Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (n. 81922076, 81973951, 81873373), Construction project of collaborative innovation of shanghai (No. ZYJKFW201811010, ZYJKFW201701005).

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati esaminati e approvati dal Comitato per l'etica degli esperimenti sugli animali dell'Università di medicina tradizionale cinese di Shanghai (numero di autorizzazione etica PZSHUTCM190308020).
1. Fabbricazione dell'alta piattaforma
<ol><li>Impostare la lunghezza e la larghezza del dispositivo di supporto su 86 cm x 17 cm (Figura 1).</li>
	<li>Fissare il dispositivo di connessione verticalmente al dispositivo di supporto. Il dispositivo di collegamento deve essere lungo circa 30 cm per impedire al topo di correre sulla superficie superiore della piattaforma alta e avere una larghezza di 14 cm.</li>
	<li>Fissare il pedale orizzontale (5 cm x 5 cm) al dispositivo di collegamento. L'altezza sospesa nella parte inferiore del pedale orizzontale deve essere maggiore o uguale a 50 cm. NOTA: A seconda del numero di ratti sperimentali, è possibile utilizzare più pedali orizzontali, con un topo posizionato su ogni pedale.</li>
</ol>2. Istituzione di un modello di ratto di asma
<ol><li>Sensibilizzare i ratti con oav<ol>
<li>Preparare la soluzione di sensibilizzazione il giorno 0. Preparare ogni 1 mL della soluzione di sensibilizzazione con 1 mg di OAV e 10 mg di idrossido di alluminio, con soluzione salina normale come solvente.</li>
		<li>Iniettare per via intraperitoneale ogni ratto con 1 mL della soluzione di sensibilizzazione il giorno 0. Disegnare la soluzione sensibilizzante con una siringa adatta per un uso successivo.</li>
		<li>Afferrare la coda e sollevare il topo, posizionarlo su una superficie ruvida e tirare delicatamente indietro la coda. Afferrare la pelle sia delle orecchie che del collo con il pollice sinistro e l'indice tenendo saldamente la pelle posteriore con le restanti tre dita e palmi (fare attenzione ad astenersi dall'applicare forza in eccesso che soffoca il topo).</li>
		<li>Con la mano destra, eseguire un'iniezione intraperitoneale nel ratto con la siringa preparata con 1 ml della soluzione di sensibilizzazione.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ratti impegnativi con OAV<ol>
<li>Selezionare una scatola con un coperchio (la lunghezza, la larghezza e l'altezza sono 39 cm x 28 cm x 23 cm) e praticare un piccolo foro sul lato. Collegare la scatola sigillata, la tazza di nebulizzazione e il nebulizzatore di compressione con un tubo di gomma (Figura complementare 1). NOTA: La dimensione delle particelle nebulizzate del nebulizzatore compresso è di 1 - 5 μm, il tasso di nebulizzazione è maggiore di 0,2 mL/min e la pressione finale è di 205 kPa.</li>
		<li>Il 14 ° giorno dopo la sensibilizzazione, aprire il coperchio della scatola sigillata fatta in casa e posizionare il topo nella scatola (la scatola può ospitare 5 ratti), quindi mettere la scatola sigillata in un armadietto di biosicurezza.</li>
		<li>Preparare la soluzione di sfida. Mescolare accuratamente 300 mg di OAV con 30 mL di soluzione salina normale.</li>
		<li>Accendere il nebulizzatore ad ultrasuoni e aggiungere 30 mL della soluzione di sfida nella tazza di nebulizzazione. Regolare il dosaggio della soluzione di sfida e il numero di ratti in base al volume della scatola sigillata fatta in casa.</li>
		<li>Ripetere la nebulizzazione più volte (una volta al giorno) o regolare la procedura in base alla gravità dei sintomi dell'asma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Trattamento dell'agopuntura
