מדידת ריכוז יון בשכבת הגבול Unstirred עם תיקון פתוח-קלאמפ פיפטה: השלכות בשליטה של תעלות יונים על ידי נוזל לזרום

הגשה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האלקטרו-פיזיולוגי, כגון זרימת הנוזלים רק בתקנות תעלות היונים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה להעריך את ריכוז היונים בפועל בשכבת הגבול הלא מרושתת של משטח הממברנה לפרשנות נתונים הקשורה לוויסות זרימת הנוזלים של תעלות היון. כדי להתחיל בהליך זה, לכופף את צינור נימי זכוכית ירה כדי ליצור צורת U.

הקוטר הפנימי של נימי צריך להיות גדול מספיק להפחתת התנגדות הסדרה בעת הקלטת זרמי יון גדולים. לאחר מכן, להמיס שלושה גרם של אגרוז ב 100 מיליליטר של אשלגן כלורי שלושה טוחנות, ולהנח אותו על צלחת חמה בין 90 ל 100 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, לטעון את הגשר עם אשלגן כלורי agarose, על ידי טבילת גשר הזכוכית בתמיסה.

שמור את זה לילה בטמפרטורת החדר עבור agarose להגדיר ולהקשיח. למחרת, חפרו בזהירות את גשר הזכוכית הטעון באשלגן כלורי ממלח אגרוז מוקשח. אחסן את הגשר בבקבוק רחב צוואר של אשלגן כלורי בעל שלושה טוחנות במקרר.

בהליך זה, מניחים מיכל טעון בתמיסת רחצה, מעל תא המהדק טלאי. לאחר מכן, מלאו את תא הטלאי בתסכת הרחצה על ידי יניקת הצינור. כדי לעצור את זרימת הנוזלים, גזור את הצינור בצד המיכל, כדי לחסום את זרימת הנוזלים.

ואז קליפ הצינור בצד היניקה כדי לעצור את היניקה באותו זמן. זה מצב הבקרה נייח. כדי להחיל כוח הגזיר זרימת נוזלים, לפתוח את שני הצינורות על המיכל ואת צדי היניקה באותו זמן.

לפני או אחרי החלת כוח הגזיר של זרימת הנוזלים על התא, חשב את קצב הזרימה במיליליטר לדקה על ידי מדידת הירידה בנפח הנוזלים לאורך זמן נתון. כדי למדוד שינויים בפוטנציאל צומת מתכת נוזלית, להכין מלוחים פיזיולוגיים-מלח נורמלי עבור תא הרחצה, ולהשוות אותם בהיעדר נוכחות של גשר אגר אשלגן כלורי. לאחר מכן, מניחים פיפטה טלאי המכילה פתרון אשלגן כלורי שלושה טוחנות בתא, כדי למזער את המעבר הפוטנציאלי צומת בין פיפטה פתרונות רחצה.

לאחר מכן הגדר את מגבר מלחצי המתח למצב המהדק הנוכחי. לאחר ביטול פוטנציאל ההיסט הראשוני, למדוד את השינויים במתח הנגרמים על ידי שינוי שיעורי הזרימה. כדי לוודא שהשינויים במתח הם פוטנציאל צומת מתכת נוזלית, בחן מחדש את השפעת זרימת הנוזלים על פוטנציאל הצומת, תוך שימוש בגשר המלח אגרוז בין ת פתרון האמבטיה לאלקטרודה הייחוס.

עם תוצאות השינויים בפוטנציאל צומת מתכת נוזלית, לצייר את יחסי קצב זרימה פוטנציאליים פונקציה, ולהעריך את הערך הרווי של שינוי פוטנציאלי צומת על ידי קצב זרימה נוזלים supra. לאחר מכן, לשנות את ריכוז הכלוריד בנוזל הרחצה, ולצייר את הקשר ריכוז כלוריד פוטנציאלי צומת. שים לב כי קצב הנוזלים צריך להיות קבוע, וגוה מספיק כדי למנוע את הירידה של ריכוז כלוריד לזה של אלקטרודה התייחסות כלוריד כסף כסף סמוך.

משתי עקומות היחסים, להעריך את השינויים בריכוז כלוריד מן השינוי הפוטנציאלי צומת נמדד. זרמי VDCC-L נרשמו במוציטים העורקים המזנטיים המפוזרים באנזימטיות של חולדות, עם הקלטת מהדק טלאי מחוררת nystatin. עם גשר אשלגן כלורי, ניתן למזער את פוטנציאל הצומת בין אלקטרודה הייחוס לפתרונות הרחצה, וזרימת הנוזלים הגדילה את המתח של זרם VDCC-L באופן עצמאי.

עם זאת, כאשר האלקטרודה התייחסות כלוריד כסף כסף היה מחובר ישירות לנוזל הרחצה, ללא גשר אשלגן כלורי אגרוז, הקשר IV בנוכחות זרימת נוזלים עבר ימינה, לעומת זה של זרמי VDCC-L במצב סטטי. הגידול הנגרמת על ידי זרימת נוזלים של זרמי קר 2.1, אשר נרשמו בתאי לוקמיה בסופילית עכברוש עם גשר אגרוז, ניתן להסביר על ידי אפקט השכבה unstirred. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים באלקטרו-פיזיולוגיה.

אז זה לוויסות זרימת הנוזלים בזרימה של ערוץ היונים. במונחים של תופעות אלקטרו-כימיות, בשכבת הגבול הלא מרוסן על פני קרום התא.