אנו מודים מרכז רפואי שבדי למתן מימון ומתקנים. אנו מודים גם קרייג החולים לשימושם הנדיב של שטח מעבדה.

ניסויים בוצעו בהתאם להנחיות של המכון הלאומי לבריאות בארה&quot;ב לטיפול ולשימוש בחיות במחקר אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים במרכז הרפואי השוודי ועדת שימוש. כל הנהלים בוצעו עם טכניקות aseptic מתאימות. בחיות מעבדה מנוצלות ללימוד היו גברים, בן 3 חודשים, סוג בר עכברי C57 עם משקל גוף מפני 25 כדי 27 גרם. 1. אינדוקציה שבץ Vivo <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום מעיל נימה עם שרף שיניים לפני הניתוח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים חתיכה ארוכה 12 מ&quot;מ של נימה מתוך תפר ניילון 7-0. מערבבים 2 חלקים של שרף עם חלק 1 של המקשה, ומיד טובלים את קצה החוט לתוך התערובת לכסות כ 1/3 לכל אורכו. הסר את זה מהר ולוודא כי הוא מכוסה במעיל חלקה ועלו של שרף שיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אוויר יבש הנימה עבור 2 שעות לפני השימוש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר לתוךn תא הרדמת אינדוקציה (2 נפח L), ולהגדיר את זרימת isoflurane 1.5% ב 25% מועשרים בחמצן חדר אוויר 2 ליטר / דקה נכנסה לתא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכבר כדי להישאר בחדר האינדוקציה עד בהרדמה מלאה, 8 כפי שנקבע על ידי חוסר תגובת קמצוץ זנב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר על שולחן הניתוחים עם משטח לוהט, ולהגדיר את ריכוז isoflurane ב -1% לצורך תחזוקה של הרדמה נמסר ספונטני דרך חרטומו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קליפ שיער על חלקו הקדמי לחלק האחורי של הצוואר, ולרסס את הצוואר עם אלכוהול לחיטוי. החל משחת עיניים וטרינרי על שתי העיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לפקח באופן רציף על טמפרטורת גוף, להשתמש בדיקת טמפרטורה רקטלית מחוברת תצוגה דיגיטלית במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר במצב שכיבה, ליישם פתרון לקרצף 10% povidone יוד לחיטוי, לכסות עם וילון סטרילית, ולאחר מכן לעשות חתך קו האמצע לאורך הצוואר עם להב אזמל כירורגי בגודל 10. </li> &lt;li&gt; זמני ולקשור את העורק הראשי משותף שמאלה (CCA) עם 6.0 תפר משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקום אחר עניבה על העורק הראשי החיצוני השמאל (ECA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח קליפ כלי דם על עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי חור קטן על עורק התרדמה החיצוני במספרי כלי דם. הכנס נימה עשויה תפר ניילון 7-0 מצופה שרף שיניים לתוך פתח ECA, ולקדם אותה cephalically, תוך הסרת קליפ, עד התנגדות מורגשת (כ 5-7 מ&quot;מ מנקודת ההסתעפות של CCA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח עניבה זמנית על עורק התרדמה הפנימי כדי לאבטח את הנימה בעמדה. עיין בתרשים, איור 1 א. סגור את העור עם תפר משי, ולחדור הפצע על החלק הקדמי של הצוואר עם 0.2 מ&quot;ל של bupivacaine 0.5%, כמו בשלב 2.