著者はE.を供給するための6月ミドルトンに感謝したいと思いますフェカリス株と指導のための細菌文化を持つ。C.エレガンスは、研究基盤プログラムのNIH事務所（P40 OD010440）によって資金を供給されるCGC、によって提供された。

1）線虫の増殖培地の調製（NGM） <ol><li> 50プレートを作成するには、1.5グラムのNaCl、8.5グラム超純寒天、及び1 Lflask〜1.25グラムペプトンを追加します。 </li><li>フラスコにのdH 2 Oの487.5ミリリットルを追加します。アルミホイルの切れ端でフラスコの開口部を混合し、カバーするために静かに渦巻き。 </li><li>標準的な条件（121 PSI、120°C、20分）でオートクレーブして、ソリューションを滅菌。 </li><li>解決策は、水浴中で45℃に冷却することができます。 </li><li> 5 mg / mlのストック溶液（エタノールに溶解）、500μlの1 M CaCl 2を、500μlの1 M MgSO 4を、そして12.5ミリリットルKPO 4緩衝液（54.15グラムから500μlのコレステロール：溶液に、順番に次の行を追加します。のdH 2 Oを500mlの中でKH 2 PO 4および17.8グラムK 2 HPO 4）18に記載されているように。 </li><li>滅菌ピペットを使用して、各ポリスチレンを60mmペトリ皿に寒天溶液10mlを加える。メディアは室温overnで固化することを許可ightの。 </li></ol> BブロスE. 2）準備大腸菌メディア<ol><li> 5を100mlの培養液を作るために、ビーカーにバクトトリプトン、2.5グラムの酵母エキス、5.0グラムのNaCl 5.0グラムを追加します。 </li><li> 500mlを最終容量まで無菌蒸留水を加える。溶質が溶解するまで、撹拌しながら、ホットプレート上でソリューションを加熱。 </li><li> 5ガラス瓶（少なくとも200ミリリットルの容積）にBブイヨンを100mlを注ぐ。 </li><li>標準的な条件（121 PSI、120℃、20分）でオートクレーブで解決策を滅菌する。 </li><li> B液は使用前に室温まで冷却することができます。 </li></ol> 3）種まきC.エレガンスメンテナンスプレート<ol><li> NGMプレートは少なくとも1週間室温で乾燥させた後、E.のいくつかのコロニー〜と100ミリリットルBのブロス培養物を接種する大腸菌 （OP50）。 </li><li> E.を育てる37℃で一晩大腸菌文化。 </li><li>ピペットワンツー滴（約10081、L）OP50文化の各NGMプレートの中央に。プレートは、典型的には、蓋側を上に積層されている。 （播種）ピペッティングと、スタックの一番下にあるプレートに文化をピペッティングすることから始めます。各スタックの上のあなたのように動作します。文化は、プレートの端に近づきすぎていないことが重要であるので、播種後のプレートを移動しないようにしてください。 </li><li>シードプレートは使用する前に、少なくとも1週間、室温で乾燥させます。 </li><li>シードされたプレートを室温で密封されたプラスチック容器に（反転）が格納される。 </li></ol> 4）C.を維持エレガンス菌株<ol><li>よく供給C.を維持するためにelegansの株は、3〜4日ごとに新しい、シードNGMプレートに3 L4sまたは妊娠成人を移動するピックワームを使用しています。 </li><li>ストアプレート（反転）は、好ましくはインキュベーター内部15℃ - 22℃記載のアッセイにおける文化20℃で保存した後elegansの開発は、温度依存性である。 maintenaとして温度が上昇NCE、発達段階の間の時間は減少します。 </li></ol>トリプシン大豆寒天（TSA）Eの5）の調製フェカリス文化メディア<ol><li>ホットプレート上で、攪拌しながら50のプレートを作るために、滅菌したフラスコに、500mlの蒸留水を測定し、沸騰させる。 </li><li>フラスコに粉末TSA寒天20gのを加え、溶液を溶解することができます。 </li><li>標準的な条件（121 PSI、120℃、20分）でオートクレーブで解決策を滅菌する。 </li><li>解決策は、水浴中で45℃に冷却することができます。 </li><li>滅菌ピペットを使用して、各ポリスチレンを60mmペトリ皿に寒天溶液10mlを加える。メディアが一晩室温で固化することができます。 </li></ol>トリプシン大豆ブロス（TSB）Eの6）の準備フェカリス文化メディア<ol><li>攪拌しながら250培養管を作るために、ホットプレート上でフラスコと暖かいに滅菌蒸留水500mlを測定します。 </lI&gt; <li>フラスコにTSB寒天粉末15グラムを加え、粉を溶解することができます。 </li><li>標準的な条件（121 PSI、120℃、20分）でオートクレーブで解決策を滅菌する。 </li><li>滅菌、5ミリリットル試験管にその後ピペット2ミリリットル、室温まで冷却するソリューションを可能にします。 </li></ol> 7）ストレプトマイシンと、E.のためのブレインハートインフュージョン（BHI）メディアの準備、 フェカリス文化<ol><li>滅菌フラスコに、500mlの蒸留水を測定し、ホットプレート上で、攪拌しながら、沸騰させる。 </li><li>フラスコにBHI培地の26グラムを加え、溶液を溶解することができます。 </li><li>標準的な条件（121 PSI、120℃、20分）でオートクレーブで解決策を滅菌する。 </li><li>ソリューションは℃の水浴中で45まで冷まします。 </li><li>無菌技術を使用して、10 mg / mlのストレプトマイシンストック溶液と混合する渦0.5 mlを加える。 </li><li>各60ミリメートルのポリスチレンシャーレに溶液10mlを加える。 </li><l私は&gt;メディアが一晩室温で固化することを許可する。ストアプレート（反転）4℃で使用前に数時間までC。 </li></ol> 8）E.を維持フェカリス菌株<ol><li> E.を維持するフェカリス株は、独立したトリプシン大豆寒天（TSA）プレートにストリーク個々のコロニーを滅菌ループを使用しています。 </li><li> 37℃で一晩培養液を育てる。数週間、室温で密封された袋や箱に保管プレート（反転）。 </li></ol> 9）E.の準備EIWアッセイ用フェカリスプレート<ol><li> E.のコロニーを2ミリリットルTSB文化を接種フェカリス 、37℃で一晩インキュベート℃、 </li><li> E.のピペットを20μl フェカリス準備BHI-ストレプトマイシンプレートの中央に文化、そして37℃で一晩インキュベート℃、 </li></ol> 10）E.の準備EIWアッセイ用大腸菌プレート（コントロールプレート） <ol><li>の100ml B-仲間に接種E.の植民地と目文化大腸菌 OP50と37℃で一晩インキュベート</li><li>非シードNGMプレートの中央にOP50文化のピペットを20μlと播いプレートは室温で一晩乾燥させます。 </li></ol>ワームアッセイ11）卵<ol><li> 15ピック- 20上演-L4 C.準備BHI-ストレプトE.上の細菌の芝生の中央に虫 （ 図1） フェカリスプレート 。 BHIプレートにOP50の多くを転送しないように注意してください。 NGM-OP50プレートコントロールにL4s同じ数を選ぶ。 </li><li> 20℃で40時間、プレートをインキュベート</li><li> 20％漂白剤溶液を準備します。蒸留水の適切な量と市販漂白剤（6.0％次亜塩素酸ナトリウム）を混ぜる。 </li><li>プラスチックの蓋の上に10の個別の場所（ワームまたは細菌プレート）に漂白剤溶液10μl滴を追加します。 </li><li>ワームピックを使用して、各漂白ドロップに1ワームを転送します。静かに渦の先端ワームは、ピックの先端を（解剖顕微鏡下で滴を表示することによって確認）洗い流されていることを確認するために漂白剤の液滴で選ぶ。 </li><li>ワームは卵を（ 図2）追放、オープンバーストまでキューティクルが約10分間、または溶解することができます。プレートから卵を転送しないように注意してください。 </li><li>解剖顕微鏡を使用して、漂白剤の各ドロップで卵を数える。 </li></ol>

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著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言します。

