Name: intraductal delivery to the rabbit mammary gland
Uploaded: 2017-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland at JoVE.com

The authors acknowledge support from a Translational Breast Cancer Research Grant (14-60-26-BROC to AB) from the Breast Cancer Research Foundation and the American Association for Cancer Research.

נהלים באמצעות בנושאים בעלי חיים אושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש מאוניברסיטת טקסס באוסטין. 1. הכנה לפני הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את משקל הגוף של כל ארנבת. כמו בכל במחקרים פרה, לפקח משקולות חיה בקביעות כדי להעריך את רעילות אפשרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הרדמה הארנב, למלא צינור חרוטי 50 מ&quot;ל עם ג&#39;ל ספין אולטרסאונד זמינים מסחרית ב XG 500 עבור 30 s; לא אמור להיות שום בועות גלויות בתוך הג&#39;ל עם השלמת צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל תת עורי glycopyrrolate במינון של 0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג ו acepromazine לשריר במינון של 0.75 מ&quot;ג / ק&quot;ג. מתן 15-20 דקות עבור ההרגעה ייכנס לתוקף תוך מעקב אחר סימנים והתנהגות חיוניים. הערה: Glycopyrrolate הוא סוכן אנטי-כולינרגיות שמונע ברדיקרדיה ומפחית פרשות נשימת עיכול. Acepromazine היא תרופת הרגעה, אשר משמשת premedicatiעל הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל 35 מ&quot;ג / ק&quot;ג של קטמין ו 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג של xylazine תת עורי כמו הרדמה. עם זאת, כמפעיל הופך להיות יותר מנוסה יכול לבצע את משלוח intraductal במהירות רבה יותר, להקטין את המינונים התרופה ל -15 מ&quot;ג / ק&quot;ג של קטמין ו 3 מ&quot;ג / ק&quot;ג של תת-עורית xylazine; זה יקצר את זמן ההרדמה ואת הזמן הנדרש עבור החיה להתאושש מההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק ולתעד את קצב הלב, 2 SPO, טמפרטורה, קצב נשימה, וצבע קרום ריר כל 15 דק &#39;. החל סיכת עין לשתי העיניים. הערה: רק טכנאים שעברו הכשרה מתאימה אושרו על ידי IACUC של המוסד שלהם צריך לנהל או לפקח הרדמה. שימוש צג הרדמת וטרינרים יכול לסייע ברכישת סימנים חיוניים והוא מומלץ. צג הרדמת הווטרינרים, לעומת זאת, אינו מחליף את הצורך לבדוק באופן ידני את החיה כל 15 דק &#39;. ראו את הוראות היצרן fאו את השימוש הנכון של צג וטרינרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את התחלתה של הרדמה על ידי קמצוץ בוהן עדין; הארנב צריך להיות ללא תגובה לפני שתמשיך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לגלח את הבטן הזנב של הארנב באזור סביב זוגות השלישי והרביעי של מוצצים מפשעתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם רוב של השיער הוסר, להחיל קרם להסרת שיער Over-the-counter לאזור המגולח. הסר את דקות שמנת 10 לאחר יישום באמצעות מגבות נייר לחה רטובות עם מים חמים. הערה: ארנב עור הוא מאוד שביר / רגיש. הקרם להסרת השיער אמור לשמש לא יותר מ -10 דקות. למעשה, זה בטוח לנסות &quot;נקודת מבחן&quot; ב 5 דקות ורק לעזוב על זמן רב יותר אם במקום בדיקה מצביע על זמן ארוך יותר תקופה נדרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב את האזור עם פדי גזה ספוג באלכוהול לניקוי הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הארנב על dorsum שלה שוקת נ בצורה מרופדת שמיכת מים חמה הסירקולציה מחודשת וכרית סופגת. </li></ol> 2. Preparation של חומר ניגוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחדש את מגיב בניגוד הלא ממוקד על פי הוראות היצרן. פיפטה למעלה ולמטה בעדינות לתערובת. הערה: חומר הניגוד להשתמש בפרוטוקול זה הוא יציב בטמפרטורת חדר למשך 4 - 6 שעות לאחר כינון מחדש. נער בעדינות את הבקבוקון בין כל אחזור. הערה: היקף הפתרון הנדרש יהיה תלוי במספר הצינוריות להיות מוזרק. הארנב יש 4 פתחים ductal לכל פטמה, ו -0.2 מ&quot;ל של תמיסת מספיקה כדי למלא עץ ductal אחד של הארנב הלבן מבוגר ניו זילנד (Oryctolaguscuniculus). לכן, בהיקף כולל של 0.8 מיליליטר עשוי להישלח בלוטת חלב אחד. </li></ol> 3. משלוח Intraductal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את הפטמות המתאים להיות מוזרק; זוגות -3 וה -4 th של מוצצי מפשעה מומלצים, כפי שהם דמיינו בקלות כאשר החיה ממוקמת על dorsum שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 0.2 מ&quot;ל של תמיסת מלח 0.9% סטרילי לתוךמזרק טוברקולין 1 מ&quot;ל Luer נעילת עם מחט 22 G. כראוי להשליך את המחט 22 G פעם מלוחים הוא בתוך המזרק ולהחליף אותו עם מחט 25-מד סטרילית. נגב בעדינות את האזור עם אלכוהול איזופרופיל 85% על פד גזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השיפוע של עד המחט במקביל המזרק לגוף של בעלי החיים, להכניס את השיפוע של המחט לתוך הצד של הפטמה לאט להזריק 0.1-0.2 מיליליטר של תמיסת מלח; זה יאפשר להדמיה טובה יותר של פתחי ductal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 0.2 מ&quot;ל של תמיסת ההזרקה לתוך מזרק טוברקולין מ&quot;ל Luer נעילת 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את הפטמה בעדינות עם האגודל ואצבע מורה ומרים אותו מעט כדי למקם אותו על הזרקת intraductal; זכוכית מגדלת עינית לביש עשויה לסייע לדמיין את פתחי ductal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוך שמירה על עמדת הרים של הפטמה, בזהירות cannulate צינור עניין באמצעות מחט 25 G קהה קצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר cannulation, בעדינות לסובב את מזרק נעילת Luer ברכזת של-t הבוטהמחט עירוי ip עד שהוא ננעל במקומו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרם את פטמה ולהזריק הפתרון לאט כדי למזער את הנזק הפוטנציאלי שנגרם על ידי העברת נוזל במהירות בתוך צינור; ללא בזמן אם יש התנגדות כאשר הזרקת הפתרון. </li></ol> 4. הדמיה אולטראסאונד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח כמות ליברלית של ג&#39;ל אולטרסאונד centrifuged על העור של האזור של עניין. ודא שאין בועות בתוך הג&#39;ל, כמו אלה יתפשרו על איכות התמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את עומק הדמיה עד 6 מ&quot;מ. מניחים את מתמר 21 מגה-הרץ במגע עם ג&#39;ל ולסרוק את האזור של עניין במצב B. שים את חומר הניגוד באזור הסרוקים לרבות פתיחת ductal וברחבי הדביקים. הערה: הגדרות אלו פותחו לשימוש עם מכונת אולטרסאונד ספציפית photoacoustic. עיין בטבלה של חומרים לקבלת פרטים נוספים. זה עשוי להיות נחוץ כדי להתאים את עוצמת השידור ועומק הדמיה של מערכות הדמיה אחרות כדי לייעל חלבלהדמיה בלוטת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את ג&#39;ל אולטרסאונד מעורו של בעלי החיים עם פד גזה. </li></ol> 5. טיפול לאחר הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את הזריקה: לא אמור להיות שום סימנים של טראומה לאזור הפטמה או הרקמה הסובבת, ונפיחות באזור המקיף את הפטמה מציינת שקיימת זריקת כרית שומן חלב ולא הזרקה intraductal מוצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הארנב בעמדה sternal. במידת הצורך, לתת 0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג של yohimbine לווריד אל הווריד האוזן שולית; זה יהיה לבטל את ההשפעה של xylazine ולאפשר החיה להתאושש מהר יותר מן ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג הארנב כל 15 דקות במהלך תקופת ההתאוששות עד שהחיה היא התראה, בעלי תגובה שומרת על מעמדה sternal. הערה: הליך זה לא צריך לגרום נזק לרקמות או נפיחות. אם אדמומיות או נפיחות הם נצפו, לנהל מנה של מ&quot;ג meloxicam 0.1-0.2 / קילו PO פעם החיה ערנית ומסוגליםלקחת תרופות דרך הפה. יצירת קשר עם צוות הווטרינרים של המוסד לקבלת הדרכה נוספת. </li></ol>