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכבר כדי להתעורר מההרדמה להכרתו בתא התאוששות למשך 60 דקות. אין להשאיר את החיה ללא השגחה עד שהוא חזרהתודעה מספיק כדי לשמור recumbence sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העכבר על הניקוד חסר נוירולוגים (NDS) כדלקמן: 0 תפקוד מוטורי = רגיל, 1 = כפיפה של גו ושל forelimb הנגדי על להרים זנב, 2 חגות = לצד הנגדי אך היציבה נורמלית במנוחה, 3 = נשען אל נגדי בצד במנוחה, 4 = אין פעילות מוטורית ספונטנית. 4,9 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבצע את הבדיקות NDS, להרים העכבר בזנב ומניחים על משטח שטוח לצורך השגחה (2-3 דקות). לחלופין, להתבונן עכברים בחדר ההתאוששות. אל תכלול עכברים כי התערוכה NDS נמוך מ -2 מהניסוי בשל חסימה מספקת של MCA. הערה: טכניקת Flowmetry ליזר דופלר ניתן להשתמש כדי לאשר חסימת MCA 9-11. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-להרדים את החיה לאחר 60 דקות של התאוששות בחדר אינדוקציה כמתואר לעיל, מחדש לעקר את החתך בעור הקודם עם 10% פתרון לשפשף-יוד povidone, ולפתוח מחדש את הפצע כירורגית עלהקדמי של הצוואר על ידי חיתוך והסרת תפר משי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר את הנימה מן ECA לבצע את הפעולות הבאות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח קליפ כלי דם על ICA. שחרר את התפר על ICA ולמשוך הנימה החוצה כשהוא אוחז קליפ פתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את קליפ ומקום עניבה על ECA proximally הקיצוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקליפ ולהסיר המיתר מן המרכז לאמנות עכשווית כדי לשחזר את זרימת הדם אל המוח. עיין בתרשים, איור 1B. </li></ol></li></ol> התקנה 2. IV צנתר לווריד הצוואר עבור רציף 48 שעות טיפול הערה: המשך ההתקנה של הקטטר מיד לאחר השלב 1.16.3 ללא התעוררות של העכבר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשני גדלים שונים של צינורות גמישים: להכניס את הצינורות הפנימיים (0.94 מ&quot;מ מחוץ קוטר; להכיל את התרופה להיות חדור) לתוך הצינורות החיצוניים (3.18 מ&quot;מ מחוץ קוטר; להגנה על הצינורות הפנימיים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Pלשרוך את העכבר אפרקדן, להחיל 10% הפתרון לשפשף povidone יוד לחיטוי, ולעשות חתך 1 ס&quot;מ בחלק האחורי של הצוואר עם להב אזמל כירורגי בגודל 10. הפכו את העכבר לתוך במצב שכיבה, מחדש לעקר החלק הקדמי של הצוואר עם 10% פתרון לשפשף povidone יוד, ולפתוח מחדש את הפצע כירורגית על החלק הקדמי של הצוואר. מנהרת צינורות מתחת לעור מן החתך נעשה על חזרה בקדמת הצוואר, ואת exteriorize זה מן הפצע הפעור 1 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרה של רקמה שומנית תת עורית מהאגף השמאלי של החלק הקדמי של הצוואר על רוחבית 1 ס&quot;מ מן קו האמצע. האתר את וריד הצוואר שמאלה, הנח שני קשרים לאורך הווריד 5 מ&quot;מ זה מזה, ומעט למתוח הווריד. עושה חור קטן על עורק הצוואר בין שני קשרים עם מספרי כלי דם; הכנס את קצה caudally עמוק צינורות 5 המ&quot;מ הפנימי (לכיוון הלב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הצינורות עם שני קשרי וריד הצוואר. סגור את העור על החלק הקדמי של