מודלים להשתלה הם כלים בעלי ערך למחקר אימונולוגי שלעתים קרובות דורשים מומחיות כירורגית. כאן, אנו מציגים גישה אפשרית להשתלת תאי לב ושרירים הטרוטופיים בחולדות. על ידי הדגשה ופשטה של כל השלבים המכריעים של המודל שלנו, חוקרים ללא רקע כירורגי צריכים להיות מסוגלים לשלוט במודל זה בזמן סביר.
שני מודלי ההשתלה מספקים תובנות חשובות על מנגנוני הסובלנות והדחייה ו ניתן ליישם אותם במינים שונים. יש לנו ניסיון רב בהוראת מודל זה ליחידים ללא הכשרה כירורגית מוקדמת. לאחר שלמדנו את הצעדים המכריעים, אנו ייעצו סבלנות ותרגול מספיק עם בעלי חיים שנפטרו.
עבור הסבר הלב התורם, לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס הדוושה בבעל חיים תורם חולדה בן שבעה עד 22 שבועות, להחיל חומר סיכה העין ולהשתמש קוצץ מכני כדי להסיר את הבטן ואת פרווה בית החזה. מניחים את החולדה בתמקום supine על בסיס חימום ולתקן את הגפיים בבסיס שולחן הניתוח עם רצועות אלסטיות. לחטא את העור החשוף עם 70% אתנול ולבצע לפרוטומיה חציונית.
הכנס מפשקים לתוך החתך ולהשתמש ספוגיות כותנה מעורקות כדי לגייס את המעי לצד שמאל של התורם כדי לחשוף את הנבוב הנבוב הנחות. לאחר מכן, לנקב את הווריד הוורידי הנחות כדי לאפשר הזרקה תוך ורירית של 500 יחידות בינלאומיות של הפרין מומס במיליליטר אחד של תמיסת מלח איזוטונית קרה כקרח. לעצור את הדימום באתר מנוקב לאחר נסיגת מחט על ידי דחיסה קלה באמצעות ספוגית כותנה.
חגר את הסרעפת, בצע כריתת חזה צדדית לשני צידי התורם והצמיד את קיר בית החזה. הסר את pericardium ואת העצב vagal על ידי הכנה בוטה באמצעות שני מחזיקי מחט מיקרו. עבור exsanguination, לחצות את כלי הבטן ולהכניס את הענף הקהה של מספריים מחודד גשוש לתוך הסינוס הדם הרוחבי.
השתמש בדחיסה כדי לנתח את העורקים העולים ואת עורק הריאה בצורה חדה ככל האפשר תחת מתיחה קאודאלית קלה של הלב. מניחים קשירה אחת 5-0 סביב קאווה ורידים ריאתי ולהדק את הקשירה צעד חכם ככל האפשר. לנתק את הגב רקמה כדי קשירה ולחלץ את הלב.
כדי לעקל את הלב המופרש, השתמשו ב-18 אונקיות מקתר תוך ורדי כדי לשטוף 30 מיליליטר של תמיסת מלח איזוטונית קרה, בתוספת 1000 יחידות בינלאומיות של הפרין דרך העורקים העולים ועורק הריאה לפני שתניחו את הלב בצינור 15 מיליליטר של תמיסת מלח על הקרח. לאחר הכנת החולדה המטופלת בת 10 עד 14 השבועות כפי שהוכח זה בלבד, גייסו את המעיים לצד השמאלי העליון של המטופל על גבי דחיסה חמה ורטובה. ולהתאים את המיקרוסקופ הכירורגי או חלופה מספקת.
לאחר גיוס התריסיון ואת jejunum proximal, בהתאמה, באמצעות חמש עד שבע הגדלה מלאה, להשתמש ספוגיות כותנה ניתוח קהה לחשוף את אב העורקים הבטן ואת ונק קאווה נחות. באמצעות שני מחזיקי מחט מיקרו כדי לרומם את כלי הבטן מבלי לפגוע בוורידים המותניים, מניחים מהדק כלי דם קולי על כלי הדם. השתמש 30 עד 45 מעלות מקושת 27 מד cannula כדי לנקב את כלי הבטן.
ולהשתמש במספריים פוטס כדי להגדיל את אתר הנקב לתוך חתך אורך התואם את גודל לומן של כלי התורם. כדי להסיר קרישי דם ולמנוע פקקת לאחר הניתוח, לבלבל את כלי עם מלוחים ולהציב את השתל לתוך situs. שימוש בשני קטעים פשוטים 8-0 monofilament תפרים שאינם resorbable, לתקן את אבי העורקים העולה התורם אבי העורקים הבטן המטופל בפינות הגולגולת caudal של החתך האורך.