正常にこのアッセイを実施する中で最も重要なステップは次のとおりである：1）C.のよく供給銘柄を使用して正確に識別虫 、2）アッセイプレート上の細菌の培養、単一種類、3）E.への露出のためにL4ワームを上演フェカリス、4）Eに露光時間を維持するすべての試験および5にわたって一貫フェカリス ）漂白時間は卵の崩壊を防ぐために、10分を超えてはならない。 このアッセイのためには、健全な、よく飼育ワームを選ぶことが重要です。母性飢餓は子孫19,20の繁殖力と成長に影響を与えることができ、したがって、それはワームがよくこのアッセイを実行する前に、いくつかの世代のために供給されていることが重要です。ワームのよく供給株式だけで簡単に2〜3日ごとに新しいシードNGMプレートにいくつ成虫を転送することによって維持されている。検定前に2日、成虫は、アッセイのために利用できる十分なL4子孫を持つためにOP50の新鮮な芝生の上に配置する必要があります。 &lt;ウェブクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;これは、EIWのアッセイプレートは、細菌の一タイプのみの成長を促進することも重要である。E.フェカリス菌株を BHIプレート上で増殖させた。ストレプトマイシンを大腸菌に対して選択するプレートに加えた彼らは、アッセイプレートにメンテナンスNGMプレートから転送されるL4ワームで転送された大腸菌 OP50、。 OP50もBHIプレート上に生えています。 、C.に対して選択されていない場合エレガンスは BHIプレート上ながら細菌の2つのタイプ（ 大腸菌及びE.フェカリス ）を餌になります。 E.の株このアッセイで使用フェカリスは、ストレプトマイシンに耐性がある。細菌の異なる種類このアッセイ、異なる抗生物質、おそらく異なる培地のために使用された場合は、選択した細菌を選択するために使用され、E.に対してすべきである大腸菌 OP50。 正確にこのアッセイのためにワームを上演を​​選択すると、いくつかの理由で重要です。まず、tの間に卵の保持をカウントすることが重要である<html>彼は産卵の時/自己受精Cに敷設エレガンス 。産卵は、Cの最初の5日間のみ発生elegansの成人（40時間後にL4の周りピーク）かつ迅速にその後4,21を拒否。受精卵を生産していないながら、成虫は2〜3週間の平均のために生きる、非常に多くの成虫は、少なくとも一週間のために生きる。したがって、EIWアッセイは年齢不詳のコミット予定していない成虫で実行されていないことを確認することが重要である。 それはEIWアッセイで動物を上演使用することが重要である第二の理由は、ワームが細菌にさらされてきた時、開発の時間、毒素または薬剤が厳密に制御されるようになります。 C.の文化エレガンスは通常卵、L1またはL4の段階で同期されます。 L4の段階があるため、Eに長い露光その懸念このアッセイに使用したワームは妊娠成人になる前フェカリスは致死性をもたらすでしょう。 10トン &quot;&gt;タイムワームの持続時間は漂白剤溶液中に残っているこの時間はワームからワームに変化はないものの、ワームは受精卵が最終的に漂白剤で溶解される。、通常は10分未満で溶解する必要があります。監視することも重要ですが、プロセス保護卵殻の存在のためにキューティクルのためよりも遅くなります。卵殻よりも長い10〜15分間溶液中に残っている場合漂白剤により溶解が開始されます。 卵の保持は産卵と産卵の間のバランスを反映している。独りEIWアッセイは、子宮内に保持卵数は産卵や産卵の変化によるものかどうかを区別しません。細菌株または毒素で処理したワームが対照群に比べ少なく卵を保持する場合、これは特に問題である。特に、これらのケースでは、フォローアップのひなサイズアッセイを行う必要があります。ひなサイズアッセイは、ワームの生殖寿命4上で産卵数を定量化</sup&gt;。実験群と対照群のワームのひなのサイズが同じであれば、卵性に差が産卵動作の違いに起因することができる。それは考えにくいので、そのようなE.穏やかに病原性菌株フェカリスは、卵の生産を増加させるために行動するでしょう、それが仮定するのが妥当であるE.への曝露後の卵の保持の増加フェカリスは、（ 図3に見られるように）減少した産卵行動の結果である。 EIWアッセイはまた、細菌が卵の保持を変更することができるメカニズムを決定するものではありません。それが可能であることでそれは貧しい食料源であるため、病原細菌が植民地にして口の開口部をブロックしたりすることにより摂食に影響を与えるため、 虫卵を保持することができる。それは細菌がコロニー形成し、外陰開口部を塞ぐ、または産卵系の細胞の機能に影響を及ぼす可能性もある。さらなる分析は、WHIのメカニズムを決定するために必要とされるchの卵の保持が変更される。 このEIWアッセイを容易に卵の保持に対する化合物の多くの種類の効果を決定するために変更することができる。また、このアッセイは、病原体の効果のために必要な宿主（C.エレガンス ）または病原体（E.フェカリス ）に、遺伝子を同定するための画面に組み込むことができることを十分に単純である。 EIWアッセイはまた、産卵そのもの。C.を調節するために必要な遺伝子をスクリーニングするために使用することができるelegansの産卵行動は、このようなセロトニンやアセチルコリンなどの神経伝達物質5-9で変調され、いくつかの神経細胞や筋肉群12の協調活動を必要とします。 EIWアッセイは、神経伝達物質となってシグナリングおよび/または筋肉の活動のために重要な遺伝子を同定するために使用され続けている。 EIWアッセイは、重要なCの定量的ではなく、質的よりも、分析を提供elegansの行動。

