דיווחים רבים שבחנו את מערכת המרה החוץ-כבדית דיווחו כי הם השיגו את הדגימות אך לא את האופן שבו השיגו אותן, מה שהעלה סוגיות לגבי יכולת ההשוואה. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי כל מערכת המרה extrahepatic ניתן לנתח תאים מזהמים ניתן להסיר atraumatically. פרוטוקול הנתיחה שלנו יכול להיות מיושם באופן כללי על גישות ניסיוניות העובדות על הפרעות בצינור המרה של ילודים, במטרה לנתח את מערכת המרה החוץ-כבדית.
תכונות מסוימות של הפרוטוקול, למשל, השארת הקיבה מחוברת לתריסריון, עשויות להיות שימושיות במחקר של אטרזיה של התריסריון כדי לאפשר התמצאות נכונה על ידי החלב המעוכל חלקית המתבטא על ידי הקיבה. בהתחלה, הטכניקה עשויה לדרוש קצת זמן לאימון. תרגול ומעקב אחר הגישה שלב אחר שלב יגבירו את המהירות והתוצאה.
כדי להתחיל, הניחו את המכשירים המחוטאים והאוטומטיים על משטח סטרילי ליד שולחן הניתוחים. לאחר ביצוע חתך בצפק, להרחיב את החתך למיקום של decapitation, בעקבות קו בית השחי הקדמי השמאלי. הסר את העור מצד שמאל לצד ימין עם מלקחיים א-טראומטיים.
תחת מיקרוסקופ, החזיקו את הצפק המקיף את הטחול. מרימים אותו בעדינות עד שהצפק דומה למבנה דמוי אוהל, וחותכים חור של מילימטר אחד במרכז. המתן עד שאוהל הצפק יתמלא באוויר.
חותכים את הצפק בחלון ממוסגר על ידי הצלעות התחתונות, הן אזורי הבטן הצדדיים, והן אזור שלפוחית השתן התחתונה. הקפידו על גישה מלאה לכבד, למערכת צינורות המרה, לקיבה, למעי הדק ולמעי הגס. בחן את כיס המרה ואת צינורות המרה על ידי משיכת בזהירות את תהליך xiphoid במצב גחון גולגולתי.
הימנע קריעה של הרצועה falciform שיכול להוביל לקרע של כיס המרה ממערכת צינור המרה. לאחר מכן, שחרר את המשיכה של תהליך xiphoid. משכו בעדינות את התריסריון כלפי מטה כדי לשחרר את מערכת צינורות המרה.
לאחר מכן, בצע את גיוס ה- En-bloc התחתון על ידי זיהוי הפפילה של התריסריון, המחברת את מערכת צינורות המרה לתריסריון. חותכים דרך התריסריון כשני סנטימטרים לצד הימני הצדדי של הפפילה. לאחר מכן, חותכים דרך האזור הפילורי.
ודא כי התוכן של הבטן נמצאים באזור פילורי בין מיקום החיתוך לבין פפילה התריסריון. כדי לבצע את גיוס הגוש העליון, משוך בעדינות את התהליך הקסיפואידי וקבל גישה לרצועה המזויפת. בצע חתך של סנטימטר אחד דרך הרצועה falciform בין כיס המרה קרוב לתהליך xiphoid.
חותכים את המבנים המחברים בין הכבד לבית החזה, כגון הוושט, הווריד הנבוב התחתון, אבי העורקים החזי וכל הרצועות המקיפות את האזור החשוף של הכבד. כמו כן, חתכו את כל חיבורי הרקמות שנותרו בגב. בהגדלה מיקרוסקופית של פחות מפי 20, הנח את דגימת ה-En-bloc על משטח קצף.
הרכב את הדגימה על ידי ארגון מחדש שלה במיקום האנטומי הנכון. באמצעות תנועה עדינה, לשטח את החלק האוראלי והאוראלי של התריסריון. באמצעות מלקחיים א-טראומטיים, מתחילים את תנועת ההשטחה בפפילה של התריסריון וממשיכים לקצוות החנית.
לאחר מכן, להחליק את תוכן עיסת לבן של הבטן בחלק האוראלי של התריסריון. זהה את החלק האוראלי ואת החלק האבורי של התריסריון כדי לשלול סיבוב סביר של צינור המרה. חותכים שרידים גדולים של רקמת הכבד לפני ניתוח צינור המרה.
לאחר מספר תנועות גירוד, העבירו את הדגימה למיקום נקי יותר על משטח הקצף. השתמש ברקמת הכבד הפחות דחוסה ברקע כדי למטב את התצוגה להבחנה בין EBDS לתאים לא רצויים. מעבדים את הרצועה ההפטודואודנלית עד שנשאר ה-EBDS המבודד.
שימו לב לעורק הכבד ולווריד הפורטל הנובעים כחוט לבן ועדין מאוד, כשלושה עד חמישה מילימטרים דרך הפה מהפפילה של התריסריון. בזהירות, הסר את החוט העדין הזה באמצעות משיכה עדינה לצד שמאל לרוחב. ודא שתנועות הגירוד מתחילות ממערכת צינורות המרה ומובילות לגבולות הכבד.
באמצעות פרוטוקול זה, EBDS נותח מילודים בני תשעה ימים. אורך ה-EBDS המבודד מכיס המרה לפפילה של התריסריון היה פחות מ-10 מילימטרים, וקוטרו של הדוקטוס צ'ולדוכוס העדין נע בין 0.05 ל-0.2 מילימטרים. צביעת Hematoxylin eosin בוצעה על קטע האורך של ה- EBDS עם לומן פתוח.
הכולנגיוציטים זוהו סביב הלומן כמונולייר ונצבעו כהים יותר. חוקרים צריכים לשתף ולתקנן טכניקות הפעלה כגון פרוטוקולי דיסקציה והזרקה כדי לשפר את יכולת ההשוואה והשימושיות המהירה של המחקרים והתוצאות שלהם. דיסקציה מוקדמת תהיה יתרון עבור גישות היסטולוגיות וחד-תאיות, כגון בידוד של תוך-תאי וחוץ-פרי-כולנגיוציטים, משום שהיא גורמת להפחתת זיהום תרביות תאים.
