תודה ד ר אלן או Perantoni (CDBL NCI NIH) לתמיכה הגשת כתב היד הזה. אני גם מודה ד ר מייקל הול (CDBL NCI NIH) ו- Nirmala שארמה (CDBL NCI NIH) עבור עריכת כתב היד הזה. אני אסיר תודה עד לאי טהאנג (SAIC) על גידול עכבר מעולה שלו. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות, מכון הסרטן הלאומי ומרכז לחקר הסרטן.

עכברים (Wnt5a flox / flox עכברים (Wnt5a tm1.1Tpy) וקו Dll1Cre, דגם העכבר UVJO) 7 היו מנוהלים על פי הנחיות NIH טיפול ושימוש של חיות מעבדה למד תחת פרוטוקול שאושרו על ידי NCI-פרדריק חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.
 1. הכנה של מתילן כחול צבע פתרון <ol><li>למדוד אבקה וורודה 0.1 g.</li>
	<li>לפזר את מתילן כחול 10 מ ל תמיסת מלח או 1 x buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) לחלוטין על-ידי vortexing.</li>
	<li>סינון הפתרון מתילן כחול 10 מ"ג/מ"ל עם מסנן מזרק (גודל הנקבוביות ממברנה 0.45µm) כדי למנוע סתימת במהלך ההזרקה.</li>
	<li>להרכיב הקרקפת סטרילי הווריד סט (27GX3/4 &#8243;) עם מזרק חד פעמיות 3 מ"ל, למלא המזרק עם 3 מ ל מסונן פתרון מתילן כחול. 
	הערה: כדי למנוע לחץ הידרוסטטי, לצבוע לאחר מכן זרימה, מקם קצה המחט מעל המזרק מלא עם פתרון מתילן כחול.</li>
</ol> 2. דיסקציה של העוברים לפני הלידה <ol><li>נקי לנתח מספריים וחדים עם אתנול 70%-</li>
	<li>כדי לאסוף את העוברים הלידה E18.5 או E19.5, המתת חסד עכברים בהריון הראשון באמצעות אינהלציה 2 CO ולאחר מכן לבצע פריקה צוואר הרחם בהתאם להנחיות NIH. 
	הערה: העכבר נקבה בהריון בדרך כלל יולדת ההתחלתי הוא E18.5, לעומת זאת, הכליות גדולות הן טיפול קל יותר. לכן, הכליות-E19.5 קרוב יותר ללידה הן קל יותר לבצע ניתוח זה. עם זאת, כלבלבים עם חסימות בדרכי השתן הדו-צדדיים למות לאחר הלידה. בהתאם המאפיינים של עכברים ניסיוני, יום/שעה אוסף המתאים מדעית ייקבע.</li>
	<li>תרסיס אתנול 70% על פני הבטן הגחון ולאחר מכן פתח את חלל הבטן ventrally באמצעות מלקחיים ומספריים ויבתר.</li>
	<li>הרם הרחם כולו, להפריד אותו מן הגוף על-ידי חיתוך עם לנתח מספריים-העצות של הקרניים הרחם.</li>
	<li>לשטוף את הרחם כולו עם 1 x PBS בצלחת פטרי.</li>
	<li>לחתוך את הרחם segmentally עם מספריים לנתח ולהסיר את היפרדות רותמי עם לנתח מלקחיים לחשוף את העוברים בתוך שקי חלמון.</li>
	<li>להסיר את שק החלמון תחילה ולאחר מכן להסיר את קרום מי השפיר עם לנתח מלקחיים כדי לשחרר את העוברים הלידה.</li>
	<li>לערוף העובר עם לנתח מספריים. . תנגב את עודף דם עם תחבושות גזה סטרילי. להפיל את העובר עם פני השטח הגחון שלו למעלה על מיקרוסקופ ויבתר מצויד with a מצלמה דיגיטלית עבור הדמיה. לאסוף את זנבו עבור genotyping במידת הצורך. 
	הערה: לבצע זריקות העובר אחת בכל פעם.</li>
	<li>פתח היטב את חלל הבטן של העובר עם מלקחיים על ידי קריעת העור. לאחר מכן, הסר בזהירות עודף איברים ורקמות כגון הכבד, הקיבה, המעי עם מלקחיים על-ידי גזירתם או מוציאה אותם לחשוף את הכליות, ureters את שלפוחית השתן הממוקמים dorsally ( איור 1 א'). לספוג עודפי הדם של העובר ביתור עם תחבושות גזה סטרילי, במידת הצורך. 
	הערה: עודף דם מפריע זיהוי אגן הכליה על הזרקת צבע.</li>
</ol> 3. הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה ואת ניטור לצבוע לזרום <ol><li>בועות הסר המחט, אבובים על ידי סילוק מתילן כחול פתרון מהקצה המחט על ידי לחץ הידרוסטטי. להרים את המזרק המכיל את הפתרון לצבוע מעל הרמה של קצה המחט כדי להתחיל זרימת ולאחר מכן להנמיך את המזרק כדי לעצור את זרימת.</li>
	<li>מכניס את המחט אגן הכליה ליד השופכן צינתור, דואגת שלא להפריע את זה מהרגע ששמים. לבצע הזרקת צבע לתוך כליה כדי לקבוע החסימה בדרכי השתן שלו. 
	הערה: בצע לצבוע הזרקה לתוך כל כליה חריג 7 הראשון על-ידי ביצוע באופן זהה כדי לקבוע החסימה בדרכי השתן שלו.</li>
	<li>הרם את המזרק עד כ-20 ס מ לספק לחץ הידרוסטטי. ולתת µL 15 - 60 µL של הזרם פתרון לצבוע. קצב הזרימה יהיה 3 µL/s אם המזרק הוא הרים את הגובה הזה מעל העובר.</li>