線虫（Caenorhabditis elegans）、顕微鏡、自由生活回虫は、伝統的に人間に、その透明な解剖学、十分に特徴付け開発、完全に順ゲノム、短い世代時間、および遺伝的相同性の発達と細胞シグナル伝達過程を研究するために使用されるモデル生物である。より最近では、C.エレガンスは、環境毒物学と先天性免疫10、11の分野でモデル生物となっています。 これらの自己受精雌雄同体のワームは卵から孵化2〜3日以内に、性的に成熟したとなります。そのライフサイクル、C.中エレガンスは、成人に達する前に、4幼虫（L1〜L4）を通過する。 One孤立ふたなり、ピーク産卵から3日以内に、平均して、300子孫を生成することができます。生殖成熟したCでエレガンス雌雄同体は、受精卵が敷設される前に数時間のために子宮内に保持されています。ザ任意の一時点で子宮内に格納された卵の数は、通常の（ピーク産卵時）10及び15 12の間である。子宮内の卵の数は、産卵率と産卵率の両方の関数である。受精卵は、外陰部13の開口部の周囲に配置された16外陰部の筋肉の収縮によって子宮から追放されています。ふたなり特有の運動ニューロン（HSNの）とVCの運動ニューロンのシナプス筋収縮に影響を与える外陰部の筋肉の上に、したがって、産卵行動5,7,13,14。子宮から卵の追放は、ニューロンと筋肉の協調活動に起因して発生する。 C.のラボ文化エレガンスは 、通常非病原大腸菌 OP50の食事で育てています。自然環境、Cの線虫は、例えば病原性細菌などの食品、さまざまなソースに接触し、それは潜在的に有害であり得る。中の有害物質にさらされた場合環境、C.環境がより有利になるまで虫卵を保持します。おそらく、この卵の保持はその子孫を守るための努力です。 ワーム（EIW）アッセイでは、この卵で、C.エレガンスは 、潜在的に病原性細菌、環境で発見されている腸球菌を 、公開されています。 E.の病原フォームへの暴露フェカリスはCで永続的な腸の感染症や死を引き起こす可能性がありますエレガンス 15。病原性細菌の他の形態への曝露は、しかし、効果を定量されなかった、卵の保持16,17に影響を及ぼすことが示されている。また、E.の軽度の病原性株の効果産卵行動に関するフェカリス 、すぐに致死でない株は、研究されていない。 EIWアッセイは、C.の子宮内に保持された卵の数を数える含むエレガンス 4。にもかかわらずC.エレガンス透明であり、子宮内に蓄積した卵は、無傷の動物で定量化することは困難になる可能性があります。 EIWアッセイは妊娠成人Cを漂白関与一定期間細菌に曝露した虫 。漂白剤溶液は、背後に卵を残して外側のキューティクルを溶解する。卵は、保護卵殻の存在による漂白の効果に屈折率である。漂白した後、一方は非常に簡単に漂白時にワームの子宮から放出された卵の数をカウントすることができる。 記載されたアッセイは、一度に子宮に卵の数を定量化する、単純で安価かつ迅速な方法であるため、E.の影響を定量化卵の保持にフェカリス 。このアッセイは、卵の保持に対する細菌、環境毒素又は薬剤の他の種類の効果を定量化するために使用することができる。このアッセイはまた、病原性細菌のためのスクリーンとして使用される可能性を秘めている。

