שימוש בבדיקת הזזה תרמית לבדיקת קשירת מצע לסלנופרוטאין O

אנו שואפים לחקור את הפעילות הביוכימית של חלבונים בעלי תפקידים לא ידועים. קשירת קו-פקטור חיונית לא רק לפעילותם של חלבונים מסוימים, אלא גם עשויה לשנות את יציבותם התרמית. אחד היישומים המעשיים של תופעה זו טמון בניצול השינוי ביציבות התרמית כפי שהיא נמדדת על ידי טמפרטורת ההתכה של החלבון כדי לנתח את קשירת הליגנד.

בדיקת הזזה תרמית היא כלי רב-תכליתי לחקר אינטראקציות חלבונים עם גורמים משלימים או תרופות פוטנציאליים, ולזיהוי תנאי ייצוב לקריסטלוגרפיה. חלק מיתרונותיו על פני שיטות סינון אחרות הם ההתקנה הפשוטה יחסית שלו והתפוקה הגבוהה שלו עם 96 או 384 לוחות באר. Selenoprotein O, או SelO, הוא פסאודוקינאז שמור אבולוציונית המעביר אדנוזין מונופוספט מ- ATP למצעים חלבוניים בשינוי שלאחר התרגום המכונה AMPylation.

בפרוטוקול זה, אנו משתמשים ב-TSA כדי לנתח נוקלאוטיד וקשירת מתכות ל-SelO.