הצוואר עםתפר משי 3-0. עיין בתרשים, איור 1 ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הצינורות על העור על החלק האחורי של הצוואר עם תפר, ולחבר את הצינורות אל משאבת IV microinfusion באמצעות מסתובב. חח המאפשר תנועה חופשית של עכברים בתוך הכלוב עם גישה מלאה במזון ובמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חדור החתכים בעור בחזית ובחלק האחורי של הצוואר עם 0.2 מ&quot;ל של bupivacaine 0.5% על מנת למנוע את הכאב שלאחר הניתוח. הערה: בהתאם פרוטוקולים חיים ספציפית מוסדיים, בעלי חיים עשויים להיות מטופלים עם אופיואידים, NSAIDs, או אנטיביוטיקה לפני ואחרי ניתוח. עם זאת, טיפולים שהוזכרו עשויים לשנות את התוצאות של תוצאת שבץ איסכמי (ראה סעיף דיון). 11-14 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר החיה להתעורר בחדר ההתאוששות, ולאחר מכן לשכן את החיה בכלוב נפרד עד לנקודת הסיום של הניסוי. אין להשאיר את החיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור sternalrecumbence. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב עירוי לטיפול IV רציפה 48 שעות של conivaptan (0.14 מ&quot;ג / מ&quot;ל ב דקסטרוז 5%) או הרכב 1.5 מ&quot;ל / ק&quot;ג / שעה, 4 ולהתחיל עירוי. הערה: הסכום הכולל של conivaptan IV חדורים צריך להיות כ 0.2 מ&quot;ג / עכבר / יום בהיקף כולל של 1.44 מ&quot;ל. הערה: בצע הזרקה (IP) הזרקה של conivaptan פעמיים ביום עם סך של 0.2 מ&quot;ג ב 1.44 מ&quot;ל של 5% דקסטרוז. ליישם הזרקת IP הייתה כפי שתוארה לעיל. 15 לרסן עכברים על ידי אחיזת העור של פני השטח האחוריים של הגוף ואת הזנב. להזריק conivaptan או רכב לתוך ברבע השמאלי התחתון של הבטן באמצעות מחט אינץ 26 G / 1/2. 15 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב החיות פעמיים ביום למשך כל תקופת הניסוי (48 שעות). אפשר החיות יש גישה מלאה במזון ובמים. אם החיה מפגינה סימני מצוקה או קוצר נשימה להתייעץ עם וטרינר. אם המתת חסד הוא הכרחי עבור בעל החיים dist חמורהress מתייחס לשלב 3.1 להלן, ואינו כולל את החיה מן המחקר. </li></ol> הערכה 3. בצקת מוחית עורר שבץ בנקודת הסיום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את העכבר על ידי יתר בהרדמה עם 5% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל לעשות חתך בעור מעל לעצם הגולגולת לאורך קו האמצע, לסגת העור כדי לחשוף את הגולגולת כולה על המוח. החל בבית מגנום foramen, לחתוך את עצם הגולגולת רוחבית לאורך ההיקף של המוח בכל צד, והרם אותו בזהירות בלי לגעת במוח מתחתיו. לנתק את המוח מעמוד השדרה ואת העצבים מצורפים על בסיס הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המוח, להפריד אותו נורת חוש הריח ואת המוח הקטן, לנתח את המוח הגדול לאורך בקע המיספרי לתוך אונות מוח איסכמי ולא איסכמי, כפי שתואר לעיל. 9 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך בצקת במוח על ידי השוואה רטובה אל יבש יחסים (WDR) כפי שתואר לעיל 4,9. לשקול רקמותלפני ואחרי הייבוש במשך 3 ימים ב 100 מעלות צלזיוס בתנור. חישוב תכול מי מוח (BWC) כמו% H 2 O = (WT 1-יבש. / WT הרטוב.) X 100%. </li></ol>

