מימון מהמכון הלאומי האמריקאי לבריאות (מעניק R01EB008678, R01DK096075, R01DK084053, R00DK088962 וDK103500 F32), CIMIT פרויקט מס &#39;12-1732 ובתי החולים Shriners לילדים הוא הודה בהכרת תודה. ברצוננו להודות בהכרת תודה בנק האיברים ניו אינגלנד לתמיכה בעבודה זו.

השימוש ברקמה אנושית חייב להיבדק על ידי מועצה לביקורת מוסדית (IRB) או שווה ערך. העבודה המתוארת כאן אושרה והכריזה פטור על ידי בית החולים הכללי מסצ&#39;וסטס Institutional Review Board (מס &#39;2011P001496). 1. פתרון הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סביבה נקיה מחיידקים להוסיף תוספים לפנול E בינונית &#39;וויליאמס אדומה ללא כפי שמתוארת בטבלה 1. הפתרון צריך להיות מוכנים טרי לפני השימוש. אינסולין יש להוסיף רק לפני השימוש. </li></ol> 2. חזרה הכנת טבלה של הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים קערת איבר מלאת קרח על פני השטח סטרילי, עטוף. הסר את הכבד מהתיבה, והשאיר אותו בשקית של פתרון שימור קר. שמור את הכבד בעיקר מתחת למים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את העורק הכבד (HA), אשר יהיה ממוקם דיסטלי לתיקון אב העורקים. לנתח בחינם העורק לחשוף סניפי חתך שונים לאורכו באמצעות מספריים מצנבאום. disse בזהירותct כל אורכו של העורק כדי למנוע ניתוק כלי שמספק את הכבד. אין לחתוך או לקשור ענפים שאין להם סוף גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את כל סניפי העורקים לא מספקים את הכבד באמצעות תפר משי החל גודל 0 עד 4-0, תלוי בגודל של כלי השיט. סניפים קרובים, כי הם קצרים מדי כדי לקשור או חורים בעורק עם תפר של 7-0 prolene. עניבה וחתכה את עורקי הקיבה הטחול ושמאל קרובים למקור שלהם בתא מטען צליאק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תיקון אב העורקים על ידי חיתוך גזע צליאק ישירות תחת התיקון. Cannulate תא מטען צליאק באמצעות צינורית אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את וריד השער (PV) ובוטות לנתח את זה בחינם. לקשור את כל סניפים וcannulate PV עם המגזר מוכן בגודל 24 צינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר חלקים של סרעפת מהווריד הנבוב suprahepatic, בלי לחתוך את הווריד עצמו. יצוא ממתנקז הווריד הנבוב ישירות לתוך תא האיבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך 2 ti מלא היקףדגימות ssue (אורך מ&quot;מ 2-3) מקצה של צינור המרה המשותפת; הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) ולאחסן האחרים ב 10% שנאגרו פורמלין, לרקמות וניתוח היסטולוגית, בהתאמה. Cannulate צינור מרה המשותף עם צינורית הכלי וצינור ניקוז עשוי מצינורות oxygenator הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולקשור את צינור פיברוזיס עם עניבת משי 0. צינור פיברוזיס נמצא בין צינור המרה המשותפת וכיס המרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינורות הסומק מוגדרים שקיות קרות כקרח של תמיסת הרטמן (LR) וראש צינורות, הסרת כל האוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את זרימת הווסת על צינור הסומק לטפטוף איטי. לפני חיבור צינור הסומק לצינורית וריד שער, לחסום את וריד השער עם אצבעות בhilum ולמלא את הצינורית ווריד עם סומק כדי להסיר את האוויר מוריד השער. לא להעלות את השקית יותר מ -20 סנטימטרים מעל הגובה של הכבד במהלך שטיפה קרה, כדי למנוע לחץ מופרז עלוריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך בקצרה הסומק לחסום את PV בנקודה הנמוכה ביותר. לבחון את PV להדלפות. ניתן לסגור את סניפי כלי כפי שתוארו לעיל. לשטוף את הכבד באמצעות PV עם סך של 2 L של LR קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.10, 2.11 לHA עם 1 ליטר של LR. </li></ol> 3. לקרקע מערכת SNMP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש מכשיר זלוף על ידי הוספת 2 L של perfusate (21 ° C) לקערת האיבר ומתחיל את המכשיר לראש צינורות. בצע את ההוראות של המכשיר כדי להתכונן לזלוף, קביעת הטמפרטורה ל -21 מעלות צלזיוס. התחל עם לחצים של 3 מ&quot;מ כספית ו -30 מ&quot;מ כספית בPV וHA, בהתאמה. פתח את מיכל הדלק ולהגדיר לזרימה של 3 L / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקחת דגימת דם משני גז זרימת HA וPV על ידי ציור מדגם 0.3 מיליליטר מנמלי המדגם ומפעיל אותו במכונה ניתוח גז דם על פי הוראות היצרן. לאשר חמצון נאות (PO 2&gt; 700 מ&quot;מ כספית) ו- pH (7.35-7.45). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הכבד המחובר לקחת דגימת 1.0 מיליליטר של perfusate כב= 0 מדידה בצינור Eppendorf ולאחסן ב -80 ° C. חותך שתי ± 250 ביופסיות טריז מ&quot;ג מהכבד עם להב פלדה בעל להב אחד; הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) ולאחסן האחרים ב 10% שנאגרו פורמלין. לשקול את הכבד לפני זלוף. </li></ol> 4. אדם הכבד זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הכבד למכשיר. חבר את זרימת PV לצינורית PV, לאחר הסרת אוויר מPV כמו בשלב 2.10. חבר את HA באופן דומה. PV להגדיר ולחץ HA עד 3 ו -30 מ&quot;מ כספית. הכבד צריך להיות כמעט שקוע בperfusate. לכסות את כל משטחים יבשים, כולל כלי יבוא, עם גזה סטרילית רטובה על מנת למנוע התייבשות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו לטמיון צינורות מרה לתוך מיכל איסוף. ודא פתיחת ניקוז המרה היא ברמה של הכבד או נמוך כדי לאפשר מרה לרוץ out באופן חופשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרימת יעד שיעורים הם 275-325 מיליליטר / min.kg ו50-100 מיליליטר / min.kg לPV וHA בהתאמה פעם הכבד התחמם עד 21 ° C. מאז כל כבד מגיב בצורה שונה לזלוף, לפקח על הזרימה צמודה במהלך דקות הראשונות. להגדיל או להקטין את הלחץ על אחד מהכולים אם ספיקות היעד לא הגיעו. לא יעלה על 50 מ&quot;מ כספית בHA ו -5 מ&quot;מ כספית על PV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן לקחת דגימות מרקמת כבד, perfusate והמרה בהעדפת החוקרים. אנו ממליצים על מינימום מדגם משטר האוסף הבא במהלך זלוף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביופסיות רקמות, n = 2 x 250 מ&quot;ג, בכל שעה. אחסון: הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזל חנות ב -80 לטווח ארוך C °. בנוסף, לקחת ביופסיה נוספת לפני ואחרי זלוף ולתקן ב 10% שנאגרו פורמלין (n = 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות perfusate, n = 2x 1 מיליליטר, כל 15 דקות לשעה הראשונה וכל 30 דקות לאחר מכן. לצייר דגימות מinf PVנמל מדגם נמוך. אחסון: -80 ° C לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח גז דם של PV וזרימת HA, ויצוא וריד נבוב. n = 3 x 0.3 מיליליטר, בכל 30 דקות. לצייר דגימות משני PV ויציאות מדגם HA. צייר מדגם 0.3 מיליליטר מהווריד הנבוב על ידי החדרת מזרק לתוך הווריד ולהפעיל ישירות במנתח גז דם. השתמש בתפוקה כדי להבטיח חמצון וpH מתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייצור מיצי מרה, n = 1 מיליליטר x 1, כל שעה. מבחינה ויזואלית לכמת ייצור מיצי מרה בכל שעה ולקחת דגימה מיכל האיסוף. לחדש את המכל לאחר דגימה. אחסון: קרח יבש ו-80 ° C לטווח ארוך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך זלוף במשך 3 שעות. ניטור הלחץ, pH וחמצון ולקיחת דגימות לאורך כל דרך. התאם אותו pH על ידי הוספת סודה לשתייה לperfusate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של זלוף לקחת דגימות הסופיות בעוד הכבד הוא להיות perfused. נתק את הכבד ולהסיר את צינורית צינור מרה. קח 2 דגימות רקמה שלאחר טפטוף שלצינור מרה כפי שתואר קודם לאחסון ב -80 ° C וב 10% שנאגרו פורמלין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את הכבד האנושי הבא הנחיות רשות Biohazard הנכון. </li></ol>

<ol>
