Il linfedema è una condizione cronica senza cura. Colpisce un terzo dei pazienti che hanno subito un intervento chirurgico ai linfonodi ascellari e radiazioni nel trattamento del cancro al seno. Avere un modello animale valido facilita la comprensione del meccanismo e lo sviluppo di nuove strategie di trattamento.
Il modello di coda di topo del linfedema è affidabile e riproducibile con l'insorgenza rapida. Presenta cambiamenti istologici coerenti con il linfedema umano. A dimostrare la procedura sarà il Dr.Ganesh Mohan, un post-dottorato del mio laboratorio.
Per iniziare, posiziona il topo sedato di otto settimane severamente e prepara la coda con alcool isopropilico al 70%. Utilizzare una pinza per misurare il diametro della coda con incrementi di cinque millimetri a partire da 20 millimetri dalla base della coda. Segna un'escissione circonferenziale di tre millimetri sulla coda a 20 millimetri dalla base.
Sotto ingrandimento microscopico chirurgico, eseguire una meticolosa escissione cutanea a pieno spessore di tre millimetri lasciando intatta tutta la vascolarizzazione sottostante. Incidere il segno circonferenziale superiore prima attraverso il derma seguito da un'incisione circonferenziale a tutto spessore di tre millimetri distale alla prima incisione. Fare un'incisione verticale perpendicolare a tutto spessore per collegare le due incisioni, quindi utilizzare un pickup fine dentato per afferrare un bordo d'ingresso e sezionare in profondità all'interno del piano avascolare al derma e superficiale all'avventizia venosa con micro forbici.
Iniettare 0,1 millilitro di blu isosulfan dell'1% per via sottocutanea prossimale alla punta della coda. Identificare i due canali linfatici che appaiono blu a causa dell'iniezione adiacente alle vene laterali della coda. Transect i linfatici con attenzione, sezionando un piano tra la vena laterale e il linfatico con forbici microchirurgiche dritte.
Passare la punta di una lama a forbice tra il vaso linfatico e la vena laterale e chiudere le lame per transect il vaso linfatico. Al termine, vestire la ferita della coda con un indirizzo chiaro aderente sterile. Somministrare indocianina verde 0,1 millilitri per via sottocutanea nella coda distale del topo vicino alla punta.
Attenuare le luci della stanza, quindi posizionare l'angiografia laser vicino all'infrarosso in un'impostazione di buffering ed eseguire l'imaging dal vivo. Dopo la somministrazione di blu isosulfan nella punta della coda, i linfatici hanno mostrato un colore blu. I linfatici sono stati interrotti mentre le vene laterali adiacenti sono state preservate.
Il gonfiore progressivo e il linfedema persistente prolungato nella coda di topo dopo l'induzione del linfedema sono mostrati qui. Il volume della coda del topo, calcolato da un'equazione del tronco di cono, ha raggiunto il picco alla quarta settimana e si è stabilizzato alla sesta settimana, seguito da un graduale miglioramento che è stato sostenuto fino alla settimana 15. L'imaging laser ad alta risoluzione a contrasto di macchie è stato eseguito per confermare la perfusione della coda del topo nel modello di coda del linfedema che mostra vene laterali ferite e vene laterali intatte per la valutazione della pervietà della vascolarizzazione della coda.
La linfangiografia laser nel vicino infrarosso ha dimostrato linfatici intatti preoperatori e nessun transito ICG oltre il sito chirurgico post-operatorio, confermando così che il gonfiore era causato dalla disfunzione linfatica. L'efficienza della consegna del carico genetico utilizzando la tecnologia di nanotrasfezione tissutale è stata dimostrata fornendo DNA etichettato con fluoresceina amidite alla coda murina. L'utilizzo di adattamenti per il modello di linfedema della coda di topo e l'angiografia laser nel vicino infrarosso ICG è un modello animale clinicamente traducibile ed eccitante con implicazioni terapeutiche.