כדי anastomose את העורקים העולה של התורם עם ביתן הבטן של המטופל למקם את השתל מימין לכלי המטופל תוך ביצוע המחצית הראשונה של anastomosis עם ריצה 8-0 תפר מונופילמנט. לאחר מכן מניחים את השתל בצד שמאל של כלי המטופל ולבצע את החצי השני של anastomosis. תקן את עורק הריאה התורם לוונה קאווה הנחותה באופן דומה עם שני קשרים פינתיים בפינות הגולגולת והקאודל.
לאחר תיקון כלי התורם עם קשרים בכל פינה, מניחים תפר מבחוץ אל פנים הכלי כדי להפעיל anastomosis תוך-אלומיניום עבור המחצית הראשונה של anastomosis. לפני קשירת התפר, מניחים תפר נוסף מבפנים החוצה. כדי למנוע תסחיף היקפי לאחר סיום המחצית השנייה של anastomosis, לשטוף את anastomosis עם מלוחים לפני הידוק הקשר של המחצית השנייה של anastomosis.
מניחים גזה המוסטטית סביב שני anastomoses ולשחרר בזהירות את מהדק כלי הדם קולי כדי לאפשר תדלוק שתל. ניהול כל דימום עם דחיסת אור מטליות כותנה מעקרות. לאחר כ -60 שניות, הלב צריך להתחיל לפעום.
בזהירות להחליף את המעיים ולסגור את fascia הבטן ואת העור עם תפרים רציפים רציפים 3-0 פועל. בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה, לקצור לב חולדה תורם כפי שהוכח ולהשתמש אזמל סטרילי או מספריים סטריליים לגרוס את הלב לתוך שלושה על שלושה שברים מילימטר. לעכל את החלקים ב 20 מיליליטר של תרבות בינוני בתוספת 0.5 מיליגרם למיליליטר של קולגן במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.
בסוף העיכול, מוסיפים את הרקמה לתספורת גדולה, תוך הסרת מדיום התרבות. מוסיפים 5 עד 10 מיליליטר של תמיסת מלח איזוטונית ומסננים את תרחיף הרקמה דרך מסננת. ואחרי צנטריפוגה ההשעיה התא פעמיים, לסנן אותו דרך מסננת תא 40 מיקרומטר.
לשטוף את מסננת עם חמישה עד 10 מיליליטר של תמיסת מלח איזוטונית כדי לאסוף את כל התאים הנותרים. ואחרי צנטריפוגה, תן שימוש חוזר בתאי הלב המבודדים של החולדות בתמיסת מלח בריכוז של פי 5 מ-10 לתאים החמישיים למיליליטר. לטעון מזרק מיליליטר אחד עם תמיסת התא ולמקם את החיה הנמען הרדמה במצב צמתים עם אוזן היעד פונה כלפי מעלה.
תקן את האוזן באצבע ובקלטת דו-צדדית, ולהשתמש בקנולה של 27 מד כדי להזריק באופן תת עורי 20 מיקרוליטרים של תותכי תאי שריר לב קרוב לכלי נימי חזותיים לתוך אוזנו של המטופל. לאחר תקופת התצפית הניסיונית המתאימה, לחלץ את בלוטות הלימפה בצוואר הרחם ניקוז ולבצע את הניתוחים המתאימים במורד הזרם של עניין. השתלות סינגניות שרדו עד 100 ימים ללא סימנים של כשל השתלה.
השילוב הספציפי בין התורם למקבל יכול לגרום למהירויות שונות של דחיית השתלת לב הטרוטופית. קטעי קריוסטט של הלבבות שנדחו חושפים עלייה החדירה של תאים משפיעים חיסוניים, ואילו שתלים סינגניים הם במידה רבה ללא תאים חיסוניים. כריתת לימפה צוואר הרחם ובדיקות גירוי מחדש של ניקוז תאי בלוטות הלימפה לאחר הזרקת תאי שריר לב אוראלי מגלה תגובות חיסוניות ספציפיות למתח ברור כלפי רקמת לב הטרוטופית אצל מושתלים allogenic, המצדיק ניתוחים אימונולוגיים נוספים כגון פרופיל ציטוקינים.
לטפל בכלי בזהירות בעת החדרת וחילוץ המחט. אל תשים יותר מדי תשומת לב על התפרים כדי למנוע התעצמות. אל תמקם יותר מדי תפרים לכל אנסטומוזיס.
