המטרה הכוללת של הליך זה היא לפקח על vasospasm מוחי לאחר דימום תת-אראצנואידי בעכברים ב vivo. זה מושג על ידי היישום של סונוגרפיה דופלקס בצבע בתדר גבוה מקודד תחת הרדמה עם isoflurane. נתוני ההדמיה מעובדים כדי לקבוע את מהירויות זרימת הדם בעורקים הפנימיים הפנימיים תוך-סידוריים.
מהירות זרימת דם תוך ורידי מואצת מצביעה על vasospasm מוחי. במחקר זה, ביצענו מדידות של מהירויות זרימת הדם של עורקים תוך ורידי ו extracranial אצל נקבה, C57BL / 6N עכברים בגילאי 11 עד 12 שבועות. העכברים היו נתונים או אינדוקציה SAH או ניתוח מזויף אשר תואר בפירוט במקומות אחרים.
כדי להכין את מתג בדיקת אולטרה סאונד על מכונת אולטרסאונד ולהזן את ID.Warm החימום צלחת החימום של מערכת אולטרסאונד ל 37 מעלות צלזיוס. ודא כי גשוש הטמפרטורה רקטלית מוכן לשימוש. השתמש באמבט מים חמים כדי לחמם את ג'ל אולטרסאונד ל 37 מעלות צלזיוס.
מכינים את קרם הסרת השיער, קרם מגע לאלקטרודות ומשחה לעיניים. ודא כי המתמר מותקן כראוי על הזרוע המכנית ולהבטיח כי התא של אינדוקציה הרדמה הוא סמוק עם 4% isoflurane ו 40% חמצן. לגרום להרדמה על ידי לשים את העכבר בתא במשך דקה אחת.
להגן על העיניים עם משחה. המשך רק לאחר הרדמה עמוקה מספיק הושגה. לשמור על הרדמה עם 1.5% isoflurane ו 40% חמצן באמצעות מסכת הרדמה לאורך כל ההליך.
בשלב הראשון, מהירויות זרימת הדם של העורקים הפנימיים תוך ורידי העורקים נקבעים עם סונוגרפיה דו-צדדית בתדר גבוה transcranial. מניחים את העכבר בתנוחה נוטה על צלחת החימום של מערכת אולטרסאונד כדי לשמור על טמפרטורת הגוף 37 מעלות צלזיוס. יש למרוח משחת עיניים משני הצדדים.
לפני הבחינה הראשונה לקצר את הפרווה ב occiput עם מכונת גילוח חשמלית. לאחר מכן להסיר את השיער שנותר כימית באמצעות קרם להסרת שיער. השתמש ספוגית כותנה כדי להפיץ ולשפשף את השמנת במשך שתי דקות עד השיער מתחיל לנשור.
לאחר שתי דקות נוספות להסיר את השמנת והשיער עם מרית ולחטא את העור עם חיטוי עור אלכוהולי. מצפים את ארבעת הגפיים של החיה במשחה מוליך ומתקן אותם עם סרט הדבקה על אלקטרודות א.ק.ג. המוטמעות בלוח. מניחים סיכה על בדיקה טמפרטורה רקטלית בזהירות להכניס אותו כדי לפקח על טמפרטורת הגוף, באמצעות מנורת חימום נוספת במידת הצורך.
בדוק, אם הפרמטרים הפיזיולוגיים, א.ק.ג. ואות הנשימה מוצגים כראוי על המסך של מערכת אולטרסאונד. במידת הצורך, ניתן להתאים את רמת ההרדמה כדי להשיג את הדופק היעד של 4 עד 500 פעימות לדקה. מצפה אותו עם ג'ל אולטרסאונד.
השתמש מתמר מערך ליניארי וקצב מסגרות מעל 200 מסגרות לשנייה כדי לרכוש תמונות אולטרסאונד ולהרכיב אותו על הזרוע המכנית. מניחים את המתמר על occiput מוטה לאחור על ידי 30 מעלות. השתמש במצב B ובמצב CW-Doppler כדי לדמיין את עורק העורק הפנימי תוך חיים הנכון ולהעביר את המתמר עם יחידת הבקרה קדימה ואחורה עד שנמצא את הזרימה המרבית של העורקים.
כדי לאסוף מידע אנטומי להשתמש במצב B המסורתית ומצב CW-דופלר ולהתחיל רכישה על ידי לחיצה על כפתור הרכישה. כדי לתעד מידע על מאפייני הזרימה של כלי הדם תוך נדריים לחץ על כפתור דופלר גל הדופק, למקם נפח מדגם במרכז הכלי ולרכוש לולאת cine יותר משלוש שניות. המשך באופן זהה עם הצד השמאלי.
בשלב הבא מהירויות זרימת הדם של העורקים הראשיים הפנימיים extracranial נקבעים עם סונוגרפיה דופלקס בתדר גבוה. מניחים את העכבר במצב supine על צלחת החימום של מערכת אולטרסאונד כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של 37 מעלות צלזיוס. לפני הבחינה הראשונה להסיר את השיער של החלק הקדמי של הצוואר עם מכונת גילוח חשמלית.
לאחר מכן להסיר את השיער שנותר כימית באמצעות קרם להסרת שיער כמתואר קודם לכן. מצפים את ארבעת הגפיים של החיה במשחה מוליך ומתקן אותם עם סרט הדבקה על אלקטרודות א.ק.ג. המוטמעות בלוח. מניחים סיכה על בדיקה טמפרטורה רקטלית בזהירות להכניס אותו כדי לפקח על טמפרטורת הגוף.