<ol>
	<li>Gueniau, C., Oberlander, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kappa+opioid+agonist+niravoline+decreases+brain+edema+in+the+mouse+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+stroke.">The kappa opioid agonist niravoline decreases brain edema in the mouse middle cerebral artery occlusion model of stroke.</a> J Pharmacol Exp Ther. 282, 1-6 (1997).</li><li>Krafft, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+of+stroke+and+choice+of+models.">Etiology of stroke and choice of models.</a> Int J Stroke. 7, 398-406 (2012).</li><li>Vakili, A., Kataoka, H., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+arginine+vasopressin+V1+and+V2+receptors+for+brain+damage+after+transient+focal+cerebral+ischemia.">Role of arginine vasopressin V1 and V2 receptors for brain damage after transient focal cerebral ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25, 1012-1019 (2005).</li><li>Zeynalov, E., Jones, S. M., Seo, J. W., Snell, L. D., Elliott, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine-Vasopressin+Receptor+Blocker+Conivaptan+Reduces+Brain+Edema+and+Blood-Brain+Barrier+Disruption+after+Experimental+Stroke+in+Mice.">Arginine-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan Reduces Brain Edema and Blood-Brain Barrier Disruption after Experimental Stroke in Mice.</a> PloS one. 10, e0136121 (2015).</li><li>Med Lett Drugs Ther.. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conivaptan+(Vaprisol)+for+hyponatremia.">Conivaptan (Vaprisol) for hyponatremia.</a> The Medical letter on drugs and therapeutics. 48, 51-52 (2006).</li><li>Zhao, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+arginine+vasopressin+on+the+cortex+edema+in+the+ischemic+stroke+of+Mongolian+gerbils.">Effect of arginine vasopressin on the cortex edema in the ischemic stroke of Mongolian gerbils.</a> Neuropeptides. 51, 55-62 (2015).</li><li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+Evans+Blue+injection+routes:+Intravenous+versus+intraperitoneal,+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model.">Comparison Evans Blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195, 206-210 (2011).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Curr Protoc Mouse Biol. 5, 51-63 (2015).</li><li>Zeynalov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+perivascular+pool+of+aquaporin-4+mediates+the+effect+of+osmotherapy+in+postischemic+cerebral+edema.">The perivascular pool of aquaporin-4 mediates the effect of osmotherapy in postischemic cerebral edema.</a> Crit Care Med. 36, 2634-2640 (2008).</li><li>Zeynalov, E., Dore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+doses+of+carbon+monoxide+protect+against+experimental+focal+brain+ischemia.">Low doses of carbon monoxide protect against experimental focal brain ischemia.</a> Neurotox Res. 15, 133-137 (2009).</li><li>Zeynalov, E., Nemoto, M., Hurn, P. D., Koehler, R. C., Bhardwaj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+selective+kappa+opioid+receptor+agonist+is+gender+specific+and+linked+to+reduced+neuronal+nitric+oxide.">Neuroprotective effect of selective kappa opioid receptor agonist is gender specific and linked to reduced neuronal nitric oxide.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 414-420 (2006).</li><li>Ma, M. C., Qian, H., Ghassemi, F., Zhao, P., Xia, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen-sensitive+{delta}-opioid+receptor-regulated+survival+and+death+signals:+novel+insights+into+neuronal+preconditioning+and+protection.">Oxygen-sensitive {delta}-opioid receptor-regulated survival and death signals: novel insights into neuronal preconditioning and protection.</a> J Biol Chem. 280, 16208-16218 (2005).</li><li>Ahmad, M., Zhang, Y., Liu, H., Rose, M. E., Graham, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+opportunity+for+neuroprotection+in+experimental+stroke+with+selective+blockade+of+cyclooxygenase-2+activity.">Prolonged opportunity for neuroprotection in experimental stroke with selective blockade of cyclooxygenase-2 activity.</a> Brain Res. 1279, 168-173 (2009).</li><li>Meisel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventive+antibacterial+treatment+improves+the+general+medical+and+neurological+outcome+in+a+mouse+model+of+stroke.">Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke.</a> Stroke. 35, 2-6 (2004).</li><li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+injection+of+mice.">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17, 250-251 (1969).</li><li>Adis International Limited. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conivaptan:+YM+087.">Conivaptan: YM 087.</a> Drugs in R&amp;D. 5, 94-97 (2004).</li><li>Murphy, T., Dhar, R., Diringer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conivaptan+bolus+dosing+for+the+correction+of+hyponatremia+in+the+neurointensive+care+unit.">Conivaptan bolus dosing for the correction of hyponatremia in the neurointensive care unit.</a> Neurocrit Care. 11, 14-19 (2009).</li><li>Liu, X., Nakayama, S., Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P., Bhardwaj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arginine-vasopressin+V1+but+not+V2+receptor+antagonism+modulates+infarct+volume,+brain+water+content,+and+aquaporin-4+expression+following+experimental+stroke.">Arginine-vasopressin V1 but not V2 receptor antagonism modulates infarct volume, brain water content, and aquaporin-4 expression following experimental stroke.</a> Neurocrit Care. 12, 124-131 (2010).</li><li>Wallace, B. K., Jelks, K. A., O'Donnell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-induced+stimulation+of+cerebral+microvascular+endothelial+cell+Na-K-Cl+cotransport+involves+p38+and+JNK+MAP+kinases.">Ischemia-induced stimulation of cerebral microvascular endothelial cell Na-K-Cl cotransport involves p38 and JNK MAP kinases.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 302, C505-C517 (2012).</li><li>O'Donnell, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+HOE-642+reduces+brain+edema+and+Na+uptake+in+the+rat+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+stroke:+evidence+for+participation+of+the+blood-brain+barrier+Na/H+exchanger.">Intravenous HOE-642 reduces brain edema and Na uptake in the rat permanent middle cerebral artery occlusion model of stroke: evidence for participation of the blood-brain barrier Na/H exchanger.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33, 225-234 (2013).</li><li>Walcott, B. P., Kahle, K. T., Simard, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+treatment+targets+for+cerebral+edema.">Novel treatment targets for cerebral edema.</a> Neurotherapeutics. 9, 65-72 (2012).</li><li>Shen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+G+protein-coupled+receptor+81+(GPR81)+protects+against+ischemic+brain+injury.">Inhibition of G protein-coupled receptor 81 (GPR81) protects against ischemic brain injury.</a> CNS Neurosci Ther. 21, 271-279 (2015).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

