MC Schiewe desidera ringraziare il Sig Foresta Garner al Fertility Center di Las Vegas per la sua competenza statistici per l&#39;analisi e la valutazione dei dati annuali CDC e di Sart. Inoltre, gli autori desiderano ringraziare il loro direttore medico, il Dr. Robert E. Anderson, per il suo supporto dedicato e la fede nelle nostre capacità tecniche e competenze.

<ol>
	<li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+appraisal+of+cryopreservation+(slow+cooling+versus+vitrification)+of+human+oocytes+and+embryos.">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li><li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos.">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li><li>Schiewe, M. 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B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique.">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li><li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts.">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. 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Reprod. 17, 744-751 (2002).</li><li>Schiewe, M. C., Marco-Jim&#233;nez, F., AkdemirKo&#231;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+factors+influencing+the+successful+and+reliable+implementation+of+oocyte+and+embryo+vitrification.">Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification.</a> Cryopreservation. , (2016).</li><li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+safe,+simple,+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts.">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. 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A., Givens, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+hygiene+and+quality+control+practices+in+an+embryo-production+laboratory.">General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory.</a> Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions. , (2008).</li><li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation.">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. 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M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes:+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol.">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li></ol>

MC Schiewe serve come membro del comitato scientifico di Cryo innovative imprese e come direttore tecnico per la California Cryobank. La produzione di questo video-articolo è stato pagato da Ovation fertilità. Gli autori non hanno accordi finanziari concorrenti o conflitti di interesse di rivelare quanto riguarda la vetrificazione dei gameti e degli embrioni.

Oggi, vi è un&#39;alta aspettativa di raggiungere sopravvivenza blastocisti completa (&gt; 95%) e raggiungere il successo impianto simile a quello di embrioni freschi. Alcuni gruppi hanno suggerito che i tassi di natalità live di cicli di trasferimento di embrioni vetrificati sono forse addirittura superiore blastocisti fresche quando l&#39;embrione crioconservato intatto viene trapiantato in un sano utero, non ormonale-stimolata. I nostri dati indicano chiaramente che la vetrificazione in modo efficace e affidabile mantiene la vitalità dell&#39;embrione fresco. Inoltre, abbiamo dimostrato che il nostro asettica, metodo chiuso, chiamato MicroSecure vitrificazione (mS-VTF), può raggiungere un risultato ottimale paragonabile o superiore alle norme commerciali (ad esempio, sistemi di dispositivi aperti) utilizzati nell&#39;industria FIV. Variazione è associato con ripetibilità tecnica e affidabilità tra individui che utilizzano una moltitudine di vitrificazione dispositivi / metodi. A sua volta, questo ha portato a inconsistencies tra i programmi che applicano vetrificazione. Pertanto, non è sorprendente che il dispositivo di familiarità è un fattore importante per quanto riguarda competenza del laboratorio e risultati di successo. E &#39;questo concetto di &quot;firma tecnica&quot; 11 che spiega il motivo per cui la ripetibilità tra i programmi può essere problematico. Non solo ha lo sviluppo di più di una dozzina di dispositivi commerciali complicato questo fenomeno, ha creato problemi di controllo della qualità. Fortunatamente, chiuso sistemi di vetrificazione, come mS-VTF, Rapid-I, e VitriSafe, sono ora dimostrando di essere ugualmente efficace per aprire i sistemi di dispositivo 12, 13, 14. MicroSecure VTF è un romanzo, tecnica di vitrificazione asettica sviluppata con facilità tecnica, affidabilità e crio-sicurezza in mente. Combinando l&#39;uso di due dispositivi, conformi FDA precedentemente approvati, è un sistema di vetrificazione non commerciale with il vantaggio di avere un basso costo stabilita, in contrasto con dispositivi specializzati. Inoltre, la sua prova di manomissione unico e sistema di etichettatura a due colori interiorizzato, oltre a numerosi altri vantaggi di controllo della qualità, hanno fatto mS-VTF un&#39;opzione globale attraente 11. Come dispositivo VTF non commerciale, tuttavia, la sua applicazione industriale diffusa si sta evolvendo lentamente. Solo attraverso la continua pubblicazione della sua sicurezza, la sicurezza e l&#39;efficacia clinica guadagnerà mS-VTF crescente utilizzo. Nel mese di agosto 2014, di fronte alla impossibilità di acquisire l&#39;originale embrione paglia 0,3 mL fabbricato con una, non traspirante spina idrofobico interno, siamo stati in grado di modificare in modo affidabile il metodo mS-VTF. In breve, i nuovi sperma 0,3 mL / cannucce embrione con le loro spine cotone-PVP sono stati efficacemente adattati. Ciò è stato semplicemente ottiene creando una tenuta interna prima che la spina cotone, impedendo così il contatto e il fluido traspirante con lapunta VTF a tempo indeterminato (cioè, il flexipette contenente l&#39;embrione o le uova). Inoltre, se aste ID 40 mm non sono accessibili, il problema galleggiamento associato con le aste più leggeri di 30 mm può essere contrappesi mediante due cuscinetti a sfere. Questi passaggi aggiuntivi hanno reso la tecnica leggermente meno semplice, ma altamente efficace. Oggi, l&#39;economia e l&#39;efficacia stanno diventando sempre più importanti preoccupazioni, come blastocisti biopsia sono tipicamente vetrificati individualmente fino a quando il suo stato euploidy è confermato in un report genetica. Blastocisti con uno stato aneuploidia non vitali confermato in genere vengono scartate, con il consenso del paziente, in poche settimane. Così, la maggior parte (&gt; 50%) di dispositivi VTF vengono scartati dopo conservazione a breve termine, causando un costo annuo crescente quando si utilizzano dispositivi commerciali. Nel complesso, mS-VTF è una procedura altamente efficace, affidabile e ripetibile per la crioconservazione delle blastocisti umane. Il controllo di qualità di progettazione securel superioreetichette Y e sicuro memorizza embrioni / ovociti eliminando mancato recupero e l&#39;ottimizzazione della sopravvivenza post-riscaldamento e la redditività, che giustifica l&#39;uso del sistema come un approccio universale alla embrione vetrificazione.

