;75 mg / Lの）を監視魚を追加した後の最初の週の間の毎日の亜硝酸塩（&lt;10 mg / Lの）、およびアンモニウム（0ミリグラム/ L）、週に2回、一度所望のレベルは、通常の水の変更に維持されている。 </li></ol>

<ol>
	<li>Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , (2010).</li><li>Grim, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemogen+(hemgn),+a+transcription+factor+that+regulates+erythropoiesis+and+skeletogenesis+in+zebrafish.">Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish.</a> , (2013).</li><li>Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+easy-to-assemble,+low-cost+facility.">Modular, easy-to-assemble, low-cost facility.</a> Zebrafish. 6 (3), 269-274 (2009).</li><li>Linbo, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+(Danio+rerio)+husbandry+and+colony+maintenance+at+the+Northwest+Fisheries+Science+Center.">Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center.</a> U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. 69, 4196 (2012).</li><li>McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Don't+be+afraid+to+set+up+your+fish+facility.">Don't be afraid to set up your fish facility.</a> Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).</li><li>Garcia, R. L., Sanders, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cleaning+and+disinfection+procedures+in+a+zebrafish+rerio)+facility.">Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).</li><li>Rivas-Boyero, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+a+nociceptin+receptor+from+zebrafish+(Danio+rerio).">Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio).</a> J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).</li><li>Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+regulates+dopaminergic+neuron+differentiation+via+miR-133b.">Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b.</a> Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).</li><li>Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodr&#237;guez, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mu+opioid+from+the+zebrafish+exhibits+functional+characteristics+as+those+of+mammalian+mu+opioid+receptor.">Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor.</a> Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).</li></ol>