<ol><li>Selezionare gli acupoint, tra cui GV14, BL12 bilaterale e BL13 bilaterale, secondo la teoria della medicina tradizionale cinese per il trattamento dell'asma (Figura complementare 2). Somministrare l'agopuntura manuale il giorno 2 ed eseguire una volta ogni due giorni per un totale di 7 sessioni (Figura 2) .
	<ol>
<li>Agopuntura del GV14 situato tra la settima vertebra cervicale e la prima vertebra toracica (la cavità della scapola), sulla linea mediana della schiena (Figura 3).</li>
		<li>Agopuntura del BL13 situato sotto la terza vertebra toracica, su entrambi i lati degli spazi intercostali (bordo inferiore della scapola).</li>
		<li>Agopuntura il BL12 situato sotto la seconda vertebra toracica, su entrambi i lati degli spazi intercostali (sotto la scapola, posizione identificata secondo BL13).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Afferra i ratti e posizionali sulla piattaforma alta.</li>
	<li>Tenere l'ago monouso in acciaio inossidabile (0,3 mm x 13,0 mm, figura complementare 3) maneggiare con il pollice e l'indice della mano destra e premere la parte posteriore del topo con il palmo della mano destra. NOTA: Gli aghi monouso devono essere monouso. Perché l'uso ripetuto attenuerà l'ago, il che porta ad un aumento del dolore nei ratti.</li>
	<li>Toccare la depressione al centro del bordo superiore (GV14) o il bordo inferiore della scapola (BL12 e BL13), quindi pungere delicatamente la pelle del topo con la punta dell'ago per localizzare gli acupoint.</li>
	<li>Inserire rapidamente l'ago dopo aver determinato la posizione specifica dell'acume e rimuovere rapidamente la mano destra.</li>
	<li>Attorcigliato uniformemente gli aghi di circa 360° ad una velocità di 60 volte/min per 10 -20 s, manipolarli ogni 5 minuti, quindi ritirarli dopo 20-30 min(Figura complementare 4).</li>
</ol>4. La misurazione penh
<ol><li>Preparare la metacolina: Mettere 100 mg di metacolina in un tubo di centrifuga da 5 ml e aggiungere PBS ad un volume di 2 ml (50 mg/mL di metacolina). Quindi, diluire la soluzione di metacolina da 50 mg/mL a 25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 6,25 mg/mL e 3,125 mg/mL.</li>
	<li>Ispezione degli strumenti<ol>
<li>Accendere l'amplificatore di segnale (il sistema di distribuzione aerosol e il sistema di alimentazione del flusso di polarizzazione dei roditori sono tutti spenti e il connettore di nebulizzazione è chiuso).</li>
		<li>Controllare i canali: fare clic su Calibra, riportare la linea di base di regolazione grossolana a 0 e passare alla posizione corrente diretta (DC). Mettere a punto la linea di base su 0 e iniettare 5 ml di gas con una siringa. Quindi, passare alla posizione di corrente alternata (AC).</li>
		<li>Dopo aver controllato i canali, assicurarsi che il valore di errore sia inferiore allo 0,5%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Impostazione dei parametri<ol>
<li>Accendere il sistema di distribuzione dell'aerosol e il sistema di alimentazione del flusso di polarizzazione dei roditori. Regolare la portata a 4,5 mL in base al livello del liquido sulla sfera di mercurio.</li>
		<li>Fate clic su Crea opzioni di studio (Create Study Options) e selezionate Studio risposta dose (Dose Response Study),selezionate Ratto di specie (Rat of species) e fate clic su Avanti (Next).</li>
		<li>Selezionare Elenco dose semplice, impostare il numero di dosi su 6 e fare clic su Avanti.</li>