<ol>
	<li>Flanagan, M., Love, S., Hwang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Status+of+Intraductal+Therapy+for+Ductal+Carcinoma+in+Situ.">Status of Intraductal Therapy for Ductal Carcinoma in Situ.</a> Curr Breast Cancer Rep. 2 (2), 75-82 (2010).</li><li>Love, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Feasibility+Study+of+the+Intraductal+Administration+of+Chemotherapy.">A Feasibility Study of the Intraductal Administration of Chemotherapy.</a> Cancer Prevention Research. 6 (1), 51-58 (2013).</li><li>Stearns, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+Clinical+Evaluation+of+Intraductally+Administered+Agents+in+Early+Breast+Cancer.">Preclinical and Clinical Evaluation of Intraductally Administered Agents in Early Breast Cancer.</a> Sci Transl Med. 3 (106), 106ra108 (2011).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Safety+Parameters+of+the+Study+on+Intraductal+Cytotoxic+Agent+Delivery+to+the+Breast+before+Mastectomy.">The Safety Parameters of the Study on Intraductal Cytotoxic Agent Delivery to the Breast before Mastectomy.</a> Chin J Cancer Res. 26 (5), 579-587 (2014).</li><li>Mahoney, M. E., Gordon, E. J., Rao, J. Y., Jin, Y., Hylton, N., Love, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+Therapy+of+Ductal+Carcinoma+In+Situ:+a+Presurgery+Study.">Intraductal Therapy of Ductal Carcinoma In Situ: a Presurgery Study.</a> Clin Breast Cancer. 13 (4), 280-286 (2013).</li><li>Murata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+Access+for+Prevention+and+Therapy+of+Mammary+Tumors.">Ductal Access for Prevention and Therapy of Mammary Tumors.</a> Cancer Res. 66 (2), 638-645 (2006).</li><li>Chun, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductally+Administered+Pegylated+Liposomal+Doxorubicin+Reduces+Mammary+Stem+Cell+Function+In+the+Mammary+Gland+but+in+the+Long+Term,+Induces+Malignant+Tumors.">Intraductally Administered Pegylated Liposomal Doxorubicin Reduces Mammary Stem Cell Function In the Mammary Gland but in the Long Term, Induces Malignant Tumors.</a> Breast Cancer Res Treat. 135 (1), 201-208 (2012).</li><li>Brock, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+HoxA1+by+Intraductal+Injection+of+siRNA+Lipidoid+Nanoparticles+Prevents+Mammary+Tumor+Progression+in+Mice.">Silencing HoxA1 by Intraductal Injection of siRNA Lipidoid Nanoparticles Prevents Mammary Tumor Progression in Mice.</a> Sci Trans Med. 6 (217), 2172a2 (2014).</li><li>Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+Injection+For+Localized+Drug+Delivery+To+The+Mouse+Mammary+Epithelium.">Intraductal Injection For Localized Drug Delivery To The Mouse Mammary Epithelium.</a> J Vis Exp. (80), e50692 (2013).</li><li>Brock, A., Goh, H. T., Yang, B., Yu, L., Li, H., Loh, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Reprogramming:+A+New+Technology+Frontier+In+Pharmaceutical+Research.">Cellular Reprogramming: A New Technology Frontier In Pharmaceutical Research.</a> Pharm Res. 29 (1), 35-52 (2012).</li><li>Silverstein, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ductal+Carcinoma+In+Situ+of+the+Breast.">Ductal Carcinoma In Situ of the Breast.</a> Annu. Rev Med. 51, 17-32 (2000).</li><li>Love, S. M., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+Nipple+And+Breast+Ducts+Revisited.">Anatomy of the Nipple And Breast Ducts Revisited.</a> Cancer. 101 (9), 1947-1957 (2004).</li><li>Virnig, B. A., Shamliyan, T., Tuttle, T. M., Kane, R. L., Wilt, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+Management+of+Ductal+Carcinoma+In+Situ+(DCIS).">Diagnosis and Management of Ductal Carcinoma In Situ (DCIS).</a> Evidence Report/Technology Assessment. , 185 (2009).</li><li>Mills, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+Duct+Physiology+in+the+Human+Mammary+Gland.">Examination of Duct Physiology in the Human Mammary Gland.</a> PLoS One. 11 (4), e0150653 (2016).</li><li>King, B. L., Love, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Intraductal+Approach+to+the+Breast:+Raison+d'Etre.">The Intraductal Approach to the Breast: Raison d'Etre.</a> Breast Cancer Res. 8 (2), 206 (2006).</li><li>Bu, W., Xin, L., Toneff, M., Li, L., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentivirus+vectors+for+stably+introducing+genes+into+mammary+epithelial+cells+in+vivo+.">Lentivirus vectors for stably introducing genes into mammary epithelial cells in vivo .</a> J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14, 401-404 (2009).</li><li>Lyons, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Direct+Mammotrophic+Action+of+Lactogenic+Hormone.">The Direct Mammotrophic Action of Lactogenic Hormone.</a> Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 51 (2), 308-311 (1942).</li><li>Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+Of+Intraductal+Prolactin+On+Some+Aspects+of+the+Ultrastructure+and+Biochemistry+of+Mammary+Tissue+in+the+Pseudopregnant+Rabbit.">Effects Of Intraductal Prolactin On Some Aspects of the Ultrastructure and Biochemistry of Mammary Tissue in the Pseudopregnant Rabbit.</a> J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).</li><li>Falconer, I. R., Fiddler, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Intraductal+Administration+Of+Prolactin,+Actinomycin+D+and+Cycloheximide+on+Lipoprotein+Lipase+Activity+in+the+Mammary+Glands+of+Pseudopregnant+Rabbits.">Effects of Intraductal Administration Of Prolactin, Actinomycin D and Cycloheximide on Lipoprotein Lipase Activity in the Mammary Glands of Pseudopregnant Rabbits.</a> Biochim Biophys Acta. 218 (3), 508-514 (1970).</li><li>Singh, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Molecular+Size+on+the+Retention+of+Polymeric+Nanocarrier+Diagnostic+Agents+in+Breast+Ducts.">Influence of Molecular Size on the Retention of Polymeric Nanocarrier Diagnostic Agents in Breast Ducts.</a> Pharm Res. 29 (9), 2377-2388 (2012).</li><li>Jain, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atypical+Ductal+Hyperplasia:+Interobserver+and+Intraobserver+Variability.">Atypical Ductal Hyperplasia: Interobserver and Intraobserver Variability.</a> Mod Pathol. 24 (7), 917-923 (2011).</li><li>Betsill, W. L., Rosen, P. P., Lieberman, P. H., Robbins, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraductal+Carcinoma.+Long-term+Follow-up+After+Treatment+by+Biopsy+Alone.">Intraductal Carcinoma. Long-term Follow-up After Treatment by Biopsy Alone.</a> JAMA. 239 (18), 1863-1867 (1978).</li><li>Eusebi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+Follow-up+of+In+Situ+Carcinoma+of+the+Breast.">Long-term Follow-up of In Situ Carcinoma of the Breast.</a> Semin Diagn Pathol. 11 (3), 223-235 (1994).</li><li>Sanders, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Natural+History+Of+Low-Grade+Ductal+Carcinoma+In+Situ+Of+The+Breast+In+Women+Treated+By+Biopsy+Only+Revealed+Over+30+Years+Of+Long-Term+Follow-Up.">The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up.</a> Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).</li><li>Esserman, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Addressing+Overdiagnosis+and+Overtreatment+in+Cancer:+A+Prescription+For+Change.">Addressing Overdiagnosis and Overtreatment in Cancer: A Prescription For Change.</a> Lancet Oncol. 15 (6), e234-e242 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