著者は、この論文のための目的の競合を宣言しません。

この記事の主な目的は、機能的なゼブラフィッシュ施設の建設が複雑ではなく、最小限の工事知識を持つ初心者の魚の研究者が構築できることを実証することである。さらに、この資料では、この機能のゼブラフィッシュの施設のための材料は、地元のペット用品店やホームセンターから容易にかつ低コストで取得できることを示している。すべての材料とツールは、システムの構築や魚の水槽を取得した後は約1営業日かかります。 72時間最初の実行は、そのようなリークや、測定すべき低水圧、として、システム内の任意の障害を可能にする。システム内の汚染物質が循環から除去されるために、この最初の実行もできます。例えば、PVC接着剤は、循環の最初の数時間の間に除去される有害な有機材料を含んでいてもよい。システムはmaintenボリュームと水の交換の調整を可能にし、容易に主排水弁を有する<html>ンス。さらに、システムはまた、水の圧力の調整を容易にする圧力リリーフラインを有している。それは水圧の調節を可能にするので、1つまたは2つだけの区画（棚）が使用されますと、このラインが便利です。 施設は、個々の研究者の容量のニーズを満たすために1、2または3コンパートメント（1.8 Lの36水槽）の利用を可能にする設計でモジュール化されています。各区画に配置された開閉弁は、システムの異なる部分の単離を容易にする。このバルブシステムは、潜在的な感染の拡散を回避するために、そして区画することにより、システムの洗浄を容易にするためにも有用である。さらに、すべての水槽の水の供給は、2つのバルブ9のポート灌水一つと水槽の入口可撓性チューブ少なくとも一つを有している。この二重弁システムは、水の圧力の微調整を可能にし、また清掃手順または魚の抽出や操作を容易にする。 T &quot;&gt;アンモニア、亜硝酸塩と硝酸塩の適切な文書は、施設の適切な機能のために不可欠である。彼らは成長に硝化細菌のための十分な表面を提供するので、このために、biobal​​lsが重要である。魚のコロニーが安定したら、施設ができ容易に拡大または縮小水槽を使用するように変更する。また、施設は文献5で利用可能なプロトコルを以下のゼブラフィッシュを飼育するように変更することができる。また、施設がシステムの機能を拡張するために他のモジュールまたはラックを追加するように修正することができる。 追加の酸素供給器を追加する必要がないように、タンクに新鮮な水の流れが十分に新鮮な酸素を提供する。貯水槽で発生する空気交換は、酸素の十分な供給源である。大きなタンクが次に使用される場合、追加の酸素源を添加してもよい。これは、タンクに新鮮な水の流れずに魚が窒息することも留意すべきであるので、その水流bは不可欠である密接に何もないことを保証するために監視eは、水のラインをブロックしている。これは、水の温度が28.5℃に維持することが必須である。一定温度は、システムが28.5°Cに収容されている部屋の温度を維持することによって達成することができる。代替的に、水槽加熱源は、一定の温度を維持するために購入することができる。水質を維持することが一貫して、実験結果に不可欠である。実験条件に基づいた正確な水質パラメータを決定するために利用できる多くの源がある。 10日、その後、再利用の前に70％アルコールを噴霧 - 魚タンクは7日毎清掃されます。また、錆を防止し、構築するためにクロムラックは、この時点で洗浄し、乾燥させることを示唆している。汚染の兆候が認められた場合に、個々のタンクは2％漂白剤溶液8で消毒されている。一般的な健康は、感染の兆候に特別な注意を払って監視されている（皮膚潰瘍、腫脹、exolpthalmiaは、オフ色など ）、気泡症（原因）過飽和ガス濃度、水の温度の迅速な変化、配管システムの問題）、鰓過形成（水中のアンモニア、銅、亜鉛、または活性塩素の高レベルをまたは卵に関連する炎症及び（腹壁を押し出す女性の卵の保持のために）線維増殖（これはビタミンC欠乏）、脊柱側弯症。 この施設の建設は柔軟性があり、小さいまたは拡張されたシステムが可能になります。基本構成のアイデアを取ることによって、この機能は、様々なサイズの基礎研究の必要性に合うように配置することができる。建設は機関によって異なる場合がありますので、プロトコルの中で最も重要なステップは、72時間最初に実行され、建設の第一週の間、アンモニウム、硝酸塩、および亜硝酸塩レベルの毎日の監視。優れた水質は、魚の健康を維持する助けとなる。手頃な価格の魚のsysteのために利用可能な現在のプロトコルの多くは、mは、オープンエアの水の流れ3が必要です。オープンエアから保護水を持つことは、水質汚染や蒸発のための機会を最小限に抑えます。一般的なオープンエアシステムと比較した場合、クローズドシステム上のメンテナンスが最小限である。 問題は、施設の建設に（漏れなど 、低水圧を、。）が生じた場合、上記のように、1つは、単純に、施設内の関心領域を切り取ると同じ段階的に部品を交換することにより、接合パイプを交換することができ。このシステムは、気付かれないままの場合、魚に有害になる可能性がある、小さな漏洩に起因する大規模な水の損失に対して脆弱である可能性があり。最小限の投資のためにフロート遮断装置は、水位が安全なしきい値を下回ったことを検出し、システムをシャットダウンします。システムの綿密なモニタリングが利用できない場合、これが必要になることがあります。正しい修正では、このシステムは移動性の欠如以外に直面している非常にいくつかの制限があります。このシステムが構築されたらそれはいくつかの部分を切断し、新しい場所にrecementingことなく移動することは非常に困難であるエド。この移動性の制限は、システムが理想的にワークスペース内に維持する必要があることを意味する。移動性が望まれる場合の柔軟性を高めるために行うことができる小型の修正がある。横方向の各供給圧力リリーフライン、ポンプ吐出の開始時に組合を追加し、排水バルブ上記。ドレイン線は、乾燥嵌代わりの代わりに接合することができる。ポンプ部にフレキシブルカップリングを追加することもモビリティを支援します。これは、追加されるこのシステムのシンプルな構造とメンテナンスが文献に見現在のプロトコルは、小さな研究機関1,2,10-12に利用可能であることを意味します。保守この学部学生の研究のための理想的なシステム作る簡単です。また、このシステムは、独立した研究と教育ラボに最適です。 結論として、このタイプの施設は、手頃な価格の構築が容易であり、in vivoでの実験のための機能です。この施設は限られた資源と制限された畜産スペースを持つ機関に最適です。ゼブラフィッシュの研究は、薬理学、生理学、発達、あるいは遺伝学的研究を含む研究は、複数の種類のために使用される領域である。実際には、利用可能な変異体またはトランスジェニックゼブラフィッシュの大多数は、生物医学の事実上すべての分野の研究の革新的なラインをサポートしています。さらに、このシステムは、小型の主に学部機関における科学専攻のための研究の機会と教室の経験を強化し、生物医学科学者の次の世代を鼓舞するために使用することができます。

