We would like to thank Dr. Harry Orr at the University of Minnesota for his generous gift of transgenic mice. We would also like to thank the following Skidmore College alum for their work performing the preceding experiments: Monica Villegas, Porter Hall, Mitchell Spring, Nicholas Toker, Jenny Zhang, Chloe Larson and Cheyanne Slocum. Furthermore, we would like to thank Skidmore College for funding the development of these methods.

<ol>
	<li>Stucki, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+impairments+contribute+to+Spinocerebellar+ataxia+type+1+progression+and+can+be+ameliorated+by+the+mitochondria-targeted+antioxidant+MitoQ.">Mitochondrial impairments contribute to Spinocerebellar ataxia type 1 progression and can be ameliorated by the mitochondria-targeted antioxidant MitoQ.</a> Free Radic Biol Med. 97, 427-440 (2016).</li><li>Breuer, M. E., Willems, P. H., Russel, F. G., Koopman, W. J., Smeitink, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+mitochondrial+dysfunctions+in+the+brain,+from+mice+to+men.">Modeling mitochondrial dysfunctions in the brain, from mice to men.</a> J Inherit Metab Dis. 35 (2), 193-210 (2012).</li><li>Breuer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mitochondrial+OXPHOS+dysfunction+in+the+development+of+neurologic+diseases.">The role of mitochondrial OXPHOS dysfunction in the development of neurologic diseases.</a> Neurobiol Dis. , (2012).</li><li>Hroudov&#225;, J., Singh, N., Fizar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dysfunctions+in+neurodegenerative+diseases,+relevance+to+Alzheimer's+disease.">Mitochondrial dysfunctions in neurodegenerative diseases, relevance to Alzheimer's disease.</a> Biomed Res Int. 2014, 175062 (2014).</li><li>Burright, E. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SCA1+transgenic+mice,+a+model+for+neurodegeneration+caused+by+an+expanded+CAG+trinucleotide+repeat.">SCA1 transgenic mice, a model for neurodegeneration caused by an expanded CAG trinucleotide repeat.</a> Cell. 82 (6), 937-948 (1995).</li><li>Clark, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purkinje+cell+expression+of+a+mutant+allele+of+SCA1+in+transgenic+mice+leads+to+disparate+effects+on+motor+behaviors,+followed+by+a+progressive+cerebellar+dysfunction+and+histological+alterations.">Purkinje cell expression of a mutant allele of SCA1 in transgenic mice leads to disparate effects on motor behaviors, followed by a progressive cerebellar dysfunction and histological alterations.</a> J Neurosci. 17 (19), 7385-7395 (1997).</li><li>Kuznetsov, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers,+tissues+and+cells.">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3 (6), 965-976 (2008).</li><li>Deng-Bryant, Y., Singh, I. N., Carrico, K. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+tempol,+a+catalytic+scavenger+of+peroxynitrite-derived+free+radicals,+in+a+mouse+traumatic+brain+injury+model.">Neuroprotective effects of tempol, a catalytic scavenger of peroxynitrite-derived free radicals, in a mouse traumatic brain injury model.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28 (6), 1114-1126 (2008).</li><li>Vaishnav, R. A., Singh, I. N., Miller, D. M., Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+peroxidation-derived+reactive+aldehydes+directly+and+differentially+impair+spinal+cord+and+brain+mitochondrial+function.">Lipid peroxidation-derived reactive aldehydes directly and differentially impair spinal cord and brain mitochondrial function.</a> J Neurotrauma. 27 (7), 1311-1320 (2010).</li><li>Matthews, R. T., Yang, L., Browne, S., Baik, M., Beal, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coenzyme+Q10+administration+increases+brain+mitochondrial+concentrations+and+exerts+neuroprotective+effects.">Coenzyme Q10 administration increases brain mitochondrial concentrations and exerts neuroprotective effects.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (15), 8892-8897 (1998).</li><li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+creatine+in+a+transgenic+mouse+model+of+Huntington's+disease.">Neuroprotective effects of creatine in a transgenic mouse model of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 20 (12), 4389-4397 (2000).</li><li>Ferrante, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+effects+of+coenzyme+Q10+and+remacemide+in+transgenic+mouse+models+of+Huntington's+disease.">Therapeutic effects of coenzyme Q10 and remacemide in transgenic mouse models of Huntington's disease.</a> J Neurosci. 22 (5), 1592-1599 (2002).</li><li>Hersch, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creatine+in+Huntington+disease+is+safe,+tolerable,+bioavailable+in+brain+and+reduces+serum+8OH2'dG.">Creatine in Huntington disease is safe, tolerable, bioavailable in brain and reduces serum 8OH2'dG.</a> Neurology. 66 (2), 250-252 (2006).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+with+coenzyme+Q10+and+creatine+produces+additive+neuroprotective+effects+in+models+of+Parkinson's+and+Huntington's+diseases.">Combination therapy with coenzyme Q10 and creatine produces additive neuroprotective effects in models of Parkinson's and Huntington's diseases.</a> J Neurochem. 109 (5), 1427-1439 (2009).</li><li>Yang, X., Dai, G., Li, G., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coenzyme+Q10+reduces+beta-amyloid+plaque+in+an+APP/PS1+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Coenzyme Q10 reduces beta-amyloid plaque in an APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Mol Neurosci. 41 (1), 110-113 (2010).</li><li>Sandhir, R., Mehrotra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+supplementation+is+effective+in+improving+mitochondrial+dysfunctions+induced+by+3-nitropropionic+acid,+implications+in+Huntington's+disease.">Quercetin supplementation is effective in improving mitochondrial dysfunctions induced by 3-nitropropionic acid, implications in Huntington's disease.</a> Biochim Biophys Acta. 1832 (3), 421-430 (2013).</li><li>Ergonul, P. G., Nergiz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+organic+acids+in+olive+fruit+by+HPLC.">Determination of organic acids in olive fruit by HPLC.