למחקר זה יש ערך חשוב למחקר שבץ בבעלי חיים. מחקר זה מגלה כי עירוי IV הרציף של conivaptan (0.2 מ&quot;ג / יום) לאחר שבץ ניסיוני בעכברים ביעילות מפחית בצקת במוח לאחר 48 שעות של טיפול. השפעת הזרקת ה- IP של אותו המינון של conivaptan על בצקת במוח גם נחקרה. טיפול Conivaptan ידי שני מסלולי IV ו- IP מייצר aqua...

Stroke continues to be an enormous burden for patients and clinicians. Animal stroke models have been used in the laboratory setting for nearly two decades.1 Nevertheless, experimental treatments that work in animals often fail in humans.2 This discrepancy in treatment outcomes may be due to various factors, such as administration routes for drugs used in animal research, drug metabolism and elimination rate, and many other aspects. One of the major complications of stroke, brain edema, is a focus of current research in neuroscience. Mechanisms of brain edema formation involve disturbances in water and electrolyte balance triggered by the arginine-vasopressin (AVP) response to ischemic brain injury.3 Therefore, AVP and its receptors (V1a and V2) are a major focus of research studies of post-ischemic brain edema formation.3
We have developed a methodology to study the effects of mixed arginine-vasopressin (V1a and V2) receptor blocker conivaptan on post-ischemic brain edema in mice.4 Molecular targets of conivaptan5 make the drug a suitable candidate for exploration of its properties in alleviation of brain edema. Furthermore, conivaptan needs to be studied in the context of pathophysiological events of stroke.6 In designing this study, we considered comparing treatment outcomes using two different routes of administration for conivaptan: intravenous (IV)4 and intraperitoneal (IP).7 Effects of the treatments on stroke-induced brain edema were evaluated. Here detailed protocols are described for surgical induction of experimental stroke by middle cerebral artery occlusion (MCAO), and followed by continuous conivaptan treatment using the installation of a jugular IV catheter. After induction of stroke, animals were randomly allocated into the following groups: vehicle or conivaptan (0.2 mg/day) treated IV or IP.

<table><tbody><tr><td>Heated Pad</td><td>K&amp;amp;H Manufacturing Inc</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Monitor with Rectal Probe</td><td>Physitemp</td><td>7029</td><td></td></tr><tr><td>Silk Suture Spool, 6-0</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>SP114</td><td></td></tr><tr><td>Silk Suture on a Needle, 3-0</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Suture, 7-0</td><td>Ethicon</td><td>1696G</td><td></td></tr><tr><td>Dental Resin Polysiloxane with Hardener</td><td>Heraeus Kulzer</td><td>65817930</td><td></td></tr><tr><td>Microinfusion IV Pump</td><td>Kent Scietific</td><td>GT0897</td><td></td></tr><tr><td>Swivel 22GA</td><td>Instech</td><td>375/22PS</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-002</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-009</td><td></td></tr></tbody></table>

continuous iv infusion is the choice treatment route for arginine-vasopressin receptor blocker conivaptan in mice to study stroke-evoked brain edema

שבץ הוא אחד הגורמים העיקריים לתחלואה ותמותה בעולם. שבץ מסתבך בשל בצקת במוח ואירועים pathophysiological אחרים. בין השחקנים החשובים ביותר בפיתוח האבולוציה של בצקת במוח עורר שבץ הוא הורמון ארגינין-וזופרסין ואת הקולטנים שלו, V1a ו- V2. לאחרונה, conivaptan חוסם קולטן V1a ו V2 כבר למשוך תשומת לב כתרופה פוטנציאל להפחתת הבצקת במוח לאחר שבץ. עם זאת, במודלים של בעלי החיים אשר כרוכים יישומי conivaptan במחקר שבץ צריכים להיות שונים בהתבסס על נתיבים ריאליים של ממשל. הנה התוצאות של ורידי רציף 48 שעות (IV) מושוות עם ההזרקה (IP) טיפולי conivaptan לאחר שבץ ניסיוני בעכברים. פיתחנו פרוטוקול שבו באמצע חסימה בעורק מוחי היה בשילוב עם התקנה קטטר לווריד הצוואר לטיפול IV של conivaptan (0.2 מ&quot;ג) או ברכב. מחזורים שונים של בעלי חיים טופלו 0.2בולוס מ&quot;ג IP conivaptan או רכב יומי. בצקת במוח ניסיוני עורר שבץ הוערכה בעכברים לאחר IV הרציפה וטיפולי IP. השוואה של התוצאות הראתה כי ממשל IV הרציף של conivaptan מקל בצקת במוח שלאחר איסכמי בעכברים, בניגוד לממשל IP של conivaptan. אנו מסיקים כי המודל שלנו יכול לשמש למחקרים עתידיים של יישומי conivaptan בהקשר של שבץ בצקת במוח.