שיטה זו של מסירת intraductal אל בלוטת חלב הארנב עשויה לשמש ריאגנטים בניגוד אולטרסאונד ותמיסות מימיות רבות אחרות, כוללים הצבעים ותרופות חיוניים. מחקרים קודמים הדגימו את משלוח intraductal של הורמונים 17, 18, 19. במודלים של מכרסמים, מסירת intraductal של חומצות גרעין 8, כימותרפיות 6, 7, ונושאות nanoparticle 8, 20 בוצעו. הפרוטוקול המתואר כאן יכול להיות מותאם ליישומים אלו גם כן. עבור יישומים מסוימים, אישור של משלוח intraductal ידי חיוני לצבוע כחול אוונס, כמו דמיינו דרך העור, עשוי להיות מספיק. עם זאת, ראיה דרך העור היא מפוזרת, ותעלות פרט אינן היטב demarcaטד. במחקרי נקודות קצה, חיוני לצבוע כחול אוונס מספק מפה ברורה של עץ ductal כולו, אבל זה דורש את בידודה של רקמת השד. לכן, אולטרסאונד משופר לעומת מספקת גישה חלופית לדמיין את משלוח intraductal כדי צינוריות פרט במחקרים בבעלי חיים חיים. נציין כי לצבוע אוונס הכחול ממפה את עץ ductal כולו, כולל צינוריות המסוף הקטן-קוטר, תוך מגיב ואולטרסאונד בניגוד המפות לכלול רק את הצינוריות הגדולות. הבדל נוסף הוא האפשרות לפקח דינמיקה זמנית אולטרסאונד, ואילו אוונס הכחול מספק מדידת תמונת מצב אחת בלבד. כמו בשיטה למסירת intraductal אל צינור מכרסם חלב 9, האתגר המשמעותי ביותר והגבלת טכניקה זו עשויה להיות ההסתמכות על מומחיות מפעילה. עם זאת, הגודל הגדול של פתחי ductal במודל ארנב מפשט את ההליך, מבטל את הצורך לבצעing הטכניקה בעזרת סטראו, ומקצר את הזמן הדרוש המפעילים החדשים לפתח מיומנות. מניסיוננו, ההזרקה של 0.1-0.2 מיליליטר של תמיסה מלח לצד של הפטמה לפני מועד מתן intraductal היא שלב קריטי המאפשר ויזואליזציה הברורה של פתחי ductal (שלב 3.2 לעיל). מיצוב הרמה מדויק של המשלוח הוא גם חיוני; זה מבטיח כי הפתרון זורם לתוך הצינור (שלבי 3.5 ו -3.6, לעיל). נציין כי שיתוף הממשל של מגיב בניגוד יהיה בהכרח לצמצם את ההיקף הזמין לבדיקת ריאגנטים או רפויים אחרים. עם זאת, משלוח intraductal יכול גם להתבצע ללא הדמיה או עם בדיקה פשוטה על ידי אוונס כחול לאשר את המסירה. הנגע פולשני הנפוץ ביותר של השד הוא קרצינומה ductal באתרם (DCIS), שבו ductal נורמלי לתאי האפיתל להתרבות בתוך צינור החלב אך אינם חודרים through קרום המרתף לרקמה הסמוכה. עם ההתקדמות בתחום ההדמיה ממוגרפיה, שיעורי האיתור של DCIS גדלו באופן דרמטי. בארצות הברית, כ -25% מהנגעים השד שאובחנו רק לאחרונה מסווגים DCIS, ועל ידי 2020, יותר מ 1 מיליון נשים יחיו עם DCIS בארצות הברית לבדה 22, 23, 24, 25. עם זאת, נגעי DCIS רב להישאר רדומים, ואת רוב ההערכות, נמצאו שרק 15-40% 21, 22, 23, 24, 25 של נגעי DCIS אי פעם יהיו התקדמות סרטן פולשני. עם זאת, אין כיום סמנים חזויים כדי לסייע בזיהוי של שגידולים יהפכו פולשנית. ככל שיותר נשים מאובחנות עם נגע טרום סרטני זה,<html> שאלות רציניות לגבי יתר באבחון טיפול יתר צמחו. הטיפול במחלה טרום ממאיר הוא בדרך כלל אגרסיבי. רוב החולים עם DCIS ינותחו (כריתת גוש או כריתת שד), ורבים גם לקבל קרינה 25. חלק מהחולים עם הורמון רצפטור חיובי DCIS יקבלו גם 5 שנים או יותר של טיפול אנדוקריני, אשר הוכח להפחית הישנות. תופעות לוואי של טיפול זה עשויות לכלול שבץ, קרישי דם, איבוד מסת עצם, וסיכונים גבוהים של רחם וסרטן רירית רחם. כל האפשרויות הללו יש תופעות לוואי מערכתי רציניות להשפיע על איכות חיי מטופל. יש צורך משמעותי עבור אסטרטגיות טיפוליות פולשניות פחות 25. משלוח intraductal של חומרים כימותרפיים בשני המודלים העכבר בחולות סרטן השד הוכח בעבר כיעיל, ללא עדות לרעילות מערכתית או לטווח ארוך שינויים histopathological<html> נ&quot;צ &quot;&gt; 3, 4, 5, 6. ממשל intraductal של הרפוי יכול יום אחד להציע אפשרויות חדשות עבור נשים שאובחנו עם DCIS כי לא התקדם טרם נגעתי מקומי פולשנית. הפוטנציאל לבלימת tumorigenesis תוך שמירת מבנה ductal עושה את זה 10 אסטרטגיה טיפולית אטרקטיבית. חשוב לציין, גישת המשלוח המקומית מבטיחה שהטיפול מגיע התאים חריגים הרלוונטיים תוך מזעור ניזק בטחונות פוטנציאלי לרקמות אחרות. בעוד מודלי גידול ארנב אינם זמינים, בלוטת החלב הרגילה של ארנבים עשויה לספק מודל רלוונטי לבדוק את הרפוי משלוח, בטיחות, תחבורה, קינטיקה של מקומי ספיג בתוך צינור החלב. במחקרי vivo אלה ייאפשרו הבדיקה והאימות של אבחון מועמד ותרופות בסביבת רקמות רלוונטית. s = &quot;jove_content&quot;&gt; גישה דומה אפשרה ממשל intraductal תרופות לחיות עכברים ואפשר עבור משלוח סמים פולשני מקומי מינימאליים למערכת ductal חלב 8, 9. עם זאת, את האנטומיה של בלוטת חלב עכבר שונה משד אדם במספר דרכים חשובות, לרבות רכב הרקמות ומספר הצינוריות שמסתיימות בכל פטמה. כאן, אנו מרחיבים את הטכניקה הזו כדי במודל חיה גדול שבו מבנה אפיתל החלב באופן הדוק יותר מייצג את האנטומיה של השד האנושי 12, 14. זה מפותח את האפשרות לניטור מוגבר הדמיה עבור assaying מסירת intraductal הקשורה של ריאגנטים שונים כדי האפיתל ductal ארנב החלב. התקדמות משלוח מקומי במודל חיה מתאים, עם האנטומיה ductal דומה בלוטת האנושית, צריכה להאיץ את היישום של-אני לאnvasive, ממוקד אסטרטגיות טיפוליות בבני אדם.