</a> 'Czech Food Sci. 28 (3), 202-205 (2010).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quantiative+measurement+of+motor+inco-ordination+in+naive+mice+using+an+acelerating+rotarod.">The quantiative measurement of motor inco-ordination in naive mice using an acelerating rotarod.</a> J Pharm Pharmacol. 20 (4), 302-304 (1968).</li><li>Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+motor+balance+and+coordination+in+mice+using+the+balance+beam.">Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li><li>Servadio, A., Koshy, B., Armstrong, D., Antalffy, B., Orr, H. T., Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+analysis+of+the+ataxin-1+protein+in+tissues+from+normal+and+spinocerebellar+ataxia+type+1+individuals.">Expression analysis of the ataxin-1 protein in tissues from normal and spinocerebellar ataxia type 1 individuals.</a> Nat Genet. 10 (1), 94-98 (1995).</li><li>Klement, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ataxin-1+nuclear+localization+and+aggregation,+role+in+polyglutamine-induced+disease+in+SCA1+transgenic+mice.">Ataxin-1 nuclear localization and aggregation, role in polyglutamine-induced disease in SCA1 transgenic mice.</a> Cell. 95 (1), 41-53 (1998).</li><li>Serra, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+profiling+links+SCA1+pathophysiology+to+glutamate+signaling+in+Purkinje+cells+of+transgenic+mice.">Gene profiling links SCA1 pathophysiology to glutamate signaling in Purkinje cells of transgenic mice.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2535-2543 (2004).</li><li>Carter, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+progressive+motor+deficits+in+mice+transgenic+for+the+human+Huntington's+disease+mutation.">Characterization of progressive motor deficits in mice transgenic for the human Huntington's disease mutation.</a> J Neurosci. 19 (8), 3248-3257 (1999).</li><li>Anjomani Virmouni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+GAA-repeat-expansion-based+mouse+model+of+Friedreich's+ataxia.">A novel GAA-repeat-expansion-based mouse model of Friedreich's ataxia.</a> Dis Model Mech. 8 (3), 225-235 (2015).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Se si utilizzano questi metodi come descritto, sono in grado di rilevare e alleviare ossidativa disfunzione mitocondriale fosforilazione mediata in modelli murini malattie neurodegenerative cerebellari. I saggi biochimici e comportamentali combinate sono metodi poliedrici per determinare l&#39;entità del contributo mitocondriale per cerebellare patologia malattia neurodegenerativa. Trattando i topi con l&#39;acido succinico per stimolare il metabolismo e aumentare la funzione mitocondriale, siamo in grado di mostrare un salvataggio di deficit comportamentali cerebellari e la degenerazione cerebellare. La metodologia qui presentata può essere utilizzato per testare un&#39;ampia varietà di composti metabolicamente mirati idrosolubili per potenziale trattamento di malattie neurodegenerative cerebellare. L&#39;acido succinico è facilmente solubile in acqua a 0,75 mg / ml, che consente per la consegna facile con acqua potabile gabbia e non richiede la creazione di pellet cibo integrati. Altri solubile in acquacomposti possono essere facilmente sostituiti nel protocollo. Se utilizzando composti metabolicamente mirati che non sono solubili in acqua, la nostra metodologia può essere facilmente adattato per trattamento con pellet cibo integrati 11, 12. Durante il test di un nuovo composto, è fondamentale per verificare la penetrazione cerebellare del farmaco prima di iniziare il trattamento tramite analisi HPLC o altro metodo di rilevazione adeguato. La batteria di valutazioni patologiche è stato scelto a causa della loro efficacia riportato a rilevare le patologie neurodegenerative del cervelletto. Le valutazioni saggio impronta, test del fascio e il dosaggio rotarod sono ampiamente usati di malattie cerebellari neurodegenerative tra cui vari SCA, e Friedreich atassia di 6, 23, 24. Questi particolari valutazioni comportamentali correlati fortemente con degenerazione cerebellare. Tuttavia, altri behavioraL paradigmi possono essere sostituiti o aggiunti in base alle esigenze. L&#39;etichettatura delle cellule di Purkinje nei topi SCA1 con atassina-1 e calbindina è ampiamente utilizzato per rilevare la degenerazione cerebellare nei modelli SCA1 5, 20, 21. Altri anticorpi neuronale selettivi e regioni di tessuto può essere utilizzato per visualizzare la mitigazione del neurodegenerazione, se necessario. Analisi La respirazione è un potente strumento per la rilevazione specifica di disfunzione o riparazione all&#39;interno dei singoli complessi mitocondriali dal tessuto cerebellare. Si deve prestare attenzione per minimizzare il tempo tra la raccolta del tessuto e si effettua il test per ottenere risultati riproducibili. Inoltre, è importante notare l&#39;omogeneità del tessuto analizzato. In particolare, il tessuto cerebellare costituito prevalentemente di neuroni granulari che non esprimono il transgene SCA1 nel nostro modello. Pertanto, un passaggio fondamentale di questoprotocollo è quello di determinare se tutta la respirazione cerebellare è un metodo praticabile per il rilevamento di funzione complessa ossidativo. cambiamenti nella respirazione transgenico SCA1 cervelletto del mouse possono essere sottili e possono richiedere un aumento del numero di soggetti per ottenere risultati statisticamente significativi. La combinazione di metodi comportamentali e neuropatologici descritti in questo protocollo fornisce quantificazione distinta di malattie SCA1 e può robusta rilevare miglioramento in seguito a trattamento con composti idrosolubili. Il significato di questo protocollo è nella sua ampia adattabilità a vari trattamenti e una gamma diversificata di modelli murini. Inoltre, molte delle tecniche utilizzate in questo protocollo non richiedono costose attrezzature o tecniche complicate e sono quindi adatti per un ambiente di ricerca universitario. Le future applicazioni di questo protocollo saranno utilizzati per valutare il grado di efficacia del trattamento al momento della consegna età-dipendente del composto.