La vitrificazione è la tecnologia assistita più incisivo unico riproduttiva nel settore fecondazione in vitro (IVF) in quanto lo sviluppo di iniezione intracitoplasmatica dello spermatozoo. Oggi, blastocisti sono crioconservati senza la perdita di vitalità degli embrioni precedentemente associati ai tradizionali metodi lento congelamento 1. Con affidabile di post-riscaldamento embrione di sopravvivenza, l&#39;industria infertilità sta trasformando in uso preferenziale dei cicli di trasferimento di embrioni crioconservati, che danno esiti della gravidanza simili o superiori rispetto trasferimento tradizionale embrioni freschi. In collaborazione con blastocisti biopsia e screening genetico preimpianto (PGS), vetrificazione è diventato uno strumento di vitale importanza clinica per ottimizzare sani nascita risultati in tempo reale tramite euploid singolo trasferimento di embrioni 2, 3. Murino vetrificazione degli embrioni è stato sviluppato a metà degli anni 1980 4, </sup&gt; 5 e adattato agricoltura animale entro il 1990 6. Sulla base della premessa che le soluzioni di vetrificazione formano uno stato glasseous metastabile, senza danneggiare la formazione di cristalli di ghiaccio, si è dimostrato di preservare più efficacemente l&#39;integrità cellulare completa di embrioni. È interessante notare che l&#39;accettazione promettente di vetrificazione in embriologia umana non ha cominciato a realizzarsi fino al 21 ° secolo. I primi pubblicazioni che promuovono l&#39;uso di vetrificazione coinciso con lo sviluppo di dispositivi di sistema &quot;aperto&quot; unici 7, 8, 9. Tuttavia, l&#39;adozione di vetrificazione nella pratica clinica era lento, come è venuto in un momento miglioramenti congelamento lento blastocisti avvennero anche. Successful convenzionale lenta velocità di congelamento, oltre alla vetrificazione, sono state allineate con i miglioramenti nei sistemi di coltura dell&#39;embrione, nonché con la Incorporationi di approcci blastocele-collasso, che ha migliorato sia la sopravvivenza globale di trophectoderm e, successivamente, l&#39;impianto 10. Negli ultimi dieci anni, la tecnologia si è rapidamente soppiantato vetrificazione pratiche di congelamento convenzionali. In larga misura, ciò è dovuto allo sviluppo di dispositivi vitrificazione specializzati. Alcuni di questi dispositivi hanno ostacolato la sicurezza generale, l&#39;efficienza e l&#39;efficacia della vetrificazione clinica con l&#39;introduzione di difetti di progettazione inerenti ai dispositivi utilizzati nell&#39;industria FIV 11. Infatti, le sfumature di diversi dispositivi introducono significativa variazione tecnica tra programmi, comunemente indicato come &quot;firme tecniche&quot; 12. Così, riviste scientifiche, come il Journal of Experiments visualizzate (JoVE), può servire come una risorsa preziosa per dimostrare i dettagli tecnici, che contribuirà a ridurre le variazioni risultato. Un altro problema in corso è che some embriologi continuano ad essere male informato, ancora oggi, sulla base delle domande che il &quot;ultra-rapido raffreddamento di embrioni o ovociti in un &#39;sistema di vetrificazione aperto&#39; (vale a dire, il contatto embrione diretto con azoto liquido (LN 2)) è un prerequisito per l&#39;ottimizzazione i tassi di successo. &quot; Chiaramente, questa credenza è imprecisa, basato sul comprovato successo dei asettica sistemi 13, 14, 15 chiuse. Sulla base dei principi cryobiological di vetrificazione, l&#39;efficacia di vetrificazione è più altamente dipendente tassi di riscaldamento che su tassi 16, 17, 18 di raffreddamento. In generale, indipendente dal dispositivo vetrificazione utilizzato, il tasso di riscaldamento deve superare la velocità di raffreddamento per assicurare alti tassi di sopravvivenza. Alti tassi di riscaldamento riducono al minimo la possibilità di una crescita del ghiaccio (vale a dire, il Recrystallization di impurità nucleate in crio-soluzioni) durante la fase di devetrificazione del riscaldamento. Certo, la stabilità della soluzione vetrificazione (cioè, il tipo e la concentrazione di agenti crioprotettivi usati) può avere un effetto di confusione, ma questo viene indirizzato in una pubblicazione separata 11. Considerando i problemi di velocità di raffreddamento-riscaldamento, MicroSecure di vetrificazione (mS-VTF) è stato sviluppato nel 2008 come un metodo poco costoso, non commerciale FDA-compliant che ottimizzato gli aspetti di controllo di qualità di vetrificazione. Era unico in quanto ha offerto a prova di manomissione, interiorizzato, etichettatura dual-color. Inoltre, per il carico e memorizzare gli embrioni direttamente nella flexipette sterile utilizzato per pipettare (cioè senza pipettaggio ad una superficie periferica secondaria) e utilizzando cannucce ionomerica-resina che sigillano completamente saldato utilizzando un sigillante automatizzato, variante tecnica è stata eliminata in modo efficace. Nel valutare la completeness di dispositivi vitrificazione per l&#39;uso potenziale, ci sono diversi fattori di controllo della qualità che dovrebbero essere presi in considerazione, tra cui: 1) Etichettatura potenziali etichette -Può essere rispettate in modo sicuro? Sono a prova di manomissione? Offrono due colori potenziale di identificazione? C&#39;è bisogno di un&#39;etichetta secondaria, e può l&#39;etichetta essere facilmente rimosso per scopi di registrazione (ad esempio, il paziente verifica) post-riscaldamento? 2) facilità tecnica embrioni -Può essere facilmente caricati nel / sul dispositivo in modo tempestivo e semplicemente identificati e monitorati post-riscaldamento? 3) procedurale semplicità / ripetibilità -La il metodo di vetrificazione offerta semplicità e affidabilità che permette facilmente per la ripetibilità, che riduce al minimo la variazione tra tecnici (interni) e programmi (esterni)? 4) capacità di stoccaggio LN 2 -Può i dispositivi essere facilmente gestito e sicuro e identificato? È il loro storabbia spazio potenziale efficiente? Fa il dispositivo di sicurezza offerta e la sicurezza da danni fisici o possibili contaminanti come un sistema chiuso asettico? 5) il potenziale di recupero / resilienza -È il disegno dispositivo soggetto a potenziali problemi nel recupero garantito di embrioni, e faranno in modo affidabile vetrificare e mantenere completa integrità cellulare post-riscaldamento? Quest&#39;ultima preoccupazione specifica qualità, il tasso di recupero, è stato effettivamente sorprendentemente ridotto al minimo in rapporti pubblicati; questo viene fatto generalmente nascondendo la esito sfavorevole (cioè, embrione perso o uovo) nel tasso di sopravvivenza in genere-buoni. Qualsiasi dispositivo inclini a recupero incoerente (&lt;99%) è gravemente lacunosa e costituisce una passività procedurale. Il nostro asettica, chiuso metodo mS-VTF è stato sviluppato in modo strategico per tenere conto di ogni misura di controllo della qualità. Tuttavia, dopo 5 anni di successo clinico superiore e validazione 14, la procedura ha avuto to essere modificato. L&#39;originale cannucce embrione 0,3 mL (in possesso di una spina idrofobico) sono stati rimossi dal settore FIV e sostituiti con una cannuccia sperma 0.3 mL in possesso di un tampone di cotone / PVP standard (ad esempio, rietichettato come sperma / embrione di paglia). Questo documento procedurale vengono descritte le procedure specifiche e le strategie necessarie per attuare in modo sicuro, semplice ed efficace mS-VTF. Inoltre, si segnalano la modifica (s) necessario per tenere conto in modo affidabile per limitazioni di approvvigionamento, fino al momento in cui un contenitore di paglia ideale alternativa viene reintrodotto nel laboratorio clinico.