		<li>Selezionare i parametri Penh e Area: impostare il tempo di adattamento dell'animale su 5 minuti, il tempo di nebulizzazione su 2 minuti, il tempo di risposta a 3 minuti e il tempo di recupero su 2 minuti.</li>
		<li>Aggiungere in sequenza le seguenti soluzioni al nebulizzatore (200 μL per ratto): metacolina (0 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL e 50 mg/mL). Si possono osservare cambiamenti in tempo reale a Penh (Figura 4).</li>
		<li>Dopo aver reagito tutte e 6 le soluzioni con concentrazioni diverse, fare clic su File e sessione finale per completare l'esperimento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Papi, A., Brightling, C., Pedersen, S. E., Reddel, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asthma.">Asthma.</a> Lancet. 391 (10122), 783-800 (2018).</li><li>. Global strategy for asthma management and prevention Available from: <a target="_blank" href="https://ginasthma.org/gina-reports/">https://ginasthma.org/gina-reports/</a> (2019)</li><li>Enilari, O., Sinha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Global+Impact+of+Asthma+in+Adult+Populations.">The Global Impact of Asthma in Adult Populations.</a> Annals of Global Health. 85 (1), (2019).</li><li>. Global strategy for asthma management and prevention Available from: <a target="_blank" href="https://ginasthma.org/gina-reports/">https://ginasthma.org/gina-reports/</a> (2020)</li><li>Zhuang, Y., Xing, J. J., Li, J., Zeng, B. Y., Liang, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=History+of+acupuncture+research.">History of acupuncture research.</a> International Review of Neurobiology. 111, 1-23 (2013).</li><li>Yang, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+use+of+acupuncture+as+supplemental+therapy+for+patients+with+allergic+asthma.">Considerations for use of acupuncture as supplemental therapy for patients with allergic asthma.</a> Clinical Reviews in Allergy &amp; Immunology. 44 (3), 254-261 (2013).</li><li>Nurwati, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+interleukin-17+level+by+acupuncture+at+Feishu+(BL13)+is+strengthened+by+acupuncture+at+Zusanli+(ST36)+in+a+mouse+model+of+chronic+asthma:+An+experimental+study.">Reduction of interleukin-17 level by acupuncture at Feishu (BL13) is strengthened by acupuncture at Zusanli (ST36) in a mouse model of chronic asthma: An experimental study.</a> Medical Acupuncture. 27 (4), 278-282 (2015).</li><li>Nurwati, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+in+inflammation+and+airway+remodelling+after+acupuncture+at+BL13+and+ST36+in+a+mouse+model+of+chronic+asthma.">Improvement in inflammation and airway remodelling after acupuncture at BL13 and ST36 in a mouse model of chronic asthma.</a> Acupuncture in Medicine. 37 (4), 228-236 (2019).</li><li>Reddy, A. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgelin-2+as+a+therapeutic+target+for+asthmatic+pulmonary+resistance.">Transgelin-2 as a therapeutic target for asthmatic pulmonary resistance.</a> Science Translational Medicine. 10 (427), (2018).</li><li>Shin, Y. S., Takeda, K., Gelfand, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+asthma+using+animal+models.">Understanding asthma using animal models.</a> Allergy Asthma &amp; Immunology Research. 1 (1), 10-18 (2009).</li><li>Cui, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electro-acupuncture+relieves+chronic+visceral+hyperalgesia+in+rats.">Electro-acupuncture relieves chronic visceral hyperalgesia in rats.</a> Neuroscience Letters. 376 (1), 20-23 (2005).</li><li>Tobin, J. R., Martin, L. D., Breslow, M. J., Traystman, R. 