	<li>לנטר את הצבע הכחול של לצבוע מתחיל הראשון של אגן הכליה, אזי באורך של השופכן, ולבסוף ב לומן שלפוחית השתן- 
	הערה: זה לוקח בערך 5 s לראות צבע לצבוע חלש להגיח בתוך לומן שלפוחית השתן אם השופכן הוכנס כהלכה לתוך שלפוחית השתן. אפשר לצבוע לצבור חסומים באתר כ- 15 ש' אם אין צבע לצבוע מופיע לומן שלפוחית השתן.</li>
	<li>למקם את המזרק עד להפסיק לצבוע זרימה, הסר את המחט מן הכליה.</li>
	<li>לקחת תמונות של הכליה, השופכן לשלפוחית השתן לעקוב אחריו עם צבע פתרון באמצעות מצלמת ה והדמיה התוכנית מחוברים stereomicroscope.</li>
	<li>להפוך רשומה של hydronephrosis של הכליה, hydroureter את המיקום הסופי של הפתרון לצבוע במחברת המעבדה.</li>
	<li>לבצע הזרקה של הכליה contralateral כפי שמתואר סעיפים 3.1) ל 3.5) ולאפשר זרימה צבען בערך 20 s בסה כ. 
	הערה: לומן שלפוחית השתן יהיה מלא עם פתרון לצבוע, המצוין על-ידי צבע כחול חזק, אם השופכן הוכנס כהלכה לתוך לומן שלפוחית השתן. לאחר הערכה של חסימת צומת דרכי השתן, את ureters ואת שלפוחית השתן יכול להיות קבוע על חלוקתה.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rasouly, H. M., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lower+urinary+tract+development+and+disease.">Lower urinary tract development and disease.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).</li><li>Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-Box+Genes+in+the+Kidney+and+Urinary+Tract.">T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract.</a> Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).</li><li>Bohnenpoll, T., Kispert, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureter+growth+and+differentiation.">Ureter growth and differentiation.</a> Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).</li><li>Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic,+environmental,+and+epigenetic+factors+involved+in+CAKUT.">Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).</li><li>Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+canonical+Smad+signaling+in+ureteral+and+bladder+mesenchyme+causes+ureteropelvic+junction+obstruction.">Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction.</a> J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).</li><li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Id2+haploinsufficiency+in+mice+leads+to+congenital+hydronephrosis+resembling+that+in+humans.">Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans.</a> Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).</li><li>Yun, K., Perantoni, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydronephrosis+in+the+Wnt5a-ablated+kidney+is+caused+by+an+abnormal+ureter-bladder+connection.">Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection.</a> Differentiation. 94, 1-7 (2017).</li><li>Uetani, N., Bouchard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plumbing+in+the+embryo:+developmental+defects+of+the+urinary+tracts.">Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts.</a> Clin Genet. 75, 307-317 (2009).</li><li>Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+urinary+tract+defects+in+mice:+methods+to+detect+the+presence+of+vesicoureteric+reflux+and+urinary+tract+obstruction.">Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction.</a> Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).</li><li>Weiss, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephric+duct+insertion+requires+EphA4/EphA7+signaling+from+the+pericloacal+mesenchyme.">Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme.</a> Development. 141, 3420-3430 (2014).</li></ol>