彼らはシステム及び生物レベルで翻訳されるために、インビトロ研究に許可しているため、生体内でのモデルは、総合的な生物医学研究の実施に不可欠である。例えば、小型哺乳類、すなわちげっ歯類との研究は、薬物の開発および利用可能な薬物の改善に必要な証明されている。しかし、（財政的およびロジスティック）複雑さは、それは実験のために齧歯類の施設を建設し、維持することは事実上不可能小さな研究の学術機関で提案するかもしれない。それにもかかわらず、in vivoでの研究は、より少ない複雑な物流を必要とする他の動物種を用いて行うことができる。ゼブラフィッシュ（ ゼブラフィッシュ ） が正常に遺伝学、開発、病態生理、および薬理1,2,10,11,12を研究するためのin vivoモデルとして使用されてきた。 rに比較した場合の実験のためにゼブラフィッシュを収容するために必要な設備が比較的単純でかなり安価であるodent施設。 Kim ら 3は最近、詳細に部品や人件費の両方が含まれている約1500ドル、のために構築することができる80のタンクゼブラフィッシュの住宅システムを記載している。これは商業的供給者の任意の数から既製、80タンクシステムを購入することを要求され​​ることはほぼ8500ドルとは全く対照的である。しかしながら、説明は、Kim らによって与え。魚研究の初心者のために従うことが複雑で困難な場合がある。我々はゼブラフィッシュ施設が1500ドルの投資のための簡易的に構築することができると信じています。 小さ ​​な学術機関での生体内の施設の設立は、より強力かつ徹底した調査を生成すると追加のツール彼らの学部を提供しています。 中でサポートされているin vitroデータvivoでの結果は、一般的にのみ体外のアプローチで使用して得られたデータよりもより包括的な生物医学研究を生産する。そのため、in vivoでの研究施設の実装が大幅に全体的な研究努力における機関の成功強化します（研究への学生の暴露、出版物、通信、外部資金の追求、 等 。）。 この研究で説明するようなゼブラフィッシュ施設の建設は、フィナンシャル·タイムズを収縮時に（in vivoでの研究施設なしまたは機関）限られた施設との研究教育機関に最適です。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Item</td>
			<td>Brand</td>
			<td>Quantity</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit</td>
			<td>Style Selections</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18-Gallon General Bucket/Tote</td>
			<td>Centrex Plastics: LLC&#160;Rugged Tote</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord</td>
			<td>Master Electrician</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp</td>
			<td>Smartpond&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whole House Water Replacement Filter</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Seal Tape</td>
			<td>William H Harvey</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC PVC Cement</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-fl oz LO-VOC Primer</td>
			<td>Oatey&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing</td>
			<td>Mister Landscaper&#160;</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve</td>
			<td>Mister Landscaper</td>
			<td>33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter</td>
			<td>&#160;Mister Landscaper</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drop-In Filter with House&#160;</td>
			<td>Whirlpool</td>
			<td>6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree PVC Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia 90-Degree Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Tee</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-in Dia PVC Cap</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>LASCO</td>
			<td>2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve</td>
			<td>American Valve</td>
			<td>5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3/4-in Dia PVC Cap</td>
			<td>Lasco</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-In x 5-Ft Pvc Pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;-In x 10-Ft Pvc pipe</td>
			<td>Charlotte Pipe</td>
			<td>3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11/16x1-7/80 PVC ring</td>
			<td>SXT</td>
			<td>10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC male adapter</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC coupling&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#189;&#8221; PVC female adapter&#160;</td>
			<td>SXT</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>link</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.8 L Dual Beta Keeper</td>
			<td>Top Fin</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#190;&#8221; PVC male adapter (w/ #18 O-ring)</td>
			<td>SXT</td>
			<td>28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90-degree &#190;&#8221; threaded PVC elbow</td>
			<td>SXT</td>
			<td>27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Mesh</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1 yard</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulkhead Connector</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hacksaw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drill</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hole saw</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable Wrench</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pliers&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape Measure</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety Glasses</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Work Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of an affordable and easy-to-build zebrafish facility

生体内では生物医学研究は、臨床の進歩に体外調査結果に変換するために極めて重要である。限られたリソースを持つ小型の学術機関は、それが事実上不可能に研究のための典型的なげっ歯類の施設を構築し、維持するために見つける。ゼブラフィッシュ研究は薬理学、生理学、発達および遺伝的研究におけるin vivo研究のための貴重な代替手段であることが実証されている。この記事では、機能的なゼブラフィッシュ施設が簡単かつ手頃な価格の方法で構築することができることを実証している。私たちは、そのような施設は、最小限のツールと​​専門知識を用いて約1営業日で構築することができることを実証している。本研究で構築し27 1.8 L水槽のゼブラフィッシュ設備の費用は約1500ドルだった。私たちは3ヶ月間の初期作業150魚のコロニーの維持が千ドルであると推定している。このプロジェクト研究のためにゼブラフィッシュの養殖するために導入された、関係の学生が、提案している。

