מחסום דם המעיים הוא מערכת רב שכבתית השולטת במעבר של חומרים מזינים, מטבוליטים חיידקיים, תרופות ותרכובות אקסוגניים אחרות מ לומן מעיים לזרם הדם. כפי שאנו יודעים, שלמות המחסום עלולה להיפגע במערכת העיכול, כמו גם במחלות לב וכלי דם וכמה מחלות מטבוליות אשר עלול לגרום לגישה קלה יותר של תרכובות פעילות ביולוגית כגון מטבוליטים חיידקיים במעיים לזרם הדם ועשויים להשפיע על תפקודו של האורגניזם כולו. לכן החן של מחסום המעיים עשוי להיות סמן של מחלות מעיים ומעיים נוספות.
בסרטון זה, אנו מציגים מדידה ישירה של החטטנות מחסום דם המעיים בחולדות באמצעות דגימת דם פורטל לאחר ניהול של חומר בדיקה למערכת העיכול. אנו מתארים בפירוט את הסיווג של וריד הפורטל ואת וריד וריד נחות קאווה ממש מעל קונפולנס ורידים בהיפוך. דגימת דם מווריד פורטל וקנה קאווה נחות מאפשר להעריך לא רק את החרניות של מחסום דם המעיים, אלא גם מסלול סיווג וספיגה של מולקולות מעניינות כגון מטבוליטים חיידקי מעיים או תרופות.
שיטה זו כמעט ואינה מושפעת מתפקוד הכבד והכליות ושומרת על זרימת הדם במעיים שהיא יתרון חזק על פני שיטות vivo ו- in vitro נפוצות. בעלי חיים צריכים להיות צום לילה לפני ההליך. בצע את כל ההליכים במהלך הרדמה כללית.
בעלי חיים מתים לאחר הניסוי. ההליך שלנו מתחיל עם החדרת הקו לניהול תוך מעיים. כאן אנו מציעים ניהול תוך-קולי של סמן.
זה אולי להיות שונה על ידי הממשל ברמות שונות של מערכת העיכול. לדוגמה, בטן או התריסום. עם זאת, קח בחשבון את המהירות המשתנה של פריסטואלזיס ואינטראקציות אפשריות עם אנזימים וחומצות קיבה תוך מתן סמן לחלקים העליונים של מערכת העיכול.
השתמש בגודל קטטר פולי ילדים 10 F או 8 F כקטטר המעי הגס. סמן את הקטטר כדי לציין את החלק אשר יוכנס לתוך המעי הגס כשמונה סנטימטרים. בדוק את האזור האנאלי ואת ספירת הצואה בפי הטבעת לפני החדרת הקטטר במעי הגס.
אם הצואה קיימת, רוקנו את פי הטבעת על ידי עיסוי האזור הרטלי. שים חומר סיכה לאורך הקטטר. לאחר מכן, הרם את פי הטבעת וסביבתו עם חומר סיכה.
הכנס את הקטטר עם חוט מדריך דרך הסוגר האנאלי החיצוני. בצע תנועות איטיות קדימה, אחורה ועגולות. המשך לבדוק את המיקום של הקטטר על ידי תום הבטן בעת החדרת הקטטר.
השלב הבא הוא צנתור vena קאווה נחות. אתה יכול לדלג על הליך זה במחקרים חנונים במעיים. נסו להרגיש את הדופק על עורק הירך וחותכים את העור לאורך של כשני סנטימטרים במקום שבו הדופק מוחשי.
לנתח את fascia והשרירים כדי לדמיין את הצרור הנוירו-וסקולרי. לאחר מכן, לנתח את וריד הירך מהחבילה הנוירו-וסקולרית. קודם העצבים, אחר כך עורק הירך ואז הוריד.
היזהר במהלך הניתוח של החבילה מאז כמה ענפים זעירים של וריד הירך עלול בקלות להיפגע. לאחר מכן לשים שתי קשירה על וריד הירך. אל תקשור את הקשרים עדיין.
לתפוס את הקצוות של קשירה פרוקסימלית עם מחזיק מחט. ואז בזהירות למשוך את הקצוות קשירה עם המחזיק כלפי מעלה כדי לסגור את החלק הפרוקסימלי של וריד. חכה עד שהווריד יתמלא בדם וקשר את הקשר הדיסטלי.