<table><tbody><tr><td>Aluminum Cane</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>Ball bearings, 3/32&quot;</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td>stainless steel</td></tr><tr><td>CBS semen/embryo straw, 0.3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>individual sterile</td></tr><tr><td>Color, ID rods, 30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td><td>weighted</td></tr><tr><td>Culture tubes, 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>Conical</td></tr><tr><td>Culture tubes, 10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filter, 250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0.22 &amp;mu;m</td></tr><tr><td>Flasks, Tissue Culture 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes, 300 &amp;mu;m ID</td><td>Cook Med.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>Sterile, 20/pack</td></tr><tr><td>Forcep, Large</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>Forcep, Splinter - fine</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>Goblet</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>Heat Sealer, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V or 220 V with adapter</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&amp;nbsp;</td><td>Life Global or</td><td>LGGH-100; 100&amp;nbsp;mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>with non-essential AA&#039;s</td></tr><tr><td>Labels, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Various colors</td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen Tank, 40&amp;nbsp;L</td><td>MVE or Taylor Warton</td><td>various</td><td>liquid storage&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>LN&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;; Dewar flask, 0.5&amp;nbsp;L</td><td>Hampton Research</td><td>HR4-695</td><td>Stainless steel</td></tr><tr><td>6-well Custer Dishes</td><td>Biogenics</td><td>015/020</td><td>plasticware by case</td></tr><tr><td>Pipette Bulb, Micro Cap</td><td>Drummond</td><td>Fisher#13681451</td><td>Hole on bulb apex</td></tr><tr><td>Petri Dishes, 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351006</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 58 mm</td><td>Nunc</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Pipette Tips, ART long</td><td>Fisher Sci.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &amp;mu;L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond or Falcon</td><td>various</td><td>rechargeable</td></tr><tr><td>Pipetting Device, Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 1&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 2&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 5&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, Serological 10&amp;nbsp;mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>Scissors, Surgical Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td>various</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Gauze pads, 4&quot; x 4&quot;</td><td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic serum</td><td>Life Global, or</td><td>LGPS-20; 20 mL, or</td><td>stored at 2 - 8 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>purchase low endotoxin lot</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot into 50&amp;nbsp;mL flasks, 1 year;&lt;br/&gt;
17.1 g/flask + Medium to 50 mL;&lt;br/&gt;
makes a 1 M solution;&lt;br/&gt;
Filter with 0.22 &amp;micro;m unit</td></tr><tr><td>Timer</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Thawing Solution</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&amp;le;1.0 M Sucrose)</td><td>T1, T2, T3, T4; tored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td>Vitrification Solution*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&amp;ge;7.9 M [Glycerol/EG])</td><td>V1, V2, V3; stored at 2 - 8 &amp;ordm;C for &amp;le;1 month after opening</td></tr><tr><td colspan="4">* Non-permeating cryoprotective additives may include: sucrose, ficoll and sodium hyaluronate&amp;nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** Other commercial preparations are typically ethylene glycol (EG)/dimethyl sulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4.8 M), but could be EG/propylene glycol (32% v/v; 5.2 M). Mixed solutions are typically used to reduce cryo-toxicity concerns of a high molar solution. Commercial solutions typically include an ES and VS solution. The formulation of commercial preparation is typically proprietary property.</td></tr></tbody></table>

