פרוטוקול זה מאפשר סינתזה פשוטה ומהירה של ננו-טיפות פרפלואורוקרבון שעברו אידוי אופטי ומספק שיטה לשיפור הביצועים של חלקיקים אלה. גרסת האדם מאפשרת שיפור הניגודיות על ידי מניפולציה של השלב של הדמיית האולטרסאונד תחילה. זה לא דורש ציוד נוסף וניתן לבצע על כל מערכת אולטרסאונד לתכנות.
התחילו בשטיפת בקבוקון תחתון עגול של 10 מיליליטר עם כלורופורם ושטפו החוצה מזרק זכוכית הדוק של 10 מיקרוליטר ומיליליטר אחד עם כלורופורם על ידי שאיפה חוזרת ונשנית של נפח המזרק המלא וגירושו בסך הכל שלוש פעמים. באמצעות המזרקים, הוסף 200 מיקרוליטרים של 25 מיליגרם למיליליטר DSPE-mPEG-2000, שמונה מיקרוליטרים של 10 מיליגרם למיליליטר DSPC, ומיליליטר אחד של מיליגרם אחד למיליליטר IR-1048 לתוך הבקבוקון התחתון העגול. זכרו לנקות את המזרקים בין השומנים או הצבע כדי למנוע זיהום במלאי.
הסר את הממס באמצעות מאייד סיבובי. ודא שהוואקום מותאם באיטיות ל-332 מיליברס כדי למנוע חבטות. לאחר חמש דקות, להפחית את הלחץ ל 42 מיליבר כדי להסיר את כל המים שאולי נכנסו לתמיסה.
משהים את עוגת השומנים במיליליטר אחד של PBS וסוניקט או מערבולת בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות או עד שכל עוגת השומנים הופסקה והתמוססה בתמיסה. מעבירים את התמיסה לבקבוקון זכוכית של שבעה מיליליטר ומניחים את הבקבוקון בכלי זכוכית מלא בקרח כדי לאפשר לתמיסה להתקרר במשך חמש דקות. שטפו מזרק זכוכית אטום לגז עם פרפלואורוהקסאן.
לאחר מכן להוסיף 50 microliters של perfluorohexane לבקבוקון באמצעות המזרק. הבדיקה מנתחת את התערובת כאשר המשרעת מוגדרת לאחת, זמן התהליך מוגדר ל-20 שניות, הדופק מוגדר לשנייה אחת, והדופק מוגדר לחמש שניות. לאחר מכן שנו את ההגדרות כפי שהוזכרו בכתב היד של הטקסט ובצעו את התערובת פעם נוספת.
מעבירים את תמיסת הננו טיפות לצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר ואת הצנטריפוגה ב-300 גרם למשך שלוש דקות כדי להפריד בין הטיפות הגדולות יותר שהן יותר ממיקרומטר אחד מהטיפות הקטנות יותר. השליכו את הכדור והעבירו את הסופרנטנט לצינור צנטריפוגה אחר של 1.5 מיליליטר. לשטוף את supernatant על ידי צנטריפוגה ב 3, 000 גרם במשך חמש דקות כדי לזרוק את כל הטיפות בתמיסה.
השהה מחדש את ה- PFCnDs במיליליטר אחד של PBS על ידי ניתור הכדור למעלה ולמטה ולאחר מכן סוניקט בסוניקטר אמבטיה למשך דקה אחת. דלל את מלאי PFCnDs פי 100 על ידי הוספת 10 מיקרוליטרים של מלאי PFCnD ל-990 מיקרוליטרים של PBS וסוניקט אמבטיה כדי לפזר את ה-PFCnDs לפני מדידת גודלם. מדוד את גודל הטיפות באמצעות פיזור אור דינמי.
מי דגה על ידי מילוי בקבוק ואקום של 500 מיליליטר ב-400 מיליליטר מים שעברו דה-יוניזציה, אוטמים בפקק גומי ומחברים את הבקבוקון לקו הוואקום. פתחו את קו הוואקום והטביעו את תחתית הבקבוקון בסוניקטר האמבטיה. סוניקט במשך חמש דקות או עד שלא נראית היווצרות בועת גז.