<table><tbody><tr><td>Agar, ultrapure</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Tryptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion dehydrated medium</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>781781</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;, N2 strain</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;</td><td>Tritech Research Inc.</td><td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt;</td><td>Fisher Scientific-Fisherbrand</td><td>875713</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli &lt;/em&gt;(OP50)</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt; strains</td><td></td><td></td><td>provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci</td></tr><tr><td colspan="4">by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;</td></tr><tr><td colspan="4"> &lt;p&gt;all strains grew at 44.5 &amp;ordm;C and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified&amp;nbsp;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;(arabinose, mannitol, methyl-&amp;alpha;-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;presumptive identification of all &lt;em&gt;E&lt;/em&gt;. &lt;em&gt;faecalis&lt;/em&gt; strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Motic</td><td>SMZ 168B</td><td>any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient</td></tr><tr><td>Streptomycin sulfate</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL</td><td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td>Yeast extract</td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

measuring the effects of bacteria on c. elegans behavior using an egg retention assay

C. elegansの産卵行動は、浸透圧1と振動2などの環境手がかりに影響されます。食品Cの合計がない場合に虫も産卵を中止し、その子宮3で受精卵を保持します。しかし、特に異なる食品の源、特に病原性細菌と産卵行動に腸球菌 、の効果は十分に特徴付けされていません。卵内ワーム（EIW）アッセイは、この場合にはE.、細菌の異なる種類の効果を定量化するための有用なツールであるフェカリス、産卵行動に。 EIWアッセイは、C.の子宮内に保持された卵の数を数える含むエレガンス 4。 EIWアッセイは上演漂白、妊娠成人C.を伴うelegansのキューティクルを除去し、動物から保持卵を分離する。前の漂白に、ワームは、細菌（または環境キューの任意のタイプにさらされている）一定の期間。漂白した後、一方は非常に簡単にワームの子宮内部に保持された卵の数をカウントすることができる。 E.後の卵の保存では、このアッセイでは、定量化可能な増加フェカリス露光を容易に測定することができる。 EIWアッセイは、潜在的に病原性の細菌や環境毒素の存在についてスクリーニングするために使用され得る行動アッセイである。また、EIWアッセイは産卵行動がこのようなセロトニンやアセチルコリンなどの神経伝達物質5-9によって変調であるため、シグナル伝達物質に影響を与える薬をスクリーニングするためのツールかもしれません。