	<li>Merion, R. M., Pelletier, S. J., Goodrich, N., Englesbe, M. J., Delmonico, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+after+cardiac+death+as+a+strategy+to+increase+deceased+donor+liver+availability.">Donation after cardiac death as a strategy to increase deceased donor liver availability.</a> Ann Surg. 244 (4), 555-562 (2006).</li><li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+machine+preservation+facilitates+successful+transplantation+of+'orphan'+extended+criteria+donor+livers.">Hypothermic machine preservation facilitates successful transplantation of 'orphan' extended criteria donor livers.</a> Am J Transplant. 15, 161-169 (2015).</li><li>Dutkowski, P., Schlegel, A., de Oliveira, M., M&#252;llhaupt, B., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE+for+human+liver+grafts+obtained+from+donors+after+cardiac+death.">HOPE for human liver grafts obtained from donors after cardiac death.</a> J Hepatol. 60 (4), 765-772 (2013).</li><li>Dutkowski, P., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solutions+to+Shortage+of+Liver+Grafts+for+Transplantation.">Solutions to Shortage of Liver Grafts for Transplantation.</a> Br J Surg. 101 (7), 739-774 (2014).</li><li>Vogel, T., Brockmann, J. G., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+Normothermic+Liver+Perfusion:+An+Update.">Ex-vivo Normothermic Liver Perfusion: An Update.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 167-172 (2010).</li><li>Monbaliu, D., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+Perfusion+of+the+Liver:+Past,+Present,+and+Future.">Machine Perfusion of the Liver: Past, Present, and Future.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 160-166 (2010).</li><li>Matsuno, M., Uchida, K., Furukawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Machine+Perfusion+Preservation+of+Liver+Grafts+From+Donation+After+Cardiac+Death.">Impact of Machine Perfusion Preservation of Liver Grafts From Donation After Cardiac Death.</a> Transplant Proc. 46 (4), 1099-1103 (2014).</li><li>Schlegel, A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hypothermic+machine+perfusion+in+liver+transplantation.">Role of hypothermic machine perfusion in liver transplantation.</a> Transplant Int. , (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13, 1327-1335 (2013).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prophylaxis+in+(sub)normothermic+organ+preservation:+In+vitro+efficacy+and+toxicity+of+cephalosporins.">Antibiotic prophylaxis in (sub)normothermic organ preservation: In vitro efficacy and toxicity of cephalosporins.</a> Transplantation. 95 (8), 1064-1069 (2013).</li><li>Post, I. C., Dirkes, M. C., Heger, M., Bezemer, R., van't Leven, J., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+flow+and+pressure+management+in+machine+perfusion+systems+for+organ+preservation.">Optimal flow and pressure management in machine perfusion systems for organ preservation.</a> Ann Biomed Eng. 40 (12), 2698-2707 (2012).</li><li>Post, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+preservation+at+hypothermic+to+normothermic+conditions+using+clinical+and+experimental+organ+preservation+solutions.">Endothelial cell preservation at hypothermic to normothermic conditions using clinical and experimental organ preservation solutions.</a> Exp Cell Res. 319 (17), 2501-2513 (2013).</li><li>Klein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Donation+and+Utilization+in+the+United+States,+1999-2008.">Organ Donation and Utilization in the United States, 1999-2008.