オックスフォード大学へのオープンアクセスの資金を提供するためのウェルカムトラスト。ロバートディーコンは、ウェルカムトラスト助成金WT084655MAによって資金を供給オックスフォードOXIONグループのメンバーです。

1。はじめに： マウスやラットは、最初は小説食物のごく少量を消費します。これは、彼らが嘔吐することができないことに起因する中毒に責任があるためであると考えられている。 彼らは以前にその食品を食べた別の動物に遭遇している場合は、これに対する唯一の例外は、彼らは仲間から吐き出される空気のそれの臭いなら、彼らは安全な13としてそれを分類します。食品の匂いが他のラットの呼吸12日に、二硫化炭素とペアリングされているためです。確かに、二硫化炭素自体はマウスとラット17の両方で摂餌量が増加します。現象は&quot;食べ物の好みの社会的伝達&quot;と呼ばれ、シンプルな嗅覚学習のパラダイム22として使用することができます。これは、海馬3の病変に敏感であることが報告されているが、他の研究5はこの発見を複製に失敗している。それは新皮質のコリン作動性システム、特に眼窩コンポーネント19は、社会的な伝送のための海馬のコリン作動性システムよりも重要であることが示唆されている。社会的な伝送であってもおそらく減少CREB（cAMP依存応答エレメント結合タンパク質）高齢者の海馬7の伝達によって媒介、老齢ラットでは記憶障害を追跡することが示されている。 げっ歯類は、社会的な伝達による食品の嗜好を獲得しやすさはhyponeophagiaテスト用の強力な意味を持っています。著者は、海馬病変と対照ラットとhyponeophagiaのテストを実行していたとき、彼は誤ってテスト8のために次のコントロールのラットのケージにテストされた海馬のラットを（スイートコーンを食べていたもの）入れて。それは、14秒以内に300秒の遅延を持っているだけでなく、コントロールを食べた細心の注意従ってhyponeophagiaのテスト中に食べ物の匂いのような社会的な感染を防ぐために注意が必要です。 第一hyponeophagiaテストが分かりやすく明確な結果にならない場合、複数のさらなる試験を行うことができます。図1-4は、さまざまな装置の例を示しています。考案することができるテストの状況の数は、実験者の想像力によって制限されます。結果は、双方向の反復測定ANOVAによって分析されています。 hyponophagiaデータは非常に長い待ち時間を与えるいくつかの動物で、ガウス分布に適合すると頻繁に偏りがない、一般的には非常に可変なので、それは最初に変換する必要があります。平方根や対数変換は、極端な長いレイテンシを切り詰めるために特に有用である。 2。装置： 図1-4 hyponeophagiaテストセットアップの例として提示されています。スイートコーンのnibletもそれに置かれる可能性がよく、図1に示すように、食品は、明らかに最高の液体を含むため、非常に適したものの、新規食品及び環境の特定の組み合わせは、重要ではありません。 一般的に、それは食物で覆われた装置の床の大部分を置いておくのは良い考えです。だけでなく、動物が忌避この異常な面を見つけるように見えるか、このテクニックはまた、食べ物を見つける前に探査のために困惑を解消。それは不安惹起したかので、それは、それが運動を押したので、食べ物を見つけると食べて待ち時間が増大するためこのように鎮静薬は、不安惹起表示される場合があります。たとえば、ある出版物は、オープンフィールド2の中央に食べ物を入れてお勧め。だけでなく、この結果は、探索時間が交絡している餌の待ち時間で、それはまた、不安、すなわち、オープンフィールドの中央エリアの嫌悪の追加のファセットで捕食リスクの回避に関連しているオープンフィールドを介した不安、の古典的な尺度を導入していない自然の生息地14。しかし、状況によっては、これは実際に実験の目的の機能かもしれません。 2で述べた実験のもう一つの欠点は、餌はオープンフィールドの中心に標準的な実験室チャウということだった。これは小説ではないことを二重欠点を有し、また、そのようなスイートコーンや加糖練乳のような食品とは異なり、 非常においしいではありません。したがって、この側面のみを軽度の欠乏は必要である;私たちは、常に極端な嗜好性の餌を使用すると、新たな食べ物を食べたり、回避するかどうかをめぐる紛争を増加させるだけでなく、動物は試験前に奪わ過度に食品である必要がないだけでなく、ことを発見したここで紹介したプロトコルのラッセルとバーチ20の3Rの&quot;洗練&quot;の側面を反映している。 2.1手順： 一晩マウスの食品配給。約彼らは通常の食事というものの第三である普通食、1gの/マウスを与えてからテストする前にケージのホッパー夕方からすべての食べ物を削除します。その場合に収容されたグループには、作品がすべてのマウスが等しい株式を食べることができるように小さくしていることを確認してください。それらをテストする翌朝と、すぐにテストが終了すると、その食べ物を交換してください。 また、選択されたhyponeophagia試験装置、グループホームケージからマウスがテストの実行前と実行中個別に配置される小さなケージの行を設定します。 （これはまた、徐々にグループからマウスを削除する場合に発生する可能性があるグループのケージに残って残っているマウスの不安の増加、、食べ物の好みの社会的な伝送を回避することができます。また、テストの標準化（グループと単独飼育動物との間）を支援と動物が最適に警告していることを保証します。 試験装置にマウスを置きます。食べてレイテンシを測定します。これは、連続して2〜3秒のために食べる/飲むように定義されます。多くの場合、マウスはにおいを嗅ぐまたはなめる最初は食べ物を短く、しかし唯一の後に阻害することなく継続的に食べるように開始されます。 他の対策も取ることができます。