שימוש במנורת חימום נוספת במידת הצורך. בדוק שוב את התצוגה הנכונה של הפרמטרים הפיזיולוגיים על המסך. מצפים את החלק הקדמי של הצוואר עם ג'ל אולטרסאונד מחומם ל 37 מעלות צלזיוס.
מניחים את המתמר במקביל לבעל החיים ומתאימים את התנוחה על מנת לקבל תמונות אורך של העורק הראשי הנכון. השתמש במצב B במצב CW-דופלר כדי לדמיין את עורק העורק הראשי הנכון. התמונה צריכה להכיל את העורק הראשי המשותף הנכון, את העורק הראשי הפנימי הימני ואת העורק הראשי החיצוני הנכון.
כדי לאסוף מידע אנטומי להשתמש במצב B המסורתית ומצב CW-דופלר ולהתחיל רכישה על ידי לחיצה על כפתור הרכישה. כדי לתעד מידע על מאפייני הזרימה של עורק העורק הראשי החוץ-סידורי לחץ על כפתור דופלר גל הדופק, מקם את נפח הדגימה במרכז העורק הראשי המשותף עורק העורק הראשי הפנימי ועורק הראשי החיצוני ורכוש לולאת cine יותר משלוש שניות. המשך באופן זהה עם הצד השמאלי.
מסיימים את ההרדמה ומסירים את החיה מלוח ההתחממות ומכניסים אותה לכלוב, מניחים באינקובטור מחומם ל-36 מעלות צלזיוס למשך שעה כדי למנוע היפותרמיה ולבדוק התאוששות מלאה. השלב הבא הוא עיבוד נתוני האולטרה-סאונד. שימוש בתחנת עבודה חיצונית לעיבוד שלאחר נתוני אולטרסאונד בתדירות גבוהה.
יצא את מצב B, מצב CW-דופלר ומצב PW-דופלר תמונות לולאות cine לתוכנת Vevo LAB. פתח את מחקר אולטרסאונד מיוצא. בחר בעל חיים אחד ופתח את לולאת הסינוס PW-Doppler של עורק העורק הראשי תוך חיים.
בפרוטוקול זה נרשמות בדרך כלל שבע עד שמונה פעימות לב בעקומות מהירות זרימה תואמות. השהה את לולאת הסינוס ולחץ על לחצן המדידה. בחר את חבילת כלי הדם ולחץ על RICA PSV כדי למדוד את הלחץ הסיסטולי שיא של העורק הראשי תוך חיים הנכון.
עכשיו לחץ שמאלה על פסגת עקומת מהירות ולמשוך את הקו הישר לקו האפס. קבע את המדידה בלחיצה באמצעות לחצן העכבר הימני. עכשיו לבחור RICA EDV כדי למדוד את המהירות הדיאסטולית הסופית.
לחץ שמאלה על הפריחה המינימלית של עקומת המהירות בסוף diastole. משוך את הקו ישר לקו האפס וקבע מידות בלחיצה באמצעות לחצן העכבר הימני. בחר RICA VTI כדי למדוד את אינטגרל זמן המהירות.
לחץ שמאלה בתחילת עקומת מהירות ועקוב אחר העקומה עם עכבר עד סוף הרמה הדיאסטולית. ולאחר מכן לחץ שוב ימינה כדי לקבוע את המדידה. יצא את הנתונים של העורקים הפנימיים תוך-מוחיים באמצעות לחצן הדוח.
הקש על יצא ושמור את הנתונים כקובץ דוח VSI. השתמש באותה גישה למדידת PSV, EDV ו- VTI של העורקים הראשיים הפנימיים החוץ-סידוריים הנכונים וייצא את הנתונים בהתאם. המשך באופן זהה עם הצד השמאלי ולהשתמש LICA PSV, EDV ו VTI.
בחמישה עכברים ושלושה מהם SAH הושרה בעוד שניים לקבל ניתוח מזויף את מהירות זרימת הדם של העורק הפנימי תוך ורידי של העורק הראשי הפנימי extracranial נקבע יום אחד לפני הניתוח ואחד, שלושה ושבעה ימים לאחר הניתוח. לפני הניתוח, מהירויות זרימת דם נוספות תוך ורידי, כמו גם היחס בין זרימת דם תוך אסטרנציאלית היו דומים בין SAH ובעלי חיים מזויפים. ביום הראשון לאחר אינדוקציה SAH לא היו שינויים משמעותיים במהירות זרימת הדם תוך או חוץ סידורי או היחסים בין זרימת דם תוך ורידי.
בימים שלוש ושבע מהירויות זרימת הדם תוך ורידי של העורק הראשי הפנימי גדלו במידה ניכרת ושניים מבעלי החיים SAH המציין vasospasm מוחי לאחר SAH. כמו מהירויות זרימת הדם extracranial נשאר כמעט ללא שינוי, היחסים של מהירויות זרימת הדם תוך אסטרניאלית גם גדל באופן משמעותי ביום השביעי בבעלי החיים SAH המציין vasospasm המוחי. לסיכום, ניתן להשתמש בסונוגרפיה דו-קרנית בתדר גבוה בצבע כדי לבצע מדידות vivo של מהירויות זרימת הדם תוך ורידי בעכברים.
בדומה למצב בחולים אנושיים מהירויות זרימת הדם תוך ורידי להאיץ בעכברים לאחר SAH המציין vasospasm. השיטה האולטרה סונוגרפית המוצגת כאן היא מהירה ומעט פולשניות. זה מאפשר מחקרים אורך של vasospasm במודלים SAH מורין.