<html> משלוח intraductal ממוקד של תרופות נחקר במודלים של מכרסמים ו בניסויים בבני אדם בשלב מוקדם 3, 4, 5, 6, 11, 12. שלב א אחרון אני לומד הדגים את הבטיחות והיתכנות של קרבופלטין intraductal או דוקסורוביצין liposomal pegylated intraductal בנשים ממתינות כריתת שד לטיפול סרטן פולשני 2. פרוטוקולים קודמים למסירה intraductal פותחו עבור בלוטות עכבר וחולדה החלב 6, 7, 8, 9. למטרות מחקר, זריקות תאים סרטניים intraductal ואת משלוח וקטור lentiviral של אונקוגנים גם בוצעו במודלים של מכרסמיםנ&quot;צ &quot;&gt; 13, 14, 15, 16. עם זאת, אידאל במודל vivo של תהליך מסירת intraductal צריך לאפשר הפיתוח של כיתות רומן של תרכובות טיפוליות ולהקל הערכה פרה-קלינית. הבדלים אנטומיים בין מכרסמים ובני האדם יש מסובך התרגום של אלה לימודים. בניגוד עכברים, שבו כל צינור מסתיים פטמה נפרדת, השד האנושי מורכב 5 עד 9 מערכות ductal עצמאיות, כל אחד עם פתיחה נפרדת ומסתיימת הפטמה. בלוטות חלב ארנב נמל ארבע מערכות ductal עצמאיות, כל אחד בנפרד, נגישה באמצעות אחד מארבעה פתחים בבית פטמה אחת. דגם ארנב יותר תואם במידה רבה את האנטומיה של גוף האדם, ומרשה המחקר של אספקת סמים intraductal בהקשר רלוונטי יותר. כאן, אנו משתמשים בשתי טכניקות כדי להעריך משלוח intraductal. שיתוף הממשל שלחיוני לצבוע היתרים להדמיה דרך העור ומספק אישור פשוט ומהיר של השיטה. עבור יישומים מסוימים, מיפוי ברזולוציה גבוהה של צינוריות עשוי להיות מועדף. אנו מציגים כאן פרוטוקול הדמיה אולטרסאונד של צינוריות דרך משלוח intraductal של ריאגנט בניגוד הלא ממוקד.