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R., Luparello, T., Lyons, H. A., Bleecker, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+of+action+of+suggestion+in+the+induction+of+acute+asthma+attacks.">The mechanism of action of suggestion in the induction of acute asthma attacks.</a> Psychosomatic Medicine. 31 (2), 134-143 (1969).</li><li>Savov, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ozone-induced+acute+pulmonary+injury+in+inbred+mouse+strains.">Ozone-induced acute pulmonary injury in inbred mouse strains.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 31 (1), 69-77 (2004).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Gli acupoint GV14, bilaterali BL12 e bilaterali BL13 utilizzati in questo studio si trovano sul retro, e quindi l'alta piattaforma è adatta per il fissaggio dei ratti. In altri studi, un metodo di fissazione adeguato deve essere selezionato in base alla posizione degli acupoint15. Per gli acupoint sull'addome, il topo può essere posizionato verso il basso in un cono nero (simile a un sacchetto di pasticceria utilizzato dai fornai)17. Una catena è attaccata al cono di ritenuta per la fissazione e anche la gamba posteriore del topo è fissata. In questo modo, la parte anteriore del corpo dell'animale è saldamente fissata nel cono, mentre l'addome e la schiena sono esposti. Per gli acupoint sulla gamba, il topo può essere posizionato verticalmente in uno speciale secchio trasparente, lasciando la coda e le zampe posteriori naturalmente fuori dalsecchio 18. La canna trasparente copre il corpo del topo, ma è conveniente per l'agopuntura sulla gamba.
Durante l'esecuzione di questi metodi è necessario prendere in considerazione diversi passaggi critici. Prima del trattamento di agopuntura, i ratti devono essere posizionati sulla piattaforma alta per l'allenamento con alcuni giorni di anticipo fino a quando i ratti non si tengono zitti e respirano senza intoppi sulla piattaforma alta. Per la manipolazione dell'agopuntura, più duro è il palmo della mano destra preme indietro il topo, più facile è inserire l'ago. Per la misurazione della funzione respiratoria, il sistema WBP misura i cambiamenti nel Penh che riflettono i cambiamenti nella resistenza polmonare dei ratti in modo non invasivo e riduce al minimo gli effetti dello stresspsicologico 19,20. L'effetto dell'ambiente esterno sui ratti dovrebbe essere ridotto al minimo. Il ratto deve essere collocato nella sala prove e quindi coperto la sala prove con un sacchetto di plastica (con foro di 1 cm x 1 cm sul lato dorsale per la ventilazione) per ridurre l'irritazione causata dall'ambiente esterno.
La limitazione di questo esperimento è che l'ago può cadere se il topo oscilla durante l'agopuntura. Pertanto, il bisogno deve essere manipolato ogni 5 minuti per regolare la profondità. Inoltre, l'alta piattaforma è adatta per ratti, ma non per animali più piccoli, come i topi.
In sintesi, forniamo una descrizione dettagliata del metodo per la fabbricazione di un'alta piattaforma per il fissaggio dei ratti senza restrizioni durante l'agopuntura. La piattaforma alta può esporre completamente gli acupoint sul retro del topo. L'uso dell'alta piattaforma e delle misurazioni della funzione respiratoria non invasiva può facilitare l'analisi dell'agopuntura come trattamento per l'asma. Lo studio del meccanismo terapeutico dell'agopuntura sul retro può portare nuovi trattamenti a malattie respiratorie come l'asma e la broncopneumopatia cronica ostruttiva.