המחבר אין לחשוף.

העכבר כליות פונקציונלי החל E16.5, מבחן הזרקת צבע אפשרי תיאורטית, מנקודת זמן זו. עם זאת, הכליה הוא קטן מדי כדי להיות מוזרק עם הפתרון לצבוע, פנוטיפים hydronephrosis ו hydroureter שאינם קיימים בבירור מאז פנוטיפים אלה הם השפעה משנית של שתן בנוי עקב שתן נורמלי תחבורה. פנוטיפים אלה, מן המכשולים כגון UPJO או UVJO, ניכרות בשעה E18.5 על-ידי הכליות נפוחה ureters. גדול יותר הכליות של העוברים E19.5 או הגורים neonatal קל יותר לתמרן יותר מאלה של עוברי-E18.5 או צעירים. עם זאת, כלבלבים עם חסימות בדרכי השתן הדו-צדדיים למות לאחר הלידה. לכן, לבצע ניסויים כדי לאמת CAKUT פנוטיפים בבחירת כראוי עוברי הלידה או הגורים בהתאם למאפייני העכבר ניסיוני.
לנתח בזהירות כדי לשמור על מערכת השתן תקין לפני ביצוע הזרקת צבע כדי לבחון את פוטנציאל פגמים. זה חשוב בעיקרו של דבר חריג hydronephrotic הכליות, ureters, אשר הם מאוד נפוחה ולהיפגע בקלות במהלך הסרת הרקמה הנוספת כדי לחשוף את הכליות ואת מכסים השתן. פגיעה באיברים אלה במהלך ניתוח תמנע את נחישות מלא של פגמים אמיתיים. לדוגמה, איור 2 מציג ברורים התרחבות שופכן, אך לדליפת לצבוע נכשל להראות הטעם מסוף hydroureter דיסטלי.
תמיד להיות בטוח להסיר בועות אוויר לאורך צינור והן את המחט לפני זריקה, כל הבועות האלה יחסום זרימת צבע מתאים. לאחר ניתוח מוצלח, השלב הקריטי לבחון את החסימה בדרכי השתן היא ההכנסה של קצה המחט לתוך האגן הכליה. החדרת המחט לתוך החצי העליון של הכליות, ליד השופכן צינתור, שימושי לכוון את מחט לתוך האגן הכליה. קצה המחט יצביע לכיוון השופכן הפרוקסימלית. מאז כלי הדם כליות הינם ממוקמים בסמוך השופכן צינתור, לצבוע עשוי לזרום לאורך כלי הדם כליות. אלא אם כן מחט יצביע לכיוון השופכן הפרוקסימלית. במקרה זה, קצה המחט צריך להיות מותאם באגן הכליה לכיוון השופכן הפרוקסימלית. עוד יותר, המחט עשוי לעבור דרך הכליה אם הוספת עמוק מדי, גורם לצבוע לדלוף מתוך הכליה, לתוך חלל הגוף. זהירות על ההכנסה של קצה המחט לתוך קצה המחט בתוך אגן הכליה אגן הכליה וניטור יכול לעזור למנוע כשל זה. לפעמים, המחט להיחסם על ידי רקמת כליה במהלך ההזרקה אם לא מוכנסים לתוך האגן הכליה. במקרה זה, להסיר את הרקמה של המחט, אפס זרימה צבע על-ידי הפעלה מחדש של הלחץ ההידרוסטטי ולנתב את מחט לכיוון אגן הכליה. בנוסף, ייתכן פנוטיפים המשויך CAKUT חד-צדדית או דו-צדדית. לכן, ודא ההזרקה מתבצעת בנפרד עבור מערכות השתן ישר ושמאלה. בצורה אופטימלית, לבצע את הזריקה הראשונה עם כליה ללא ספק חריג כדי לוודא אם UVJO היא חד צדדית.
תמונה מיד לאחר במבחן הזרקה מאז לצבוע עובר אגן הכליה וגרגר במהירות. קשה לראות את הצבע במהלך הדימות של שופכן נורמלי כי שופכן נורמלי הוא צינור דק, למרות צבע זרימת ניתן לנטר תחת המיקרוסקופ ויבתר. כמו חלופית מתילן כחול, ירוק ב- PBS 1 x 1% יכול לשמש גם ו יופיע בצבע ירוק כהה9. בנוסף הזרקת צבע, סעיפים היסטולוגית של הכליות, ureters בעקבות H &#38; E מכתים יאשר את הליקויים בתוך הכליות, ureters. גם, הדמיה של מקטעים עם עיתונאי ספציפי שופכן הוא דרך נוספת כדי לאשר UVJO7. עם זאת, מקטעים אלה אמורים להיות שלמים, חלוקתה טורי נחוץ למנוע תוצאות חיוביות שגויות. לעומת ניתוחים מסורתי המבוסס על סעיף של מערכות השתן, פרוטוקול זה הזרקת צבע היא דרך מיידית כדי לבחון את התקינות של הכליה, שופכן פטנטים וכדי להמחיש מכשולים כגון UPJO או UVJO.
פרוטוקול זה מספק פשוטה והמחש שיטה פשוטה toquickly בדרכי השתן מבנה בהתפתחות מאוחרת שלב העכבר, המאפשר הניתוח של דרכי השתן פיתוח. השיטה המתוארת כאן יכול לשמש כדי להעריך מוטציות הגורמות מולדים בדרכי השתן התפתחותית, כאמצעי זיהוי שינויים בהתפתחות ההבשלה או שופכן בדרכי השתן.