<table><tbody><tr><td>MicroMarker non-targeted contrast reagent</td><td>VisualSonics</td><td>VS-11694</td><td></td></tr><tr><td>Luer Lock 1 mL Syringes</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Glycopyrrolate 0.2 mg/mL</td><td>Wedgewood Compounding Pharmacy</td><td>GLYCOP-INJ013VC</td><td>6 month shelf life, supply may be limited.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Atropine Sulfate 0.5 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>15320764</td><td>If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.</td></tr><tr><td>Ketamine HCL 100 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>21250699</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.animalhealthinternational.com/&quot;&gt;http://www.animalhealthinternational.com/&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Acepromazine 10 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>17640541</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>20101547</td><td></td></tr><tr><td>Yohimbine 0.2 mg/mL</td><td>Animal Health International</td><td>14588965</td><td></td></tr><tr><td>Hair Removing Cream</td><td>Veet</td><td></td><td>Sensitive skin solution. Available through local retailers.</td></tr><tr><td>Blunt tip infusion needles</td><td>Sai Infusion Technology</td><td>B14-50</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles&quot;&gt;http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Veterinary Pulse Oximeter</td><td>EdanUSA</td><td>VE-H100B</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html&quot;&gt;http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Warm Water Pump</td><td>Gaymar</td><td>TP700</td><td></td></tr><tr><td>Warm Water Blanket</td><td>Animal Health International</td><td>21232696</td><td>Maxi-Therm Lite Warming Pads</td></tr><tr><td>Ultrasound system</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td></td></tr></tbody></table>

intraductal delivery to the rabbit mammary gland

טיפולי intraductal המרוכזות לסרטן השד להציע יתרונות פוטנציאליים, כולל אספקה יעילה אל הגידול רעיל סיסטמית מופחתים ותופעות לוואי 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. עם זאת, מספר אתגרים להישאר לפני טיפולים אלו יכולים להיות מיושמים באופן נרחב יותר. פיתוח ואימות של הרפוי intraductal במודל חיה מתאים להקל על פיתוח של אסטרטגיות טיפוליות intraductal לחולים. בעוד בלוטת חלב עכבר כבר בשימוש נרחב כמערכת מודל של פיתוח חלב tumorigenesis, האנטומיה היא נבדל בלוטת האדם. במודל חי גדול יותר, כמו הארנב, עשוי לשמש מודל טוב יותר עבור מבנה בלוטת חלב ופיתוח טיפולי intraductal. ב- Contrast לעכברים, שבה עשרה עצים ductal מופצים מרחבית לאורך ציר הגוף, כל שמסתיים בבית פטמה נפרדת, בלוטת חלב ארנב יותר דומה בלוטת האדם, עם מערכות ductal חופף מרובות כי יציאה דרך פתחים נפרדים פטמה אחת. כאן, אנו מציגים שיטות זעירות-פולשנית המסירה של ריאגנטים ישירות לתוך צינור חלב הארנב להדמיה של המשלוח עצם עם הדמיה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה.

