עבור תרכובת כי צריך להינתן ישירות לתוך זרם הדם, אופטימיזציה של מתן תוך ורידי הוא החלק העיקרי של הליך הניסוי. הפרוטוקול המפורט שלנו מספק הוראות שלב אחר שלב לביצוע מינון בולוס תוך ורידי מרובים באמצעות וריד הצוואר של עכבר, וכיצד לבצע צנתורים עורקיים וחדריים ימניים להערכה המודינמית מדויקת במודל יתר לחץ דם עורקי ריאתי של היפוקסיה עכבר. ההליכים המוצגים כאן הם תוצאות חשובות עבור חוקרים המעוניינים בשורש IV של פלטפורמת מתן תרכובות לפתח טיפול ליתר לחץ דם עורקי ראשוני.
חוקרים יכולים להשתמש בשיטת הזרקת בולוס ורידים ג'וגולרית זו לבדיקת תרכובת לפיתוח תרופות בכל מודל של מחלת עכברים. הזרקת בולוס IV מוצלחת ומדידות לחץ דם דורשות תרגול רב. כדי להתחיל, הסר את העכבר מתא ההרדמה.
הניחו את העכבר המרדים במצב שכיבה על משטח הזרקה מתחת למיקרוסקופ דיסקציה. שמור על ההרדמה באמצעות חרוט אף עם 1.5% isoflurane, ולרסן בעדינות את ארבע הרגליים עם סרט דבק כדי לשתק את הגוף. קרצוף בעדינות את אזור הניתוח שלוש פעמים עם שלושה סבבים לסירוגין של תמיסת יוד פובידון ואתנול 70%.
לאחר ביצוע חתך אורכי של 0.5 ס"מ, השתמש במלקחיים כדי להפריד את השריר ואת רקמות השומן ולאתר את וריד הצוואר החיצוני הנכון. לאחר מכן הכנס מחט סטרילית 28G לתוך הווריד הצווארי. כששיפוע המחט פונה כלפי מעלה.
לחץ באיטיות על בוכנה מזרק כדי להזריק את התרכובת לתוך הווריד. אפשר למחט להישאר בתוך הווריד למשך 10 שניות נוספות כדי למנוע זרימה חוזרת. הסר את המחט והשתמש בצמר גפן כדי להפעיל לחץ על אתר ההזרקה כדי למנוע דימום.
תפרו את העור בתפר 5/0 והכניסו את בעל החיים לכלוב התאוששות כאשר תחתית הכלוב מכוסה במגבת נייר ללא מצעים. ראשית, מדדו את המרחק מאתר החדרת הצנתר למיקום קצה הצנתר הרצוי. יש לסמן שני סימוני מרחק צנתר כדי לספק אינדיקציה ויזואלית לעומק החדרה, למרוח את המשחה הווטרינרית ישירות על משטח העין של עיני העכבר למניעת יובש.
הניחו את העכבר במצב שכיבה על משטח הזרקה מתחת למיקרוסקופ דיסקציה. לאחר חתך העור מן הלסת אל עצם החזה, להפריד את בלוטות הרוק ולחשוף את קנה הנשימה. שים 0.5 מיליליטר של PBS בחלל כדי להאט את התפתחות עווית כלי הדם תוך מניפולציה של עורק התרדמה.
בודד בזהירות קטע של חמישה מילימטר של עורק התרדמה הימני על ידי הנחת פיסת נייר לבן מתחת לכלי הדם כרקע. שימוש ב-8-0 תפר, לקשור קשר קבוע כדי לסגור את קצה הגולגולת של כלי השיט. לאחר מכן קשרו את הקשר הרופף הראשון כדי לחסום זמנית את זרימת הדם מאבי העורקים.
