The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

Le varie procedure sperimentali e l&#39;eutanasia umana sono approvati dal comitato etico istituzioni ospitanti e dai competenti organismi di regolamentazione. L&#39;eutanasia è normalmente realizzato utilizzando CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale. 1. Dispositivo <ol><li> Macchina la porzione principale della base del dispositivo di un blocco solido di alta densità resina acetalica, come descritto in questo manoscritto. A ciascuna estremità creare 3 mm strisce alti elevati, e la macchina parte da questi 2,5 mm boschetti per prendere le aste (vedi Figura 2 e Figura 3). </li><li> Fai barre di acciaio inossidabile di diametro 2,4 millimetri con estremità arrotondate-off. NOTA: Il telaio principale del coperchio è stata lavorata su piastra duralluminio. Un numero limitato di dispositivi finiti sono disponibili presso Dr. Goodlad. </li></ol> 2. Uso del dispositivo <ol><li> Sezionare l&#39;intestino tenue e del colon dalla cavità addominale con le forbicie le dita guantate. Rimuovere il mesentere tenendola con pinze curve e delicatamente tirando via dall&#39;intestino. </li><li> Sciacquare l&#39;intestino con fosfato freddo salina tamponata (PBS, pH 7,4) con un puntale tipo Gilson, che era stato abbattuto alla sua estremità più larga in modo che possa andare bene su un 10 o 20 ml luer siringa di plastica. </li><li> Disporre il piccolo intestino (SB) su un foglio di carta assorbente e dividere in tre parti uguali di lunghezza (prossimale, medio e distale - SB1, SB2 e SB3) con le forbici. Rimuovere il cieco e il layout del colon. </li><li> Fai diverse molto piccoli tagli nelle segmenti intestinali con le forbici per consentire al fluido di fuggire e mettere un foglio di carta assorbente sopra l&#39;intestino e delicatamente eseguire un dito sopra i preparativi per spremere il liquido e asciugare. </li><li> Sollevare le sezioni e inserire le barre di acciaio inossidabile che in precedenza erano bagnati immergendo in un bicchiere di tampone fosfato. NOTA: L&#39;intestino può essereconvertito se lo si desidera (rovesciato). </li><li> Etichettare un pezzo di carta o un filtro di carta tagliata a misura per adattarsi alla base del dispositivo. Pencil è migliore, in quanto non è influenzato da praticamente tutte le soluzioni. Data Autopsia, codice sperimentale ed il numero di identificazione degli animali sono suggeriti. </li><li> Posizionare la carta o carta da filtro nella base del dispositivo. Inserire le aste e gli intestini nelle fessure alla base del dispositivo. Assicurarsi che l&#39;estremità prossimale dei segmenti è posizionato in maniera standard. Le estremità prossimali devono essere vicino le etichette di carta. </li><li> Posizionare la parte superiore del dispositivo sopra la base. Utilizzare le barre angolari per guidare una lama di bisturi per tagliare longitudinalmente sezioni. NOTA: Aiuta se il tessuto è delicatamente e accuratamente tenuto con un dito per garantire che non si muove con il coltello. </li><li> Rimuovere la parte superiore del dispositivo. Rimuovere con cura la carta e tessuti di filtro (ancora sulla loro aste). NOTA: Un pezzo di carta rigida posto sotto il filcarta ter aiuterà sollevamento. </li><li> Leggermente umido (con un dito guantato immerso in PBS) i segmenti. Arrotolare la verga, lato a lato per aprire l&#39;intestino e diffonderla piatta. Il tessuto viene quindi aderire alla carta da filtro. </li><li> Esaminare visivamente i preparativi per eventuali lesioni macroscopiche. </li><li> Trasferire il tessuto aderito alla carta da filtro per un bagno poco profondo (o casella di sandwich) contenente fissativo. NOTA: Dopo il tessuto aderisce alla carta da filtro o di carta rimarrà saldamente collegato. Una vasta gamma di fissativi può essere utilizzata per mantenere la preparazione. Si raccomanda che il liquido di Carnoy dovrebbe essere utilizzato per lo studio delle proliferazioni cellulari intestinali 6, che è la fissazione ideale per i migliori metodi di proliferazione cellulare; tuttavia formalina o molti altri fissativi possono essere utilizzati anche se sono necessari altri endpoint. </li><li> Dopo la fissazione (solitamente 3 ore), trasferire i preparativi in ​​etanolo al 70%. I campioni possono essere conservati fino al momento. Le preparazioni cun essere studiati en face e / o utilizzati per la preparazione di campioni istologici per H &amp; E o altre tecniche di colorazione istologiche, immunoistochimica e / o ibridazione in situ. NOTA: fissazione prolungata può ridurre la reattività immunoistochimica e / o ibridazione in situ reattività. Scatole panino polipropilene sono ideali per la memorizzazione di un gran numero di preparazioni. </li><li> Se necessario i tessuti fissati dai vari segmenti intestinali può essere fatto in &#39;rotoli svizzera e colorate con l&#39;intera gamma di metodi istologici 6 compresi quelli sopra descritti. Per fare un &#39;Swiss roll&#39; i segmenti intestinali vengono rimossi dalla carta da filtro, arrotolata intorno ad un bastoncino da cocktail o uno stuzzicadenti, fissato con un perno entomologico e trattati a cera incorporamento 6. </li><li> Se necessario, macchia il tessuto all&#39;ingrosso con blu di metilene di visualizzare aberranti cripta foci 7. </li><li> Punteggio preparativi fissatitempo libero. </li></ol>