ポンプとFltersシステムの構築 ラックを組み立てる最初のステップを設定したら、ポンプおよびフィルタシステムを構築することである。フィルタは、システムのポンプに接続されており、容易にフィルタのメンテナンスや交換を可能にする第1の棚の底レベルの上方に位置している。同様に、UVランプは、フィルタのPVCパイプに接続され、必要に応じて（ 図4A）のようなUVランプの容易な交換を可能にするために、プラスチック製のワイヤータイで適所に保持される。直ちにポンプ次の紙フィルター、活性炭フィルター、UVランプはPVC管を介して設置されている。 Biobal​​ls硝酸塩に有毒なアンモニア廃棄物を変換する細菌の成長のための表面を提供するために、タンクに添加される。システム内の水のガロン当たり1つbiobal​​lは細菌の増殖を可能にするのに十分な領域である。オーバーフローの場合にbiobal​​lsリザーバとcontaminaの機会に残るように、プラスチック製の貯蔵器の蓋を装着することができるンが最小化されている。オーバーフローイベントが非常に低い場合であっても、（リザーバの上部のパイプの流出を追加）排水システムは、システムにすることができる容易な付加である。 主電源ラインの構築 第二段階は、ゼブラフィッシュタンク（ 図4B）を含有するすべてのコンパートメントをフィードバックする主給水ラインを組み立てることである。このラインは、PVCパイプの部分を備えたUVランプに接続されている。この行は、PVCティーを介してラックに上下左右に実行されます。ティーの下端がシステム全体の排水弁として機能するPVCパイプの部分を接続するために使用される。 4つの区画に水平に実行タンクを養うメインライン：第五の棚の第2の棚の上、第三の棚の上、第三の棚の上、下。第2、第3、第4の棚ラインの上部は、水槽に水を提供するので、それらはmidlinで実行棚の電子。これらのラインの各々は、個々の区画の制御を可能にする個別の開閉弁を有する。 9ポート灌漑マニホールドは、水平線の端部に取り付けられており、これらの灌漑は、可撓性¼ &quot;チューブ（ 図4B）を介して水槽に水を供給する。灌漑マニホールドのすべてのポートが内蔵開閉弁を有している。また、開閉弁は、簡単にアクセスし、水のフロー制御のため、水槽の入口付近に、各ポートに接続されたチューブの端部に配置されている。チューブは蓋に穿孔された穴によってタンク内に挿入される。これはしっかりとタンク内に挿入されたチューブを維持するのに役立ちます。 第五の棚の上で実行されるラインは、圧力緩和剤として使用され、それは個々の開閉弁で制御される。これは、この領域はストレージに使用できるように、第五の棚の奥で実行この行を持っていることをお勧めします。舞ので、n個のラインは、ラックの側面の正中線で、それはPVCの肘と塩ビ管の一部を使用して、バックにされ実行され、その後、別のPVC肘と片を用いて、圧力リリーフラインとして縦方向（水平）を実行します塩ビ管の。圧力リリーフラインは、ラックの反対側に垂直に実行され、（この排気ライン2 &quot;PVCパイプで構成され、以下を参照）、水リザーバ内に終了する主排気ラインで終わる。 メイン排気ラインの構築 第3のステップは、水リザーバが配置される側（ 図4C）に、ラックに横方向に実行される排気システムを組み立てることである。このシステムは、2 &quot;PVCパイプを使用して、圧力リリーフラインから来る水を収集し、水槽から（下の水槽の建設を参照）排水構築されています。主排気ラインは、ラックの上に圧力リリーフラインを接続し、水に再終了垂直に並べservoir。また、メイン排気ラインは、PVCティーを介して主排気ラインに接続する水平2 &quot;のPVCパイプを介して水槽から流出​​を受ける。これら水平排水管は水槽（下記参照）からのドレン水を受けるための1 &#39;の長手方向切断を持つ。これらの水平ドレイン線は、背面にある棚の一番下の部分で実行され、排水水は重力によって主排気ラインに実行することができますマイナー傾斜を持っている。水槽ドレン水をスポンジ上に落下し、デブリをフィルタするようにスポンジフィルターパッドは、水平ドレイン線に追加される。全体組み立てシステムを図5に描かれています。 水槽の構築 代表的な水槽は、 図6に示されている。水槽ドレンラインの端部は（排気ライン上のセクションの上を参照）の水平ドレンライン内に配置される。金網を防止するために、水槽内のドレイン線に挿入されタンクの外に泳ぐからゼブラフィッシュ。これらの特定のタンクは逃げる魚を防止し、また、汚染の機会を最小限に蓋を持っている。オーバーフローが発生した場合は、タンクの蓋は、床に落ちるの魚を防ぐことができます。蓋をタンクには小さな穴がタンクの上部付近にドリル加工することができるその後、蓋なしでタンクが含まれている理想的ですが、システムが構築されている場合。これは逃げる魚を防ぐながら水を逃がすことができるようになります。 機能する ゼブラフィッシュコロニーは他の場所で3〜6で説明入手可能と確立されたプロトコルによって維持することができた。簡単に言えば、我々の施設は約85 ml /分（または仔魚タンク45 ml /分）でシステム·ポンプは、それぞれ成人流量を調整（または仔魚タンク）によってシステムボリューム時間あたり約75回循環させることができ。