modified microsecure vitrification: a safe, simple and highly effective cryopreservation procedure for human blastocysts

Clinical embrione vetrificazione si è evoluto con lo sviluppo di dispositivi di vitrificazione unici nel 21 ° secolo e con l&#39;idea sbagliata che ultra-rapido raffreddamento in un sistema &quot;aperto&quot; (cioè, diretta LN 2 contatto) era una necessità per ottimizzare il successo vetrificazione. Il dogma che circonda l&#39;importanza della velocità di raffreddamento ha portato a pratiche pericolose soggette a variazioni tecniche e alla creazione di dispositivi vitrificazione che disattese importanti fattori di controllo della qualità (ad esempio, la facilità d&#39;uso, la ripetibilità, l&#39;affidabilità, la sicurezza di etichettatura, e la sicurezza di stoccaggio). La comprensione dei difetti di controllo di qualità di altri dispositivi consentiti per lo sviluppo di un metodo di mS-VTF protetto, sicuro, ripetibile e affidabile l&#39;obiettivo di ridurre al minimo variazioni nelle e tra-tecnico. Altrettanto importante, ha unito la disponibilità di due dispositivi FDA conformi esistenti: 1) un 0,3 mL ionomerica paglia resina embrione con interiorizzato, a due colori, manomissione-petichettatura tetto con ripetibile potenziale sigillo di saldatura; e 2) abbreviato, comunemente usato, ID 300 micron flexipettes sterili per caricare direttamente l&#39;embrione (s) al fine di creare un dispositivo vetrificazione globale altamente efficace. Come altri asettica, chiusi sistemi vetrificazione (ad esempio, alta sicurezza vitrificazione (HSV), Rapid-i, e VitriSafe) efficacemente utilizzato in medicina riproduttiva, microSecure vitrificazione (mS-VTF) ha dimostrato di poter conseguire un livello elevato di sopravvivenza post-riscaldamento e gravidanza risultati con la sua attenzione alla semplicità, e ha ridotto la variazione tecnica. Anche se la paglia dell&#39;embrione 0.3 mL contenente una spina idrofobico interno è stato sostituito in commercio con una cannuccia sperma normale possedere cotone-polivinilpirrolidone (PVP) spine, ha mantenuto la sua composizione di resina ionomerica per garantire la tenuta della saldatura. Tuttavia, i tappi di cotone possono stoppino il contenuto liquido-embrione del flexipettes al contatto. Metodo mS-VTF modificato è stato adattato per includere una saldatura interna aggiuntivasigillare prima la spina sul lato dispositivo di caricamento. Il passo tecnico aggiunto alla procedura di mS-VTF non ha colpito la sua applicazione di successo, i tassi di sopravvivenza più in alto (&gt; 95%) e tassi di gravidanza continuano oggi.

