בידוד, תרבית ואפיון תאי גזע במוך השן משיני אדם נשירים וקבועים

התחל על ידי אבטחת השן האנושית שנעקרה במקומה באמצעות מלקחיים דנטליים. לאחר מכן חתכו את השן באמצעות דיסק יהלום המחובר לידית שיניים ולנוזל קירור מים. באמצעות מחפר שיניים, להסיר את רקמת מוך השן מן השן.

לאחר מכן, השתמש בלהב כירורגי סטרילי כדי לטחון בזהירות את רקמת מוך השן לשברים קטנים. לאחר מכן הניחו את השברים האלה במטחנת רקמות קטנה עם PBS כדי ליצור תערובת הומוגנית. מעבירים את שברי הרקמה הטחונים לצינור של 15 מיליליטר ומעכלים אותם באמצעות תערובת של קולגן מסוג אחד ומפזרים.

דוגרים על הרקמה בתערובת האנזימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. לאחר הדגירה יש לנטרל את האנזימים. לאחר מכן, להעביר את הרקמה מעוכל צינור 15 מיליליטר לסובב ב 300 גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן יש להשליך בזהירות את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את הגלולה ב-DMEM טרי, בתוספת 10% עד 20% FBS. עבור תרבית תאים, בזהירות להעביר את תרחיף התא לצלוחית תרבית 25 סנטימטרים רבועים. לדגור על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו-חמצני.

לאחר יומיים-שלושה, באמצעות פיפטה סרולוגית סטרילית, שואפים בזהירות את המדיום ומחליפים אותו בתווך טרי. לאחר מכן, לאפיון DPSCs, הפעל את ציטומטר הזרימה ואשר את אופי תאי הגזע המזנכימליים של התאים המבודדים. ההתמיינות המוצלחת של DPSCs לאוסטאובלסטים, אדיפוציטים וכונדרוציטים מאמתת את האופי הרב-עוצמתי של DPSCs.

זמן ההכפלה של DPSCs היה עקבי עם זה שדווח עבור תאי גזע מזנכימליים, מה שמרמז על אוכלוסיית תאים בריאה ומתרבה. ניתוח ציטומטריית הזרימה הראה כי רוב ה- DPSCs היו חיוביים עבור CD-90, CD-73 ו- CD-105, ואישרו את זהותם כתאי גזע מזנכימליים. יתר על כן, פחות מ -2% מהתאים היו חיוביים ל- CD-34, CD-45 ו- HLADR, מה שמאשר את היעדר זיהום משמעותי בתאי המטופויאט או אנדותל.