מערכת השתן מורכב זוג של הכליות ו ureters ו נפוץ שלפוחית השתן לשופכה. הפונקציה העיקרית של מערכת השתן היא לשמור על הומאוסטזיס בגוף על-ידי ניהול יתרת אלקטרוליט והמים של הדם. הכליות לסנן את הדם שליטה אלקטרוליט ריכוזים, מאזן חומצה בסיס, לייצר שתן כדי במעים עודף מים ופסולת כולל מומסים בגבול מטבוליטים. השתן מועבר מכן וגרגר מ אגן הכליה עד bladderin באופן חד כיווני איפה זה מאוחסן, בסופו של דבר מסולק דרך השופכה1.
Ureters הם צינורות ישרים שמקורו התעלה nephric. לאחר להנץ מן התעלה nephric ביום עובריים 10.5 (E10.5) העכבר, הקנה שופכן לתרמיל, מבדיל בין לתוך מבנה מרובה שכבות בשם urothelium אשר הוא אטום בין עכבר, E12.5 ו- E16.5. התאים mesenchymal סביב הקנה שופכן מובדלים גם לתוך שלוש שכבות המורכבת תאי סטרומה הפנימי, תאי השריר החלק העבה ביניים ו fibroblasts adventitial החיצוני. Ureteral גלי ממברנות ייזום באגן הכליה מופצים דרך השכבה שריר חלק של הקיר שופכן שלפוחית השתן להובלת שתן2,3, אשר מיוצר החל מ- E16.5 העכבר1.
מולדים של כליות ודרכי השתן (CAKUT) הם בין מחלות גנטיות בתדירות הגבוהה ביותר, נוכח סביב 1% של עוברים אנושיים1,4, המורכבת מגוון פנוטיפים כולל hydronephrosis ו- hydroureter. הצטברות חריגה של שתן בתוצאות שופכן וכליות במבנה כליה, hydroureter hydronephrotic. אחד סיבת היווצרות hydronephrosis ו/או hydroureter היא חסימה של דרכי השתן. חסימת צומת Ureteropelvic (UPJO) נגרמת על ידי זרימת השתן aberrant עקב סתימה בין השופכן הפרוקסימלית של אגן הכליה, וכתוצאה מכך hydronephrosis וצמצום hydroureter הפרוקסימלית אפוזיציה או מתקפלים מתמיד5, 6. בנוסף, חוץ רחמי ההוספה של השופכן דיסטלי לתוך הקיר בשלפוחית השתן או במערכת הרבייה נקרא חסימה בצומת ureterovesical (UVJO). UVJO יכול גם לגרום hydronephrosis ו hydromegaureter היווצרות7,8. פגם צומת (UVJ) ureterovesical נוסף הוא vesicoureteric ריפלוקס (VUR). VUR מאופיין על ידי זרימת השתן רטרוגרדית משלפוחית לכיוון הכליה-UVJ. בהשוואה ל- UVJO, העוברים הלידה עם VUR בפירוש מציג של כליות hydronephrotic נפוחה או hydroureter חמורה פנוטיפ9.
העכבר מעבדה, זרימת השתן יכול להיבדק על ידי הזרקה של צבע, כגון כחול מתילן, לתוך אגן הכליה9. הפתרון injectedmethylene הכחול יהיה להתחקות אחר מסלול שתן מן האגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן. Hydronephrosis ניתן לזהות על ידי הרחבה של לצבוע בתוך הכליה. UPJO ניתן יהיה מזוהה כמו סתימה של צבען זורם השופכן צינתור עם אגן הכליה נפוחה5. כל התרחבות של השופכן שצוין על-ידי קוטר המוגדלות מדגים דוגמה hydroureter. לבסוף, הצטברות צבע לקיר שלפוחית השתן או באתר של מערכת הרבייה מציינת UVJO עם כליה hydronephrotic נפוחה, מורחבים7,hydromegaureter10. כדי לזהות VUR, הפתרון לצבוע מוזרק לתוך שלפוחית השתן, זרימה רטרוגרדית עוקבות מנוטר ב כליות9.
כאן מוצג עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה העובר הלידה פרוטוקול. פרוטוקול זה מאפשר את העקיבה של זרימת השתן מ אגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן ומוודא פוטנציאליים חסימות צומת דרכי השתן כגון UPJO או UVJO.

<table width="786">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:295px;height:21px;">Methylene blue</td>
			<td style="width:197px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:127px;">M9140</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:295px;height:42px;">Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML</td>
			<td style="width:197px;">Fisherscientific</td>
			<td>50-983-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:295px;height:42px;">3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:295px;height:42px;">Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane</td>
			<td style="width:197px;">Pall corporation</td>
			<td style="width:127px;">4614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="width:295px;height:42px;">Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4&#34; 12&#34;&#160;</td>
			<td>EXELINT</td>
			<td style="width:127px;">26709</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delicate Operating Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:295px;height:21px;">Micro Dissecting Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:295px;height:21px;">Dumont Tweezers; Pattern #5</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:295px;height:21px;">BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2&#34;</td>
			<td style="width:197px;">BD</td>
			<td style="width:127px;">305106</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing urinary tract junction obstruction defects by methylene blue dye injection

פגמים חסימה בדרכי השתן צומת הם מולדים גרימת hydronephrosis ו- hydroureter. פגמים חסימה בדרכי השתן מאתר צומת יכול להיות מוערך על ידי מעקב אחר זרימת לצבוע מתילן כחול בתוך מערכת השתן. צבע כחול מתילן מוזרק לתוך אגן הכליה הכליות עובריים הלידה ונשאר צבע זרימת להשגחה של אגן הכליה הכליה וגרגר ו לתוך לומן שלפוחית השתן לאחר הפעלת לחץ הידרוסטטי. צבע הצטברות יהיה ניכר לומן שלפוחית השתן בדרכי השתן הלידה הרגילה, אך מוגבל בין אגן הכליה את נקודת הסיום של שופכן נורמלי, אם התרחשה חסימות בדרכי השתן. שיטה זו מקלה על האישור של חסימות בדרכי השתן צומת והדמיה של hydronephrosis ו- hydroureter. כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה לאשר חסימות בדרכי השתן צומת.