<ol>
	<li>Goodlad, R. A., Alison, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Cancer+Handbook."> Cancer Handbook.</a> , 243-262 (2007).</li><li>Ward, J. M., Treuting, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+intestinal+epithelial+carcinogenesis:+pathology+and+preclinical+models.">Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models.</a> Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).</li><li>Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Training+mouse+pathologists:+ten+years+of+workshops+on+the+Pathology+of+Mouse+Models+of+Human+Disease.">Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease.</a> Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).</li><li>Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fat+influences+on+polyp+phenotype+in+multiple+intestinal+neoplasia+mice.">Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice.</a> Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).</li><li>Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+device+to+rapidly+prepare+whole+mounts+of+murine+intestine.">A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine.</a> Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).</li><li>Alferez, D., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+best+measure+cell+proliferation+in+samples+from+the+intestine.">To best measure cell proliferation in samples from the intestine.</a> Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).</li><li>Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+aberrant+crypt+foci+and+colonic+carcinoma+in+dimethylhydrazine-treated+rats+varies+in+a+site-specific+manner+and+depends+on+tumor+histology.">The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology.</a> Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).</li><li>Park, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+epidermal+growth+factor+and+dimethylhydrazine+on+crypt+size,+cell+proliferation,+and+crypt+fission+in+the+rat+colon.+Cell+proliferation+and+crypt+fission+are+controlled+independently.">Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently.</a> Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).</li><li>Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mucin-depleted+foci+(MDF)+in+the+colon+of+rats+treated+with+azoxymethane+(AOM)+are+useful+biomarkers+for+colon+carcinogenesis.">Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis.</a> Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).</li><li>Ruehl-Fehlert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1.">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li><li>Goodlad, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+vascular+endothelial+growth+factor+receptor-2+signaling+reduces+tumor+burden+in+the+ApcMin/++mouse+model+of+early+intestinal+cancer.">Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer.</a> Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).</li><li>Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistant+carbohydrates+stimulate+cell+proliferation+and+crypt+fission+in+wild-type+mice+and+in+the+Apc(Min/+)+mouse+model+of+intestinal+cancer,+association+with+enhanced+polyp+development.">Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development.</a> Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Il dispositivo accelera notevolmente il processo in modo che due operatori possono autopsia completamente un mouse all&#39;interno 6 min. Ciò includerà un controllo visivo per lesioni macroscopiche evidenti e la pesatura e alla fissazione degli organi principali. Essa consentirà inoltre agli operatori di lavare, asciugare e pesare lo stomaco, intestino cieco, intestino tenue e del colon e preparare l&#39;intero monti. Il tessuto appiattita può essere fissato molto rapidamente e così evitare artefatti degradazione. Uno dei principali vantaggi del dispositivo (tranne velocità) è che il dispositivo può generare la produzione di preparazioni di qualità migliore, che poi rende successiva analisi e quantificazione molto più facile. En face punteggio è ideale per quantificare le lesioni cancerogene e pre-cancerogene macroscopici (come il numero di polipi, il diametro e il volume degli oneri). La anche la natura dei preparativi li rende ideali per la successiva rotazione in &#39;panini svizzeri&#39; e sezionamento in modo che l&#39;analisi istologica di &#39;micro pnumero olyp &#39;può anche essere quantificato. Aberrant focolai cripta e altre lesioni pre-neoplastiche possono anche essere visualizzati utilizzando l&#39;intera monti. Cambiamenti infiammatori in diversi modelli di colite possono osservare anche utilizzando l&#39;intera monti. Inoltre la posizione quantitativa e spaziale di questi eventi in diverse regioni del budello può essere determinato. Limitazione della tecnica è che l&#39;uso del dispositivo richiede una certa destrezza, soprattutto nel punteggio del tessuto con il bisturi. La maggior parte degli operatori possono apprendere la tecnica in breve tempo, dopo pochi minuti di pratica. Le preparazioni prendere solo pochi minuti, ma se è necessaria la conservazione istantanea piccoli campioni possono essere presi per la fissazione o congelati e poi il resto del tessuto preparato come al solito.