טמפרטורת הגוף של בעלי החיים בתוך הטווח הפיזיולוגי ויציבה לאורך ההליך הכירורגי של אינדוקציה שבץ. שני עכברים אשר הציג NDS נמוך מ -2 מיד לאחר MCAO הוצאו מהמחקר. MCAO בעכברים מייצר נפח האוטם בחצי הכדור ipsi...

Watch this Scientific Journal Video about Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema at JoVE.c

Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

Our studies have revealed that the beneficial effects of conivaptan are dependent on the method of delivery after experimental stroke in mice. We have developed a research protocol for delivery of the receptor blocker via IV catheter on stroke-evoked brain edema formation in mice.

עירוי IV רציף הוא כביש טיפול הבחירה עבור ארגינין-וזופרסין קולטן חוסם Conivaptan עכברים ללמוד בצקת מוחית עורר שבץ

Stroke is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Stroke is complicated by brain edema and other pathophysiological events. Among ...

continuous-iv-infusion-is-choice-treatment-route-for-arginine

Research

JoVE Journal

Medicine

8.8K Views.  Swedish Medical Center. Our studies have revealed that the beneficial effects of conivaptan are dependent on the method of delivery after experimental stroke in mice. We have developed a research protocol for delivery of the receptor blocker via IV catheter on stroke-evoked brain edema formation in mice. 

Video: Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular (ICV) and Intravenous (IV) Injection in Mice

Despite the protective role that blood brain barrier plays in shielding the brain, it limits the access to the central nervous system (CNS) which most often results in failure of potential therapeutics designed for neurodegenerative disorders 1,2. Neurodegenerative diseases such as Spinal Muscular Atrophy (SMA), in which the lower motor neurons are affected, can benefit greatly from introducing the therapeutic agents into the CNS. The purpose of this video is to demonstrate two different injection paradigms to deliver therapeutic materials into neonatal mice soon after birth. One of these methods is injecting directly into cerebral lateral ventricles (Intracerebroventricular) which results in delivery of materials into the CNS through the cerebrospinal fluid 3,4. The second method is a temporal vein injection (intravenous) that can introduce different therapeutics into the circulatory system, leading to systemic delivery including the CNS 5. Widespread transduction of the CNS is achievable if an appropriate viral vector and viral serotype is utilized. Visualization and utilization of the temporal vein for injection is feasible up to postnatal day 6. However, if the delivered material is intended to reach the CNS, these injections should take place while the blood brain barrier is more permeable due to its immature status, preferably prior to postnatal day 2. The fully developed blood brain barrier greatly limits the effectiveness of intravenous delivery. Both delivery systems are simple and effective once the surgical aptitude is achieved. They do not require any extensive surgical devices and can be performed by a single person. However, these techniques are not without challenges. The small size of postnatal day 2 pups and the subsequent small target areas can make the injections difficult to perform and initially challenging to replicate.

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular ICV and Intravenous IV Injection in Mice

This article demonstrates two very different methods of injection: 1) into the brain (intracerebroventricular) and 2) systemic (intravenous) to introduce the therapeutic agents into the central nervous system of neonatal mice.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

Despite the protective role that blood brain barrier plays in shielding the brain, it limits the access to the central nervous system (CNS) which most ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

שיטה הנפחי עבור כימות Vasospasm המוחית במודל מאתר של דימום תת-עכבישי

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Neuroscience

Delivery of Antibodies into the Murine Brain via Convection-enhanced Delivery

Convection-enhanced delivery (CED) is a neurosurgical technique enabling effective perfusion of large brain volumes using a catheter system. Such an approach provides a safe delivery method by-passing the blood brain barrier (BBB), thus allowing treatment with therapeutics with poor BBB-permeability or those for which systemic exposure is not desired, e.g., due to toxicity. CED requires optimization of the catheter design, injection protocol, and properties of the infusate. With this protocol we describe how to perform CED of a solution containing up to 20 &#181;g of an antibody into the caudate putamen of mice. It describes preparation of step catheters, testing them in vitro and performing the CED in mice using a ramping injection program. The protocol can be readily adjusted for other infusion volumes and can be used for injecting various tracers or pharmacologically active or inactive substances, including chemotherapeutics, cytokines, viral particles, and liposomes.

Convection-enhanced delivery (CED) is a method enabling effective delivery of therapeutics into the brain by direct perfusion of large tissue volumes. The procedure requires the use of catheters and an optimized injection procedure. This protocol describes a methodology for CED of an antibody into a mouse brain.

מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר

Convection-enhanced delivery (CED) is a neurosurgical technique enabling effective perfusion of large brain volumes using a catheter system. Such an ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Systems Analysis of the Neuroinflammatory and Hemodynamic Response to Traumatic Brain Injury

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional deficits. Numerous studies by our group and others have shown that mTBI stimulates cytokine expression and activates microglia, decreases cerebral blood flow and metabolism, and impairs cerebrovascular reactivity. Moreover, several works have reported an association between derangements in these neuroinflammatory and hemodynamic markers and cognitive impairments. Herein we detail methods to characterize the neuroinflammatory and hemodynamic tissue response to mTBI in mice. Specifically, we describe how to perform a weight-drop model of mTBI, how to longitudinally measure cerebral blood flow using a non-invasive optical technique called diffuse correlation spectroscopy, and how to perform a Luminex multiplexed immunoassay on brain tissue samples to quantify cytokines and immunomodulatory phospho-proteins (e.g., within the MAPK and NF&#954;B pathways) that respond to and regulate activity of microglia and other neural immune cells. Finally, we detail how to integrate these data using a multivariate systems analysis approach to understand the relationships between all of these variables. Understanding the relationships between these physiologic and molecular variables will ultimately enable us to identify mechanisms responsible for mTBI.

This protocol presents methods to characterize the neuroinflammatory and hemodynamic response to mild traumatic brain injury and to integrate these data as part of a multivariate systems analysis using partial least squares regression.

ניתוח מערכות של התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית

Mild traumatic brain injuries (mTBIs) are a significant public health problem. Repeated exposure to mTBI can lead to cumulative, long-lasting functional ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent infarction size and location, precipitation of platelet:fibrin intermixed blood clots similar to those in patients, and an adequate sensitivity to fibrinolytic treatment. The rose bengal (RB) dye-based photothrombotic stroke model meets the first two requirements but is highly refractory to tPA-mediated lytic treatment, presumably due to its platelet-rich, but fibrin-poor clot composition. We reason that combination of RB dye (50 mg/kg) and a sub-thrombotic dose of thrombin (80 U/kg) for photoactivation aimed at the proximal branch of middle cerebral artery (MCA) may produce fibrin-enriched and tPA-sensitive clots. Indeed, the thrombin and RB (T+RB)-combined photothrombosis model triggered mixed platelet:fibrin blood clots, as shown by immunostaining and immunoblots, and maintained consistent infarct sizes and locations plus low mortality. Moreover, intravenous injection of tPA (Alteplase, 10 mg/kg) within 2 h post-photoactivation significantly decreased the infarct size in T+RB photothrombosis. Thus, the thrombin-enhanced photothrombotic stroke model may be a useful experimental model to test novel thrombolytic therapies.

Traditional photothrombotic stroke (PTS) models mainly induce dense platelet aggregates of a high resistance to tissue plasminogen activator (tPA)-lytic treatment. Here a modified murine PTS model is introduced by co-injecting thrombin and photosensitive dye for photoactivation. The thrombin-enhanced PTS model produces mixed platelet:fibrin clots and is highly sensitive to tPA-thrombolysis.

מודל שבץ פוטוטרומבוטי מועשר בפיברין ורגיש ל-tPA

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

Intracranial Pressure Monitoring In Nontraumatic Intraventricular Hemorrhage Rodent Model

Survivors of intraventricular hemorrhage are often left with significant long-term memory impairment; thus, research utilizing intraventricular hemorrhage animal models is essential. In this study, we sought out ways to measure intracranial pressure, mean arterial pressure, and cerebral perfusion pressure during nontraumatic intraventricular hemorrhage in rats. The experimental design included three Sprague Dawley groups: sham, standard 200 &#181;l intraventricular hemorrhage, and vehicle control groups. By introducing an intraparenchymal fiberoptic pressure sensor, precise intracranial pressure measurements were obtained in all groups. Cerebral perfusion pressures were calculated with the knowledge of intracranial pressure and mean arterial pressure values. As expected, the intraventricular hemorrhage and vehicle control groups both experienced a rise in the intracranial pressure and subsequent decline in cerebral perfusion pressure during intraventricular injection of autologous blood and artificial cerebrospinal fluid, respectively. The addition of an intraparenchymal fiberoptic pressure sensor is beneficial in monitoring precise intracranial pressure changes.