I mitocondri sono i principali produttori di adenosina trifosfato (ATP), un coenzima essenziale per energia cellulare, con la maggioranza di ATP mitocondriale prodotto mediante fosforilazione ossidativa (OXPHOS) utilizzando la catena di trasporto degli elettroni. Il cervello, dato le sue alte richieste metaboliche e la sua dipendenza da fosforilazione ossidativa per alimentare l&#39;attività neurale, è altamente sensibile alla disfunzione mitocondriale. Come risultato, disfunzione mitocondriale viene attivato durante il processo di invecchiamento 1 ed è implicato nella patogenesi di molteplici patologie neurodegenerative 2, 3, 4. Pertanto, ne consegue che i mitocondri sono bersagli terapeutici interessanti per neurodegenerazione. In questo protocollo, abbiamo adottato l&#39;uso di atassia spinocerebellare di tipo 1 (SCA1) come una malattia neurodegenerativa modello per lo studio dei mitocondril erettile e lo sviluppo di terapie mitocondriali mirati. SCA1 è causata da una mutazione polyglutamine (polyQ) repeat espansione nel prodotto del gene atassina-1 che innesca progressiva degenerazione dei neuroni di Purkinje del cervelletto e neuroni di altre regioni del cervello. La linea di topo transgenico qui utilizzato (designato come il mouse SCA1), che esprime una polyQ-mutante ataxin-1 transgene sotto il controllo di un promotore specifico Purkinje cellule, permette l&#39;analisi mirata della componente Purkinje cellule di SCA1 5. I topi sottoposti a SCA1 graduale degenerazione delle cellule di Purkinje e sviluppare andatura atassica 6. La disfunzione mitocondriale complesso e l&#39;efficacia del trattamento mitocondriale mirati possono essere valutati con una batteria di saggi molecolari e comportamentali. La disfunzione mitocondriale complesso è misurata ex vivo mediante saggi di respirazione che consentono di rilevare il consumo di ossigeno alterata all&#39;interno del tessuto cerebellare inla presenza di substrati catena di trasporto degli elettroni e inibitori 7. Test di respirazione sono stati precedentemente usato con il tessuto permeabilizzate, isolati mitocondriali, e tutto il tessuto 7, 8, 9. Essi consentono per la valutazione diretta della funzione mitocondriale a differenza di metodi di raccolta dei dati morfologici, come la microscopia elettronica a trasmissione o immunofluorescenza. L&#39;uso di tutto il tessuto piuttosto che mitocondri isolati impedisce selezione di parte dei mitocondri sani che si possono verificare durante il processo di isolamento 7. Adattate al protocollo, come illustrato, il saggio la respirazione è un metodo prezioso per rilevare la disfunzione mitocondriale in cerebellari stati di malattia neurodegenerative. attivatori non specifici del metabolismo possono essere usati per dedurre disfunzione mitocondriale in modelli di topi transgenici di diseas neurodegenerativeee aiutare lo sviluppo di nuove terapie. Quercetina, coenzima Q10 e creatina sono stati tutti in grado di migliorare la patologia malattia neurodegenerativa in pazienti e in modelli animali di malattia neurodegenerativa 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. Qui vi presentiamo un attivatore metabolico romanzo, acido succinico, per stimolare il metabolismo e aumentare la funzione mitocondriale nella malattia neurodegenerativa. Per assicurarsi che l&#39;attivatore attraversa la barriera ematoencefalica, HPLC è stato impiegato per rilevare consegna al tessuto neurale nei topi trattati 17. Per valutare gli effetti terapeutici dei composti idrosolubili metabolicamente mirata come acido succinico, una batteria di paradigmi comportamentali e studi immunopatologici può essere utilizzato. due per i deficit di coordinazione motoria trovati nelle malattie neurodegenerative cerebellare, il test della pista impronta, test del fascio e il dosaggio verga rotazione accelerando vengono utilizzati per rilevare salvataggio di patologia comportamentale 6, 18, 19. Queste misure sono integrate con la valutazione immunopatologico di citoarchitettura cerebellare valutando lo spessore molecolare strato (definito come Purkinje dendritica delle cellule lunghezza pergolato) e Purkinje conta soma celle all&#39;interno di un lobulo definito di tessuto cerebellare 6, 20, 21. Qui vi presentiamo diversi metodi neuropatologici e comportamentali per il rilevamento e il trattamento della disfunzione mitocondriale con composti solubili in acqua metabolicamente mirato. Usiamo ex vivo l&#39;analisi della respirazione mitocondriale per analizzare disfunzione mitocondriale nel tran SCA1il mouse sgenic. Inoltre, abbiamo dimostrato che i sintomi della malattia e la patologia sono migliorate l&#39;acido succinico richiamo mitocondriale solubile in acqua, implicando ulteriori disfunzione mitocondriale nella progressione della malattia SCA1.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine diphosphate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2754</td>
			<td>ADP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153</td>
			<td>BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-Diamidino-2-phenylindole</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td>DAPI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td>DTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>1446600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>6994</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mannitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M4125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium-lactobionate</td>
			<td>Bio-Sugars</td>
			<td>69313-67-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotenone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R8875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Succinic Acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#8242;,N&#8242;-Tetramethyl-p-phenylenediamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7394</td>
			<td>TMPD</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>U0631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11NQ antibody (anti-ataxin-1 )</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Servadio, et al. 1995, PMID: 7647801</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse secondary antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calbindin antibody (goat)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>C-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control transgenic mice</td>
			<td>Harry Orr, Ph.D.</td>
			<td>A02</td>
			<td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCA1 mice</td>
			<td>Harry Orr, Ph.D.</td>
			<td>B05</td>
			<td>Burright, et al. 1997, PMID: 9217978</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wildtype mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>001800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ESM-100L microtome</td>
			<td>ERMA</td>
			<td></td>
			<td>Sledge microtome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview FV1200 Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol-gelatin slides</td>
			<td>FD Neuro Technologies</td>
			<td>PO101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>VCAT 80465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OXYT1 Oxytherm Electrode Control Unit</td>
			<td>Hansatech Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P.T.F.E. paper</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-08277-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotallion Rotarod</td>
			<td>PPP&#38;G</td>
			<td></td>
			<td>contact corresponding author for information</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultimate 3000 HPLC</td>
			<td>Dionex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://imagej.nih.gov/ij/">http://imagej.nih.gov/ij/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counter plugin (for ImageJ)</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3P&#38;G Rota-Rod v3.3.3 (rotarod software)</td>
			<td>PPP&#38;G</td>
			<td></td>
			<td>contact corresponding author for information</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phidget21.dll (required for rotarod software)</td>
			<td>DLL-Files.com</td>
			<td></td>
			<td><a href="https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html">https://www.dll-files.com/phidget21.dll.html</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