1.341 blastocisti vetrificati sono stati riscaldati tra il 2012 al giugno 2014, e 1.341 embrioni recuperati (100%), mentre 1.316 sono sopravvissuti (98,1%). blastocisti biopsia sperimentato oltre il 99,5% di sopravvivenza. Al momento il trasferimento prevalentemente singolo, geneticamente testato, euploid, embrioni vetrificati, siamo stati in grado di raggiungere alcuni tra i tassi di impianto più alti e tassi di natalità dal vivo negli Stati Uniti, indipendentemente dall&#39;età (figura 3) 20, secondo recenti statistiche nazionali riportati dal Centro per il controllo delle Malattie e la Società per tecniche di riproduzione assistita (tabelle 1 e 2). Valutare una popolazione di pazienti buona prognosi (meno di 35 anni) per i soli cicli crioconservati (Tabella 1), il nostro laboratorio ha superato la media nazionale sia per i tassi di impianto (ad esempio, l&#39;efficienza di un embrione per stabilire una gravidanza) e, infine, vivere tassi di natalità<html> di oltre il 30%. Inoltre, l&#39;iniziale di validazione / verifica delle nostre cannucce di stoccaggio modificati in metà del 2014 con 70 di ricerca titolari di autorizzazione, blastocisti aneuploidi ri-vetrificate portato a 100% di recupero e il 100% di sopravvivenza. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg" /> Figura 1. Installazione MicroSecure VTF. Il piatto VTF (A) è assemblato con 3 file distinte di soluzioni di vetrificazione, che utilizzano 3 gocce di lavaggio prima del posizionamento nei distinti, goccioline di holding numerate. Inoltre, le singole pipette con punte VTF accorciati (cioè, flexipettes 300 micron ID) sono protetti e organizzati in un rack tubo di polistirolo (B), che può essere ruotata per un uso ordinato. Si noti che un gruppo di pipettaggio lampadina micropipetta monouso rappresentante è appoggiato sul rack di polistirolo.<html> Arget = &quot;_ blank&quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg" /> Figura 2. Modificato blastocisti Grading System. Conti Il nostro sistema di classificazione blastocisti Gardner modificato per l&#39;ernia indotta delle cellule TE per facilitare blastocisti biopsia. La modifica considera la schiusa prematura di blastocisti completi (A: Grado 3 = meno del 10% ernia) e blastocisti espanse (B: grado 4 = fino al 50% ernia), mentre una blastocisti cova (C) ha superiore al 50% ernia 16. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> 54871fig3.jpg &quot;/&gt; Figura 3. gravidanza risultati comparativi. Nel corso di un intervallo di cumulativo di 1,5 anni, i dati di gravidanza sono stati confrontati per valutare gli effetti del trasferimento di blastocisti euploidi vetrificati-riscaldato (n = 172 cicli / 144 trasferimenti) rispetto ai cicli non PGS (n = 160 cicli / 153 trasferimenti) che coinvolgono prevalentemente fresco trasferisce 18. Per i nostri scopi sperimentali, questo dato rivela chiaramente che la blastocisti biopsia vetrificati dalla procedura mS-VTF mantengono la loro vitalità. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Fonte di dati </td><td> # cicli </td><td> Medio di embrioni trasferiti # </td><td> Impianto Tariffe (%) </td><td> I tassi di natalità in diretta (%) </td></tr><tr><td> NB Lab * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00% </td><td> 74.50% </td></tr><tr><td> Media nazionale </td><td> 20.423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60% </td><td> 44.10% </td></tr><tr><td colspan="5"> * I dati sono stati mediati sulla base del 2014 prestazioni di Orange County fertilità, Southern California Fertility Center e il sud della California Center for Reproductive Medicine cliniche utilizzando l&#39;Ovation corrente fertilità laboratorio (NB Lab), che ha fondato la procedura microSecure vetrificazione nel 2008. </td></tr></tbody></table> Tabella 1. 2014 CDC Assisted Reproductive statistiche. Congelati i dati trasferimento di embrioni di gravidanza delle donne sotto i 35 anni da tre segnalazione cliniche medico utilizzando il nostro laboratorio NB rispetto alla media nazionale degli Stati Uniti il ​​2013 di oltre 450 cliniche di segnalazione. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"> Medie nazionali SART </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Clinica - Stato </td><td> Donne </td><td> Donne </td><td> Donne </td><td> Donne </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 anni </td><td> 35-37 anni </td><td> 38-40 anni </td><td> 41-42 anni </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63,1% </td><td> 58,3% </td><td> 40,6% </td><td> 32,3% </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64,7% </td><td> 61,5% </td><td> 40,4% </td><td> 32,2% </td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63,2% </td><td> 59,7% </td><td> 34,6% </td><td> 18,7% </td></tr><tr><td> Media nazionale </td><td> 48,6% </td><td> 38,3% </td><td> 24,3% </td><td> 12,3% </td></tr><tr><td colspan="5"> SCCRM-Southern California Center for Reproductive Medicine; CCRM-Colorado Center for for Reproductive Medicine; e RMA-Reproductive Medicine Associates </td></tr><tr><td colspan="5"> * Queste cliniche principali sono tutti prevalentemente realizzato cicli di trasferimento di embrioni vetrificati, in associazione con test genetici preimpianto, nella loro pratica standard di cura del paziente per ottimizzare il successo nati vivi per ogni embrione trapiantato. </td></tr></tbody></table> Tabella 2. 2014 i tassi cumulativi di natalità dal vivo, come riportato dalla Società per tecniche di riproduzione assistita (SART), per la Clinica SCCRM utilizzando il nostro Ovation fertilità Lab di Newport Beach, CA, in contrasto con molti altri programmi rispettati, così come con il SART medie nazionali.

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Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

Modificato vetrificazione MicroSecure: Un altamente Procedura Crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

11.8K Views.  Ovation Fertility. MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.

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Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal and postnatal consequences. To ensure the innocuousness of ART applications, studies in animal models are necessary. In addition, as a last step, embryo development studies require evaluation of their capacity to develop full-term healthy offspring. Here, embryo transfer to the uterus is indispensable to perform any ARTs-related experiment.
The rabbit has been used as a model organism to study mammalian reproduction for over a century. In addition to its phylogenetic proximity to the human species and its small size and low maintenance cost, it has important reproductive characteristics such as induced ovulation, a chronology of early embryonic development similar to humans and a short gestation that allow us to study the consequences of ART application easily. Moreover, ARTs (such as intracytoplasmic sperm injection, embryo culture, or cryopreservation) are applied with suitable efficiency in this species.
Using the laparoscopic embryo transfer technique and the cryopreservation protocol presented in this article, we describe 1) how to transfer embryos through an easy, minimally invasive technique and 2) an effective protocol for long-term storage of rabbit embryos to provide time-flexible logistical capacities and the ability to transport the sample. The outcomes obtained after transferring rabbit embryos at different developmental stages indicate that morula is the ideal stage for rabbit embryo recovery and transfer. Thus, an oviductal embryo transfer is required, justifying the surgical procedure. Furthermore, rabbit morulae are successfully vitrified and laparoscopically transferred, proving the effectiveness of the described techniques.