L'asma è una malattia cronica caratterizzata da broncocostrizione e iper-reattività delle vie aeree1. A circa 339,4 milioni di persone in tutto il mondo viene diagnosticata l'asma2. La prevalenza dell'asma è in aumento a livello globale, con 100 milioni di nuovi casi previsti per il prossimodecennio 3. Corticosteroidi inalati e a β2-agonisti non controllano efficacemente i sintomi di tutti i pazienti4. Pertanto, l'uso di terapie alternative come l'agopuntura per trattare l'asma ha ricevuto una maggioreattenzione 5. Un metodo efficace per il trattamento dell'asma è l'ago GV14 (Dazhui), il BL12 bilaterale (Fengmen) e il bilaterale BL13 (Feishu)6. L'agopuntura riduce significativamente i livelli di immunoglobulina secretoria A (SIgA) nella saliva e nelle secrezioni nasali dei pazienti con asma allergica e riduce il numero di eosinofili del sangue periferico con un tasso effettivo totale dell'85%6. L'agopuntura a BL13 e ST36 (Zusanli) nei topi con asma cronica diminuisce il livello di IL-17 del 40% e diminuisce lo spessore muscolare liscio del 33% rispetto a quello del gruppo ovalbumina (OVA), alleviando così i sintomi infiammatori7,8. Tuttavia, il meccanismo del trattamento dell'agopuntura per l'asma non è completamente chiaro.
I modelli animali sono uno strumento importante per la ricercasull'asma 9 perché il modello animale può essere utilizzato per la misurazione continua della funzione respiratoria per valutare l'efficacia del trattamento dell'asma10. Nel frattempo, gli studi sulla fisiopatologia dell'asma richiedono campioni di prova, inclusi campioni di trachea, polmone e broncoalveolare per verificare i cambiamenti nei livelli dei fattorichiave 11. I modelli di ratto dell'asma sono comunemente usati per valutare la fisiopatologia dell'asma perché producono risposte alle vie aeree di lunga durata e mostrano risposte immediate e tardive alle vieaeree 12. Tuttavia, a causa della ripetuta stimolazione sperimentale, i ratti spesso diventano irritabili. Pertanto, è necessario un metodo adatto per riparare i ratti. I metodi comunemente utilizzati per la fissazione del ratto includono anestesia e legame13. Sebbene il metodo di anestesia fornisca una migliore esposizione degli acupoint, può influenzare la conduzione nervosa e, in ultima analisi, influenzare i risultati sperimentali14. Il metodo di legame non induce gli stessi effetti fisiologici dell'anestesia, ma i ratti trattenuti sperimenteranno la tensione muscolare scheletrica. Inoltre, l'ago non può raggiungere facilmente la posizionedesignata 15. Qui, introduciamo un'alta piattaforma che può essere utilizzata per riparare i ratti senza limitarli ed esporre completamente gli acupoint sul retro. I ratti possono essere posizionati sulla piattaforma alta durante la somministrazione dell'agopuntura. La piattaforma alta è in grado di ospitare il topo solo mentre è in piedi, e poiché è posizionata a una certa distanza da terra, i ratti non si muoveranno a causa della paura delle altezze16.
Questo articolo descrive in dettaglio la fabbricazione dell'alta piattaforma, l'istituzione di un modello di ratto di asma, il funzionamento dell'accostamento di un topo sulla piattaforma alta e la misurazione della funzione respiratoria utilizzando un sistema di pletosmografia per tutto il corpo (WBP).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:728px;" width="728">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">0.3 mm x 13.0 mm acupuncture needle</td>
			<td style="width:192px;">China Suzhou Medical Device Factory</td>
			<td style="width:114px;"></td>
			<td style="width:154px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:24px;width:267px;">Al(OH)3</td>
			<td style="width:192px;">American Thermo</td>
			<td style="width:114px;">77161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Compression nebulizer</td>
			<td style="width:192px;">Jiangsu Lude Medical Electronics Co., Ltd.</td>
			<td style="width:114px;">NB-212C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Fine Pointe V2.0</td>
			<td style="width:192px;">American Buxco</td>
			<td style="width:114px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Laboratory gas drying unit</td>
			<td style="width:192px;">American Drierite</td>
			<td style="width:114px;">26800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Methacholine</td>
			<td style="width:192px;">American Sigma</td>
			<td style="width:114px;">MKCF6054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Ovalbumin</td>
			<td style="width:192px;">American Sigma</td>
			<td style="width:114px;">A5503-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Phosphate Buffer solution (1x)</td>
			<td style="width:192px;">Gelifesciences</td>
			<td style="width:114px;">SH30256.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Seal box</td>
			<td style="width:192px;">IRIS Corporation of Japan</td>
			<td style="width:114px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:267px;">Whole-body plethysmography respiratory function measurement system</td>
			<td style="width:192px;">American Buxco</td>
			<td style="width:114px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acupuncture in a rat model of asthma