このアッセイは、一つC.内に保持された卵の数を定量化することができE.への曝露後のelegansフェカリス 。 L4は、ワームは（彼らの外陰部、 図1上記の透明オープンスペースが特徴）E.にさらされた上演成人期を通じてフェカリス 。 E.への暴露の40時間後フェカリスは 、漂白を行った。キューティクルは、漂白液滴で崩壊したように、卵がより明らかになった（ 図2）。保持された卵の数は、解剖顕微鏡下で容易に確認しながらカウントすることによって定量した。 多くの卵を大腸菌の存在下に保持されたE.フェカリスに比べて株は、試験大腸菌 OP50コントロール（ 図3）。 E.のいずれかに歪みの影響でいくつかのバリエーションがありますエラーバーから見られるように、個々のワームにフェカリス 、。しかしながら、E.株の効果卵リテンション内にフェカリスワームの人口はコントロールから大きく変化はない。卵の保持の程度はE.の異なる菌株によって誘発フェカリステストさも異なる場合があります。この様々な効果は、各菌株で異なる病原性因子の発現に起因し得る。 <img alt="図1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig1.jpg" /> 図1。 L4はC.を上演識別エレガンス 。 L4段階C.虫幼虫は成虫よりも長さが若干短く専用プレート上の最大の幼虫の存在している。 L4sは保持卵（成虫はやや広い作るもの）、Bが存在しないためだけでなく、大人よりも薄いです。大人より少し短いものの幼虫を識別した後、L4-上演C.エレガンスは、さらにに位置軽く半月スポットによって識別され自分の体の真ん中（黒矢印）。このスポットは小さい幼虫（L2およびL3段）に表示されているが、成人では存在しない。すべての画像は解剖顕微鏡（AとB、それぞれのための40Xと50Xの倍率）に取り付けられたカメラで、NGMプレート上のワームを撮影しました。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51203/51203fig1highres.jpg">大きな画像を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig2.jpg" /> 図2。漂白剤溶液は、Cを溶解時間をかけて虫がキューティクル。上演成体ワーム（）を漂白剤溶液の液滴に配置されます。 5〜10分かけて、ワームのキューティクルは、（BF）溶解し始める。キューティクルのほとんどが溶解しているので、卵は（F黒矢印）見えるようになる。ワームALS内部脂肪質の店<html>漂白剤でゆっくり溶解O、および（F、灰色の矢印）表示されたまま。すべての画像は解剖顕微鏡（40X）に取り付けられたカメラで、NGMプレート上のワームを撮影しました。 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/51203/51203fig2highres.jpg">大きな画像を表示するには、ここをクリックしてください</a> 。 <img alt="図3" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51203/51203fig3.jpg" src="/files/ftp_upload/51203/51203fig3.jpg" /> 図3。一部E.フェカリス株は暴露40時間後に増加した卵の保持を引き起こす。6 Eの2にさらされるワームはフェカリス株は（オレンジ色のバー）ワーム飼育E.に比べて卵の保持レベルの上昇を示した大腸菌 （OP50）コントロール株（青いバー）。テンワームは、各試験の各菌株を与えた。試験は、異なる日に三連で行った。 *はp &lt;0.05（スチューデントのt検定）を示す。&quot;&gt;拡大画像を表示するにはここをクリックしてください。

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卵保持アッセイを使用した C. エレガンスの行動に対する細菌の影響の測定 |生物学 |ビデオ

Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

卵·イン·ワーム（EIW）アッセイは、産卵行動を定量化するための有用な方法である。産卵の変化は、モデル生物の行動反応することができます<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em&gt;このような病原性細菌によって生成されるものとして、潜在的に有害な環境物質へ。

上の細菌の影響を測定する<em&gt; C.エレガンス</em卵保持アッセイを用いて&gt;行動

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

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Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

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17.0K ビュー.  Fairleigh Dickinson University. 卵·イン·ワーム（EIW）アッセイは、産卵行動を定量化するための有用な方法である。産卵の変化は、モデル生物の行動反応することができます線虫（Caenorhabditis elegans）このような病原性細菌によって生成されるものとして、潜在的に有害な環境物質へ。

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The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the intestine the primary location for disease. The nematode intestine structurally and functionally mimics mammalian intestines and is transparent making it amenable to microscopic study of colonization. Here we show that pathogens can cause disease and death. We are able to identify microbial mutants that show altered virulence. Its conserved innate response to biotic stresses makes C. elegans an excellent system to probe facets of host innate immune interactions. We show that hosts with mutations in the dual oxidase gene cannot produce reactive oxygen species and are unable to resist microbial insult. We further demonstrate the versatility of the presented survival assay by showing that it can be used to study the effects of inhibitors of microbial growth. This assay may also be used to discover fungal virulence factors as targets for the development of novel antifungal agents, as well as provide an opportunity to further uncover host-microbe interactions. The design of this assay lends itself well to high throughput whole-genome screens, while the ability to cryo-preserve worms for future use makes it a cost-effective and attractive whole animal model to study.

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Here, we present the nematode Caenorhabditis elegans as a versatile host model to study microbial interaction.