Monitoring intracranial pressure in rodent&#160;models of nontraumatic intraventricular hemorrhage is not common in the current literature. Herein, we demonstrate a technique for measuring intracranial pressure, mean arterial pressure, and cerebral perfusion pressure during intraventricular hemorrhage in a rat&#160;animal model.

ניטור לחץ תוך גולגולתי במודל מכרסם דימום תוך חדרי לא טראומטי

Survivors of intraventricular hemorrhage are often left with significant long-term memory impairment; thus, research utilizing intraventricular hemorrhage ...

Intraventricular Drug Delivery and Sampling for Pharmacokinetics and Pharmacodynamics Study

Although the blood-brain barrier (BBB) protects the brain from foreign entities, it also prevents some therapeutics from crossing into the central nervous system (CNS) to ameliorate diseases or infections. Drugs are administered directly into the CNS in animals and humans to circumvent the BBB. The present protocol describes a unique way of treating brain infections through intraventricular delivery of antibiotics, i.e., polymyxins, the last-line antibiotics to treat multi-drug resistant Gram-negative bacteria. A straightforward stereotaxic surgery protocol was developed to implant a guide cannula reaching into the lateral ventricle in rats. After a recovery period of 24 h, rats can be injected consciously and repeatedly through a cannula that is fitted to the guide. Injections can be delivered manually as a bolus or infusion using a microinjection pump to obtain a slow and controlled flow rate. The intraventricular injection was successfully confirmed with Evans Blue dye. Cerebrospinal fluid (CSF) can be drained, and the brain and other organs can be collected. This approach is highly amenable for studies involving drug delivery to the CNS and subsequent assessment of pharmacokinetic and pharmacodynamic activity.

Delivery of therapeutics directly into the central nervous system is one way of circumventing the blood-brain barrier. The present protocol demonstrates intracerebroventricular injection for subsequent collection of cerebrospinal fluid and bodily organs. This facilitates the investigation of drug pharmacokinetics and pharmacodynamics in animal models for developing new treatments.

Although the blood-brain barrier (BBB) protects the brain from foreign entities, it also prevents some therapeutics from crossing into the central nervous ...

<meta charset="utf8"></head><body>הדמיה מבוססת צבע פלואורסצנטי של פירוק מחסום דם-מוח בעכברים

Evaluation of Blood-Brain Barrier Breakdown in a Mouse Model of Mild Traumatic Brain Injury

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is a complex process influenced by several factors, such as the concentration of dyes in the blood, permeability of brain vessels, duration of dye extravasation, and reduction in dye concentration in the tissue due to degradation and diffusion. In a mild traumatic brain injury model, exposure to blast-induced shock waves (BSWs) triggers BBB breakdown within a limited time window. To determine the precise sequence of BBB breakdown, Evans blue, and fluorescein isothiocyanate-dextran were injected intravascularly and intracardially into mice at various time points relative to BSW exposure. The distribution of dye fluorescence in brain slices was then recorded. Differences in the distribution and intensity between the two dyes revealed the spatiotemporal sequence of BBB breakdown. Immunostaining of the brain slices showed that astrocytic and microglial responses correlated with the sites of BBB breakdown. This protocol has broad potential for application in studies involving different BBB breakdown models.

<meta charset="utf8"></head><body>הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

A method was developed to visualize dye extravasation due to blood-brain barrier (BBB) breakdown by administering two fluorescent dyes to mice at different time points. The use of glycerol as a cryoprotectant facilitated immunohistochemistry on the same sample.

הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is ...

עירוי IV רציף הוא כביש טיפול הבחירה עבור ארגינין-וזופרסין קולטן חוסם Conivaptan עכברים ללמוד בצקת מוחית עורר שבץ

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

שיטה הנפחי עבור כימות Vasospasm המוחית במודל מאתר של דימום תת-עכבישי

מסירת נוגדנים למוח מורנה באמצעות הסעה-משלוח משופר

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

ניתוח מערכות של התגובה הנוירו-דלקתית וההמודינמית לפגיעה מוחית טראומטית

מודל שבץ פוטוטרומבוטי מועשר בפיברין ורגיש ל-tPA

ניטור לחץ תוך גולגולתי במודל מכרסם דימום תוך חדרי לא טראומטי

Intraventricular Drug Delivery and Sampling for Pharmacokinetics and Pharmacodynamics Study

הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה

הערכה של התמוטטות מחסום דם-מוח במודל עכבר של פגיעה מוחית טראומטית קלה