必要に応じて水質が活性な生物学的濾​​過および小規模水変化（システム容量の約5％）によって維持される。日常的監視pH、導電率、溶存酸素（DO）レベル、及び温度の一貫性の条件を維持するために必要である。キットは、pHを測定するために市販されており、レベルのDO。導電率メーターもご購入いただけます。毎日、これらの変数をテスト容器から250mlの水を除去し、分析を行うために。 pHレベルは7.2に維持されるべきで、DOは6未満mgであり、500μSと1300μSの間の導電性べきである。 （ここではソース）温度は28.5℃に維持されなければならない。定期的なシステムメンテナンス（3 - 4週間）は、約30％の水の変化と洗浄し、フィルターパッドおよび木炭の交換を含む。 <img alt="図1" fo:content-width="7in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig1highres.jpg" width="700" /> 図1：ゼブラフィッシュ施設の三つの主要なコンポーネント。 A.ポンプおよびフィルタシステムは、最初に（棚の底部に配置されている棚）とは、主要な電源ラインと水のストックタンクに接続してください。B.は、主要な供給ラインがUVランプから派生し、魚の水槽が含まれている3つの上の棚に水を供給している。すべての貯蔵コンパートメントは、独立して供給され、個別に弁により（オンまたはオフ）を制御することができることに留意されたい。このメインラインはまた、下端の主排出弁を有し、上端に主排気ラインに終了する圧力リリーフラインとして継続する。C.主排気ラインは、圧力リリーフラインから異なるから水を受け取る水槽のコンパートメントとは、水のストックタンクに終了します。すべての棚は、PVCパイプであり、個々の魚の水槽のために水を受け取ることが縦方向に開放されている水槽の排気ラインを持っていることに注意してください。これらの行は、少し水が主排気ラインに重力によって実行できるように傾斜している。この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。 <img alt="図2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig2highres.jpg" width="600" /> 図2：ゼブラフィッシュ施設の三つの主要なコンポーネントを組み立て、容易に機能的には、水のストックタンクが既にbioballsを持っていることに注意してください。主排気ラインからの水は、水位（明確にするために、この図には示されていない）上記のメッシュ上に配置されたスポンジフィルター上に落ちる。明確にするために第2の棚が示さ洗浄器のみ4供給管を有し、図示の一部だけ水槽を持ち、水槽排気ラインが透明であることに留意されたい。ラックの各棚は9 1Lの魚の水槽を保持し、9ポート洗浄器を持つことができます。 <img alt="図3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig3highres.jpg" width="600" /><br/&gt; 図3：魚タンクユニット水槽は、通常のペットショップで取得し、2Lの容量を有するA.水槽排水システムはの裏側に1 1/8 &quot;の穴を穿孔することによって構築される。タンクは、その後3/4 PVC肘L &quot;3/4を使用して形状」「PVCパイプ片は、逆に配置されます」。この排水システムは、水槽の背面にある水槽の排気ラインの開放側に分類されます。B.イメージ水槽排水システムにメッシュのインストールを描いた。メッシュは、排気ラインへ排出されるのゼブラフィッシュを防ぐことができます。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig4highres.jpg" /> 図4：個々の部品構成。 A. 3つのフィルタおよびポンプシステムは、システムの底部ラックにある。ポンプ三mechanに接続されているiCalのフィルタは、システムの水から汚染物質を除去するためにUVフィルターが続く。B.水平電源ラインが各タンクに新鮮な水と酸素を供給し、9ポート灌漑マニホールド、で終わる。各棚への供給ラインは、クリーニングおよび隔離の目的で、各棚に水を止めるために使用することができる開閉弁を有している。C.水槽排気ラインは、循環を再入力する主排気ラインに注ぐ。圧力リリーフラインは、メイン排気ラインに注ぐ。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/51989/51989fig5highres.jpg" /> 図5：完成システム完成したシステムは、ポンプとフィルタシステム、主垂直電源線、各棚水平電源ライン、タンク排気ライン、圧力リリーフライン、及び含まれる循環システムのための主排気ラインを含んでいる。 。 図6：代表水槽水槽は、システム内の水平方向の排水ラインと接続する排水ラインが含まれています。