</a> Am J Transplant. 10 (4), 973-986 (2010).</li><li>Jay, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Increased+Costs+of+Donation+After+Cardiac+Death+Liver+Transplantation.">The Increased Costs of Donation After Cardiac Death Liver Transplantation.</a> Ann Surg. 251 (4), 743-748 (2010).</li><li>Seehofer, D., Eurich, D., Veltzke-Schlieker, W., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+Complications+After+Liver+Transplantation:+Old+Problems+and+New+Challenges.">Biliary Complications After Liver Transplantation: Old Problems and New Challenges.</a> Am J Transplant. 13, 253-265 (2013).</li><li>Morrissey, P., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+After+Circulatory+Death:+Current+Practices,+Ongoing+Challenges+and+Potential+Improvement.">Donation After Circulatory Death: Current Practices, Ongoing Challenges and Potential Improvement.</a> Transplantation. 97 (3), 258-264 (2014).</li><li>Verdonk, R., Buis, C., Porte, R., Haagsma, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+complications+after+liver+transplantation:+A+review.">Biliary complications after liver transplantation: A review.</a> Scand J Gastroenterol. 41, 89-101 (2006).</li><li>Pine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+Transplantation+Following+Donation+After+Cardiac+Death:+An+Analysis+Using+Matched+Pairs.">Liver Transplantation Following Donation After Cardiac Death: An Analysis Using Matched Pairs.</a> Liver Transpl. 15 (9), 1072-1082 (2009).</li><li>Sutton, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+viability+assessment+of+discarded+human+donor+livers+during+ex+vivo+normothermic+machine+perfusion.">Criteria for viability assessment of discarded human donor livers during ex vivo normothermic machine perfusion.</a> PLoS One. 11, e110642 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Machine+Perfusion+for+Ex+Vivo+Preservation+and+Recovery+of+the+Human+Liver+for+Transplantation.">Subnormothermic Machine Perfusion for Ex Vivo Preservation and Recovery of the Human Liver for Transplantation.</a> Am J Transplant. 14, 1400-1409 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., Yarmush, M. L., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organomatics+and+organometrics:+Novel+platforms+for+long-term+whole-organ+culture.">Organomatics and organometrics: Novel platforms for long-term whole-organ culture.</a> Technology. 02 (1), 13-22 (2014).</li><li>Berendsen, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+subnormothermic+machine+perfusion+system+restores+ischemically+damaged+liver+grafts+in+a+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation.">A simplified subnormothermic machine perfusion system restores ischemically damaged liver grafts in a rat model of orthotopic liver transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 6 (2012).</li></ol>

בני הזוג. BE Uygun, K Uygun וYarmush הם ממציאים בפטנט שרלוונטי למחקר זה (WO / 2011 / 002,926), ובני הזוג. BE Uygun, K Uygun וYarmush הם ממציאים בפטנט שרלוונטי למחקר זה (WO / 2011/35223). בני הזוג. יש לי K Uygun וBruinsma בקשת פטנט זמני הקשורים לעבודה זו. יש לי ד&quot;ר K Uygun ולהיות Uygun אינטרס כלכלי בפתרוני איברים, חברה מתמקדת בפיתוח טכנולוגית שימור איברים. ד&quot;ר K Uygun ולהיות האינטרסים של Uygun מנוהלים על ידי MGH והשותפים HealthCare בהתאם לסכסוך שלהם על מדיניות ריבית.