לאחר מכן קשרו את הקשר הרופף השני בין שני התפרים הראשונים. באמצעות מחט 25G, לעשות חור קטן כי הוא גדול מספיק כדי להעביר את הצנתר בקו אחד עם כלי הדם בין הקשר הקבוע והשני רופף. החזיקו את הצנתר במרחק של 1.5 אינץ' מהקצה והכניסו בעדינות את קצה הצנתר דרך חור העורק.
הדקו את הקשר הרופף השני סביב הצנתר וכלי הדם שעדיין מאפשר מעבר של הצנתר. שחררו בעדינות את הקשר הרופף הראשון. ממשיכים להחדיר את הצנתר לכיוון אבי העורקים העולה בהתאם לסימן שעל הצנתר עד לבדיקת לחץ דם מראה פרופיל לחץ דם עורקי.
תיעוד נתוני לחץ דם מערכתיים באמצעות מערכת איסוף הנתונים והתוכנה. שחררו את צומת התפר האמצעית כדי לאפשר את הוצאת הצנתר. לאחר מכן הדקו את הקשר הרופף הראשון כדי למנוע דימום ומשכו את הקטטר מעורק התרדמה.
בודדו בזהירות את וריד הצוואר החיצוני הימני מרקמת החיבור שמסביב. שימוש ב-8-0 תפר, לקשור את כל הענפים הקטנים ולקשור קשר קבוע כדי לסגור את קצה הגולגולת של הכלי. ואז לקשור קשר רופף על הקצה הקאודלי של הכלי.
השתמש במחט 25G כדי ליצור חור קטן קרוב לקשר הקבוע. החזיקו את הצנתר והכניסו את הצנתר לחתך הווריד והדקו את הקשר הקאודלי סביב הצנתר וכלי הדם. לדחוף את הקטטר לאט לתוך הלב הנכון.
עקוב אחר עומק קצה הצנתר בהתבסס על סימן הצנתר. הערך את מיקום קצה הצנתר בהתאם למעקב אחר גלי הלחץ בתוכנה. כאשר קצה הצנתר נמצא בחדר הימני, המוניטור יראה מעקב לחץ סיסטולי טיפוסי בחדר הימני.
שמור על יציבות הצנתר ואסוף את הנתונים במשך חמש דקות. לאחר השלמת ההקלטה, משכו בזהירות את הצנתר החוצה ושימו לב שאין רישום לחץ. קשרו את הקשר הקאודלי סביב הכלי.
החזירו את הצנתר לתמיסת PBS. במהלך צנתור חדר ימין בעכבר שחור C57 מבוקר נורמוקסיה, התקבלה גישה מוצלחת לחדר החדר הימני כפי שניתן לראות על ידי השינוי בצורת הגל ההמודינמית באזורים שונים של המערכת הוורידית. לחץ דם סיסטמי ולחץ סיסטולי בחדר ימין נמדדו בעכבר חזה סגור ארבעה שבועות לאחר החשיפה להיפוקסיה או נורמוקסיה.
בהשוואה לקבוצת נורמוקסיה, לחץ סיסטולי בחדר ימין גדל באופן משמעותי בקבוצת ההיפוקסיה. הטיפול בתרכובת מיקרו-רנ"א 7C1/let-7 הביא לירידה משמעותית בלחץ הסיסטולי בחדר ימין בהשוואה לקבוצת ההיפוקסיה, בעוד שלחץ הדם המערכתי לא השתנה באף קבוצה. הערכת הלחץ הסיסטולי בחדר האדום בעכברי חזה סגור היא אתגר בגלל האנטומיה המורכבת של החדר האדום.
על החוקרים להימנע מניסיונות ממושכים וחוזרים ונשנים לצנתור חדרים אדומים. הליך מינון הצוואר והבולוס שלנו יכול לשמש לבדיקת תרכובת לפיתוח תרופות בכל מודל של מחלת עכברים. אנו יכולים להשתמש בשורש IV של פלטפורמת מתן תרכובות כדי לפתח טיפול ליתר לחץ דם עורקי ריאתי.