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Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

手ごろな価格で簡単に構築ゼブラフィッシュ施設の建設

In vivo biomedical research is pivotal to translate in vitro findings into clinical advances. Small academic institutions with limited resources find it ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

16.2K ビュー.  Presbyterian College School of Pharmacy. A Zebrafish facility suitable for breeding and in vivo research is built in an easy and affordable manner. Maintenance is minimal. This facility is ideal for student involvement and independent research.

ビデオ: Construction of an Affordable and Easy-to-Build Zebrafish Facility

Construction and Implantation of a Microinfusion System for Sustained Delivery of Neuroactive Agents.

Sustained delivery of neuroactive agents is widely used in neuroscience, but poses many technical challenges. It is necessary to deliver the agent with high precision while minimizing localized trauma and inflammation. Also, the ability to customize the system to accommodate animals of different species and sizes is desirable. This video presentation demonstrates the construction of an infusion system that can be fitted to any particular research animal. The delivery microcannula diameter is approximately 10-fold smaller than most infusion cannulas presently used. This translates into enhanced accuracy and reduced trauma to the brain region under study. The delivery cannula can also be sculpted to fit the contour of the surface of the animal's skull, thereby allowing closure of the scalp incision neatly over the infusion system, precluding the need for a skull-mounted pedestal, reducing risk of infection, and ensuring a greater level of comfort to the animal. The system is assembled in an air-free environment and requires the researcher to fashion glass micropipettes with a heat source. These construction methods require special skills that are best acquired, if not in person, using video instruction.  (This article is based on work first reported in J Neurosci Methods. 2008 Jan 30;167(2):213-20. Epub 2007 Aug 28.).

As neuroscience inquiry becomes more sophisticated, investigation of brain structures and circuitry requires improved levels of accuracy and higher resolution. We have developed a method for the preparation and implantation of a chronic infusion system within the brain utilizing a borosilicate microcannula with a tip diameter of 50 microns.

神経刺激剤の徐放のためのMicroinfusionシステムの構築と注入。

Sustained delivery of neuroactive agents is widely used in neuroscience, but poses many technical challenges. It is necessary to deliver the agent with ...

生物学

Proper Care and Cleaning of the Microscope

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a microscope causes reduction in contrast and resolution. DIC is especially sensitive to contamination and scratches on the lens surfaces. This protocol details the procedure for keeping the microscope clean.

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a microscope causes reduction in contrast and resolution. DIC is especially sensitive to contamination and scratches on the lens surfaces. This protocol details the procedure for keeping the microscope clean.

顕微鏡の適切な手入れとクリーニング

Keeping the microscope optics clean is important for high-quality imaging. Dust, fingerprints, excess immersion oil, or mounting medium on or in a ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or alkyne-tagged monosaccharides1, 2. The modified monosaccharides, processed by the glycan biosynthetic machinery, are incorporated into cell surface glycoconjugates. The bioorthogonal azide or alkyne tags then allow covalent conjugation with fluorescent probes for visualization, or with affinity probes for enrichment and glycoproteomic analysis. This protocol describes the procedures typically used for noninvasive imaging of fucosylated glycans in zebrafish embryos, including: 1) microinjection of one-cell stage embryos with GDP-5-alkynylfucose (GDP-FucAl), 2) labeling fucosylated glycans in the enveloping layer of zebrafish embryos with azide-conjugated fluorophores via biocompatible Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC), and 3) imaging by confocal microscopy3. The method described here can be readily extended to visualize other classes of glycans, e.g. glycans containing sialic acid4 and N-acetylgalactosamine5, 6, in developing zebrafish and in other living organisms.

A click-chemistry based method that allows for the rapid, noninvasive, and robust labeling of alkyne-tagged glycans in zebrafish embryos is described. Fucosylated glycans in the enveloping layer of zebrafish embryos in the late gastrulation stage were imaged in this study.

代謝標識とBioorthogonalクリックケミストリーによるゼブラフィッシュ胚でのイメージンググリカン

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal neurons. In contrast, the adult zebrafish retina possesses the robust ability to spontaneously regenerate any neuronal class that is lost in a variety of different retinal damage models, including retinal puncture, chemical ablation, concentrated high temperature, and intense light treatment 1-8. Our lab extensively characterized regeneration of photoreceptors following constant intense light treatment and inner retinal neurons after intravitreal ouabain injection 2, 5, 9. In all cases, resident M&uuml;ller glia re-enter the cell cycle to produce neuronal progenitors, which continue to proliferate and migrate to the proper retinal layer, where they differentiate into the deficient neurons. 
	We characterized five different stages during regeneration of the light-damaged retina that were highlighted by specific cellular responses. We identified several differentially expressed genes at each stage of retinal regeneration by mRNA microarray analysis 10. Many of these genes are also critical for ocular development. To test the role of each candidate gene/protein during retinal regeneration, we needed to develop a method to conditionally limit the expression of a candidate protein only at times during regeneration of the adult retina. 
	Morpholino oligos are widely used to study loss of function of specific proteins during the development of zebrafish, Xenopus, chick, mouse, and tumors in human xenografts 11-14. These modified oligos basepair with complementary RNA sequence to either block the splicing or translation of the target RNA. Morpholinos are stable in the cell and can eliminate or "knockdown" protein expression for three to five days 12. 
	Here, we describe a method to efficiently knockdown target protein expression in the adult zebrafish retina. This method employs lissamine-tagged antisense morpholinos that are injected into the vitreous of the adult zebrafish eye. Using electrode forceps, the morpholino is then electroporated into all the cell types of the dorsal and central retina. Lissamine provides the charge on the morpholino for electroporation and can be visualized to assess the presence of the morpholino in the retinal cells. 
	Conditional knockdown in the retina can be used to examine the role of specific proteins at different times during regeneration. Additionally, this approach can be used to study the role of specific proteins in the undamaged retina, in such processes as visual transduction and visual processing in second order neurons.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