הכליות, מערכת השתן התחתונה ממוקמים הגבי לאיברים הפנימיים ביותר אחרים כגון הכבד, המעי. לאחר הסרת האלו לאיברים פנימיים אחרים, הם זוג כליות ואת ureters לו שלפוחית שתן בודדת גלוי (איור 1 א'). על ניתוח מוצלח, לצבוע מוזרק את אגן הכליה יזרום מן הכליה לתוך שלפוחית השתן דרך השופכן. אגן הכליה הוא החלק מורחבים דמוי משפך הפרוקסימלית של השופכן בכליה. לכן הנקודה הזרקת צבע הוא ליד השופכן proximal גלוי מחובר עם הכליה כמצוין עם חצים שחורים (איור 1B-ג 1). לאחר הזרקת מתילן כחול צבע פתרון לתוך כליה אחת, לצבוע זורם אגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן וכתוצאה מכך צבע כחול גלוי לומן שופכן ושלפוחית, אם חסימות בדרכי השתן אינם קיימים (איור 1B ). הפתרון לצבוע בדרך כלל ב שופכן נורמלי מהר עוד לפני הדמיה ונעלם צבע לצבוע השופכן חלש בגלל השופכן נורמלי הוא צינורית דקה. עם זאת, ניתן לצפות צבע זרימת השופכן עם מיקרוסקופ ויבתר. צבע כחול חזק לומן שלפוחית השתן מופיע כתוצאה של זרם ארוך של בערך 20 s בסך הכל לאחר הזרקה של שתי הכליות עם הפתרון צבען (איור 1C). צבע הצטברות בשלפוחית לאחר הזריקה contralateral מציין כי מערכת השתן השנייה אין חסימה בצומת דרכי השתן.
סביר להזריק של הכליה חריגה מן הסתם קודם לאשר כל הפרעה צומת דרכי השתן. Hydronephrotic לא תקין כליות ניתן לזהות על ידי גודל גדול או משטח דק שקוף עם אגן הכליה broadened שלהם. דוגמה hydronephrotic נפוחה וכליות hydroureter מורחבים באופן חריג מתוארים איור2 א. Hydroureter מורחבים התוצאה בדרך כלל פריט חזותי חזק יותר מכיוון האחסון המורחב שלו שומר על פתרון דיי הרבה יותר מאשר שופכן רגיל, דק. אם הכליות ו/או את ureters ניזוקו במהלך ניתוח, הבחינה של דלקת בדרכי השתן צומת חסימות בלתי אפשרי כי לצבוע תדלוף החוצה aberrantly באתר פגום. לדוגמה, hydroureter חריג איור 2 א נפגע בחלקו המרכזי, לכן, המיקום הסופי של הפתרון צבע לא ברור, UVJO אין אפשרות לאמת למרות העדר לצבוע ב לומן שלפוחית השתן (איור 2 א). עם זאת, זו מערכת השתן הלידה עם hydroureter מורחבים בכליה hydronephrotic נפוחה ייתכן UVJO השופכן מורחב לאורכו, הכליה במובהק נפוחה. מערכת השתן contralateral נורמלית כמו זה של שופכן דק והוא לצבוע לאחר מכן נכנס לומן שלפוחית השתן (איור 2B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56247/56247fig1.jpg"> 
איור 1. דוגמאות של הזרקת מתילן כחול צבע לתוך מערכת השתן נורמלי. (א) תמונה אופיינית של מערכת השתן של העובר הלידה (E19.5) לאחר הסרת עודפי רקמת. שתי כליות ureters שני, לו שלפוחית שתן נראים עם איברי הרבייה, כאן האשכים (B) דוגמה של הזרקת צבע לתוך כליה נורמלי. ניתן לראות נקודת זריקה לתוך אגן הכליה הכליה (חץ שחור). צבע לצבוע חלש מוצגת ב השופכן ואת לומן שלפוחית השתן לאחר מתן אפשרות לצבוע לזרום עבור 5 ס' (ג) לצבוע ההצטברות לומן שלפוחית השתן לאחר הזרקה של שתי הכליות נורמלי. הצבע הופך חזק מהצטברות הפתרון לצבוע ב לומן שלפוחית השתן לאחר מתן אפשרות לצבוע לזרום 20 s. אגן הכליה מוצגת גם עם צבע לצבוע חלש בכליה. ב': שלפוחית השתן, k: כליות, testis חודו, שופכן u:... <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56247/56247fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56247/56247fig2.jpg"> 
באיור 2. דוגמאות של מתילן כחול לצבוע הזרקה לתוך מערכת השתן עם חד צדדית hydroureter. (א) דוגמה של הזרקת צבע לתוך מערכת השתן עם hydroureter בכליה hydronephrotic של גור הנשי neonatal בתזרים צבען של 15 s. הכליה hydronephrotic הוא ללא ספק גדול יותר contralateral הכליה. וגרגר המתאים הוא מורחבים צבע צבען הוא בחריפות לזיהוי אבל hydroureter פגום בבירור כפי שנצפה על ידי דולף פתרון צבע לתוך חלל הגוף. (B) הזרקה צבע לתוך הכליה contralateral של מערכת השתן עם hydroureter חד צדדית בתזרים צבען של ס' 20 Injected פתרון צבע לתוך הכליה רגיל מצטבר לומן שלפוחית השתן המאשרת כי חריגות היא חד צדדית. ב': שלפוחית השתן, HK: hydronephrotic הכליה, HU: hydroureter k: כליות, u: שופכן, Ut: קרן הרחם. <a href="//ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/56247/56247fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection at JoVE.com