Il mouse e il topo geneticamente modificato 1-3 sono un modello prezioso per lo studio di diverse patologie soprattutto tumorali e il suo rapporto infiammazione nel tratto gastrointestinale. Questo spesso richiede la preparazione di supporti interi del piccolo intestino e / o del colon. La preparazione di supporti integrali può essere fatto con un paio di forbici precisione di offset ma può richiedere circa 20 minuti per topo 4. Questo non è molto pratico per studi comparativi, che richiedono una notevole quantità di topi (dire 10 per gruppo in analisi statistica). Inoltre, il tempo necessario aumenta il rischio di degradazione dei tessuti. Un tentativo di alleviare questo problema ha portato alla sperimentazione di vari aiuti di preparazione taglio. Il primo era basato su una serie di piastre metalliche, con alberi di taglio, ma i piatti oscurata il tessuto e il taglio era così difficile da controllare. Un conventional matita sei facce finalmente fornito l&#39;ispirazione per il dispositivo di taglio, come abbiamo potuto poi vedere come una forma di mezza matita sarebbe una buona guida per un bisturi (Figura 1). Ciò ha provocato un disegno per un telaio con quattro guide di taglio 5. L&#39;efficacia di questo dispositivo era drammatica come le preparazioni in Figura 4 mostrano la differenza tra la preparazione e la preparazione forbice dispositivo. Le cime dei dispositivi originali è stato costruito da diversi pezzi di metallo, ma quelli successivi, e il modello attuale è stata lavorata da un solido pezzo di duralluminio. La base è stata lavorata su qualità resina ad alta densità. Il dispositivo ha dimostrato di essere di grande utilità per la preparazione di supporti interi di topo dell&#39;intestino in quanto accelera notevolmente e migliora la qualità e la consistenza delle preparazioni, che hanno una vasta gamma di applicazioni.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Delrin</td>
			<td>Ryan Plastics, Earls Barton, UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>High-density acetal resin similar material would suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Duralumin plate</td>
			<td>Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Finished device(s) ready for use</td>
			<td>Contact Dr Goodlad&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Contact&#160; r.goodlad@imperial.ac.uk&#160; for supply details</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple device to rapidly prepare whole mounts of the mouse intestine