בניסיון לשחזר את הכבדים נפצעו במהלך איסכמיה פיתחנו מערכת SNMP שיכול להיות מועסק לאחר תקופה של אחסון קר. זלוף המכונה Subnormothermic מציע חלופה לאחסון קונבנציונלי קר, וכן דרכי זלוף המכונה היפותרמיה וnormothermic. מערכות שונות קיימות; כולם מציעים יתרונות וחסרונות שונים 3,9,20. SNMP מאפשר לזלוף ללא ספק חמצן, כדרישות חמצן מטבולים בגיל 21 מעלות צלזיוס הם נפגשו על ידי חמצון פעיל של perfusate. למרות מופחת בתנאי subnormothermic, חילוף חומרים הוא משמעותי ודורש התמיכה של פתרון זלוף עשיר בחומרים מזינים. פתרונות זלוף מסורתיים, כגון פתרון זלוף המכונה בלזר, הם בדרך כלל מינימאליים בהרכב ומיועדים לזלוף הקר. &#39;וויליאמס בינוני E שמשה כמדיום תרבות hepatocyte במשך שנים רבות, והוא מכיל גomponents שהם אוניברסליים לתמיכה בפונקציה סלולרית, בפרט בתנאים חמים vivo לשעבר. מדידות שנעשו במהלך זלוף מכונה הם שיקוף של הפונקציה של האיבר. פרמטרים ישירות נצפים כגון ייצור מיצי מרה וספיגת חמצן הם מדידות בזמן אמת, שניתן להשתמש כדי להעריך את הכבד לפני ההשתלה. באופן דומה, סמנים של פגיעה ואיסכמיה (K +, שחרור חומצת החלב) סלולריות ניתן למדוד באופן ישיר בפתרון זלוף ועשויה להצביע על תפקוד איבר 20. ככל שטכנולוגיה מתפתחת זלוף מכונה נוספת ומשיגה יישום קליני נרחב יותר, מתאמים מדויקים בין פונקצית vivo לשעבר ותוצאה קלינית יכולים להתבצע ופרמטרי זלוף יהיו שימושיים בסיוע להחלטות להשתלת כבד או לדחות שולית באיכות. יתר על כן, כנקודה-התקדמות כלים אנליטיים טיפול, ניתוח מתוחכם יותר יהיה זמין ישירות במכונת perfuשיאון 21. בעבודה זו אנו מראים כי יכולים להיות נתמכים על כבדים במערכת SNMP עם פגיעה מינימאלית בכבד, המשתקפים בהיסטולוגיה ושחרורו של ALT. התאוששות תפקודית של הכבד מתבטאת הטובה ביותר על ידי ATP, אשר נמצאה במיתאם לכדאיות כבד והוא מאוד מרמז על הצלחת השתלה במודלים של בעלי חיים 22. Ex vivo והתאוששות לפני השתלה של שתלי כבד יאפשר הרחבה משמעותית של התורם בריכה כבד, תיקון הפער בין ההיצע והביקוש של כבדי תורם בהשתלה.

השתלה כבד היא הטיפול המרפא רק לעשרות אלפי חולים הסובלים ממחלת כבד סופנית. כדי להקל על השתלה מוצלחת, שימור אופטימלי של הכבד מרגע שהוא רכש מן התורם עד למועד זה הוא מושתל במקבל הוא הכרחי על מנת למנוע הידרדרות מהירה של השתל. הסטנדרטי לשימור כבד הנוכחי נקרא &quot;קירור סטטי &#39;: הכבד הוא מקורר בפתרון שימור קר כקרח, ובכך להפחית את חילוף החומרים של הכבד ולהאט את ההשפעות המזיקות של איסכמיה. למרות שטכניקת אחסון קרה זו אפשרה להשתלה מוצלחת, איברים של איכות שולית כגון איברי DCD נפגעו איסכמיה החמה או חולה נחות תכנית steatosis תוצאות 1. ישנו גוף המתרחב במהירות של ראיות שזלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד כשיטת שימור חלופית עלולים imלהוכיח תוצאות עבור איברים השוליים אלה 2,3. השתלה כבד הפכה לקורבן של ההצלחה שלה. הרבה יותר חולים מופנים להשתלה ממה שיש כבדים זמינים, ואלפים מתו ברשימת ההמתנה בארצות הברית בכל שנה. בהתחשב במציאות של המחסור הכבד תורם וניצול הגובר של שתלי כבד של איכות לא טובה למקבלי נזקקים, הוא מוחזק באופן נרחב שזלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד לפני ההשתלה מקיים את ההבטחה של שינוי פרדיגמה בהשתלת כבד. חל עלייה ניכרה בעניין מחקרי בנושא זה בשנים האחרונות 4-8. במרכזים באירופה ובצפון אמריקה שונים זלוף מכונה היפותרמיה הפך לאחרונה זלוף מכונה קליני הקדמת 8 וnormothermic בטמפרטורות פיסיולוגיות הוחל כבדים אנושיים שהושלכו והוא מתורגם לשימוש קליני, כמו גם 9.פיתוח נרחב שהוביל לפיתוח של פרוטוקולים שונים, תוך אופטימיזציה מתמדת מזהה את זלוף האופטימלי פרמטרי 10-12. שימוש בשתלים שולית באיכות גדל יותר פי 10 בעשור האחרון 13. בהשוואה לתקן הנוכחי לשימור כבד (אחסון קר סטטית), זלוף המכונה vivo לשעבר מספק יתרונות פוטנציאליים רבים, אשר כולם לגרום לנחוצה הרחבת בריכת האיברים ועלולים להיות ירידה בשכיחות של סיבוכים לאחר ההשתלה. בפרט, סיבוכי המרה שסובלים כיום שתלי כבד הכי מוצלחת באיכות לאחר ההשתלה יישארו בעיה משמעותית 14-18. זלוף מכונת בתנאי subnormothermic מספק חלון זמן כדי להעריך את תפקוד שתל באופן אובייקטיבי לעניין התאמה להשתלה 19. שני perfusate בעוד הכבד הוא להיות perfused במעגל vivo לשעבר,nd ניתן