Una piattaforma alta può riparare i ratti senza restrizioni ed esporre completamente gli acupoint sul retro durante la manipolazione dell'agopuntura. Questo articolo descrive i metodi per la fabbricazione dell'alta piattaforma, stabilisce un modello di ratto di asma e misura i cambiamenti nella funzione respiratoria utilizzando un sistema di pletosmografia per tutto il corpo (WBP) non invasivo e in tempo reale.

Con agopuntura ai punti GV14, BL12 bilaterali e BL13 bilaterali, il topo mantiene una posizione soggetta. Il topo può ruotare la testa solo verso l'esterno e non verso l'interno perché una direzione è bloccata con una tavola di legno(Figura 5).
Con l'aumento della concentrazione di metacolina, Penh mostra una tendenza all'aumento e il tasso di crescita aumenta gradualmente. A concentrazioni di 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL e 50 mg/mL, Penh è aumentata del 18,40% ± 10,70%, del 27,55% ± 10,70%. 26,30%, 88,10% ± 45,63%, 427,60% ± 172,92% e 882,27% ± 121,97%, mostrando un effetto che aumenta con l'aumento della dose (Figura 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig1.jpg"> Figura 1. Fabbricazione dell'alta piattaforma. La piattaforma alta è costituita da un dispositivo di supporto, tre dispositivi di collegamento e tre pedali. La lunghezza e la larghezza del dispositivo di supporto sono di 86 cm x 17 cm, la lunghezza e la larghezza del dispositivo di collegamento sono 30 cm x 14 cm, la lunghezza e la larghezza del pedale sono 5 cm x 5 cm. Ogni dispositivo di connessione è separato da 20 <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig1large.jpg" target="_blank">cm.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig2.jpg"> Figura 2. Protocollo per la definizione di un modello di ratto di asma. La sensibilizzazione viene eseguita il giorno 0 e l'agopuntura viene eseguita a giorni diversi sulla piattaforma alta dai giorni 2 ai 14. Dopo la sfida, il cambiamento in Penh viene misurato. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig3.jpg"> Figura 3. Posizioni anatomiche di GV14 (Dazhui),BL12 (Fengmen)e BL13 (Feishu) sui ratti. (A) Dissezione anatomica della parte posteriore di un ratto che mostra la scapola, la prima costola, la seconda costola, la terza costola e la seconda vertebra toracica (T2). (B) Il piano sagittale delle costole e della vertebra toracica. (C) La sezione trasversale della scapola. (D) GV14: Situato nella cavità della scapola, linea mediana della schiena; BL13: Situato sul bordo inferiore della scapola; BL12: Situato sotto la scapola, posizionato secondo BL13. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig4.jpg"> Figura 4. Cambiamenti in tempo reale nella funzione respiratoria. La curva blu mostra i cambiamenti in tempo reale in Penh. La curva verde mostra la variazione totale del volume delle maree (TVb) in un determinato periodo. La curva viola mostra il cambiamento totale in Penh in un certo periodo. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig5.jpg"> Figura 5. Agopuntura di GV14 (Dazhui),BL12 (Fengmen)e BL13 (Feishu) nei ratti sulla piattaforma alta. (A) Vista dall'alto delle posizioni di GV14, BL12 e BL13 nei ratti. (B) Vista laterale di un ratto agopuntura su una piattaforma elevata. Il topo viene posizionato sulla piattaforma e mantenuto in posizione soggetta durante l'agopuntura. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61762/61762fig6.jpg"> Figura 6. Misurazione di Penh. Il WBP viene utilizzato per misurare il Penh del ratto normale. Con l'aumentare della concentrazione di metacolina, anche il Penh aumenta gradualmente. I dati sono presentati come la media ± SEM (n = 3). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762fig6large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Figura complementare 1. Le specifiche del nebulizzatore. La dimensione delle particelle nebulizzate del nebulizzatore compresso è di 1 - 5 μm, il tasso di nebulizzazione è maggiore di 0,2 mL/min e la pressione finale è di 205 kPa. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762supfig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>
Figura complementare 2. Le posizioni schematiche di GV14 (Dazhui),BL12 (Fengmen)e BL13 (Feishu) nel ratto. Fare <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762supfig2large.jpg" target="_blank">clic qui per scaricare questo file.</a>
Figura complementare 3. Specifiche dell'ago. La lunghezza dell'ago è di 13 mm e il diametro è di 0,3 mm. Fare <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762supfig3large.jpg" target="_blank">clic qui per scaricare questo file.</a>
Figura complementare 4. Schema della manipolazione dell'agopuntura. Dopo aver inserito l'ago, ha attorcigliato uniformemente gli aghi di circa 360° in diverse direzioni. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/61762/61762supfig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