Preparazione supporti interi dell&#39;intestino tenue e del colon del mouse per la successiva analisi o la quantificazione può essere lunga e difficile. Descriviamo l&#39;uso di un dispositivo semplice da tagliare e intestini &#39;roll&#39; del mouse per preparare rapidamente intere preparazioni montaggio di qualità superiore ed uniforme a quello che può essere ottenuto manualmente. Il dispositivo comprende una base che contiene 4 barre in acciaio inox e una parte superiore, che funge da guida per il taglio. Le aste sono inseriti nel lume dell&#39;intestino tenue [diviso in terzi] e il colon. Le aste ed i campioni vengono poi poste su un pezzo di carta da filtro o carta nelle scanalature di tenuta nella base del dispositivo. La parte superiore del dispositivo viene quindi posizionato e funge da guida per il taglio. Le due sezioni ad angolo al centro del pezzo superiore sono utilizzati per guidare un coltello o bisturi e tagliare gli intestini longitudinalmente sulla parte superiore delle aste. Una volta che le sezioni intestinali sono stati tagliati, la parte superiore viene rimosso e la carta, tissue e aste delicatamente rimosso dal dispositivo e posto in panchina. Le aste sono poi delicatamente arrotolate lateralmente per appiattire e incollare i segmenti intestinali sul pezzo di carta da filtro sottostante o carta. La preparazione finale può essere esaminato o fisso e memorizzati per una successiva analisi. I preparativi sono preziosi per lo studio dei cambiamenti intestinali nei modelli normali o geneticamente modificati mouse. I preparativi sono stati utilizzati per lo studio e la quantificazione degli effetti di infiammazione (colite), danni, lesioni pre-cancerose (aberranti crypt foci (ACFS) e Mucin impoverito focolai (MDF)) e polipi o tumori.

Polipi sono facili da identificare sotto uno stereomicroscopio con fonte luminosa all&#39;altra illuminare il tessuto (Figura 4). E &#39;utile per segnare la carta con segni di matita quando un polipo si osserva in modo che punteggio può essere discusso più tardi e diversi operatori in grado di raggiungere un accordo. Il tessuto può anche essere massa macchiato [con blu di metilene] per identificare aberranti foci 8 o mucina foci impoverito (MDF) 9 dall&#39;illuminazione dall&#39;alto o dall&#39;illuminazione trans (figura 5). La posizione delle lesioni può essere ottenuto su una base 8 posizionale. Per fare questo si deve prima di preparare una griglia di 10 quadrato in un pacchetto di disegno computer, copia diverse volte e poi allungare i più griglie di diverse dimensioni note e stampare su un foglio di acetato (vedere Figura 6) [Intaglio è un utile e programma relativamente semplice per fare questo]. Si può quindi trovare una griglia che si adatta al l<html> ength della sezione e usarlo per segnare gli eventi di interesse. Una volta segnato, parte o tutto il tessuto può essere rimosso per ulteriori analisi o l&#39;intero sezioni può essere arrotolato in un &#39;Swiss roll&#39; per sezionamento istologico. Anche se questa procedura è stata descritta come tecnicamente impegnativo 10 la natura pianeggiante e anche dei preparativi rende questa procedura molto più semplice. La preparazione macro può essere utilizzata per segnare &#39;polipi macro&#39; ei rulli svizzeri utilizzati per segnare &#39;micro polipi&#39; 11,12 (figura 7). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig1.jpg" /> Figura 1. Come l&#39;ispirazione del dispositivo proveniva da una matita. Discussioni nell&#39;unità piombo Servizio biologica per l&#39;idea di utilizzare una forma di mezza matita per fungere da guida per il taglio.53042 / 53042fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig2.jpg" /> Figura 2. Foto del dispositivo originale. Il dispositivo originale è stato costruito da diversi pezzi di metallo, preparati a mano. (A) Il dispositivo assemblato. (B) La parte superiore del dispositivo è stato rimosso per mostrare le aste in posizione. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53042/53042fig2large.jpg" target="_blank">Favore clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig3.jpg" /> Figura 3. Foto di dispositivo ridisegnato. (A) La struttura principale del coperchio viene lavorato su piastra duralluminio. (B) La base (visto in nero)è costituito da un blocco solido di alta densità resina acetalica, con 4 aste rimovibili seduto in un canale. Viene mostrato un filtro di carta (bianco) posto sulla parte superiore della base (nero) (C) La vista finale del dispositivo:. Il coperchio (A) è posto sulla parte superiore della vasca (B). Sono mostrati Dimensioni in centimetri. Le aste sono 2,4 mm di diametro con estremità arrotondate-off. Vedere di riferimento 5 per maggiori dettagli. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53042/53042fig3large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig4.jpg" /> Figura 4. Preparazione Gut realizzato con compensato forbice e utilizzando il dispositivo. (A) L&#39;intestino preparati utilizzando forbici offset. (B) l&#39;intestino preparati con la taglierina budello mostra la stessa larghezza per tutta l&#39;intestino e<html> la migliore presentazione del tessuto, che rende il conteggio, e l&#39;osservazione di polipi molto più facile. Modificato da figura 3 nella proliferazione cellulare 6. Barra di scala con l&#39;unità è indicata. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53042/53042fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig5.jpg" /> Figura 5. foci cripta aberranti visto in tutta monte di colon colorato con blu di metilene. L&#39;intero montaggio colon è stato sfuso macchiato di blu di metilene per identificare i focolai aberranti cripta, indicato dalle frecce. Barra di scala con l&#39;unità è indicata. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53042/53042fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <html> file / ftp_upload / 53042 / 53042fig6.jpg &quot;/&gt; Figura 6. Modello per fogli di acetato per il punteggio posizionale. Varie dimensioni di griglia di 10 caselle vengono stampati su fogli di acetato. L&#39;intestino taglio è posto sulla griglia che si adatta alla lunghezza della sezione, e gli eventi di interesse sono valutate come numero di conteggio di lesioni in ogni quadrato. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/53042/53042fig6large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/53042/53042fig7.jpg" /> Figura 7. Swiss roll di un tenue del mouse H &amp; E macchiato. Il piccolo intestino tenue rullo svizzero mostrata è da un Apc (min + /) del mouse, un pozzo caratterizzato dal modello vivo di tumore intestinale genesi. Le frecce indicano adenomi rappresentativi. È mostrato Barra di scala con l&#39;unità.42 / 53042fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.