線虫の宿主微生物間相互作用を研究する多彩なIn Vivoモデル

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

遺伝学

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

線虫集団ベースの化学感覚嗜好アッセイの自動解析

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

行動学

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ<em&gt;線虫（Caenorhabditis elegans）</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

神経科学

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their locomotory patterns upon detection of diverse environmental stimuli and can modulate their suite of behavioral responses in response to starvation conditions. Nematodes typically exhibit a decreased aversive response when removed from a food source for over 30 min. Observation of behavioral changes in response to a changing nutritional status can provide insight into the mechanisms that regulate the transition from a well-fed to starved state.
We have developed an assay that measures a nematode&#39;s ability to cross an aversive barrier (i.e. copper) then reach a food source over a prolonged period of time. This protocol builds upon previous work by integrating multiple variables in a manner that allows for continued data collection as the organisms shift towards an increasingly starved condition. Moreover, this assay permits an increased sample size so that larger populations of nematodes can be simultaneously evaluated.
Organisms defective for the ability to detect or respond to copper immediately cross the chemical barrier, while wild type nematodes are initially repelled. As wild type worms are increasingly starved, they begin to cross the barrier and reach the food source. We designed this assay to evaluate a mutant that is incapable of responding to diverse environmental cues, including food sensation or detection of aversive chemicals. When evaluated via this protocol, the defective organisms immediately crossed the barrier, but were also incapable of detecting a food source. Hence, these mutants repeatedly cross the chemical barrier despite temporarily reaching a food source. This assay can straightforwardly test populations of worms to evaluate potential pathway defects related to aversion and starvation.

A Caenorhabditis elegans Nutritional-status Based Copper Aversion Assay

Here, we present a Caenorhabditis elegans-specific assay designed to evaluate changes in copper aversion behavior and the ability to locate a common food source, as the organism progresses from a well-fed to starved nutritional state.

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt;栄養状態ベースの銅回避アッセイ

To ensure survival, organisms must be capable of avoiding unfavorable habitats while ensuring a consistent food source. Caenorhabditis elegans alter their ...

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A non-mammalian soil round worm, Caenorhabditis elegans, is a valuable model organism for toxicology studies due to its convenience and lack of animal ethics issues compared with mammalian animal systems. In this protocol, a detailed procedure of toxicological evaluation of chemicals in C. elegans is described. A clinical anticancer drug, etoposide, which targets human topoisomerase II and inhibits DNA replication of human cancer cells, was selected as a model testing chemical. Age-synchronized C. elegans eggs were exposed to either dimethyl sulfoxide (DMSO) or etoposide, and then the growth of C. elegans was monitored every day for 4 days by the stereo microscope observation. The total number of eggs laid from C. elegans treated with DMSO or etoposide was also counted by using the stereo microscope. Etoposide treatment significantly affected the growth and reproduction of C. elegans. By comparison of the total number of eggs laid from worms with different treatment periods of chemicals, it can be decided that the reproductive toxicity of chemicals on C. elegans reproduction is reversible or irreversible. These protocols may be helpful for both the development of various drugs and risk assessment of environmental toxicants.

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

A basic protocol to evaluate the toxicity of chemicals in a model animal, Caenorhabditis elegans, is described. The method is convenient and useful for the development of pharmaceuticals as well as for the risk assessment of various environmental pollutants.

成長および線虫の繁殖に対する薬剤の効果を測定

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

医学

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates. Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis behavior.
 The premise behind testing the response of the worms to an odorant is to place them in an area and observe the movement evoked in response to an odorant. Even with the many available assays, optimizing worm starting location relative to both the control and test areas, while minimizing the interaction of worms with each other, while maintaining a significant sample size remains a work in progress 1-10. The method described here aims to address these issues by modifying the assay developed by Bargmann et al.1. A Petri dish is divided into four quadrants, two opposite quadrants marked "Test" and two are designated "Control". Anesthetic is placed in all test and control sites. The worms are placed in the center of the plate with a circle marked around the origin to ensure that non-motile worms will be ignored. Utilizing a four-quadrant system rather than one 2 or two 1 eliminates bias in the movement of the worms, as they are equidistant from test and control samples, regardless of which side of the origin they began. This circumvents the problem of worms being forced to travel through a cluster of other worms to respond to an odorant, which can delay worms or force them to take a more circuitous route, yielding an incorrect interpretation of their intended path. This method also shows practical advantages by having a larger sample size and allowing the researcher to run the assay unattended and score the worms once the allotted time has expired.

C. elegans Chemotaxis Assay

A method of quantitatively evaluating the chemotactic response of Caenorhabditis elegans is described. A chemotactic index (CI) was employed as a way to precisely evaluate the response of worms to certain targets, and serve as a platform of comparison between strains and compounds of interest.

