Un protocollo per la valutazione funzionale del Whole-Protein Saturazione mutagenesi biblioteche Utilizzando High-Throughput Sequencing

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11:36 min

•

July 3rd, 2016

DOI :

10.3791/54119-v

July 3rd, 2016

•

Michael Allen Stiffler¹, Subu K Subramanian¹, Victor H Salinas¹, Rama Ranganathan¹

¹Green Center for Systems Biology, University of Texas Southwestern Medical Center

Riepilogo

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Biologia Molecolare

Numero 113

mutagenesi

saturazione mutagenesi

generazione di sequenziamento di prossima

alta sequenziamento di throughput

TEM 1 beta lattamasi

la resistenza agli antibiotici

primer ortogonali

Capitoli in questo video

0:05

Title

0:43

Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis

1:53

Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors

3:47

Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance

5:51

High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations

8:44

Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis

10:16

Conclusion

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