treating sca1 mice with water-soluble compounds to non-specifically boost mitochondrial function

La disfunzione mitocondriale svolge un ruolo significativo nel processo di invecchiamento e nelle malattie neurodegenerative tra cui diversi atassie ereditarie spinocerebellari e di altri disturbi del movimento segnato da una progressiva degenerazione del cervelletto. L&#39;obiettivo di questo protocollo è quello di valutare la disfunzione mitocondriale in atassia spinocerebellare di tipo 1 (SCA1) e valutare l&#39;efficacia del targeting farmacologica della respirazione metabolica attraverso l&#39;acido succinico composto idrosolubile per rallentare la progressione della malattia. Questo approccio è applicabile ad altre malattie cerebellari e può essere adattato ad una serie di terapie idrosolubili. Ex vivo l&#39;analisi della respirazione mitocondriale viene utilizzata per rilevare e quantificare i cambiamenti correlati alla malattia in funzione mitocondriale. Con prove genetiche (dati non pubblicati) e la prova proteomica di disfunzione mitocondriale nel modello SCA1 del mouse, si valuta l&#39;efficacia del trattamento con l&#39;solubile in acqua metabolica richiamo sL&#39;acido uccinic sciogliendo questo composto direttamente in acqua potabile gabbia casa. La capacità del farmaco di passare la barriera emato-encefalica può essere dedotta mediante cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC). L&#39;efficacia di questi composti può quindi essere testato l&#39;utilizzo di più paradigmi comportamentali tra cui il rotarod accelerazione, prova trave e analisi impronta. integrità Cytoarchitectural del cervelletto può essere valutata mediante saggi di immunofluorescenza che rilevano nuclei delle cellule di Purkinje e dendriti delle cellule di Purkinje e soma. Questi metodi sono tecniche robuste per determinare la disfunzione mitocondriale e l&#39;efficacia del trattamento con composti solubili in acqua in malattia neurodegenerativa cerebellare.