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A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine

The use of a simple device to cut and &#8216;roll&#8217; mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Un dispositivo semplice da preparare rapidamente intere Monti della Intestino mouse

Preparing whole mounts of the mouse small intestine and colon for subsequent analysis or quantification can be time consuming and difficult. We describe ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

19.5K Views.  National Institutes of Health. The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

Misurazione accurata e semplice della citochina pro-infiammatoria IL-1β utilizzando un intero saggio stimolazione del sangue

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Ricerca

Medicina

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current estimates put the prevalence of amblyopia at approximately 1-3%1-3, the majority of cases being monocular2. Amblyopia is most frequently caused by ocular misalignment (strabismus), blur induced by unequal refractive error (anisometropia), and in some cases by form deprivation.
Although amblyopia is initially caused by abnormal visual input in infancy, once established, the visual deficit often remains when normal visual input has been restored using surgery and/or refractive correction. This is because amblyopia is the result of abnormal visual cortex development rather than a problem with the amblyopic eye itself4,5 . Amblyopia is characterized by both monocular and binocular deficits6,7 which include impaired visual acuity and poor or absent stereopsis respectively. The visual dysfunction in amblyopia is often associated with a strong suppression of the inputs from the amblyopic eye under binocular viewing conditions8. Recent work has indicated that suppression may play a central role in both the monocular and binocular deficits associated with amblyopia9,10 .
Current clinical tests for suppression tend to verify the presence or absence of suppression rather than giving a quantitative measurement of the degree of suppression. Here we describe a technique for measuring amblyopic suppression with a compact, portable device11,12 . The device consists of a laptop computer connected to a pair of virtual reality goggles. The novelty of the technique lies in the way we present visual stimuli to measure suppression. Stimuli are shown to the amblyopic eye at high contrast while the contrast of the stimuli shown to the non-amblyopic eye are varied. Patients perform a simple signal/noise task that allows for a precise measurement of the strength of excitatory binocular interactions. The contrast offset at which neither eye has a performance advantage is a measure of the "balance point" and is a direct measure of suppression. This technique has been validated psychophysically both in control13,14 and patient6,9,11 populations.
In addition to measuring suppression this technique also forms the basis of a novel form of treatment to decrease suppression over time and improve binocular and often monocular function in adult patients with amblyopia12,15,16 . This new treatment approach can be deployed either on the goggle system described above or on a specially modified iPod touch device15.