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Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Agopuntura in un modello di ratto di asma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

5.9K Views.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. Una piattaforma alta può riparare i ratti senza restrizioni ed esporre completamente gli acupoint sul retro durante la manipolazione dell'agopuntura. Questo articolo descrive i metodi per la fabbricazione dell'alta piattaforma, stabilisce un modello di ratto di asma e misura i cambiamenti nella funzione respiratoria utilizzando un sistema di pletosmografia per tutto il corpo (WBP) non invasivo e in tempo reale.

Video: Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Bronchial Thermoplasty:  A Novel Therapeutic Approach to Severe Asthma

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks. Bronchial thermoplasty is delivered by the Alair System and is performed in three outpatient procedure visits, each scheduled approximately three weeks apart. The first procedure treats the airways of the right lower lobe, the second treats the airways of the left lower lobe and the third and final procedure treats the airways in both upper lobes. After all three procedures are performed the bronchial thermoplasty treatment is complete.
Bronchial thermoplasty is performed during bronchoscopy with the patient under moderate sedation. All accessible airways distal to the mainstem bronchi between 3 and 10 mm in diameter, with the exception of the right middle lobe, are treated under bronchoscopic visualization. Contiguous and non-overlapping activations of the device are used, moving from distal to proximal along the length of the airway, and systematically from airway to airway as described previously. Although conceptually straightforward, the actual execution of bronchial thermoplasty is quite intricate and procedural duration for the treatment of a single lobe is often substantially longer than encountered during routine bronchoscopy. As such, bronchial thermoplasty should be considered a complex interventional bronchoscopy and is intended for the experienced bronchoscopist. Optimal patient management is critical in any such complex and longer duration bronchoscopic procedure. This article discusses the importance of careful patient selection, patient preparation, patient management, procedure duration, postoperative care and follow-up to ensure that bronchial thermoplasty is performed safely.
Bronchial thermoplasty is expected to complement asthma maintenance medications by providing long-lasting asthma control and improving asthma-related quality of life of patients with severe asthma. In addition, bronchial thermoplasty has been demonstrated to reduce severe exacerbations (asthma attacks) emergency rooms visits for respiratory symptoms, and time lost from work, school and other daily activities due to asthma.

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled manner to reduce excessive airway smooth muscle. Reducing airway smooth muscle decreases the ability of the airways to constrict, thereby reducing the frequency of asthma attacks.

Termoplastica bronchiale: un nuovo approccio terapeutico per l&#39;asma grave

Bronchial thermoplasty is a non-drug procedure for severe persistent asthma that delivers thermal energy to the airway wall in a precisely controlled ...

Ricerca

Medicina

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

L&#39;angiogenesi nel polmone del ratto ischemica

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

Un modello del Chronic Infusion nutrienti nel ratto

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal inflammation and fibrosis ultimately resulting in declining kidney function. Before improved clinical management and prevention of pyelonephritis can be instituted, a reliable animal model must be established in order to study the mechanisms of progression, recurrence, and therapeutic efficacy. The transurethral infection model closely mimics human pyelonephritis but exhibits considerable variation due to its reliance on urethral reflux to transport the bacteria to the kidney. Herein, a detailed surgical protocol for performing bacterial injections into the rat renal pelvis is provided and confirmed by non-invasive Magnetic Resonance Imaging (MRI). Using this protocol, animals receive direct exposure to a desired concentration of E. coli bacteria and can fully recover from the surgical procedure with adequate post-operative care. This facilitates subsequent longitudinal MRI assessments of the experimental animal models for comparison with saline (sham) controls. Using this direct delivery approach, the severity of infection is controllable and applicable for mechanistic studies of progression as well as development of novel treatment strategies.