לדגום המרה המיוצרת במהלך זלוף למדידת סמנים של תפקוד איבר. בדרך זו &quot;קשה התפשר&quot; כבדים שמושלכים להשתלה תחת הקריטריונים הנוכחיים ניתן להעריך באופן אובייקטיבי כלהתאמתם להשתלה. הערכת כדאיות פוטנציאלית מאפשרת לרבים מאיברים אלה כדי להיות מנוצלים לצורך ההשתלה. יתרון חזק באותה מידה של זלוף מכונה הוא תיקון ושיפור של כבדים שניזוקו על ידי איסכמיה החמה / קרה. ATP מתרוקן בקצב מהיר מאוד באיסכמיה הקרה חמה ולאחר מכן וניתן repleted בתקופה של זלוף מכונה לפני ההשתלה של הכבד 20. הכבד, עם מאגרי האנרגיה שלה ומצב מטבולים מתחדש, הוא preconditioned ומוכן יותר להשפעות המזיקות של פגיעת reperfusion לאחר ההשתלה בנמען. עבודה זו מתארת ​​שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של גרף כבד אנושיts במעבדה, אשר תהיה שימושי לחוקרים המבקשים ללמוד גם את הטכניקה והשפעות מיטיבות של vivo לשעבר זלוף מכונה. אנו עושים שימוש בכבדי תורם אנושיים שנדחו להשתלה ולאחר מכן הוקצו למטרות מחקר. טכניקת רכש כבד סטנדרטית כרוכה בסומק עורקים באתרו של הכבד הבא הידוק צולב אב העורקים בתורמי המוח מתים (DBD) או לאחר מעצר דם בתורמי דם מוות (DCD), תיארו בפירוט רב יותר במקום אחר 20. בנוסף, הכבד הוא מקורר במהלך הרכש על ידי מילוי חלל הבטן של התורם עם קרח. העדפות פתרון סומק להשתנות בין האזורים, עם רוב הרכישות באמצעות אוניברסיטת ויסקונסין או פתרון היסטידין טריפטופן-ketoglutarate (HTK). שטיפה-שולחן נוספת של וריד השער משפרת את שטיפת דם שייר. כבד לעתים קרובות נרכשים עוזב sur קטע של אב העורקיםעיגול תא מטען צליאק. כיס המרה היא חרות, מרה היא aspirated, ואת צינור המרה הוא הסמיק. הכבדים ארוזים בשקיות סטרילית המכילות פתרון שימור קר כקרח ומועברים בקופסות או קירור ייעודיים. לקבלת תוצאות נציג זמן איסכמיה החמה וקר צריך להיות מוגבל ל 60 דקות ושעה 12, בהתאמה. למרות הקרנה סרולוגיות שגרתית לפתוגנים transmissible, יש לנקוט באמצעי זהירות סטנדרטי בעת מסירת איברים אנושיים, דגימות שהתקבלו מאיברים אנושיים, וכל חומרי פסולת. הפרוטוקול כאן מתאר זלוף המכונה subnormothermic באמצעות מכשיר זלוף הכבד זמין מסחרי. שימוש במכשיר כזה מאפשר לתרגום מהיר יותר להגדרה הקלינית ואימות צולבת של פרוטוקולים שונים והגדרות מכשיר בין קבוצות מחקר ומרכזי השתלות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Liver Assist perfusion device</td>
			<td>Organ Assist B.V.</td>
			<td>Liver Assist</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liver Assist disposable set</td>
			<td>Organ Assist B.V.</td>
			<td>Liver Assist disposable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Williams&#8217; Medium E</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>W1878&#8211;6x500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Eli Lilly &#38; Co</td>
			<td>Humulin R U-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin 5,000 U/ml</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030-156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>MGH pharmacy</td>
			<td>7750500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen gas tank 95% O2/5% CO2</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>ZO2OX9522000043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specialty gas regulator</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>Y11244D580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactated Ringer&#8217;s solution</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2B2324X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% neutral buffered formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>316-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Adson forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debakey tissue forceps, 7.75&#8221;, 2.25 mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors 7&#34; Curved SureCut Tungsten</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6965SC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Needle holder 5.5&#8211;7&#8221;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12565-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0 blackbraided silk sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>SA66G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 nylon suture, Nurolon RB1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>C554D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood gas analysis machine</td>
