הערכת אולטרסאונד לא פולשנית של התקדמות סרטן רירית הרחם במחיקה מכוונת Pax8 של מדכאי הגידול Arid1a ו - Pten בעכברים

מחקר זה מראה כי אולטרסאונד מונחה ידני מתאים היטב למעקב אחר התפתחות פתולוגיה של הרחם במודל עכבר מושרה של סרטן רירית הרחם. הדמיית אולטרסאונד אינה פולשנית ולכן מאפשרת מחקרי אורך של עכברים בודדים על פני ימים ושבועות. זה מאפשר ללכוד וריאציות אינדיבידואליות ובסופו של דבר להשתמש בפחות בעלי חיים למחקר.

שיטה זו יכולה להיות מיושמת בקלות כדי לפקח על שינויים פתולוגיים ומודלים שיקוף אחרים, כולל אלה עבור neoplasia ומחלות כרוניות של השתן ומערכת העיכול. התחל להגדיר את מכשיר האולטרסאונד להדמיית הרחם או השחלה על ידי בחירת מתמר או בדיקה עם טווח של 32 עד 56 מגה-הרץ. עבור אל יישומים הכרטיסייה ממסך הבית ובחר עכבר מצב בטן קטנה.

לאחר מכן לחץ על סריקה כדי לחזור למסך הבית והמתן להצגת תמונה חיה. לאחר מכן, בחר מצב B מהאפשרויות בסרגל הכלים השמאלי לפני לחיצה על באפשרות פקדים נוספים כדי להציג כלים נוספים לעידון תמונה, כגון רווח ועומק תמונה או כדי להתאים את הגדרות רכישת הקליפ, כגון מספר המסגרות לשנייה. לאחר בחירת הגדרות התמונה, חזור למסך הבית על ידי לחיצה על מצב B.

מניחים מזרק של שלושה עד 10 מיליליטר מלא בתמיסת נוזל איזוטוני סטרילי בין כרית חימום לפד סופג למשך מספר דקות כדי לחמם אותו ל 35 עד 40 מעלות צלזיוס. אם למכונה אין מחמם, הניחו בקבוק ג'ל אולטרסאונד על כרית החימום. כדי להזריק מיליליטר עד שני מיליליטר של תמיסה לתוך חלל הצפק של עכבר, לאבטח את העכבר על ידי קשקוש ביד אחת, חושף את הוונטרום.

לאחר מכן החזק את העכבר בזווית של כ-20 מעלות כשהאף מופנה לרצפה. הכנס מחט מזרק שחפת 25 מד דרך העור ודופן הבטן של הרביע הימני הקאודלי של הבטן. כדי למנוע הזרקה לתוך כלי הדם או מערכת העיכול, למשוך בחזרה על הבוכנה מזרק עם לחץ מינימלי לחפש דם.

מקם את העכבר בשכיבה גחונית על כרית הספיגה מעל כרית חימום לפני הנחת חרוט אף מכרסם בבטחה על אפו ולוע העכבר. הניחו כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד שחומם מראש על עמוד השדרה משני צדי העכבר המורדם בין הצלע האחרונה לאגן. שים כמות קטנה של ג'ל על הבדיקה אולטרסאונד.

לאחר מכן, מקם את הבדיקה במקביל לחוליות עם החלק הקדמי של הבדיקה בצד הגולגולת. עם עכבר בשכיבה גחון, לסרוק לאט את האזור עבור ציון דרך הכליות. כאשר הכליה במבט, משוך את הגשושית כדי למצוא את השחלה, שהיא אליפסה מעט היפראקואית למבנה עגול בתוך כרית שומן שחלות היפראקואית מאוד, הגובלת גולגולתית-גחון על ידי הכליה וגבית-לטרלית על ידי דופן הבטן הגבית.

שפר את ניגודיות התמונה על-ידי התאמת עוצמת האות באמצעות המחוון בתחתית מסך הבקרה. כדי לשפר את ההדמיה של הכליה, להפעיל לחץ על הבטן contra-lateral באמצעות אצבע. שנו את הלחץ והזווית ממקביל לעמוד השדרה לכ-20 מעלות גחון.

