הפרוטוקול הכולל מתאר הליכים כירורגיים שבוצעו בקלות של הסרת התוספתן המכונה תיקון caecal בעכברים. מודל כריתת התוספתן מורין יכול לשמש לחקר התפקידים הביולוגיים של נספח בפתוגנזה של מחלת מערכת העיכול האנושית. התוספתן האנושי הוא איבר שנוי במחלוקת.
מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי הנספח ממלא תפקיד חשוב בשמירה על בריאות המעיים. כדי לחקור את הפונקציה הביולוגית של נספח, יצירת מודל בעלי חיים הקשורים למחלה הקשורים לתוספתן הוא קריטי. בפרוטוקול זה, נתאר צעדים כירורגיים פשוטים ובטוחים של הסרת נספח, המכונה תיקון caecal בעכברים.
כדי להבטיח את הצלחתו של מודל זה, קיימים שלושה שלבים מרכזיים כפי שתראה בסרטון הבא. ראשית, לאתר את caecum של העכברים לפני הניתוח. שנית, לעשות חתך קטן בבטן.
שלישית, לחטא ולסגור את גדם caecum. החלק הראשון, כריתת תוספתן של עכברים. הכינו מכשירים כירורגיים סטריליים ופתרונות ניקוי לפני הניתוח.
הרדמה ואבטח את העכבר על פלטפורמה בתמרה על-חושית על-ידי הנחת ארבע רצועות של סרט הדבקה רפואי על-פני הגפיים כדי למנוע תנועה יציבה במהלך הניתוח. בעדינות לגעת בכל הבטן של העכבר כדי למצוא את התחושה של בליטה. מכסים את הווילון ומחטאים את האזור המגולח של בטן העכבר רחב ככל האפשר באמצעות פעמיים של אנטויודין.
בצע חתך אורך הנע בין 0.5 ס"מ לס"מ אחד במרכז הבטן. על פי המיקום מראש של caecum, לחפש את caecum בעדינות החיצונית אותו במשך סנטימטר אחד בערך כדי לזהות את תיקון caecal. השתמש מלוח פיזיולוגי מחומם מראש סטרילי כדי לחות את המעי.
כדי למנוע סיבוכים פוטנציאליים של דימום וזיהום לאחר הניתוח, ligate כלי הדם mesenteric של caecum באמצעות 8-0 תפר. לחות את caecum עם מלוחים. סמן את אזור החלקה באמצעות התפר 4-0 עם לולאה פתוחה ליד לשיא של caecum במעי הגס הפרוקסימלי.
חותכים את התיקון caecal מתחת כריתה מסומנת באמצעות מיקרו מספריים ולמחוק את התוכן caecal שיורית עם ספוגיות כותנה רפואית. לחטא את הגדם של caecum עם entoiodine. סגור את הגדם עם תפר פועל באמצעות 8-0 תפר.
הסר בזהירות את לולאת הליך המשנה 4-0, ששימשה בעבר לסימון החלקה על הגדם של caecum. לעקר את המיקום ת התפר באמצעות entoiodine. rehydrate אזור החיתוך עם מלוחים.
סגור את שכבת השרירים עם תפר פועל באמצעות 8-0 חוט תפר. סגור את שכבות העור באמצעות תפרים מופרעים עם חוט תפר 4-0. לחטא את החתך הכירורגי פעמיים עם entoiodine.
לאחר מכן, להסיר יוד באמצעות 75% אלכוהול רפואי. בעדינות להפוך את העכבר בחזרה. להזריק תת עורית 0.1 מיליגרם לקילוגרם משקל גוף של buprenorphine, ו 0.4 מיליליטר של מלוחים פיזיולוגיים.
ותנו את העכבר על כרית החום, עד שהוא יחזור להכרה. להחזיר את העכבר לכלוב הסטרילי, ולפקח מקרוב על העכבר לסימני הכאב במשך שלושה ימים לאחר הניתוח כדי להבטיח את החלמתו. החלק השני:אינדוקציה של סרטן המעי הגס הקשורים קוליטיס עם Azoxymethane, AOM, ו Dextran נתרן סולפט, DSS, שבעה ימים לאחר כריתת התוספתן.
להפשיר aliquot אחד של AOM ולדלל אותו 1 מיליגרם למיליליטר באמצעות 0.9% מלוחים נורמליים. כל תהליך ההכנה מתבצע במכסה המנוע של האדים. ממיסים ארבעה גרם אבקת DSS בתמיסת מים אוטומטית של 200 מיליליטר להכנת 2%DSS.
כל כלוב מכיל חמישה עכברים. בצע הזרקה תוך-אישית של AOM עם 0.01 מיליליטר לגרם לעכבר המבסס על משקלו. החלף את המים האוטומטיים ב- 2%DSS למשך חמישה ימים.
העכברים מוזנים במים אוטו-סלאביים במשך שני מחזורים נוספים. החלק השלישי:תוצאות. תוצאות זרימה ו- ELISA מציינות הסרה מוצלחת של תיקון ה- caecal.
הליך זה יכול לתרום להפחתה משמעותית של תאי פלזמה ספציפיים ל- IgA, שינוי ברור של הפרשת IgA במעיים גדולים, לעומת 3% DSS, אשר יש שיעור תמותה גבוה ושינוי משקל משמעותי בגלל צואה עקובה מדם חמורה, ירידה פי הטבעת, ו abcess הבטן. ה-2%DSS מתאים לכל התהליך לקצב ההישרדות הגבוה שלו לכמעט 80% ושינוי משקל סביר הן בקבוצות מזויפות והן בקבוצות כריתת תוספתן. כפי שמוצג בתמונות אלה, יש לנו בהצלחה המושרה קוליטיס הקשורים גידולים המעיים.
בתמונות מכתים H&E, חץ שחור מציין כיב ריר, ראש חץ מציין אדנוקרצינומה, וחץ לבן מציין חדירת נויטרופילים בין בלוטות. שלבים שונים של אדנוקרצינומה ניתן לראות הן בקבוצות מזויפות והן בקבוצות כריתת תוספתן. מודל חסכוני זה של כריתת התוספתן של מורין יכול לשמש למענה על כמה שאלות חשובות כגון: מה תפקידו של התוספתן בוויסות חיידקי המעיים וכיצד הוא משתתף בתגובה החיסונית ברקמת הלימפה הקשורה למעיים.
זכור, כדי למנוע את הנזק בהיתוך המעי, המיקום מראש של caecum וחתך עור קטן חשובים. בנוסף, השתמשנו 2% DSS כדי לגרום קוליטיס. אבל ריכוז גבוה יותר של DSS עשוי לשמש עבור זני עכברים אחרים.