הכן 10% אמוניום לכל תמיסת סולפט על ידי המסת 500 מיליגרם בחמישה מיליליטר של מים degassed. מערבבים בעדינות את התמיסה אם האמוניום פרסולפט אינו מתמוסס במלואו. בכוס של 400 מיליליטר עם מוט ערבוב על צלחת ערבוב, הוסיפו 150 מיליליטר של מים ללא גזים ו-50 מיליליטר של 40 תמיסת אקרילמיד ביסקרילאמיד כדי ליצור 200 מיליליטר של תמיסת 10% אקרילאמיד ביסקרילאמיד.
ערבבו את התערובת ב-200 סל"ד כדי לאפשר ערבוב נכון מבלי ליצור בועות. שקלו 400 מיליגרם סיליקה והוסיפו אותה לתמיסת 10% אקרילאמיד ביסקרילאמיד כדי ליצור תמיסת סיליקה ואקרילאמיד של 0.2%. הכינו תבנית מרובעת עם הכללה גלילית על ידי חיתוך הקצוות מפיפטה להעברת פלסטיק ותמיכה בה בתבנית עם סרט מעבדה.
הוסף שני מיליליטר של 10% תמיסת אמוניום פרסולפט לכוס כדי ליצור ריכוז סופי של 0.1% והוסף 250 מיקרוליטר של TEMED לתמיסת הפנטום. אפשרו לתמיסה לבחוש במשך פחות מדקה. יוצקים במהירות את התמיסה לתבנית תוך הקפדה שלא להכניס בועות אוויר לתמיסה.
הפתרון צריך להתפלמר בתוך 10 דקות. הסר את הפנטום על ידי הפעלת הקצה השטוח של מרית מעבדה סביב קצה התבנית והיפוך התבנית. הפעל וחמם את מערכת הלייזר הפועמת למשך כ-20 דקות בהתאם להוראות היצרן.
ודא כי צרור הסיבים האופטיים מחובר כראוי ליציאת הלייזר ושתי הרגליים ממוקמות כראוי בתוך מחזיק צרור הסיבים. לאחר הפעלת מערכת הדמיית האולטרסאונד, חבר את מתמר ההדמיה של המערך למערכת וקבע את המתמר בתוך המחזיק כדי ליישר את מישור ההדמיה שלו עם חתך לייזר. הגדר את תדירות החזרה על הדופק של מערכת הלייזר ל -10 הרץ והצב מד כוח בקצה צרור הסיבים כדי למדוד אנרגיה.
כוונן את השהיית מתג Q עד שהשטף המשוער הוא 70 מילי-ג'ול לסנטימטר מרובע. מלאו בחזרה את אחד הערוצים בפנטום פולי אקרילאמיד בג'ל האולטרסאונד ובתערובת PFCnD באמצעות מזרק קצה פלסטיק של מיליליטר אחד. מכסים בנדיבות את החלק העליון של הערוץ עם ג'ל אולטרסאונד ולהסיר את כל הבועות עם מזרק קצה פלסטיק מיליליטר אחד.
לבסוף, מניחים את הפנטום פולי אקרילאמיד מתחת למתמר וצרור הסיבים. ניסוח מוצלח והפרדה צנטריפוגלית של PFCnDs מניבים טיפות בקוטר של כ-200 עד 300 ננומטר. גודל הטיפות גדל עם הזמן עקב התלכדות ודיפוזיה בתהליך המכונה הבשלת אוסטוולד.
הניגודיות מההכללה של פעימת הקצה נמצאה גדולה בערך פי 3.2, כלומר שיפור של 220% לעומת פעימת ה-P. השטח ההיפרכואי חושב עבור כל מסגרת ונורמל על ידי האזור ההיפרכואי של המסגרת הראשונה ולאחר מכן הותאם למודל דעיכה מעריכית. זמן הדעיכה האופייני של אזור היפרכואי מנורמל היה ארוך עד פי 3.5 בהדמיית N-pulse בהשוואה לדופק P.
מסגרות התמונה הדיפרנציאליות במצב B תועדו בזמן עבור כל הדמיית N-pulse ו-P-pulse. אחד הדברים החשובים ביותר הוא לגרש את השומנים בתחתית הבקבוקון כדי לוודא שהם משולבים כראוי בעוגת השומנים.