Attraverso il targeting farmacologico dei mitocondri cerebellare con acido succinico siamo in grado di prevenire la disfunzione mitocondriale in un modello murino della cerebellare SCA1 malattia neurodegenerativa. Il donatore di elettroni canonica di succinato deidrogenasi, acido succinico, è stato sciolto in acqua potabile gabbia casa di topi SCA1 per un mese, con inizio comportamentale valutazione durante la seconda settimana di trattamento e di valutazione neuropatologico dopo il trattamento (Figura 1A). Trattamento con acido succinico 22 migliora le prestazioni dei topi SCA1 come misurate con il test impronta, saggio del fascio e accelerazione test rotarod. I miglioramenti comportamentali rilevati indica un maggiore coordinamento del motore e motore di apprendimento (Figura 1B-D). Salvataggio di prestazioni comportamentali è stato trovato in concerto con un mantenimento di ceretessuto bellar (Figura 2). trattamento con acido succinico significativamente conservata corpi cellulari di Purkinje e l&#39;aumento dello spessore dello strato molecolare (indicativo di Purkinje dendritiche cellule estensione pergolato) nella fessura primaria cerebellare nei topi SCA1 trattati rispetto ai topi non trattati SCA1. Cellula di Purkinje lunghezza dendritiche e di Purkinje conta delle cellule del corpo forniscono forti misure di citoarchitettura cerebellare complessiva 5. HPLC è stata eseguita sul tessuto cerebellare da topi trattati per verificare che l&#39;acido succinico disciolto nell&#39;acqua potabile gabbia attraversato la barriera ematoencefalica e tessuto cerebellare penetrato. Una curva variando la lunghezza del trattamento supporta ulteriormente annuncio trattamento libitum di acido succinico come un valido modo di raggiungere il tessuto cerebellare (Figure 3A-B). I nostri esperimenti respirazione sono in corso ed i nostri risultati saranno pubblicati in una ricercamanoscritto. Qui dimostriamo che siamo in grado di registrare con successo il tasso di respirazione attraverso cerebellari complessi della fosforilazione ossidativa dopo l&#39;aggiunta di diversi substrati a catena di trasporto degli elettroni e inibitori (Figura 3C). In ultima analisi, useremo il test di respirazione per mostrare i deficit della fosforilazione ossidativa in SCA1 cervelletto del mouse e l&#39;inversione di quei deficit mediante trattamento acido succinico. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53758/53758fig1.jpg" /> Figura 1: Schema di trattamento e Rappresentante dei dati dal Footprint Assay, Larghezza Assay e accelerando rotarod. (A) acido succinico è stato sciolto in acqua potabile gabbia casa di topi SCA1 per quattro settimane con inizio alle 17 settimane di età. topi SCA1 iniziano a visualizzare il fenotipo atassia a 5 settimane di età. Non raffigurati nello schema sono tre coorti di controllo: tipo selvatico topo acido succinico trattati, vevei- trattati topi SCA1 e topi di tipo selvatico veicoli trattati. le valutazioni del comportamento sono state condotte durante il periodo di trattamento come segue: saggio di impronta durante la settimana 17, saggio fascio durante la settimana 18 e accelerando rotarod durante la settimana di 19. A 20 settimane di età, i topi sono stati sacrificati e tessuto cerebellare è stato prodotto per saggi immunopatologia, saggi HPLC e test di respirazione. (B) i dati rappresentativi del saggio impronta che mostrano un&#39;andatura veicolo trattati di tipo selvatico (in alto), veicoli trattati SCA1 andatura (al centro) e un trattato con acido succinico SCA1 andatura (in basso). Dati di analisi (C) del fascio che mostra un miglioramento in termini di prestazioni del fascio (misurata come numero di prove per una corsa di successo) di topi SCA1 con trattamento acido succinico. (* P &lt;0,05). (D) trattamento con acido succinico migliora in modo significativo le prestazioni di accelerazione rotarod di SCA1 22 topi, come indicato da un aumento della latenza di cadere (* p &lt;0,05). Le barre di errore in re CDflect l&#39;errore standard della media. La significatività è stata determinata da una via ANOVA e confronti multipli analisi post-hoc. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53758/53758fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/53758/53758fig2.jpg" /> Figura 2: Rappresentante dati da Conti cellule di Purkinje e strato molecolare Spessore Immunopatologia Assays. (A) I risultati rappresentativi del saggio conta delle cellule di Purkinje che mostrano un controllo del veicolo trattati transgenico cerebellare fessura primaria (in alto), veicoli trattati SCA1 cerebellare fessura primaria (al centro) e un succinico trattata con acido SCA1 cerebellare fessura primaria (in basso) macchiato per nuclei ATXN1-positivo (rosso) e di contrasto con DAPI (blu). Linee bianche rappresentano i 200 micron regioni di tessutodesignato per la conta delle cellule. Per questa particolare analisi, un topo transgenico di controllo sovra-esprimono un gene ATXN1 non patogeno sotto il controllo di un promotore Purkinje cell-specifico è stato utilizzato al posto di un mouse di tipo selvatico, perché le funzioni di controllo transgenici facilmente livelli rilevabili di nucleare Purkinje ATXN1 e il mouse di tipo selvatico non. Il mouse di controllo transgenico non visualizza un fenotipo atassia cerebellare o neurodegenerazione. (B) I risultati rappresentativi del saggio spessore dello strato molecolare che mostrano una fessura veicolo trattati tipo selvatico cerebellare primaria (in alto), veicoli trattati SCA1 cerebellare fessura primaria (al centro) e un SCA1 fessura succinico trattata con acido cerebellare primaria (in basso) colorate per calbindin , un marker di cellule di Purkinje (bianco). Due dei tre strati di cellule cerebellari possono essere visualizzati con calbindin. Lo strato di cellule di Purkinje centrale (composto da corpi cellulari Purkinje) è visibile lungo con lo strato più esterno molecolare (costituito da Purkinje cedendriti ll). Lo strato molecolare appare al centro della fessura primario a causa delle pieghe naturali del tessuto. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53758/53758fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/53758/53758fig3.jpg" /> Figura 3: Risultati Rappresentante della HPLC e la respirazione saggi. (A) Curva standard di concentrazioni note fino a 250 ppm di acido succinico diluito in tampone acetato e tramato contro l&#39;area sotto il picco HPLC misurata. L&#39;equazione della linea è stata utilizzata per calcolare le concentrazioni di acido succinico sconosciuti da campioni di tessuto trattati. (B) Rappresentante dose-risposta picchi acido succinico da tessuto cerebellare del mouse seguenti diversi tempi di trattamento (0, 1 o 5 settimane). Nelle condizionidescritto, acido succinico tipicamente eluito tra 10 e 12 min. (C) rappresentante la respirazione fuga da tessuto cerebellare di tipo selvatico del mouse veicolo-trattata. La linea blu rappresenta la variazione della concentrazione di ossigeno, la linea rossa tratteggiata rappresenta la variazione del tasso di respirazione e la linea rossa fissa raffigura una versione livellata della linea tratteggiata. D = aggiunta di digitonina, G / M = aggiunta di glutammato / malato, A = aggiunta di ADP, R = aggiunta di rotenone, S = aggiunta di acido succinico, AA = aggiunta di antimicina A e A / T = aggiunta di Asc / TMPD. Tutti i substrati sono stati aggiunti ai tempi rappresentati in figura e alle concentrazioni descritte nel protocollo (passo 9.5). <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53758/53758fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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Trattare topi SCA1 con composti solubili in acqua per potenziare in modo non specifico la funzione mitocondriale | Medicina | Video

Treating SCA1 Mice with Water-Soluble Compounds to Non-Specifically Boost Mitochondrial Function

We present a biochemical and behavioral protocol to evaluate the efficacy of mitochondria-targeted water-soluble compounds for the treatment of Spinocerebellar ataxia type 1 (SCA1) and other cerebellar neurodegenerative diseases.

Trattare Topi SCA1 con solubile in acqua composti non-specifico Boost mitocondriale Funzione

Mitochondrial dysfunction plays a significant role in the aging process and in neurodegenerative diseases including several hereditary spinocerebellar ...

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10.5K Views.  Skidmore College. We present a biochemical and behavioral protocol to evaluate the efficacy of mitochondria-targeted water-soluble compounds for the treatment of Spinocerebellar ataxia type 1 (SCA1) and other cerebellar neurodegenerative diseases. 