<html> כאן, אנו מראים כי משלוח intraductal של ריאגנטים בניגוד צינוריות החלב של ארנב יכול להיות מושגת ללא טראומה לרקמה (איור 2). בארנבות, ארבע מערכות ductal נפרדות להתכנס פטמה אחת ולכן ניתן לגשת צלמו בנפרד באמצעות שיטה זו. פתחי ductal פרט הם דמיינו בקלות; לציין את ראש החץ סימון פתח ductal השני סמוך צינור cannulated באיור 2B. הדמיה אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה עם מגיב בניגוד ממוקד במצב הדמיה ליניארי יכולה לספק readout בזמן אמת של משלוח intraductal. נציג תמונות להראות זיהוי של המגיב עד 45 דקות שלאחר לידה (איור 3). טכניקה זו עשויה להיות שימושית גם לניטור קינטיקה של משלוח טיפולי דרך הצינורות. <html> -page = &quot;1&quot;&gt; איתן שיטת הזרקה זה תלות גבוהה המפעילה. כדי להשתלט על טכניקת ההזרקה, מומלץ להזריק פתרון של צבע 0.2% אוונס הכחול ולנטר את תקינות הבלוטה. זה מספק את המפעיל עם הודעה נוספת של הצלחה וגם מסייע בקביעת הכרכים המתאימים להיות מוזרק לתוך כל בלוטה. הערכה חזותית פשוטה יכולה לשמש כדי לקבוע אם לצבוע מגיעה למערכת ductal כולו (איור 4) והאם צינוריות כל הניזוקים במהלך הלידה. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55209/55209fig1.jpg" /> איור 1: סכמטי של ארנב חלב בלוטות. שני הזוגות התחתונים של נקודות מייצגים את המוצצים של הבלוטות מפשעתי. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55209/55209fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> ילדה = &quot;jove_content&quot; FO: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55209/55209fig2.jpg" /> איור 2: הכנה Cannulation של בלוטת החלב מפשעתי למשלוח Intraductal. (א) הפטמה של בלוטת החלב התקינה מפשעתי מוצגת כאן מייד לאחר הלידה של 0.2 מיליליטר של תמיסת מלח סטרילית 0.9%. לאחר ההזרקה, פתחי ductal הם דמיינו בצורה ברורה יותר. (ב) פתיחת ductal באותה פטמה הוא cannulated אז עם מחט עירוי 25 G קהה קצה. החץ מראה פתיחת ductal ללא צינורית. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55209/55209fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55209/55209fig3.jpg" /> איור 3. הלא ממוקד מגיב ניגודיות דמיינו בתוך צינור החלב על ידי אולטראסאונד ליmaging. (א) מגיב בניגוד הוא מקומי מיד לאחר הלידה והיא דמיינו (B) 30 דקות שלאחר הלידה ו (ג) 45 דקות שלאחר הלידה. ההתמדה של מגיב בתוך צינור החלב מאפשרת הדמיה לאורך כל התקופה בפרוטוקול זה. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55209/55209fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/55209/55209fig4.jpg" /> איור 4: בלוטת חלב מפשעתי מוזרק דרך הפטמה עם אוונס הכחול מלוח פתרון. (א) המראה החיצוני לאחר ההזרקה intraductal של 0.2 מ&quot;ל של תמיסת כחול אוונס. (ב) בעת פתיחת העור, כחול אוונס מתיר הדמיה של עץ ductal החלב כולו ומאשרת את מבנה ductal ללא פגע. (&lt;strong&gt; C) Whole-Mount הדגימה של אזור של בלוטת החלב מפשעתי לאחר קיבוע מכתים עם אלום ארגמן. <a href="https://ecsource-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/55209/55209fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland at JoVE.com

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

משלוח Intraductal אל ארנב חלב בלוט

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

intraductal-delivery-to-the-rabbit-mammary-gland

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Bioengineering

9.3K Views.  The University of Texas at Austin. Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents. 

Video: Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal and postnatal consequences. To ensure the innocuousness of ART applications, studies in animal models are necessary. In addition, as a last step, embryo development studies require evaluation of their capacity to develop full-term healthy offspring. Here, embryo transfer to the uterus is indispensable to perform any ARTs-related experiment.
The rabbit has been used as a model organism to study mammalian reproduction for over a century. In addition to its phylogenetic proximity to the human species and its small size and low maintenance cost, it has important reproductive characteristics such as induced ovulation, a chronology of early embryonic development similar to humans and a short gestation that allow us to study the consequences of ART application easily. Moreover, ARTs (such as intracytoplasmic sperm injection, embryo culture, or cryopreservation) are applied with suitable efficiency in this species.
Using the laparoscopic embryo transfer technique and the cryopreservation protocol presented in this article, we describe 1) how to transfer embryos through an easy, minimally invasive technique and 2) an effective protocol for long-term storage of rabbit embryos to provide time-flexible logistical capacities and the ability to transport the sample. The outcomes obtained after transferring rabbit embryos at different developmental stages indicate that morula is the ideal stage for rabbit embryo recovery and transfer. Thus, an oviductal embryo transfer is required, justifying the surgical procedure. Furthermore, rabbit morulae are successfully vitrified and laparoscopically transferred, proving the effectiveness of the described techniques.

Assisted reproductive techniques (ARTs) are in continuous evaluation to improve outcomes and reduce the associated risks. This manuscript describes a minimally invasive embryo transfer procedure with an efficient cryopreservation protocol that allows the use of rabbits as an ideal animal model of human reproduction.

העברת העובר פולשני המינימלי העובר ויטריפיקציה בשלב העובר אופטימלית במודל ארנב

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Developmental Biology

Intraductal Delivery and X-ray Visualization of Ethanol-Based Ablative Solution for Prevention and Local Treatment of Breast Cancer in Mouse Models