לאחר מכן, לעשות חתך קטן על הוריד בין הקשר לבין קשירה פרוקסימלית באמצעות מספריים מיקרוכירורגיים. לאחר מכן הכנס את הקטטר באמצעות פינצטה או מחט עם קצה מעוקל כפי שאנו עושים בסרטון. לנקב את וריד ולהשתמש בקצה הכפוף של המחט כמדריך לקטטר.
שחררו את הקשירה הפרוקסימלית תוך כדי החדרת הקטטר. הכנס את הקטטר במשך כשישה עד שבעה סנטימטרים בהתאם לגודל של בעל חיים כדי למקם את הקצה הפרוקסימלי של הקטטר בוונה קאווה הנחותה ממש מעל קונפולנס ורידים בהיפוי. המיקום הנכון של הקטטר צריך להיות מאושר לאחר הניסוי.
אבטחו את הקטטר בווריד הירך עם שני קשרים כירורגיים בודדים. לקשור את הקשירה הפרוקסימלית גם כן. בדוק את הפטריות של הקטטר על ידי ניסיון למשוך דם עם מזרק.
שוטפים את הקטטר עם 0.3 מיליליטר של תמיסת מלח heparinized. סגור את הפצע הכירורגי עם שתי שכבות של תפרים בודדים. עכשיו נעבור לצנתור ורידים בפורטל.
הכינו את קטטר השער. הוא מורכב ממחט, קטטר פוליאוריתן גמיש, קצה פוליאתילן גמיש של הקטטר, התקע והרצועה. השלב הראשון של ההליך הוא ביצוע לפרוטומיה קו האמצע.
לאחר הכנת שדה ההפעלה, חותכים את העור באורך מן xiphoid של עצם החזה אל הטבור. חותכים את השרירים של דופן הבטן לאורך הקו הלבן. לאחר מכן, להרחיב את החתך rostrally בצורת y כך הסחוס xiphoid הוא בין שני חתכים.
השלב הבא הוא ניתוח וריד הפורטל. ראשית, לחות את ספוגיות עם מלוחים. ואז החיצוני את cecum, המעי הגס עולה רוחבי, לולאת המעי הדק.
שים את המעיים בצד שמאל כדי לחשוף את השורש של mesentery. מכסים את המעיים עם גזה לחה עם מלוחים פיזיולוגיים כדי להגן עליהם מפני ייבוש. כדי לחשוף את וריד הפורטל לנוע בזהירות את האונות בהיפוך לצדדים או כלפי מעלה לכיוון הסרעפת עם ספוגיות לחות.
כאן אנו יכולים לראות את וריד הפורטל ואת וריד mesenteric העליון. לוקליזציה של החלק של וריד הפורטל כי הוא לא מכוסה mesentery ולהעביר את הקשירה מתחת לווריד הפורטל. כדי להגן על רקמות מפני נזק, לחות את הקשירה עם תמיסת מלח פיזיולוגית.
מהדקים במלקחיים את קצות הקשירה ומהדקים אותה בעדינות כדי לייצב את הכלי. מעבירים את החלק הארוך יותר של הקשירה של הקטטר מתחת לחלק החופשי של וריד הפורטל ומושך אותו כך הקטטר ממוקם ממש ליד וריד הפורטל. הכנס את המחט לתוך וריד mesenteric העליון שלושה מילימטרים מתחת לצומת של וריד mesenteric העליון וריד הפורטל.
החזק את המחט בזווית של 30 מעלות ולאחר הכניסה לווריד להפחית את הזווית ולקדם את המחט כמעט אופקית במקביל לווריד הפורטל לאורך של כשישה עד שבעה מילימטרים. החל טיפה אחת או שתיים של דבק רקמות במקום שבו המחט מוכנסת. הסר את ספוגיות שכיסו את הכבד.
לאחר מכן להחזיר את המעיים לחלל הבטן. הרם את המעיים בתמיסת מלח מחוממת וכסה אותו בגאזה סטרילית לחה. בדוק את הפטריות של הקטטר ולשטוף את הקטטר עם מלוחים heparinized.