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Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of the panoply of paracrine factors that it secretes, the endothelium regulates the contractile and proliferative state of the underlying vascular smooth muscle, as well as the interaction of the vessel wall with circulating blood elements. Because of its central role in mediating vessel tone and growth, its position as gateway to circulating immune cells, and its local regulation of hemostasis and coagulation, the the properly functioning endothelium is the key to cardiovascular health. Conversely, the earliest disorder in most vascular diseases is endothelial dysfunction.
In the arterial circulation, the healthy endothelium generally exerts a vasodilator influence on the vascular smooth muscle. There are a number of methods to assess endothelial vasodilator function. The Endo-PAT 2000 is a new device that is used to assess endothelial vasodilator function in a rapid and non-invasive fashion. Unlike the commonly used technique of duplex ultra-sonography to assess flow-mediated vasodilation, it is totally non-operator-dependent, and the equipment is an order of magnitude less expensive. The device records endothelium-mediated changes in the digital pulse waveform known as the PAT ( peripheral Arterial Tone) signal, measured with a pair of novel modified plethysmographic probes situated on the finger index of each hand. Endothelium-mediated changes in the PAT signal are elicited by creating a downstream hyperemic response. Hyperemia is induced by occluding blood flow through the brachial artery for 5 minutes using an inflatable cuff on one hand. The response to reactive hyperemia is calculated automatically by the system. A PAT ratio is created using the post and pre occlusion values. These values are normalized to measurements from the contra-lateral arm, which serves as control for non-endothelial dependent systemic effects. Most notably, this normalization controls for fluctuations in sympathetic nerve outflow that may induce changes in peripheral arterial tone that are superimposed on the hyperemic response.
In this video we demonstrate how to use the Endo-PAT 2000 to perform a clinically relevant assessment of endothelial vasodilator function.

A noninvasive procedure to assess endothelial function is demonstrated using the Endo-PAT 2000.

Valutazione della funzione endoteliale vasodilatatore con l&#39;Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

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Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA approved in April 2011 for the treatment of patients 22 years or older with rGBM. The device delivers alternating electric fields and is programmed to ensure maximal tumor cell kill1.
Glioblastoma is the most common type of glioma and has an estimated incidence of approximately 10,000 new cases per year in the United States alone2. This tumor is particularly resistant to treatment and is uniformly fatal especially in the recurrent setting3-5. Prior to the approval of the TTF System, the only FDA approved treatment for rGBM was bevacizumab6. Bevacizumab is a humanized monoclonal antibody targeted against the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein that drives tumor angiogenesis7. By blocking the VEGF pathway, bevacizumab can result in a significant radiographic response (pseudoresponse), improve progression free survival and reduce corticosteroid requirements in rGBM patients8,9. Bevacizumab however failed to prolong overall survival in a recent phase III trial26. A pivotal phase III trial (EF-11) demonstrated comparable overall survival between physicians&#8217; choice chemotherapy and TTF Therapy but better quality of life were observed in the TTF arm10.
There is currently an unmet need to develop novel approaches designed to prolong overall survival and/or improve quality of life in this unfortunate patient population. One appealing approach would be to combine the two currently approved treatment modalities namely bevacizumab and TTF Therapy. These two treatments are currently approved as monotherapy11,12, but their combination has never been evaluated in a clinical trial. We have developed an approach for combining those two treatment modalities and treated 2 rGBM patients. Here we describe a detailed methodology outlining this novel treatment protocol and present representative data from one of the treated patients.

A novel methodology that is employed for the treatment of recurrent glioblastomas is described. This treatment approach employs the application of alternating electric tumor treating fields (TTFields), known as TTF Therapy in combination with bevacizumab, a targeted agent that is currently FDA approved as monotherapy.

Tumore Trattamento Terapia del campo in combinazione con bevacizumab per il trattamento del glioblastoma ricorrente

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including Parkinson's and Huntington's can disrupt it. People with Parkinson's disease, for example, tend to have increased saccadic latencies. Consequently, the quantitative measurement of saccadic eye movements has received considerable attention as a potential biomarker for neurodegenerative conditions. A lot more can be learned about the brain in both health and disease by observing what happens to eye movements when the function of specific brain areas is perturbed. Deep brain stimulation is a surgical intervention used for the management of a range of neurological conditions including Parkinson's disease, in which stimulating electrodes are placed in specific brain areas including several sites in the basal ganglia. Eye movement measurements can then be made with the stimulator systems both off and on and the results compared. With suitable experimental design, this approach can be used to study the pathophysiology of the disease being treated, the mechanism by which DBS exerts it beneficial effects, and even aspects of normal neurophysiology.

This paper describes the use of quantitative measurement of eye movements in conjunction with stimulation of focal areas of the deep brain in order to study physiology, pathophysiology, and the mechanisms of deep brain stimulation.