Assisted reproductive techniques (ARTs) are in continuous evaluation to improve outcomes and reduce the associated risks. This manuscript describes a minimally invasive embryo transfer procedure with an efficient cryopreservation protocol that allows the use of rabbits as an ideal animal model of human reproduction.

Trasferimento embrionale minimamente invasivo e vetrificazione embrionale nella fase embrionale ottimale nel modello Rabbit

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

Human Blastocyst Biopsy and Vitrification

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow entails a safe and efficient vitrification protocol, due to the turnaround time of the diagnostic techniques and to transfer the selected embryo(s) on a physiological endometrium in a following natural cycle. A biopsy approach encompassing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 5-10 trophectoderm cells (ideally 7-8) limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions. After proper training, the technique was reproducible across different operators in terms of timing of biopsy (~8 min, ranging 3-22 min based on the number of embryos to biopsy per dish), conclusive diagnoses obtained (~97.5%) and live birth rates after vitrified-warmed euploid blastocyst transfer (&#62;40%). The survival rate after biopsy, vitrification and warming was as high as 99.8%. The re-expansion rate at 1.5 h from warming was as high as 97%, largely dependent on the timing between biopsy and vitrification (ideally &#8804;30 min), blastocyst morphological quality and day of biopsy. In general, it is better to vitrify a collapsed blastocyst; therefore, in non-PGT cycles, laser-assisted artificial shrinkage might be performed to induce embryo collapse prior to cryopreservation. The most promising future perspective is the non-invasive analysis of the IVF culture media after blastocyst culture as a putative source of embryonic DNA. However, this potential avant-garde is still under investigation and a reliable protocol yet needs to be defined and validated.

Blastocyst biopsy and vitrification are required to efficiently conduct preimplantation genetic testing. An approach entailing the sequential opening of the zona pellucida and retrieval of 7-8 trophectoderm cells in day 5-7 post-insemination limits both the number of manipulations required and the exposure of the embryo to sub-optimal environmental conditions.

Biopsia e vetrificazione dell'esplosione umana

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow ...

Minimum Volume Vitrification of Immature Feline Oocytes

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to promote biodiversity preservation. In felids, most species are threatened with extinction, and domestic breeds are used as a model to increase the efficiency of protocols for germplasm banking. Among oocyte cryopreservation techniques, vitrification is more and more popular in human and veterinary assisted reproduction. Cryotop vitrification, which was at first developed for human oocytes and embryos, has demonstrated to be well-suited for cat oocytes. This method offers several advantages, such as the feasibility in field conditions and the speed of the procedure, which can be helpful when several samples need to be processed. However, the efficiency is strongly dependent on the operator&#8217;s skills, and intra- and inter-laboratory standardization are needed, as well as personnel training. This protocol describes minimum volume vitrification of immature feline oocytes on a commercial support in a step by step field-friendly protocol, from oocyte collection to warming. Following the protocol, preservation of oocyte integrity and viability at warming (as high as 90%) can be expected, although there is still room for improvement in post-warming maturation and embryonic development outcomes.

This manuscript describes a protocol for the minimum volume vitrification of immature cat oocytes with laboratory-made media on commercial supports. It covers every step from oocyte isolation from ex vivo gonads to vitrification and warming.

Vitrificazione del volume minimo degli ovociti felini immaturi

In wild animals&#8217; conservation programs, gamete banking is crucial to safeguard genetic resources of valuable individuals and rare species and to ...

Vitrification of In Vitro Matured Oocytes Collected from Adult and Prepubertal Ovaries in Sheep

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily obtained from a slaughterhouse. Adult ovaries always bear several antral follicles, while in pre-pubertal donors the maximal numbers of oocytes are available at 4 weeks of age, when ovaries bear peak numbers of antral follicles. Thus, 4 weeks old lambs are considered good donors, even if the developmental competence of prepubertal oocytes is lower compared to their adult counterpart. 
Basic research and commercial applications would be boosted by the possibility of successfully cryopreserving vitrified oocytes obtained from both adult and prepubertal donors. The vitrification of oocyte collected from prepubertal donors would also allow shortening the generation interval and thus increasing the genetic gain in breeding programs. However, the loss of developmental potential after cryopreservation makes mammalian oocytes probably one of the most difficult cell types to cryopreserve. Among the available cryopreservation techniques, vitrification is widely applied to animal and human oocytes. Despite recent advancements in the technique, exposures to high concentrations of cryoprotective agents as well as chilling injury and osmotic stress still induce several structural and molecular alterations and reduce the developmental potential of mammalian oocytes. Here, we describe a protocol for the vitrification of sheep oocytes collected from juvenile and adult donors and matured in vitro prior to cryopreservation. The protocol includes all the procedures from oocyte in vitro maturation to vitrification, warming and post-warming incubation period. Oocytes vitrified at the MII stage can indeed be fertilized following warming, but they need extra time prior to fertilization to restore damage due to cryopreservation procedures and to increase their developmental potential. Thus, post-warming culture conditions and timing are crucial steps for the restoration of oocyte developmental potential, especially when oocyte are collected from juvenile donors.

The protocol aims at providing a standard method for the vitrification of adult and juvenile sheep oocytes. It includes all the steps from the preparation of the in vitro maturation media to the post-warming culture. Oocytes are vitrified at the MII stage using Cryotop to ensure the minimum essential volume.

