תפקוד ארסיות חוץ-תאית שמקורה בטסיות דם של שתלי Ti

שילוב שלשלשות חוץ-תאיות עם ביו-חומרים הוא גישה רצויה למחקרי רפואה רגנרטיבית. לכן, מחקר זה מדווח על פונקציונליזציה טיטניום עם כלי עבודה ככלי מעשי לאורתופדיה והתחדשות העצם. פונקציונליזציה יציקת טיפה היא שיטה קלה בעלות נמוכה בהשוואה לאסטרטגיות אחרות כגון מלכוד פולימרי או כריכה ביוכימית.

התחל את הפונקציונליזציה משטח טיטניום על ידי שטיפת דיסקי טיטניום עם מים deionized בכוס זכוכית. ואז להשליך את המים לפני שטיפת הדיסקים עם 70%אתנול. דקנט את הפתרון כדי sonicate השתלים שטף ב 50 C במשך חמש דקות במים deionized.

לאחר השלכת שתלי טיטניום דגירה במים בתמיסת נתרן הידרוקסיד 40% ב 50 C במשך 10 דקות עם עצבנות ולאחר מכן sonicate את השתלים במים deionized כפי שהוכח. לאחר מכן, בצע לפחות חמש שטיפות של השתלים עם מים deionized. עד שה-pH יהיה ניטרלי על מחוון ה-pH.

חזור על תהליך sonication ודגורה, כפי שהוסבר קודם לכן, על ידי החלפת נתרן הידרוקסיד עם 50% חומצה חנקתית. בצע את הכביסות ואת sonication עם מים deionized לפני אחסון השתלים בתמיסת אתנול 70%. לדגור על שתלי הטיטניום בתמיסת חומצה חנקתית של 30% למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בתסיסה עדינה.

לאחר הדגירה לבצע לפחות חמש שטיפות עם מים deionized עד pH הוא ניטרלי על אינדיקטורים pH. ואז לדגור על שתלי טיטניום בלילה בטמפרטורת החדר במים דה-יונים. למחרת, יבש את השתלים תחת ואקום ב 40 C במשך 10 דקות.

בעבודה מתחת לארון תרביות התאים, הניחו שתלי טיטניום בצלחת של 96 באר כשצד המכונה פונה כלפי מעלה. מסדרים את השלל החוץ-תאי של השלל EVs טיפה יציקה על ידי הפשרת פתרון EVs, ופתרון מערבולת בדופק של שלוש שניות. לאחר ערבוב, הפקד 40 מיקרוליטרים של תמיסת הרכבים החמצוניים על משטח הטיטניום כדי לשתק מקסימום של 4 x 10^11 EVs לכל שתל, על פי הריכוז שנקבע על ידי ניתוח מעקב ננו-חלקיקים.

לאחר מכן, מניחים את הצלחות בתנאי ואקום ב 37 C במשך כשעתיים או עד טיפות יבשות לחלוטין. התאם את זמן הייבוש בהתאם למספר שתלי הטיטניום והמים הקיימים בתא הוואקום. כמות ה-EVs ששוחררו מדיסקים טיטניום נמדדה על ידי ניתוח מעקב חלקיקים.

ביום 2 שוחררו בסביבות 10^9 EVs, ולאחר מכן שחרור מתמשך בימים 6, 10 ו-14. אין ויטרו תא תאימות ביולוגית של EVs טיטניום הוערך עם לקטט דהידרוגנאז, או בדיקת שחרור LDH, ב 48 שעות לאחר זריעת תאים על השתלים. טיטניום EVs הציג כמות נמוכה יותר של LDH מאשר הערך הציטוטוקסי המרבי המקובל.

בעוד, קבוצת בקרת טיטניום, הציג רמות פעילות LDH גבוהות יותר. הצעד החשוב ביותר הוא ייבוש ואקום של השתל המצוה. חשוב לוודא כי כל המים מתאדים כדי לקבל פיזיולוגיה אופטימלית.