Amblyopia is a developmental disorder of the visual cortex that is often accompanied by strong suppression of one eye. We present a new technique for measuring and treating interocular suppression in patients with amblyopia that can be deployed using virtual reality goggles or a portable iPod Touch device.

La misurazione e trattamento di soppressione in Ambliopia

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

A simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or expensive animal. One of the reasons that this is not done more routinely is that it is relatively difficult, despite there being several published studies that describe ways to achieve it. In this paper we demonstrate a procedure that eliminates one of the major hurdles associated with this intubation, that of visualizing the trachea during the entire time of intubation. The approach uses a 0.5 mm fiberoptic light source that serves as an introducer to direct the intubation cannula into the mouse trachea. We show that it is possible to use this procedure to measure lung mechanics in individual mice over a time course of at least several weeks. The technique can be set up with relatively little expense and expertise, and it can be routinely accomplished with relatively little training. This should make it possible for any laboratory to routinely carry out this intubation, thereby allowing longitudinal studies in individual mice, thereby minimizing the number of mice needed and increasing the statistical power by using each mouse as its own control.

This paper describes a striaghforward and efficient method of intubating mice for pulmonary function measurements or pulmonary instillation, that allows the mice to recover and be studied at later times. The procedure involves an inexpensive fiberoptic light source that directly illuminates the trachea.

Un metodo semplice di intubazione mouse polmone

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

Isolare e utilizzo Sezioni di mesenterica bovina arteria e vena come un saggio biologico per verificare Vasoactivity nel piccolo intestino

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

A Simple Mechanical Procedure to Create Limbal Stem Cell Deficiency in Mouse

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with conjunctiva. Patients suffer from recurrent corneal defects, pain, inflammation, and loss of vision.
Previously, a murine model of LSCD was described and compared to two other models. The goal was to produce a consistent mouse model of LSCD that both mimics the phenotype in humans and lasts long enough to make it possible to study the disease pathophysiology and to evaluate new treatments. Here, the technique is described in more detail.
A motorized tool with a rotating burr has been designed to remove the rust rings from the corneal surface or to smooth the pterygium bed in patients. It is a suitable device to create the desired LSCD model. It is a readily available, easy-to-use tool with a fine tip that makes it appropriate for working on small eyes, as in mice. Its application prevents unnecessary trauma to the eye and it does not result in unwanted injuries, as often is the case with chemical injury models. As opposed to a blunt scraper, it removes the epithelium with the basement membrane. In this protocol, the limbal area was abraded two times, and then the whole corneal epithelium was shaved from limbus to limbus. To avoid stroma injury, care was taken not to brush the corneal surface once the epithelium was already removed.

The following article provides an easy, reproducible technique to effectively create a sustainable mouse model of limbal stem cell deficiency (LSCD). This animal model is useful in testing and comparing the efficacy of treatments for limbal stem cell diseases.

Una semplice procedura meccanica per creare Limbal carenza Stem Cell in mouse

Limbal stem cell deficiency (LSCD) is a state of malfunction or loss of limbal epithelial stem cells, after which the corneal epithelium is replaced with ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have immunosuppressive potential and have been shown to suppress inflammation in mouse models of intestinal inflammation, even though the route of administration can limit their homing and effectiveness 1,3,4,5. Local application of MSCs to colonic injury models has shown greater efficacy at ameliorating inflammation in the colon. However, there is paucity of data on techniques to enhance the localization of human bone marrow-derived MSCs (hMSCs) to the small intestine, the site of inflammation in the SAMP-1/YitFc (SAMP) model of experimental Crohn&#39;s disease. This work describes a novel technique for the ultrasound-guided intracardiac injection of hMSCs in SAMP mice, a well-characterized spontaneous model of chronic intestinal inflammation. Sex- and age-matched, inflammation-free AKR/J (AKR) mice were used as controls. To analyze the biodistribution and the localization, hMSCs were transduced with a lentivirus containing a triple reporter. The triple reporter consisted of firefly luciferase (fl), for bioluminescent imaging; monomeric red fluorescent protein (mrfp), for cell sorting; and truncated herpes simplex virus thymidine kinase (ttk), for positron emission tomography (PET) imaging. The results of this study show that 24 h after the intracardiac administration, hMSCs localize in the small intestine of SAMP mice as opposed to inflammation-free AKR mice. This novel, ultrasound-guided injection of hMSCs in the left ventricle of SAMP mice ensures a high success rate of cell delivery, allowing for the rapid recovery of mice with minimal morbidity and mortality. This technique could be a useful method for the enhanced localization of MSCs in other models of small-intestinal inflammation, such as TNF&#916;RE6. Future studies will determine if the increased localization of hMSCs by intra-arterial delivery can lead to increased therapeutic efficacy.