時間は最初の開始を供給した後、例えば2分、セット期間中に食べて過ごし、そしておそらくまた、この期間中に消費される食料の量は、また測定することができます。脳の病変は、しばしば、これらの差動4小節に影響します。 図1に示す装置を用いてhyponeophagiaのテストを実行する2.2具体的な内容： 半透明のプラスチック製の水差しは、（おおよその体積1.5リットル、注ぎ口、さらに2cmの突出と15cmの直径）試験装置です。フルクリームを使用するには、（ネスレのカーネーションブランドが優れている）小説食品として水（それを処理促進するため）と希釈50:50コンデンスミルクを甘く。ベース上でマウスを含むとミルクの調査を容易にするために、注ぎ口も食品の上に小さな床の間を形成して上下逆さまに水差しを置く。これは、程度の認識、またはに向き、食料源に影響を与える可能性のある治療の効果を最小限に抑え、よく、牛乳へのマウスの注意を焦点を当てています。 マウスが離れても向こう側に配置され、ジャグは静かにマウスの尾をトラップしないように注意しながら、位置に低下する。 適切に飲酒を開始するために装置内に配置されてからの待ち時間が取られます。カウントしていない牛乳で嗅ぐ、飲むのは、少なくとも2秒が発生する必要があります。任意の糞便薄利をカウントし、任意の排尿を（ただし、これらの措置は装置内の時間によって影響されることに注意してください）​​に注意してください。カットオフタイムは2分です。マウスはその後で酔っていない場合は、装置からそれを削除し、別の1つまたは2つのマウスをテストしてから、後で3分程度飲むことを失敗したかをテストします。この時間は、おそらくまだ装置への馴化の状態を維持しながら、不安のレベルを減少させる最適です。マウスが食べたり、試験の設定数が実行されるまで、このテスト残り再試験 - 休息 - 再検査のサイクルを継続することができます。 3試験の最大は長すぎる実験をせずに飲んでほとんどのマウスになるはずです。試験パラメータは、飲むこと（累積）待ち時間です。 臭いが重要な役割を果たすことができる他のテストと同様に、非実験用マウスは、試験開始前に装置内に配置する必要があります。すべてのマウスの間で標準化されたクリーニングのプロトコルに従ってください。尿/糞便、食品をよく拭き、乾いた布/組織に続く湿ったとプラスチックベースを取り外します。リフィル牛乳と同様、食品（0.2ミリリットル程度、井戸の縁に）。 <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="図1"/> 図1。 hyponeophagiaテストユニットとして使用するために変換プラスチック国内の水差し。加糖練乳を便利にするストレートマウスの注意を向けるも注ぎ口の内側にある小さな食品、に配置することができます。水差しの反転ベースに接着鉛の重りは、壁にマウスのあらゆる動きに対して、それを安定させるのに役立ちます。 <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="図2"/> 図2二つの白（不安をかき立てる）hyponeophagiaテストのための白いインサートを含む観測室。スイートコーンは、新たな食品として使用することができる。 <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="図3"/> 図3。もうhyponeophagiaテストユニット。小説食品は、猿の御馳走のミックスです。 <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="図4"/> 図4。もうhyponeophagiaテストユニット。提示食べ物は混合刻んだナッツです。 3。複数hyponophagia実験を実行している。 第一hyponeophagiaテストでは、明確な結果を提供することはできません。これは頻繁に発生し、天井や床の影響で、その結果、頻繁に高いまたは低すぎるというベースライン（コントロール）の値によるものです。 10海馬病変マウスをテストするときに床効果が発生しました、それはコントロールの値がを観測するために十分に高いことがあったように見えましたeはhyponeophagiaを減少させた。 それは、テストの状況の必要なaversivenessを判断することが困難な場合があります。マウスは、すでに何度かテストされている場合（必ずしも不安に関連するタスクについて）彼らの情動性のレベルは、彼らが行動試験とより多くの不安惹起試験にve NAである場合に必要とされるよりも低くなります。これはしばしば上昇テスト環境（図4のように）によって提供することができる。嫌悪ノイズは大音量やホワイトノイズジェネレータで演奏中のラジオを、例えば、テストの状況に追加される可能性があります。明るい照明でもテスト環境のaversivenessを増加させるでしょう。 したがって、最初のhyponeophagia結果が重大でない場合は、さらにいくつかのテストの状況を試してみて、反復測定ANOVAを実行します。これは非常に強力な実験的なデザインです。 4。期待される結果： 海馬病変はマウス10のhyponeophagiaで強い減少を生産し、最近の未発表の作品は、これは、としてラット1で、海馬の腹側の領域によるものであることが示されている。 KATPチャネルサブユニットKir6.2の欠損マウスは別の9、混乱を招く結果が、テスト環境の違いが結果に著しい影響を持つことができることを強調するために機能する1つ1つのテストが少ないのhyponeophagiaを増加し、また有用性を指摘して示した複数のテストを行う。 129S2/SvHsdマウスはC57BL/6JolaHsd 6より多くのhyponeophagicていた。実際、いくつかの近交系マウスの比較は、マーク間の歪みの違い21を示した。