C. elegansの走化性アッセイ

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

生物学

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, sequester or eliminate damaged proteins to maintain a healthy proteome, thus ensuring cellular proteostasis and preventing further protein damage. Because of redundant functions within the proteostasis network, screening for detectable phenotypes using knockdown or mutations in chaperone-encoding genes in the multicellular organism Caenorhabditis elegans results in the detection of minor or no phenotypes in most cases. We have developed a targeted screening strategy to identify chaperones required for a specific function and thus bridge the gap between phenotype and function. Specifically, we monitor novel chaperone interactions using RNAi synthetic interaction screens, knocking-down chaperone expression, one chaperone at a time, in animals carrying a mutation in a chaperone-encoding gene or over-expressing a chaperone of interest. By disrupting two chaperones that individually present no gross phenotype, we can identify chaperones that aggravate or expose a specific phenotype when both perturbed. We demonstrate that this approach can identify specific sets of chaperones that function together to modulate the folding of a protein or protein complexes associated with a given phenotype.

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

To study chaperone-chaperone and chaperone-substrate interactions, we perform synthetic interaction screens in Caenorhabditis elegans using RNA interference in combination with mild mutations or over-expression of chaperones and monitor tissue-specific protein dysfunction at the organismal level.

カエノハブディティス・エレガンスを使用して組織特異的シャペロン相互作用をスクリーニングする

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...

パラホルムアルデヒドを用いた 線虫Caenorhabditis elegans における細菌代謝不活性化

Methodology to Metabolically Inactivate Bacteria for Caenorhabditis elegans Research

Caenorhabditis elegans is a common model organism for research in genetics, development, aging, metabolism, and behavior. Because C. elegans consume a diet of live bacteria, the metabolic activity of their food source can confound experiments looking for the direct effects of various interventions on the worm. To avoid the confounding effects of bacterial metabolism, C. elegans researchers have used multiple methods to metabolically inactivate bacteria, including ultraviolet (UV)-irradiation, heat-killing, and antibiotics. UV treatment is relatively low-throughput and cannot be used in liquid culture because each plate must be examined for successful bacterial killing. A second treatment method, heat-killing, negatively affects the texture and nutritional quality of the bacteria, leading to the developmental arrest of C. elegans. Finally, antibiotic treatment can directly alter C. elegans physiology in addition to preventing bacterial growth. This manuscript describes an alternative method to metabolically inactivate bacteria using paraformaldehyde (PFA). PFA treatment cross-links proteins within bacterial cells to prevent metabolic activity while preserving cellular structure and nutritional content. This method is high-throughput and can be used in liquid culture or solid plates, as testing one plate of PFA-treated bacteria for growth validates the whole batch. Metabolic inactivation through PFA treatment can be used to eliminate the confounding effects of bacterial metabolism on studies of drug or metabolite supplementation, stress resistance, metabolomics, and behavior in C. elegans.

著者スポットライト:パラホルムアルデヒド処理細菌を用いた線虫研究の進展 

The food source for Caenorhabditis elegans in the lab is live Escherichia coli. Since bacteria are metabolically active, they present a confounding variable in metabolic and drug studies in C. elegans. A detailed protocol to metabolically inactivate bacteria using paraformaldehyde is described here.

Caenorhabditisのelegansの研究のための細菌を新陳代謝的に不活性化する方法論

Caenorhabditis elegans is a common model organism for research in genetics, development, aging, metabolism, and behavior. Because C. elegans consume a ...

上の細菌の影響を測定する

要約

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この動画の章

線虫の宿主微生物間相互作用を研究する多彩なIn Vivoモデル

線虫集団ベースの化学感覚嗜好アッセイの自動解析

の歩行速度に対するエタノールの効果を測定するためのアッセイ

A

成長および線虫の繁殖に対する薬剤の効果を測定

C. elegansの走化性アッセイ

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

カエノハブディティス・エレガンスを使用して組織特異的シャペロン相互作用をスクリーニングする

Caenorhabditisのelegansの研究のための細菌を新陳代謝的に不活性化する方法論

Caenorhabditisのelegansの研究のための細菌を新陳代謝的に不活性化する方法論