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

This manuscript describes a rat surgical model of pyelonephritis using direct intra-renal infection by Escherichia coli into the renal pelvis. The experimental procedure can be utilized to study the pathogenesis of pyelonephritis as well as the associated inflammation and fibrosis.

Iniezione intrarenale di<emEscherichia coli</em&gt; In un modello di ratto di pielonefriti

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.

Valutazione fisiopatologica retinica in un modello di ratto

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal ...

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of intraoperative arrest in the field of cardiac surgery. With recent advances in cardiac surgery, the demand for prolonged VF studies under perfusion has increased. However, the field lacks simple, reliable, and reproducible animal models of chronic ventricular fibrillation. This protocol induces long-term VF through alternating current (AC) electrical stimulation of the epicardium. Different conditions were used to induce VF, including continuous stimulation with a low or high voltage to induce long-term VF and stimulation for 5 min with a low or high voltage to induce spontaneous long-term VF. The success rates of the different conditions, as well as the rates of myocardial injury and recovery of cardiac function, were compared. The results showed that continuous low-voltage stimulation induced long-term VF and that 5 min of low-voltage stimulation induced spontaneous long-term VF with mild myocardial injury and a high rate of recovery of cardiac function. However, the low-voltage, continuously stimulated long-term VF model had a higher success rate. High-voltage stimulation provided a higher rate of VF induction but showed a low defibrillation success rate, poor recovery of cardiac function, and severe myocardial injury. On the basis of these results, continuous low-voltage epicardial AC stimulation is recommended for its high success rate, stability, reliability, reproducibility, low impact on cardiac function, and mild myocardial injury.

This protocol presents a model of long-term ventricular fibrillation in rat hearts induced by continuous stimulation with low-voltage alternating current. This model has a high success rate, is stable, reliable, and reproducible, has a low impact on cardiac function, and causes only mild myocardial injury.

Un modello di fibrillazione ventricolare a lungo termine in cuori di ratto isolati

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...

Migliorare la terapia con FSN nel modello di ratto: minimizzare il disagio e massimizzare l'efficienza

Efficacy of Fu's Subcutaneous Needling on Sciatic Nerve Pain: Behavioral and Electrophysiological Changes in a Chronic Constriction Injury Rat Model

Fu&#39;s subcutaneous needling (FSN), an invented acupuncture technique from traditional Chinese medicine, is used worldwide for pain relief. However, the mechanisms of action are still not fully understood. During FSN treatment, the FSN needle is inserted and retained in the subcutaneous tissues for a long duration with a swaying movement. However, challenges arise from maintaining a posture while manipulating FSN in animal models (e.g., rats) for researchers. Uncomfortable treatment can lead to fear and resistance to FSN needles, increasing the risk of injury and may even affect research data. Anesthesia may also affect the study results too. Hence, there is a need for strategies in FSN therapy on animals that minimize injury during the intervention. This study employs a chronic constriction injury model in Sprague-Dawley rats to induce neuropathic pain. This model replicates the pain induced by nerve injury observed in humans through surgical constriction of a peripheral nerve, mimicking the compression or entrapment seen in conditions such as nerve compression syndromes and peripheral neuropathies. We introduce an appropriate manipulation for easily inserting an FSN needle into the subcutaneous layer of the animal&#39;s body, including needle insertion and direction, needle retention, and swaying movement. Minimizing the rat&#39;s discomfort prevents the rat from being tense, which causes the muscle to contract and hinder the entry of the needle and improves the study efficiency.

Autore in primo piano: Svelare gli effetti terapeutici del trattamento con FSN – Collegare la ricerca e le applicazioni cliniche nel dolore neuropatico

We present a protocol for using Fu's subcutaneous needling in a chronic constriction injury model to induce sciatic nerve pain in rats.

Efficacia dell'agugliatura sottocutanea di Fu sul dolore al nervo sciatico: cambiamenti comportamentali ed elettrofisiologici in un modello di ratto con lesione da costrizione cronica

Fu&#39;s subcutaneous needling (FSN), an invented acupuncture technique from traditional Chinese medicine, is used worldwide for pain relief. However, the ...