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利害の衝突は宣言されません。

hyponeophagiaテストで待ち時間の数字は一般的に大きく変動する。技術はそれを食べるために失敗した場合、超長い待ち時間のリスクを最小限に抑えるために役立つ、後で再テストし、食べるために動物のための一連の期間を課すことで、ここで説明し、実験者の時間を節約できます。 このようなプラス迷路のような不安のテストよりhyponeophagiaの一つの利点は、最初のテストの結果は統計的有意性を達成するために失敗した場合に不安のタイプが測定されるものとして、別のテストは、別の新たなテスト環境と食べ物を使って実行できることです。同じように表示され、質的に加えて、迷路16のとは異なり、以前に実行したテストでは変更されません。反復測定ANOVAは、一連のテストを評価するために使用することができます。 それは今情動性のいくつかの異なる側面を包括的用語&quot;不安&quot;11,15,18によってカバーされることが知られている。 hyponeophagiaの変化を示すマウスは、必ずしも高架式十字迷路オープンフィールドの変更、または明暗箱テストは表示されません。したがって、これらのテストでのパフォーマンスの根底にある脳のシステムは、少なくとも多少異なっている必要があります。例えば、視床下部と杏仁孔はよく、それらが食物摂取の調節（特に​​）と懸念しているとしてhyponeophagiaに参加することができます。