דם ורדם נודם באופן ספונטני נוהר בקטטר. לאחר חמש דקות לבדוק את צבע המעיים ואת התנועות peristaltic כדי לוודא כי זרימת הדם mesenteric הנכון נשמר. בסופו של דבר, לסגור את חלל הבטן עם שלוש שכבות של תפרים החיצוני החלק הדיסטלי של הקטטר סביב הטבור.
כדי לאסוף דם מוריד הפורטל, פתח את תקע הקטטר של הפורטל ותן לדם לזרום בחופשיות. השתמש מזרק ומחט קהה ולאסוף לא יותר מ 0.7 מיליליטר של דם. שוטפים את הקטטר עם מלוחים ממופרים וסגרו את תקע הקטטר.
כאן אנו מציגים פרוטוקולי דגימת דם של פורטל למופת להערכת חטטנות במעיים. דגימות דם מן הנבוב הנבוב נחות נחוצים עבור מחקרי סיווג וספיגה בלחץ דם. כדי לאסוף דם מן vena קאווה נחיתות להמשיך בדיוק כמו כאשר לוקחים דם מן וריד הפורטל.
כאן אנו מציגים פרוטוקול דגימת דם למופת למדידת סיווג הכבד ומעקב אחר מסלול הדם הדם-כבד-מערכתי של תרכובות נבחרות. במחקרים שלנו השתמשנו מטבוליט חיידקי, טרימתילאמין כסמן של חמת. עם זאת חומרים רבים אחרים כולל סמני חרסה בכיתה ניתן להשתמש גם כן.
חיידקים שונים מטבוליטים ודרכיים עשוי לשמש גם כדי לסלול את מסלול הספיגה או סיווג במשחת. הסר את המדריך ולנפח את הבלון באמצעות נפח נאות של מים סטריליים בדרך כלל מיליליטר אחד אבל לבדוק למעשה גודל בלון לפני הכניסה. קוטר הבלון לא יעלה על סנטימטר אחד.
מניחים את ראש החולדה למטה כדי למזער את הסיכון של הזרימה של הפתרון מנוהל מן המעי הגס. מנהלים באיטיות את החומר שנבדק באמצעות יציאת ניקוז וצנתר המעי הגס. השתמשנו טרימתילאמין במינון של 100 מיליגרם לכל משקל גוף קילוגרם מומס ב 0.7 מיליליטר של מלוחים.
לאחר עשר דקות לנפח את בלון הקטטר. סיווג ההפטי הבין כמו מיצוי בהיפול עשוי לבוא לידי ביטוי על ידי ההבדל בין ריכוז הדם פורטל ריכוז דם וינה קאווה נחות או על ידי היחס של וינה קאווה נחות וריכוז הדם פורטל. מדדנו בהצלחה את החמת מחסום המעיים ואת סיווג הכבד של טרימתילאמין בחולדות.
להלן התוצאות הייצוגיות המוכיחות כי חולדות עם יתר לחץ דם הגדילו את חדירות המעי הגס ל- TMA בהשוואה לחולדות נורמוטנסיביות. במחקר אחר חקרנו אם צריכת מלח גבוהה משפיעה על חמת מחסום המעיים-דם וסיווג הכבד של טרימתילאמין. ניהול תוך-תאי של טרימתילאמין הפיק עלייה משמעותית בריכוז TMA בדם הפורטל.
גודל הגידול וסיווג ההיפטר היו דומים בין הקבוצות. עקבנו גם אחר מסלול הספיגה של חומצות שומן קצרות שרשרת. מדדנו את הריכוז בצואה, דם פורטל ודם היקפי.
בסרטון זה תיארנו פרוטוקול מקיף הכולל מדידה ישירה של החבירה למחסום דם המעיים ב-vivo, שבניגוד לשיטות נפוצות, אינו מושפע מתפקודי כבד וכליות, מדידת סיווג כבד ושלישית, הערכת מסלול הספיגה של תרכובות אקסוגניים. הטכניקה המוצגת עשויה להיות מותאמת למטרות ניסיוניות אחרות. לדוגמה, מדידת לחץ דם פורטל או ניהול סמים ישירות לווריד הפורטל.