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה מקלה את הערכת ליקויי חסימה בדרכי השתן צומת במהלך התפתחות דלקת בדרכי השתן עובריים בעכבר. . הנה, עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה פרוטוקול המתואר.

הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

assessing-urinary-tract-junction-obstruction-defects-methylene-blue

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

15.6K Views.  National Institutes of Health. הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה מקלה את הערכת ליקויי חסימה בדרכי השתן צומת במהלך התפתחות דלקת בדרכי השתן עובריים בעכבר. . הנה, עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה פרוטוקול המתואר.

Video: Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale. This complex process requires the coordinated activity of many pre- and post-synaptic proteins to ensure appropriate synaptic connectivity, conduction of electrical signals, targeting and priming of secretory vesicles, calcium sensing, vesicle fusion, localization and function of postsynaptic receptors and finally, recycling mechanisms. As neuroscientists it is our goal to elucidate which proteins function in each of these steps and understand their mechanisms of action. Electrophysiological recordings from synapses provide a quantifiable read out of the underlying electrical events that occur during synaptic transmission. By combining this technique with the powerful array of molecular and genetic tools available to manipulate synaptic proteins in C. elegans, we can analyze the resulting functional changes in synaptic transmission. 
The C. elegans NMJs formed between motor neurons and body wall muscles control locomotion, therefore, mutants with uncoordinated locomotory phenotypes (known as unc s) often perturb synaptic transmission at these synapses 1. Since unc mutants are maintained on a rich supply of a bacterial food source, they remain viable as long as they retain some pharyngeal pumping ability to ingest food. This, together with the fact that C. elegans exist as hermaphrodites, allows them to pass on mutant progeny without the need for elaborate mating behaviors. These attributes, coupled with our recent ability to record from the worms NMJs 2,3,7 make this an excellent model organism in which to address precisely how unc mutants impact neurotransmission. 
The dissection method involves immobilizing adult worms using a cyanoacrylic glue in order to make an incision in the worm cuticle exposing the NMJs. Since C. elegans adults are only 1 mm in length the dissection is performed with the use of a dissecting microscope and requires excellent hand-eye coordination. NMJ recordings are made by whole-cell voltage clamping individual body wall muscle cells and neurotransmitter release can be evoked using a variety of stimulation protocols including electrical stimulation, light-activated channel-rhodopsin-mediated depolarization 4 and hyperosmotic saline, all of which will be briefly described.

Application of electrophysiology to accessible synapses provides a quantifiable measure of synaptic activity, useful in analyzing synaptic mutants. This article describes a dissection method used to expose the neuromuscular junctions (NMJ) of Caenorhabditis elegans (C. elegans) and briefly discusses some of the uses to which this preparation can be applied.

הביתור, הקלטה מ צומת C. elegans Neuromuscular

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved cavities within the brain that are filled with cerebrospinal fluid.  In zebrafish, after neural tube formation, the neuroepithelium undergoes a series of constrictions and folds while it fills with fluid resulting in brain ventricle formation.  In order to understand the process of ventricle formation, and the neuroepithelial shape changes that occur at the same time, we needed a way to visualize the ventricle space in comparison to the brain tissue.  However, the nature of transparent zebrafish embryos makes it difficult to differentiate the tissue from the ventricle space.  Therefore, we developed a brain ventricle injection technique where the ventricle space is filled with a fluorescent dye and imaged by brightfield and fluorescent microscopy.  The brightfield and the fluorescent images are then processed and superimposed in Photoshop.  This technique allows for visualization of the ventricle space with the fluorescent dye, in comparison to the shape of the neuroepithelium in the brightfield image.  Brain ventricle injection in zebrafish can be employed from 18 hours post fertilization through early larval stages.  We have used this technique extensively in our studies of brain ventricle formation and morphogenesis as well as in characterizing brain morphogenesis mutants (1-3).

After neural tube formation, the neuroepithelium constricts and folds while the tube fills with embryonic cerebrospinal fluid (eCSF) to form the embryonic brain ventricles. We developed this ventricle injection technique to better visualize the fluid filled space in contrast to the neuroepithelial shape in a live embryo.