hyponeophagia: a measure of anxiety in the mouse

今日の前に、このようなα-クロラロースなどの即効性と強力な殺鼠剤がまだ使用されていなかったときに、害虫のコントローラの作業は、しばしば、&quot;餌の内気&quot;と呼ばれる現象によって妨げられた。マウスやラットは、その彼らが最初に新規物質のごく少量を摂取するの戦略を進化させて潜在的な食品の毒性の問題を克服するために、胃の噴門括約筋の緊張が原因で、嘔吐することはできません。金額には、動物が物質の安全性と栄養価かどうかを決定するまで徐々に増加して摂取する。そう古いラット - キャッチャーは、最初の発生地域では、毒素のための車両であることだったようなオートミールのような口当たりの良い物質を、入れてしまうでしょう。大量の容易に消費されていた場合にのみ、彼らはその後、車の味に影響を与えないように計算された量で、毒を追加します。動物は今すぐに大量に食べていた毒餌は、、その後、速やかにその機能を実行することになります。 餌の内気は、今不安を測定する方法として、行動実験室で使用されています。このようなスイートコーン、ナッツや加糖練乳のような高度においしいですが新規物質は、、などの新しいケージのような小説な状況でマウス（またはラット）、に提供されます。新しい食品の定義された量を消費するために待ち時間が測定される。 ロバートMJディーコンはで達することができる<a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

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Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

彼らの生来の注意深さが原因でマウスやラットは、、最初は特に小説の場所に、新たな食品を消費するのが遅いです。このhyponeophagiaは、容易に実験動物はそれほど心配彼らの野生の対応以外にもかかわらず、実験室で測定することができます。

Hyponeophagia：マウス​​の​​不安の測定

Before the present day, when fast-acting and potent rodenticides such as alpha-chloralose were not yet in use, the work of pest controllers was often ...

hyponeophagia-a-measure-of-anxiety-in-the-mouse

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.8K ビュー.  University of Oxford. 彼らの生来の注意深さが原因でマウスやラットは、、最初は特に小説の場所に、新たな食品を消費するのが遅いです。このhyponeophagiaは、容易に実験動物はそれほど心配彼らの野生の対応以外にもかかわらず、実験室で測定することができます。

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A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain is correlated with that strain s ethanol preference, and therefore sedation is a highly relevant measure to study the genetics of alcohol responses and drinking. We demonstrate a simple way to expose flies to ethanol and measure its intoxicating effects. The assay we describe can determine acute sensitivity, as well as ethanol tolerance induced by repeat exposure. It does not require a technically involved setup, and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A simple assay to measure the sedating effects of ethanol on Drosophila flies, based on the loss of righting reflex, is described.

ハエでエタノールの感度を測定するために簡単

Low doses of ethanol cause flies to become hyperactive, while high doses are sedating. The sensitivity to ethanol-induced sedation of a given fly strain ...

神経科学

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to cis-regulatory elements (CREs), short (&tilde;300-600 bp) stretches of genomic DNA which can lie upstream, downstream, or within the introns of the genes they control. CREs (i.e., enhancers/promoters) typically consist of multiple clustered binding sites for both transcriptional activators and repressors1-3. They serve as logical integrators of transcriptional input giving a unitary output in the form of spatiotemporally precise and quantitatively exact promoter activity. Most studies of mammalian cis-regulation to date have relied on mouse transgenesis as a means of assaying the enhancer function of CREs4-5. This technique is time-consuming, costly and, on account of insertion site effects, largely non-quantitative. On the other hand, quantitative assays for mammalian CRE function have been developed in tissue culture systems (e.g., dual luciferase assays), but the in vivo relevance of these results is often uncertain. 
Electroporation offers an excellent alternative to traditional mouse transgenesis in that it permits both spatiotemporal and quantitative assessment of cis-regulatory activity in living mammalian tissue. This technique has been particularly useful in the analysis of cis-regulation in the central nervous system, especially in the cerebral cortex and the retina6-8. While mouse retinal electroporation, both in vivo and ex vivo, has been developed and extensively described by Matsuda and Cepko6-7,9, we have recently developed a simple approach to quantify the activity of photoreceptor-specific CREs in electroporated mouse retinas10. Given that the amount of DNA that is introduced into the retina by electroporation can vary from experiment to experiment, it is necessary to include a co-electroporated 'loading control' in all experiments. In this respect, the technique is very similar to the dual luciferase assay used to quantify promoter activity in cultured cells. 
When assaying photoreceptor cis-regulatory activity, electroporation is usually performed in newborn mice (postnatal day 0, P0) which is the time of peak rod production11-12. Once retinal cell types become post-mitotic, electroporation is much less efficient. Given the high rate of rod birth in newborn mice and the fact that rods constitute more than 70% of the cells in the adult mouse retina, the majority of cells that are electroporated at P0 are rods. For this reason, rod photoreceptors are the easiest retinal cell type to study via electroporation. The technique we describe here is primarily useful for quantifying the activity of photoreceptor CREs.