A method to conditionally knockdown a target protein&#x2019;s expression in the adult zebrafish retina is described, which involves intravitreally injecting antisense morpholinos and electroporating them into the retina. The resulting protein is knocked down for several days, which allows testing the protein&#x2019;s role in the regenerating or intact retina.

アダルトゼブラフィッシュ網膜にモルフォの in vivoエレクトロポレーションに

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration of adult tissues, such as the heart1, retina2, spinal cord3, optic nerve4, sensory hair cells5, and fins6.
The zebrafish fin is a relatively simple appendage that is easily manipulated to study multiple stages in epimorphic regeneration. Classically, fin regeneration was characterized by three distinct stages: wound healing, blastema formation, and fin outgrowth. After amputating part of the fin, the surrounding epithelium proliferates and migrates over the wound. At 33 &deg;C, this process occurs within six hours post-amputation (hpa, Figure 1B)6,7. Next, underlying cells from different lineages (ex. bone, blood, glia, fibroblast) re-enter the cell cycle to form a proliferative blastema, while the overlying epidermis continues to proliferate (Figure 1D)8. Outgrowth occurs as cells proximal to the blastema re-differentiate into their respective lineages to form new tissue (Figure 1E)8. Depending on the level of the amputation, full regeneration is completed in a week to a month.
The expression of a large number of gene families, including wnt, hox, fgf, msx, retinoic acid, shh, notch, bmp, and activin-betaA genes, is up-regulated during specific stages of fin regeneration9-16. However, the roles of these genes and their encoded proteins during regeneration have been difficult to assess, unless a specific inhibitor for the protein exists13, a temperature-sensitive mutant exists or a transgenic animal (either overexpressing the wild-type protein or a dominant-negative protein) was generated7,12. We developed a reverse genetic technique to quickly and easily test the function of any gene during fin regeneration.
Morpholino oligonucleotides are widely used to study loss of specific proteins during zebrafish, Xenopus, chick, and mouse development17-19. Morpholinos basepair with a complementary RNA sequence to either block pre-mRNA splicing or mRNA translation. We describe a method to efficiently introduce fluorescein-tagged antisense morpholinos into regenerating zebrafish fins to knockdown expression of the target protein. The morpholino is micro-injected into each blastema of the regenerating zebrafish tail fin and electroporated into the surrounding cells. Fluorescein provides the charge to electroporate the morpholino and to visualize the morpholino in the fin tissue.
This protocol permits conditional protein knockdown to examine the role of specific proteins during regenerative fin outgrowth. In the Discussion, we describe how this approach can be adapted to study the role of specific proteins during wound healing or blastema formation, as well as a potential marker of cell migration during blastema formation.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

We describe a method to conditionally knockdown the expression of a target protein during adult zebrafish fin regeneration. This technique involves micro-injecting and electroporating antisense oligonucleotide morpholinos into fin tissue, which allows testing the protein&#x2019;s role in various stages of fin regeneration, including wound healing, blastema formation, and regenerative outgrowth.

リジェネアダルトゼブラフィッシュテールフィンにMorpholinos の in vivoエレクトロポレーションで

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and behavioural research. As a vertebrate, zebrafish share considerable genetic sequence similarity with humans and are being used as an animal model for various human disease conditions. The advantages of zebrafish in comparison to other common vertebrate models include high fecundity, low maintenance cost, transparent embryos, and rapid development. Due to the spur of interest in zebrafish research, the need to establish and maintain a productive zebrafish housing facility is also increasing. Although literature is available for the maintenance of a zebrafish laboratory, a concise video protocol is lacking. This video illustrates the protocol for regular housing, feeding, breeding and raising of zebrafish larvae. This process will help researchers to understand the natural behaviour and optimal conditions of zebrafish husbandry and hence troubleshoot experimental issues that originate from the fish husbandry conditions. This protocol will be of immense help to researchers planning to establish a zebrafish laboratory, and also to graduate students who are intending to use zebrafish as an animal model.