החדר דג הזברה המוח Injection

Proper brain ventricle formation during embryonic brain development is required for normal brain function.  Brain ventricles are the highly conserved ...

Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and functional tissue. Matrix associated stem cell implants (MASI) aim to regenerate cartilage defects due to arthritic or traumatic joint injuries. Adult mesenchymal stem cells (MSCs) have the ability to differentiate into cells of the chondrogenic lineage and have shown promising results for cell-based articular cartilage repair technologies. Autologous MSCs can be isolated from a variety of tissues, can be expanded in cell cultures without losing their differentiation potential, and have demonstrated chondrogenic differentiation in vitro and in vivo1, 2.
In order to provide local retention and viability of transplanted MSCs in cartilage defects, a scaffold is needed, which also supports subsequent differentiation and proliferation. The architecture of the scaffold guides tissue formation and permits the extracellular matrix, produced by the stem cells, to expand. Previous investigations have shown that a 2% agarose scaffold may support the development of stable hyaline cartilage and does not induce immune responses3.
Long term retention of transplanted stem cells in MASI is critical for cartilage regeneration. Labeling of MSCs with iron oxide nanoparticles allows for long-term in vivo tracking with non-invasive MR imaging techniques4.
This presentation will demonstrate techniques for labeling MSCs with iron oxide nanoparticles, the generation of cell-agarose constructs and implantation of these constructs into cartilage defects. The labeled constructs can be tracked non-invasively with MR-Imaging.

Goal of the presentation is to demonstrate a highly reproducible method to generate matrix associated stem cell implants in cartilage defects, which can be visualized with MR imaging. Stem cells are labeled with FDA-approved Ferumoxides, mixed with agarose, implanted into cartilage defects and imaged with a 7T MR scanner.

השרשה של Ferumoxides תווית אדם בתאי גזע mesenchymal ב פגמים סחוס

The field of tissue engineering integrates the principles of engineering, cell biology and medicine towards the regeneration of specific cells and ...

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements and tools for genetic manipulation have become available in Drosophila 2. Soon after the initial discovery by Frie and Mello 3 that double stranded RNA can be used to knockdown the activity of individual genes in Caenorhabditis elegans, RNA interference (RNAi) was shown to provide a powerful reverse genetic approach to analyze gene functions in Drosophila organ development 4, 5.
Many organs, including lung, kidney, liver, and vascular system, are composed of branched tubular networks that transport vital fluids or gases 6, 7. The analysis of Drosophila tracheal formation provides an excellent model system to study the morphogenesis of other tubular organs 8. The Berkeley Drosophila genome project has revealed hundreds of genes that are expressed in the tracheal system. To study the molecular and cellular mechanism of tube formation, the challenge is to understand the roles of these genes in tracheal development. Here, we described a detailed method of dsRNA injection into Drosophila embryo to knockdown individual gene expression. We successfully knocked down endogenous dysfusion(dys) gene expression by dsRNA injection. Dys is a bHLH-PAS protein expressed in tracheal fusion cells, and it is required for tracheal branch fusion 9, 10. dys-RNAi completely eliminated dys expression and resulted in tracheal fusion defect. This relatively simple method provides a tool to identify genes requried for tissure and organ development in Drosophila.

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNA interference has been proven very effective to analyze gene function in Drosophila tracheal development. A detailed protocol used by Jiang lab to inject dsRNA into fly embryos to knockdown gene expression is illustrated. This technique has the potential for screening genes required for tissue and organ development in Drosophila.

RNAi הפרעה על ידי הזרקה לתוך dsRNA תסיסנית עוברים

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular dystrophies1-3, congenital myopathies4,5, and disruptions in sarcomeric assembly6,7, due to high genomic and structural conservation with mammals8. Muscular disorganization and locomotive impairment can be quickly assessed in the zebrafish over the first few days post-fertilization. Two assays to help characterize skeletal muscle defects in zebrafish are birefringence (structural) and touch-evoked escape response (behavioral).
Birefringence is a physical property in which light is rotated as it passes through ordered matter, such as the pseudo-crystalline array of muscle sarcomeres9. It is a simple, noninvasive approach to assess muscle integrity in translucent zebrafish larvae early in development. Wild-type zebrafish with highly organized skeletal muscle appear very bright amidst a dark background when visualized between two polarized light filters, whereas muscle mutants have birefringence patterns specific to the primary muscular disorder they model. Zebrafish modeling muscular dystrophies, diseases characterized by myofiber degeneration followed by repeated rounds of regeneration, exhibit degenerative dark patches in skeletal muscle under polarized light. Nondystrophic myopathies are not associated with necrosis or regenerative changes, but result in disorganized myofibers and skeletal muscle weakness. Myopathic zebrafish typically show an overall reduction in birefringence, reflecting the disorganization of sarcomeres.
The touch-evoked escape assay involves observing an embryo&#39;s swimming behavior in response to tactile stimulation10-12. In comparison to wild-type larvae, mutant larvae frequently display a weak escape contraction, followed by slow swimming or other type of impaired motion that fails to propel the larvae more than a short distance12. The advantage of these assays is that disease progression in the same fish type can be monitored in vivo for several days, and that large numbers of fish can be analyzed in a short time relative to higher vertebrates.