Quantifying the Activity of cis-Regulatory Elements in the Mouse Retina by Explant Electroporation

This protocol describes a simple and inexpensive way to quantify the activity of cis-regulatory elements (i.e., enhancer/promoters) in living mouse retinas via explant electroporation. DNA preparation, retinal dissection, electroporation, retinal explant culture, and post-fixation analysis and quantification are described.

の活動の定量化シス</em植片エレクトロポレーションによってマウス網膜で>調節エレメント

Transcription factors within cellular gene networks control the spatiotemporal pattern and levels of expression of their target genes by binding to ...

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

マウス強制水泳試験

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Optokinetic Response as a Quantitative Measure of Visual Acuity in Zebrafish

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple response. More recently adult visual behavior in zebrafish has become of interest, but methods to measure specific responses are new coming. To address this gap, we set out to develop a methodology to repeatedly and accurately utilize the optokinetic response (OKR) to measure visual acuity in adult zebrafish. Here we show that the adult zebrafish's visual acuity can be measured, including both binocular and monocular acuities. Because the fish is not harmed during the procedure, the visual acuity can be measured and compared over short or long periods of time. The visual acuity measurements described here can also be done quickly allowing for high throughput and for additional visual procedures if desired. This type of analysis is conducive to drug intervention studies or investigations of disease progression.

Zebrafish have been a valuable tool for many research areas. Here we demonstrate a method to elicit a visual response and calculate a functional visual acuity in the adult zebrafish.

ゼブラフィッシュにおける視力の定量的尺度としての視運動性応答

Zebrafish are a proven model for vision research, however many of the  earlier methods generally focused on larval fish or demonstrated a simple  ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various neurological deficits. The current ex vivo live imaging of motile ependymal cilia technique allows for a detailed study of ciliary dynamics following several steps. These steps include: mice euthanasia with carbon dioxide according to protocols of The University of Toledo&#8217;s Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC); craniectomy followed by brain removal and sagittal brain dissection with a vibratome or sharp blade to obtain very thin sections through the brain lateral ventricles, where the ependymal cilia can be visualized. Incubation of the brain&#8217;s slices in a customized glass-bottom plate containing Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)/High-Glucose at 37 &#176;C in the presence of 95%/5% O2/CO2 mixture is essential to keep the tissue alive during the experiment. A video of the cilia beating is then recorded using a high-resolution differential interference contrast microscope. The video is then analyzed frame by frame to calculate the ciliary beating frequency. This allows distinct classification of the ependymal cells into three categories or types based on their ciliary beating frequency and angle. Furthermore, this technique allows the use of high-speed fluorescence imaging analysis to characterize the unique intracellular calcium oscillation properties of ependymal cells as well as the effect of pharmacological agents on the calcium oscillations and the ciliary beating frequency. In addition, this technique is suitable for immunofluorescence imaging for ciliary structure and ciliary protein localization studies. This is particularly important in disease diagnosis and phenotype studies. The main limitation of the technique is attributed to the decrease in live motile cilia movement as the brain tissue starts to die.

Using high-resolution differential interference contrast (DIC) microscopy, an ex vivo observation of the beating of motile ependymal cilia located within the mouse brain ventricles is demonstrated by live-imaging. The technique allows a recording of the unique ciliary beating frequency and beating angle as well as their intracellular calcium oscillation pacing properties.