Murine studies in models of colonic inflammation have demonstrated that a small percentage (1 - 5%) of mesenchymal stem cells (MSC) injected intravenously or intraperitoneally home to the inflamed colon1,2. This study shows that ultrasound-guided intracardiac injections of MSCs result in increased localization to the intestine.

Ultrasuono-guida di iniezione intracardiaca di cellule staminali mesenchimali umane per aumentare Homing all'intestino per l'utilizzo in modelli murini di malattie intestinali infiammatorie sperimentali

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

Overaccumulation ileectomy-indotta della Bile nell'intestino del Mouse

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Meccanismi di secrezione dell'ormone intestinale utilizzando l'isolato irrorati intestino tenue del ratto

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

A Modified Simple Method for Induction of Myocardial Infarction in Mice

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI remodeling and evaluation of novel therapeutics. Different methods (e.g., isoproterenol treatment, cryoinjury, coronary artery ligation, etc.) have been used to induce MI. Compared with isoproterenol treatment and cryoinjury, coronary artery ligation may better reflect the ischemic response and chronic remodeling after MI. However, traditional methods for coronary ligation in mice are technically challenging. The current study describes a simple and efficient process for induction of MI in mice with readily available materials. The mouse chest skin was cut open under stable anesthesia. The heart was immediately externalized through the intercostal space after blunt separation of the pectoralis major and pectoralis minor. The left anterior descending branch (LAD) was ligated with a 6-0 suture 3 mm from its origin. Following LAD ligation, staining with 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) indicated successful induction of MI and temporal changes of post-MI scar size. Meanwhile, survival analysis results showed overt mortality within 7 days after MI, mainly due to cardiac rupture. Moreover, post-MI echocardiographic assessment demonstrated successful induction of contractile dysfunction and ventricular remodeling. Once mastered, an MI model can be established in mice within 2-3 min with readily available materials.

Under adequate anesthesia, the mouse heart was externalized through the intercostal space, and myocardial infarction was successfully induced by ligating the left anterior descending artery (LAD) using materials readily available in most laboratories.

Un metodo semplice modificato per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi

Myocardial infarction (MI) represents one of the leading causes of death. MI models are widely used for investigating the pathomechanisms of post-MI ...

Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images from which the retinal thickness can be calculated. Although OCT is widely used in clinical practice, its application in basic research is not as prevalent, especially in small animals such as mice. Because of the small size of their eyeballs, it is challenging to conduct fundus imaging examinations in mice. Therefore, a specialized retinal imaging system is required to accommodate OCT imaging on small animals. This article demonstrates a small-animal-specific system for OCT examination procedures and a detailed method for image analysis. The results of retinal OCT examination of very-low-density lipoprotein receptor (Vldlr) knockout mice and C57BL/6J mice are presented. The OCT images of C57BL/6J mice showed retinal layers, while those of Vldlr knockout mice showed subretinal neovascularization and retinal thinning. In summary, OCT examination could facilitate the noninvasive detection and measurement of retinopathy in mouse models.

Here, we describe an in vivo imaging technique using optical coherence tomography to facilitate the diagnosis and quantitative measurement of retinopathy in mice.

Applicazione della tomografia a coerenza ottica a un modello murino di retinopatia

Optical coherence tomography (OCT) offers a noninvasive method for the diagnosis of retinopathy. The OCT machine can capture retinal crosssectional images ...