The zebrafish is now an established and powerful tool for modeling muscular dystrophies, congenital myopathies, and related neuromuscular diseases. Birefringence and touch-evoked escape behavior are two common noninvasive assays used to determine the degree of muscular disorganization and locomotive impairment of zebrafish embryos during early development.

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) maintain the turnover of all mature blood cell lineages. The coordination of the complex signals leading to specific HSC fates relies upon the interaction between HSCs and the intricate bone marrow microenvironment, which is still poorly understood[1-2].
We describe how by combining a newly developed specimen holder for stable animal positioning with multi-step confocal and two-photon in vivo imaging techniques, it is possible to obtain high-resolution 3D stacks containing HSPCs and their surrounding niches and to monitor them over time through multi-point time-lapse imaging. High definition imaging allows detecting ex vivo labeled hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) residing within the bone marrow. Moreover, multi-point time-lapse 3D imaging, obtained with faster acquisition settings, provides accurate information about HSPC movement and the reciprocal interactions between HSPCs and stroma cells.
Tracking of HSPCs in relation to GFP positive osteoblastic cells is shown as an exemplary application of this method. This technique can be utilized to track any appropriately labeled hematopoietic or stromal cell of interest within the mouse calvarium bone marrow space.

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

The nature of the interactions between hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) and bone marrow niches is poorly understood. Custom hardware modifications and a multi-step acquisition protocol allow the use of two-photon and confocal microscopy to image ex vivo labeled HSPCs homed within bone marrow areas, tracking interactions and movement.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

ניתוח Glucocorticoid צואה: לא פולשני ניטור הכליה ב Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

An Iodide-Yellow Fluorescent Protein-Gap Junction-Intercellular Communication Assay

Gap junctions (GJs) are cell membrane channels that allow diffusion of molecules smaller than 1 kDa between adjacent cells. As they have physiological and pathological roles, there is need of high-throughput screening (HTS) assays to identify GJ modulators in drug discovery and toxicology assays. A novel iodide-yellow fluorescent protein-gap junction-intercellular communication (I-YFP-GJIC) assay fulfills this need. It is a cell-based assay including acceptor and donor cells that are engineered to stably express a yellow fluorescent protein (YFP) variant, whose fluorescence is sensitively quenched by iodide, or SLC26A4, an iodide transporter, respectively. When iodide is added to a mixed culture of the two cell types, they enter the donor cells via the SLC26A4 transporter and diffuse to the adjacent acceptor cells via GJs where they quench the YFP fluorescence. YFP fluorescence is measured well by well in a kinetic mode. The YFP quenching rate reflects GJ activity. The assay is reliable and rapid enough to be used for HTS. The protocol for the I-YFP-GJIC assay using the LN215 cells, human glioma cells, is described.

Here, we present a protocol for a novel gap junction intercellular communication assay designed for the high-throughput screening of gap junction-modulating chemicals for drug discovery and toxicological assessment.

Assay תקשורת צומת-המערכת יודיד-צהוב הניאון חלבון-Gap

Gap junctions (GJs) are cell membrane channels that allow diffusion of molecules smaller than 1 kDa between adjacent cells. As they have physiological and ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. Here, we present an easy and inexpensive method that would be instrumental for testing new drugs decreasing uterine contractility. This method utilizes the unique ability of the entire mouse reproductive tract to exhibit spontaneous motility when maintained ex vivo in a Petri dish containing oxygenated Krebs buffer. This spontaneous motility resembles the wave-like myometrial activity of the human uterus, referred to as endometrial waves. To demonstrate the effectiveness of the method, we employed a well-known uterine relaxant drug, epinephrine. We demonstrate that the spontaneous motility of the entire mouse reproductive tract can be quickly and reversibly inhibited by 1 &#181;M epinephrine in this Petri dish model. Documenting the changes of uterine motility can be easily done using an ordinary smart phone or a sophisticated digital camera. We developed a MATLAB-based algorithm allowing motion tracking to quantify spontaneous uterine motility changes by measuring the rate of uterine horn movements. A major advantage of this ex vivo approach is that the reproductive tract remains intact throughout the entire experiment, preserving all intrinsic intrauterine cellular interactions. The major limitation of this approach is that up to 10-20% of uteri may exhibit no spontaneous motility. Thus far, this is the first quantitative ex vivo method for assessing spontaneous uterine motility in a Petri dish model.

Uterine contractions are important for the well-being of females. However, pathologically increased contractility may result in dysmenorrhea, especially in younger females. Here, we describe a simple ex vivo preparation allowing quick assessment of the efficacy of smooth muscle relaxants that may be used for treating dysmenorrhea.

שיטה Vivo Ex להערכת בדרכי הרבייה של העכבר לתנועתיות ספונטנית מעקב הרחם MATLAB מבוסס על התנועה אלגוריתם לניתוח נתונים

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...