マウスの脳の側脳室における上衣繊毛のライブイメージング

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

使用して報酬を求める行動の変化を測定するための簡単な方法<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying Alzheimer's disease, Parkinson's disease, depression, and anxiety. Traditionally, microdialysis has been the most common (lauded) technique to examine neurotransmitter changes that occur in these disorders. But because microdialysis has the ability to measure slow 1-20 minute changes across large areas of tissue, it has the disadvantage of invasiveness, potentially destroying intrinsic connections within the brain and a slow sampling capability. A relatively newer technique, the microelectrode array (MEA), has numerous advantages for measuring specific neurotransmitter changes within discrete brain regions as they occur, making for a spatially and temporally precise approach. In addition, using MEAs is minimally invasive, allowing for measurement of neurotransmitter alterations in vivo. In our laboratory, we have been specifically interested in changes in the neurotransmitter, glutamate, related to Alzheimer's disease pathology. As such, the method described here has been used to assess potential hippocampal disruptions in glutamate in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease. Briefly, the method used involves coating a multi-site microelectrode with an enzyme very selective for the neurotransmitter of interest and using self-referencing sites to subtract out background noise and interferents. After plating and calibration, the MEA can be constructed with a micropipette and lowered into the brain region of interest using a stereotaxic device. Here, the method described involves anesthetizing rTg(TauP301L)4510 mice and using a stereotaxic device to precisely target sub-regions (DG, CA1, and CA3) of the hippocampus.

Here, we describe the setup, software navigation, and data analysis for a spatially and temporally precise method of measuring tonic and phasic extracellular glutamate changes in vivo using enzyme-linked microelectrode arrays (MEA).

アルツハイマー病のマウスモデルにおけるトニックと相性グルタミン酸を測定するための酵素ベースのバイオセンサーを使用して

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a connection between amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and impairments in the nucleocytoplasmic pathway. ALS is a neurodegenerative disease affecting the motor neurons and resulting in paralysis and ultimately in death, within 2-5 years on average. Most cases of ALS are sporadic, lacking any apparent genetic linkage, but 10% are inherited in a dominant manner. Recently, hexanucleotide repeat expansions (HREs) in the chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) gene were identified as a genetic cause of ALS and frontotemporal dementia (FTD). Importantly, different groups have recently proposed that these mutants affect nucleocytoplasmic transport. These studies have mostly shown the final outcome and manifestations caused by HREs on nucleocytoplasmic transport, but they do not demonstrate nuclear transport dysfunction in real time. As a result, only severe nucleocytoplasmic transport deficiency can be determined, mostly due to high overexpression or exogenous protein insertion. 
This protocol describes a new and very sensitive assay to evaluate and quantify nucleocytoplasmic transport dysfunction in real time. The rate of import of a NLS-NES-GFP protein (shuttle-GFP) can be quantified in real time using fluorescent microscopy. This is performed by using an exportin inhibitor, thus allowing the shuttle GFP only to enter the nucleus. To validate the assay, the C9orf72 HRE translated dipeptide repeats, poly(GR) and poly(PR), which have been previously shown to disrupt nucleocytoplasmic transport, were used. Using the described assay, a 50% decrease in the nuclear import rate was observed compared to the control. Using this system, minute changes in nucleocytoplasmic transport can be examined and the ability of different factors to rescue (even partially) a nucleocytoplasmic transport defect can be determined.

This protocol describes a method to sensitively measure the nucleocytoplasmic transport rate within motor neuron-like NSC-34 cells by quantifying the real-time change in the nuclear import of a NLS-NES-GFP protein.

運動ニューロン様NSC-34細胞内のリアルタイムでの核細胞質輸送を測定するアッセイ

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.

刺激間隔の齧歯動物の一時的な処理の評価のための力

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using reflexive tests that allow inferences regarding pain's nociceptive component but provide little information about the affective or motivational component of pain. Developing tests that capture these components of pain are therefore translationally important. Hence, researchers need to use non-reflexive behavioral assays to study pain perception at that level. Mechanical conflict-avoidance (MCA) is an established voluntary non-reflexive behavior assay, for studying motivational responses to a noxious mechanical stimulus in a 3 chamber paradigm. A change in a mouse's location preference, when faced with competing noxious stimuli, is used to infer the perceived unpleasantness of bright light versus tactile stimulation of the paws. This protocol outlines a modified version of the MCA assay which pain researchers can use to understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models. Though not specifically described here, our example MCA data use the intraplantar complete Freund's adjuvant (CFA), spared nerve injury (SNI), and a fracture/casting model as pain models to illustrate the MCA procedure.

The mechanical conflict-avoidance assay is used as a non-reflexive readout of pain sensitivity in mice which can be used to better understand affective-motivational responses in a variety of mouse pain models.

マウスの疼痛行動を測定するための機械的衝突回避アッセイ

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Hyponeophagia：マウス​​の​​不安の測定

Hyponeophagia：マウスの不安の測定