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish Danio rerio Laboratory: An Introduction

This protocol outlines regular maintenance and care to maintain optimal conditions for zebrafish husbandry. The video illustrates the protocol for system maintenance, regular housing, feeding, breeding, and raising of zebrafish larvae.

ゼブラフィッシュの定期的ケアとメンテナンス（<em&gt;ゼブラフィッシュ</em&gt;）研究所：はじめに

This protocol describes regular care and maintenance of a zebrafish laboratory. Zebrafish are now gaining popularity in genetics, pharmacological and ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic tools have been introduced, including multiple strategies for inducing mutations and generating transgenic lines. However, large-scale screening is limited by traditional genotyping methods, which are time-consuming and labor-intensive. Here we describe a technique to analyze zebrafish genotypes by PCR combined with high-resolution melting analysis (HRMA).&#160;This approach is rapid, sensitive, and inexpensive, with lower risk of contamination artifacts.&#160;Genotyping by PCR with HRMA can be used for embryos or adult fish, including in high-throughput screening protocols.

PCR combined with high-resolution melt analysis (HRMA) is demonstrated as a rapid and efficient method to genotype zebrafish.

高解像度メルト解析を用いたPCRを使用して、迅速かつ効率的なゼブラフィッシュ遺伝子型決定

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

An Assay for Lateral Line Regeneration in Adult Zebrafish

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line development and regeneration. The zebrafish is particularly attractive for such studies because of its rapid development time and its high regenerative capacity. To date, zebrafish studies of lateral line regeneration have mainly utilized fish of the embryonic and larval stages because of the lower number of neuromasts at these stages. This has made quantitative analysis of lateral line regeneration/and or development easier in the earlier developmental stages. Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish and not in the embryo/larvae, we focused on developing a quantitative lateral line regenerative assay in adult zebrafish so that an assay was available that could be applied to current adult zebrafish disease models. Building on previous studies by Van Trump et al.17&#160;that described procedures for ablation of hair cells in adult Mexican blind cave fish and zebrafish (Danio rerio), our assay was designed to allow quantitative comparison between control and experimental groups. This was accomplished by developing a regenerative neuromast standard curve based on the percent of neuromast reappearance over a 24 hr time period following gentamicin-induced necrosis of hair cells in a defined region of the lateral line. The assay was also designed to allow extension of the analysis to the individual hair cell level when a higher level of resolution is required.

Because many zebrafish models of neurological and non-neurological diseases are studied in the adult fish rather than the embryo/larvae, we developed a quantitative lateral line regenerative assay that can be applied to adult zebrafish disease models. The assay involved resolution at the 1) neuromast and 2) individual hair cell levels.

アダルトゼブラフィッシュ側線再生のためのアッセイ

Due to the clinical importance of hearing and balance disorders in man, model organisms such as the zebrafish have been used to study lateral line ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic mouse models using this method necessitates the construction of a &#8216;targeting&#8217; vector, which contains homologous DNA sequences to the target gene, and has for many years been a limiting step in the process. Vector construction can be performed in vivo in Escherichia coli cells using homologous recombination mediated by phage recombinases using a technique termed recombineering. Recombineering is the preferred technique to subclone the long homology sequences (>4kb) and various targeting elements including selection markers that are required to mediate efficient allelic exchange between a targeting vector and its cognate genomic locus. Typical recombineering protocols follow an iterative scheme of step-wise integration of the targeting elements and require intermediate purification and transformation steps. Here, we present a novel recombineering methodology of vector assembly using a multiplex approach. Plasmid gap repair is performed by the simultaneous capture of genomic sequence from mouse Bacterial Artificial Chromosome libraries and the insertion of dual bacterial and mammalian selection markers. This subcloning plus insertion method is highly efficient and yields a majority of correct recombinants. We present data for the construction of different types of conditional gene knockout, or knock-in, vectors and BAC reporter vectors that have been constructed using this method. SPI vector construction greatly extends the repertoire of the recombineering toolbox and provides a simple, rapid and cost-effective method of constructing these highly complex vectors.

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Gene targeting methodologies can be used to generate transgenic mice with knockout, knock-in and tagged alleles. Here, we describe an improved method of recombineering in E. coli, that we term &#8216;subcloning plus insertion&#8217;, which can be used to generate custom gene targeting vectors rapidly.

サブクローニングプラス挿入（SPI） - ジーンターゲティングベクターの迅速な構築のための新しい遺伝子改変方法

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...