Utilizzando Saccadometry con stimolazione cerebrale profonda per studiare normali e patologiche funzione cerebrale

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Assessment of Respiratory Function in Conscious Mice by Double-chamber Plethysmography

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to non-invasively assess some features of the respiratory function in humans as well as in laboratory animals. The present article focuses on the application of the double-chamber plethysmography (DCP) in small animals. It provides background information on the methodology as well as a detailed step-by-step procedure to successfully assess respiratory function in conscious, spontaneously breathing animals in a non-invasive manner. The DCP can be used to monitor the respiratory function of multiple animals in parallel, as well as to identify changes induced by aerosolized substances over a chosen time period and in a repeated manner. Experiments on control and allergic mice are used herein to demonstrate the utility of the technique, explain the associated outcome parameters, as well as to discuss the related advantages and shortcomings. Overall, the DCP provides valid and theoretically sound readouts that can be trusted to evaluate the respiratory function of conscious small animals both at baseline and after challenges with aerosolized substances.

The objective of the present article is to provide a detailed description of the recommended procedures to evaluate respiratory function in conscious mice by double-chamber plethysmography.

Valutazione della funzione respiratoria in topi cosciente da doppia camera pletismografia

Air volume changes created by a conscious subject breathing spontaneously within a body box are at the basis of plethysmography, a technique used to ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

Valutazione non invasiva della funzione Dorsiflexor muscolare nei topi

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

Un metodo non invasivo per generare il modello di lesione cartilaginea intra-articolare indotta dal carico ciclico del ginocchio di ratto

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Determinazione della respirazione negli spermatozoi umani mediante repirometria ad alta risoluzione

High-Resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Human Spermatozoa

Semen quality is often studied by routine semen analysis, which is descriptive and often inconclusive. Male infertility is associated with altered sperm mitochondrial activity, so the measurement of sperm mitochondrial function is an indicator of sperm quality. High-resolution respirometry is a method of measuring the oxygen consumption of cells or tissues in a closed-chamber system. This technique can be implemented to measure respiration in human sperm and provides information about the quality and integrity of the sperm mitochondria. High-resolution respirometry allows the cells to move freely, which is an a priori advantage in the case of sperm. This technique can be applied with intact or permeabilized spermatozoa and allows for the study of intact sperm mitochondrial function and the activity of individual respiratory chain complexes. The high-resolution oxygraph instrument uses sensors to measure the oxygen concentration coupled with sensitive software to calculate the oxygen consumption. The data are used to calculate respiratory indices based on the oxygen consumption ratios. Consequently, the indices are the proportions of two oxygen consumption rates and are internally normalized to the cell number or protein mass. The respiratory indices are an indicator of sperm mitochondrial function and dysfunction.

Autore in primo piano: Far progredire la ricerca sull'infertilità maschile svelando il metabolismo degli spermatozoi e la funzione mitocondriale 

The analysis of sperm mitochondrial function by high-resolution respirometry permits the measurement of the oxygen consumption of freely moving spermatozoa in a closed-chamber system. The technique can be applied to measure respiration in human spermatozoa, which provides information on sperm mitochondrial characteristics and integrity.

Respirometria ad alta risoluzione per valutare la funzione mitocondriale negli spermatozoi umani

Semen quality is often studied by routine semen analysis, which is descriptive and often inconclusive. Male infertility is associated with altered sperm ...

Protocollo Tuina standardizzato per il modello di compressione DRG per ratti

Analgesic Effect of Tuina on Rat Models with Compression of the Dorsal Root Ganglion Pain

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar disc herniation, spinal canal stenosis, and intervertebral foramen stenosis. Although Tuina, a traditional Chinese manual therapy, has shown analgesic effects in clinical practice for the treatment of neuropathic pain, its underlying neurobiological mechanisms remain unclear. Animal models are essential for elucidating the basic principles of Tuina. In this study, we propose a standardized Tuina protocol for rats with compression of the dorsal root ganglion (DRG), which involves inducing DRG compression by inserting a stainless steel rod into the intervertebral foramen, performing Tuina manipulation with specific parameters of location, intensity, and frequency in a controlled environment, and assessing the behavioral and histopathological outcomes of Tuina treatment. This article also discusses the potential clinical implications and limitations of the study and suggests directions for future research on Tuina.

Autore in primo piano: Effetto analgesico di Tuina su modelli di ratto con compressione del dolore al ganglio della radice dorsale  

This article presents a manipulation for treating chronic compression of the dorsal root ganglion in rats using Tuina therapy, along with a method for evaluating its effectiveness based on pain behavior and histopathological results.

Effetto analgesico di Tuina su modelli di ratto con compressione del dolore al ganglio della radice dorsale

Neuropathic pain is a prevalent condition that affects 6.9%-10% of the population and results from nerve damage due to various etiologies, such as lumbar ...