Breast cancer is the most prevalent cancer and the second-leading cause of cancer-related death for women in the USA. For high-risk women, prophylactic mastectomy is the most effective primary prevention strategy. Prophylactic mastectomy is an aggressive surgical procedure that completely removes the mammary epithelial cells from which breast cancer arises along with the surrounding tissue. We seek to develop a minimally invasive intraductal procedure as an alternative to prophylactic mastectomy to locally ablate the mammary epithelial cells before they can become malignant. We and others have developed an intraductal delivery procedure to reach and treat these epithelial cells in rodent models of breast cancer. While the mouse mammary gland with a single non-anastomosed ductal tree opening at the nipple has a much less complex and tortuous architecture than the human breast, chemically induced and genetically engineered mouse models of breast cancer are valuable to produce proof-of-concept studies of new preventative strategies. Here, we describe a procedure for intraductal delivery of an ethanol-based ablative solution containing micro-CT/X-ray tantalum-based contrast agent within the mouse mammary ductal tree for the therapeutic purpose of primary prevention of breast cancer. Intraductal delivery of aqueous reagents (e.g., cytotoxic compounds, siRNAs, AdCre) has been previously described in mouse models. Thus, we focus our protocol description on methodological modifications and unique experimental considerations for optimizing delivery of ethanol, for minimizing local and systemic side effects of ethanol administration, and for in vivo visualization of ductal tree filling via micro-CT/fluoroscopy imaging. Visualization of the ductal tree immediately after injection of a contrast-containing solution allows for confirmation of complete filling or unsuccessful outcomes such as underfilling or overfilling. This procedure can be applied for delivery and imaging of other ablative compounds aimed at either preventing tumor formation or locally treating early-stage tumors accessible via the ductal tree.

A method of intraductal injection of reagents for an ethanol-based ablative solution to the mouse mammary ductal tree for in vivo imaging and breast cancer prevention is described. Injection directly into the nipple opening allows for targeting mammary epithelial cells with minimal collateral tissue damage.

משלוח תוך-חינוכי והדמיה של רנטגן של פתרון אבלטיבי מבוסס אתנול למניעה וטיפול מקומי בסרטן השד במודלים של עכבר

Breast cancer is the most prevalent cancer and the second-leading cause of cancer-related death for women in the USA. For high-risk women, prophylactic ...

Cancer Research

X-Ray Visualization of Intraductal Ethanol-Based Ablative Treatment for Prevention of Breast Cancer in Rat Models

There are still a limited number of primary interventions for prevention of breast cancer. For women at a high risk of developing breast cancer, the most effective intervention is prophylactic mastectomy. This is a drastic surgical procedure in which the mammary epithelial cells that can give rise to breast cancer are completely removed along with the surrounding tissue. The goal of this protocol is to demonstrate the feasibility of a minimally invasive intraductal procedure that could become a new primary intervention for breast cancer prevention. This local procedure would preferentially ablate mammary epithelial cells before they can become malignant. Intraductal methods to deliver solutions directly to these epithelial cells in rodent models of breast cancer have been developed at Michigan State University and elsewhere. The rat mammary gland consists of a single ductal tree that has a simpler and more linear architecture compared to the human breast. However, chemically induced rat models of breast cancer offer valuable tools for proof-of-concept studies of new preventive interventions and scalability from mouse models to humans. Here, a procedure for intraductal delivery of an ethanol-based ablative solution containing tantalum oxide nanoparticles as X-ray contrast agent and ethyl cellulose as gelling agent into the rat mammary ductal tree is described. Delivery of aqueous reagents (e.g., cytotoxic compounds, siRNAs, AdCre) by intraductal injection has been described previously in mouse and rat models. This protocol description emphasizes methodological changes and steps that pertain uniquely to delivering an ablative solution, formulation consideration to minimize local and systemic side effects of the ablative solution, and X-ray imaging for in vivo assessment of ductal tree filling. Fluoroscopy and micro-CT techniques enable to determine the success of ablative solution delivery and the extent of ductal tree filling thanks to compatibility with the tantalum-containing contrast agent.

A procedure for the delivery of a chemical ablative solution to the rat mammary ductal tree for image-guided preventive treatment of breast cancer is described. Mammary epithelial cells can be targeted with minimal collateral tissue damage through cannulation directly into the nipple opening and intraductal infusion of a 70% ethanol-based ablative solution.

הדמיית רנטגן של טיפול אבלטיבי מבוסס אתנול תוך דוקטלי למניעת סרטן השד במודלים של חולדות

There are still a limited number of primary interventions for prevention of breast cancer. For women at a high risk of developing breast cancer, the most ...

In Vivo Gene Delivery into Mouse Mammary Epithelial Cells Through Mammary Intraductal Injection

Mouse mammary glands comprise ductal trees, which are lined by epithelial cells and have one opening at the tip of each nipple. The epithelial cells play a major role in mammary gland function and are the origin of most mammary tumors. Introducing genes of interest into mouse mammary epithelial cells is a critical step in evaluating gene function in epithelial cells and generating mouse mammary tumor models. This goal can be accomplished through the intraductal injection of a viral vector carrying the genes of interest into the mouse mammary ductal tree. The injected virus subsequently infects mammary epithelial cells, bringing in the genes of interest. The viral vector can be lentiviral, retroviral, adenoviral, or adenovirus-associated viral (AAV). This study demonstrates how a gene of interest is delivered into mammary epithelial cells through mouse mammary intraductal injection of a viral vector. A lentivirus carrying GFP is used to show stable expression of a delivered gene, and a retrovirus carrying Erbb2 (HER2/Neu) is used to demonstrate oncogene-induced atypical hyperplastic lesions and mammary tumors.

In Vivo Gene Delivery into Mouse Mammary Epithelial Cells Through Mammary Intraductal Injection

The present protocol describes intraductal injection of viral vectors via the teat to deliver genes of interest into the mammary epithelial cells.

ב Vivo העברת גנים לתאי אפיתל חלב עכבר באמצעות הזרקה intraductal חלב

Mouse mammary glands comprise ductal trees, which are lined by epithelial cells and have one opening at the tip of each nipple. The epithelial cells play ...

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of this research model are the ease of breeding and sample collection, relatively short gestation period, and large litter sizes. Commonly assessed routes of immunization include subcutaneous, intramuscular, intranasal, and intradermal. Nonterminal sample collection for the chronological detection of the immunologic responses to these immunizations include the collection of blood, from both dams and kits, and milk from the lactating does. In this article, we will demonstrate techniques our lab has utilized in studies of maternal immunization in New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus), including intranasal immunization and milk collection.