Vetrificazione degli ovociti maturi in vitro raccolti da ovaie adulte e prepubertali nelle pecore

In livestock, in vitro embryo production systems can be developed and sustained thanks to the large number of ovaries and oocytes that can be easily ...

Morphometric Protocol for the Objective Assessment of Blastocyst Behavior During Vitrification and Warming Steps

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a blastocyst&#39;s volume changing during individual phases before and after vitrification. The method can be useful in searching for the most optimal timing of blastocyst exposure to different concentrations of cryoprotectants by observing blastocyst shrinkage and re-expansion in different pre- and post-vitrification phases. With this methodology, the blastocyst vitrification protocol can be optimized. For a better demonstration of the usefulness of this morphometric method, two different blastocyst preparation protocols for vitrification are compared; one with using an artificial blastocoel collapsing and one without this intervention before vitrification. Both blastocysts&#39; volume changes are followed by time-lapse microphotography and measured by photo-editing software tools. The measurements are taken every 20 seconds in previtrification phases and every 5 minutes in the post-warming period. The changes of the blastocyst dimensions per time unit are presented graphically in line diagrams. The results show a long equilibration previtrification phase in which the intact blastocyst first shrinks and then slowly refills the blastocoel, entering vitrification with a fluid-filled blastocoel. The artificially collapsed blastocyst remains in its shrunken stage through the entire equilibration phase. During the vitrification phase, it also does not change its volume. Since the blastocyst morphometry shows a constant volume of the artificially collapsed blastocysts during the previtrification step, it seems that this stage could be shorter. The described protocol provides many additional comparative parameters of blastocyst behavior during and after cryopreservation on the basis of the speed and intensity of the volume changes, the number of partial blastocoel contractions or total blastocyst collapses, and the time to a total blastocoel re-expansion or the time to hatching.

Here we present a time-lapse morphometric protocol to follow the intensity of blastocyst shrinkage and re-expansion during previtrification interventions and post-warming recovery. The application of the protocol is possible in in vitro fertilization laboratories equipped with time-lapse microscopes and is recommended in the development of an optimal blastocyst vitrification method.

Morfometrica protocollo per la valutazione obiettiva dei blastocisti comportamento durante la vetrificazione e passaggi scaldavivande

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a ...

Bioingegneria

Cryopreservation of Preimplantation Embryos of Cattle, Sheep, and Goats

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage. Preimplantation embryos consist predominantly of water, and the avoidance of intracellular ice crystal formation during the cryopreservation process is of paramount importance to maintain embryo viability. Embryos are placed into a hypertonic solution (1.4 &#x2013; 1.5 M) of a cryoprotective agent (CPA) such as ethylene glycol (EG) or glycerol (GLYC) to create an osmotic gradient that facilitates cellular dehydration. After embryos reach osmotic equilibrium in the CPA solution, they are individually loaded in the hypertonic CPA solution into 0.25 ml plastic straws for freezing. Embryos are placed into a controlled rate freezer at a temperature of -6&deg;C. Ice crystal formation is induced in the CPA solution surrounding the embryo, and crystallization causes an increase in the concentration of CPA outside of the embryo, causing further cellular dehydration. Embryos are cooled at a rate of 0.5&deg;C/min, enabling further dehydration, to a temperature of -34&deg;C before being plunged into liquid nitrogen (-196&deg;C). Cryopreserved embryos must be thawed prior to transfer to a recipient (surrogate) female. Straws containing the embryos are removed from the liquid nitrogen dewar, held in room temperature air for 3 to 5 sec, and placed into a 37&deg;C water bath for 25 to 30 sec. Embryos cryopreserved in GLYC are placed into a 1 M solution of sucrose for 10 min for removal of the CPA before transfer to a recipient (surrogate) female. Embryos cryopreserved in EG, however, may be directly transferred to the uterus of a recipient.

Preimplantation embryos may be cryopreserved after placement into a hypertonic cryoprotective solution to cause cellular dehydration. After equilibration, ice crystal formation is induced in the solution surrounding the embryo. Further dehydration occurs as the embryo is slowly cooled to subzero temperatures before plunging into liquid nitrogen for storage.

Crioconservazione di embrioni preimpianto di bovini, ovini, e caprini

Preimplantation embryos from cattle, sheep, and goats may be cryopreserved for short- or long-term storage.  Preimplantation embryos consist predominantly ...

Biologia

Cryopreservation of Mouse Embryos by Ethylene Glycol-Based Vitrification

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic modifications and the number is consistently increasing year by year. Its technical development started with slow freezing methods in the 1970s1, then followed by vitrification methods developed in the late 1980s2. Generally, the latter technique is advantageous in its quickness, simplicity, and high survivability of recovered embryos. However, the cryoprotectants contained are highly toxic and may affect subsequent embryo development. Therefore, the technique was not applicable to certain strains of mice, even when the solutions are cooled to 4&deg;C to mitigate the toxic effect during embryo handling. At the RIKEN BioResource Center, more than 5000 mouse strains with different genetic backgrounds and phenotypes are maintained3, and therefore we have optimized a vitrification technique with which we can cryopreserve embryos from many different strains of mice, with the benefits of high embryo survival after vitrifying and thawing (or liquefying, more precisely) at the ambient temperature4.
Here, we present a vitrification method for mouse embryos that has been successfully used at our center. The cryopreservation solution contains ethylene glycol instead of DMSO to minimize the toxicity to embryos5. It also contains Ficoll and sucrose for prevention of devitrification and osmotic adjustment, respectively. Embryos can be handled at room temperature and transferred into liquid nitrogen within 5 min. Because the original method was optimized for plastic straws as containers, we have slightly modified the protocol for cryotubes, which are more easily accessible in laboratories and more resistant to physical damages. We also describe the procedure of thawing vitrified embryos in detail because it is a critical step for efficient recovery of live mice. These methodologies would be helpful to researchers and technicians who need preservation of mouse strains for later use in a safe and cost-effective manner.