ברגע שאיבר העניין נמצא בתצוגה, צלם סרטון על ידי לחיצה על שמור קליפ או התחל הקלטה. לאחר שתסיים, לחץ על הפסק הקלטה כדי לשמור תמונות במספר מוגדר מראש של מסגרות. החזק את הבדיקה באופן קאודלי עד שהשחלה נמצאת באספקט הגולגולתי ביותר של שדה הראייה.

שנו את לחץ הבדיקה ואת הזווית כדי לראות ולצלם את הרחם. חזור על אוסף וידאו ומסגרות עבור כל איבר מעניין. מצא את הרחם רץ לאורך דופן הבטן הגבית עם שרירי הרגל הצידית בעין.

עקוב אחר הרקמה לתנועה פריסטלטית כדי להבדיל בין לולאות המעי לבין הקרניים הנייחות של הרחם. הניחו את העכבר בשכיבה גבית כדי לאסוף את התמונות מגישה גחון. ודא שסיכוך העיניים מספיק והלוע מאובטח בחרוט האף.

יש למרוח כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד שחומם מראש על בטן הגחון לפני החלת הבדיקה בקו האמצע והגולגולת של הערווה כדי לאתר את שלפוחית השתן כנקודת ציון היפואקואית. כדי למצוא את קרני הרחם, משוך את הבדיקה לרוחב שלפוחית השתן. הפעל לחץ דיגיטלי קל משני צדי העכבר או משני צדדיו.

ברגע שקרני הרחם נמצאות בשדה הראייה, החזיקו את הגשושית בניצב לעכבר וסרקו את שני צידי הבטן כדי ללכוד מבט רוחבי של שתי הקרניים. סובב את הגשושית כדי ללכוד תצוגות קשת. לאחר האולטרסאונד, נגב את העכבר במגבת נייר לפני החזרתו לכלוב שלו כדי להתאושש.

ברגע שהעכבר ער לחלוטין לאחר שתיים עד חמש דקות, החזירו את העכבר לחדר החיות. השוואת תמונת האולטרסאונד של חלל הבטן של העכבר לפני ואחרי הזרקת המלח הראתה הדמיה משופרת של איברי הבטן, כולל הרחם והשחלות לאחר הזרקת המלח. גישה גחונית שימשה לחקר חתכי הרוחב של קרני הרחם הסמוכות לשלפוחית השתן ההיפואקואית.

אימונוהיסטוכימיה עם נוגדנים המכוונים נגד Arid1a ו- Pten שימשה לחקר אובדן חלבון מדכא גידול הולם שהושג בתאי אפיתל הרחם בהשוואה לרקמת הסטרומה השכנה. תמונות אולטרסאונד של רחם עכבר עם שינויים פתולוגיים מוקדמים זוהו לאחר שלושה שבועות של טיפול דוקסיציקלין, המראים את לומן hypoechoic ומורחב של הרחם. במחקר הפתולוגיה הגסה וההיסטופתולוגיה של אותו הרחם, נצפו רחם קטן יותר אך מורחב בעל דופן דקה והיפרפלזיה מוקדמת של רירית הרחם עם שימור הלומן המובהק בהתאמה.

העכברים שהומתו בנקודות זמן מאוחרות יותר הראו רחם גדול יותר עם לומן קטן יותר ודופן מעובה. כאשר לומדים להשתמש במיקום ידני של בדיקות, לחץ מוגזם או תנועה מהירה יכולים להקשות על זיהוי איברים. השתמשו בתנועות עדינות ומכוונות והתמקדו בזיהוי האיברים המהווים ציוני דרך ראשונים.

בנקודת הסיום של המחקר, עכברים מוקרבים ורקמות נאספות כדי לאשר את הפלת הגנים ולאפיין שינויים ברקמות. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לעקוב אחר נגעים תוך בטניים לאורך זמן. ובמקרה שלנו, השתמשנו בו כדי לעקוב אחר התקדמות סרטן הרחם במודל iPad, אשר לאחר מכן אישרנו על ידי היסטופתולוגיה.