Intranasal Immunization and Milk Collection in Studies of Maternal Immunization in New Zealand White Rabbits Oryctolagus cuniculus

This article describes and demonstrates the administration of intranasal vaccines and the collection of milk from lactating rabbits (Oryctolagus cuniculus) as a means to assess mucosal immunity in a translationally appropriate model of maternal immunization.

חיסון תוך-כלי ואוסף חלב במחקרים על חיסון אימהי בארנבים הלבנים של ניו זילנד (Oryctolagus cuniculus)

Due to similarities in placentation and antibody transfer with humans, rabbits are an excellent model of maternal immunization. Additional advantages of ...

Immunology and Infection

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of genes within the mammary epithelium has been difficult to achieve due to the lack of appropriate targeting molecules that are independent of developmental stages such as pregnancy and lactation. Herein, we describe a technique for localized delivery of reagents to the mammary gland at any stage in adulthood via intraductal injection into the nipples of mice. The injections can be performed on live mice, under anesthesia, and allow for a non-invasive and localized drug delivery to the mammary gland. Furthermore, the injections can be repeated over several months without damaging the nipple. Vital dyes such as Evans Blue are very helpful to learn the technique. Upon intraductal injection of the blue dye, the entire ductal tree becomes visible to the eye. Furthermore, fluorescently labeled reagents also allow for visualization and distribution within the mammary gland. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents, and small molecules.

A protocol for the non-invasive intraductal delivery of aqueous reagents to the mouse mammary gland is described. The method takes advantage of localized injection into the nipples of mammary glands targeting mammary ducts specifically. This technique is adaptable for a variety of compounds including siRNA, chemotherapeutic agents and small molecules.

הזרקת intraductal עבור משלוח סמים מקומיים לעכבר החלב בלוטת

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Biology

Simplifying Transcutaneous Intratracheal Drug Delivery in the Newborn Preterm Rabbit

Intratracheal (IT) drug delivery allows the direct delivery of pharmaceutical substances to the lung, maximizing potential pulmonary benefit and minimizing systemic drug exposure. The transcutaneous technique is simple and allows for the IT delivery of substances to the lung of prematurely born rabbits shortly after birth. Newborn pups are anesthetized with inhaled Isoflurane before being placed in a supine position with the neck extended. The larynx is identified and stabilized before transcutaneous placement of a 26-gauge (G) catheter into the trachea. Following catheterization of the trachea, a 30 G blunt needle attached to a Hamilton syringe is introduced into the IT catheter and is used for delivering a precise volume into the trachea during spontaneous respiration. After the IT injection is completed, the needle and catheter are withdrawn, and the pup is allowed to recover from anesthesia. Transcutaneous IT injection delivers a large proportion of the injected substance to the lung, with the majority remaining in the lung 3 hours after the intervention. The injections are well tolerated from the day of birth and can be repeated for multiple consecutive days without influencing survival. This technique can be used to investigate the effect of pharmaceutical agents on lung development and in the prevention of neonatal lung injury in preterm rabbits.

Transcutaneous intratracheal injection allows for effective intrapulmonary drug delivery during spontaneous respiration. Single and multiple injections are well tolerated with no effect on survival. The technique is simple to perform and can examine the effect of substances on lung development and the prevention of lung injury in newborn rabbits.

Intratracheal (IT) drug delivery allows the direct delivery of pharmaceutical substances to the lung, maximizing potential pulmonary benefit and ...

Medicine

Pregnancy and Nursing Management for Embryo-Transferred and Genetically Modified Rabbits

With the advancement of scientific research, the demand for gene-edited rabbit models is increasing. However, there are limited pregnancy and feeding management systems for gene-edited rabbits, leading to low survival rates among gene-edited rabbits prepared by many inexperienced researchers. Therefore, proper guidance is essential. This article summarizes the pregnancy and feeding practices for genetically modified rabbits developed in the author's laboratory and outlines a set of fundamental processes. These include pregnancy diagnosis, antenatal care, midwifery, assisted breastfeeding, weaning, and other procedures, along with the rescue and care of weak newborn rabbits. Compared to the traditional natural childbirth and nurturing methods used in rabbit farms, this approach involves more refined management, requiring additional time and effort but significantly increasing the survival rate of suckling rabbits. The methods described in this article are suitable for most laboratory breeding scenarios involving gene-edited or embryo-transferred rabbits and provide a straightforward and effective reference for other researchers.

This protocol describes a pregnancy and feeding management technique for embryo-transferred and genetically modified rabbits, aimed at reducing newborn rabbit mortality and enhancing the preparation efficiency of gene-edited rabbits.

ניהול הריון והנקה לארנבות שהועברו בעוברים והונדסו גנטית

With the advancement of scientific research, the demand for gene-edited rabbit models is increasing. However, there are limited pregnancy and feeding ...

Intraductal Injection: Delivering Injection Mix into the Ducts of the Mouse Mammary Gland

Source: Xiang, D., et al. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/59502/modeling-breast-cancer-via-an-intraductal-injection-cre-expressing">Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland.</a> J. Vis. Exp (2019).
This video describes an intraductal injection technique where we deliver injection mix into the ducts of mouse mammary glands.

הזרקה intraductal: אספקת תערובת הזרקה לתוך צינורות של בלוטת החלב העכבר

Source: Xiang, D., et al. Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland. J. Vis. Exp ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Breast Cancer

Procedures and techniques

Rabbit Intraductal Injection: Localized Delivery of Solution of Interest into the Rabbit Mammary Gland

Source: Clark et. al., <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/v/55209/intraductal-delivery-to-the-rabbit-mammary-gland">Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland.</a> J. Vis. Exp. (2017).
In this video we describe a technique of administering a solution of interest into the mammary duct of a rabbit and confirm the delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

הזרקת ארנב intraductal: משלוח מקומי של פתרון עניין לתוך בלוטת החלב ארנב

Source: Clark et. al., Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland. J. Vis. Exp. (2017).
In this video we describe a technique of administering a ...