An ethylene glycol-based vitrification method for mouse embryos is described. It is advantageous to other methods in its simplicity and low embryonic toxicity, and therefore can be broadly applicable to many strains of mice, including inbred and gene-modified mice.

Crioconservazione di embrioni di topo da glicole etilenico-Based Vetrificazione

Cryopreservation of mouse embryos is a technological basis that supports biomedical sciences, because many strains of mice have been produced by genetic ...

Bulk Droplet Vitrification for Primary Hepatocyte Preservation

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. Vitrification requires extremely fast cooling rates to achieve transition of water into the glass phase while avoiding injurious ice formation. Although pre-incubation with cryoprotective agents (CPA) can reduce the critical cooling rate of biological samples, high concentrations are generally needed to enable ice-free cryopreservation by vitrification. As a result, vitrification is hampered by CPA toxicity and restricted to small samples that can be cooled fast. It was recently demonstrated that these inherent limitations can be overcome by bulk droplet vitrification. Using this novel method, cells are first pre-incubated with a low intracellular CPA concentration. Leveraging rapid osmotic dehydration, the intracellular CPA is concentrated directly ahead of vitrification, without the need to fully equilibrate toxic CPA concentrations. The cellular dehydration is performed in a fluidic device and integrated with continuous high throughput generation of large sized droplets that are vitrified in liquid nitrogen. This ice-free cryopreservation method with minimal CPA toxicity is suitable for large cell quantities and results in increased hepatocyte viability and metabolic function as compared to classical slow-freezing cryopreservation. This manuscript describes the methods for successful bulk droplet vitrification in detail.

This manuscript describes an ice-free cryopreservation method for large quantities of rat hepatocytes whereby primary cells are pre-incubated with cryoprotective agents at a low concentration and vitrified in large droplets.

Vitrificazione delle gocce di gocciolamento per la conservazione degli epatiti primari

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. ...

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women, for both medical and non-medical indications. The main medical indications are oncologic diseases, gynecologic diseases such as severe endometriosis, systemic diseases compromising the ovarian reserve, and genetic conditions involving premature menopause. This paper describes the whole clinical and laboratory work-up of a fertility preservation treatment by outlining recommendations for objective and evidence-based counseling. Furthermore, it focuses on the effectiveness of the procedure and describes the most appropriate strategies to fully exploit the ovarian reserve and maximize the number of oocytes retrieved in the shortest possible time. The evaluation of the ovarian reserve, the definition of an ideal stimulation protocol, as well as oocyte retrieval, denudation, and vitrification procedures have been detailed along with approaches to maximize their efficacy, efficiency, and safety.

Oocyte cryopreservation is recognized by several international scientific societies as the gold standard for fertility preservation in postpubertal women. Appropriate clinical and laboratory strategies ensure maximum efficacy, efficiency, and safety of fertility preservation treatments.

Conservazione della fertilità attraverso la vitrificazione degli ovociti: prospettive cliniche e di laboratorio

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Medicina

<meta charset="utf8"></head><body>Valutazione della vitalità follicolare nei tessuti della corteccia ovarica umana vitrificata

Vitrification of Ovarian Cortex Tissue to Achieve a Glassy State of Aggregation

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or for pre-pubertal girls, it is often the only option for fertility protection. Cryopreservation can be performed either by vitrification or by slow freezing. Slow freezing is currently the standard approach. An increasing number of studies indicate that vitrification can replace slow freezing in the state-of-the-art in vitro fertilization (IVF) laboratories, significantly improving thawing survival rates and simplifying the technical aspects of cryopreservation. A metal grid-based, high-throughput protocol for rapid vitrification of ovarian cortex tissue, suitable for clinical routine, is described. The sterilization of metal grids and liquid nitrogen ensures high quality, meeting good manufacturing practice (GMP) standards. Vitrification was conducted to ensure ultra-rapid cooling rates. Instead of slowly thawing, samples were rapidly warmed. To assess follicular viability, calcein staining was performed both prior to cryopreservation and after rapid warming. The successful application of vitrification and rapid warming using metal grids is reported. No significant differences in follicular viability were observed prior to vitrification and after rapid warming. These results substantiate the high capacity of tissue vitrification for clinical routine applications as a potential substitute for the widely used slow-freezing method.

<meta charset="utf8"></head><body>Autore in primo piano: Promuovere la conservazione della fertilità nelle giovani pazienti oncologiche attraverso la vitrificazione del tessuto ovarico e la crescit

A protocol for the vitrification of ovarian tissue, as an alternative cryopreservation method to the widely used slow freezing protocol, is presented.

Vitrificazione del tessuto della corteccia ovarica per raggiungere uno stato vetroso di aggregazione

Ovarian tissue cryopreservation (OTC) is an important option for fertility preservation. For patients whose gonadotoxic treatments cannot be postponed or ...