			<td>Siemens</td>
			<td>RapidPoint 500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance scale</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-10000-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure display box</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>66000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable pressure display sets</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>61000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handheld thermocouple thermometer and probe</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td colspan="2">EW-91500-04 and EW-08516-55</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acorn-tipped vessel cannula, 4 mm</td>
			<td>Medtronic</td>
			<td>30005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Irrigation set flush tubing</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>06543-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mixing bowl, 4L</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-07300-40</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functional human liver preservation and recovery by means of subnormothermic machine perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation. Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of donor livers. Machine perfusion of donor liver grafts is an alternative to traditional cold storage of livers and holds much promise as a modality to expand the donor organ pool. We have recently described the potential benefit of subnormothermic machine perfusion of human livers. Machine perfused livers showed improving function and restoration of tissue ATP levels. Additionally, machine perfusion of liver grafts at subnormothermic temperatures allows for objective assessment of the functionality and suitability of a liver for transplantation. In these ways a great many livers that were previously discarded due to their suboptimal quality can be rescued via the restorative effects of machine perfusion and utilized for transplantation. Here we describe this technique of subnormothermic machine perfusion in detail. Human liver grafts allocated for research are perfused via the hepatic artery and portal vein with an acellular oxygenated perfusate at 21 &#176;C.

מספר התצפיות והניתוחים יכול להתבצע על הכבד במהלך זלוף, כולל תצפיות בזמן אמת ישירות, כגון שיעורי זרימה וייצור מיצי מרה; מדידות בזמן אמת, כגון ניתוח גז של perfusate, ומדידות הפוסט הוק-שנעשות לאחר איסוף הדגימה כוללים ניתוח ביוכימי של perfusate ורקמות וניתוח היסטולוגית. תוצאות שהוזכרו כאן הן מ -22 כבדים אנושיים perfused. כבד נדחו להשתלת מסיבות שונות, כולל גיל תורם, זמן איסכמי החם מוגזם, תוצאות ביופסיה (steatosis, דלקת, פיברוזיס) ומסיבות לוגיסטיות. 18 כבדים היו רכש לאחר מוות לבבי, ו- 4 הבאים מוות מוחי. בשני המקרים, תורמים טופלו קודם לכן ב30,000 יחידות של הפרין וסמוק באתר ועל השולחן בחזרה עם פתרון UW. זמן ממוצע איסכמי הקר היה 531 ± 237 דקות (SD) ואת זמן איסכמי החם הממוצע היה 27 ± 10 דקות (SD), נמדד מנסיגה של חייםתמיכה לסומק קר. תצפיות בזמן אמת ומדידות ניתן להשתמש כדי להעריך את הכבד במהלך זלוף, ואילו מדידות פוסט הוק-מתגלות לאחר זלוף. תצפיות בזמן אמת זרימה דרך כבד מתחילה נמוכה משיעורי זרימת היעד, כתוצאה מהתנגדות גבוהה יותר בכבד הקר. שימוש בלחץ של 3 מ&quot;מ כספית על PV ו -30 מ&quot;מ כספית בHA בדרך כלל ניתן להשיג תזרים היעד פעם הכבד התחמם עד 21 &#160; ° C לאחר 60 דקות של זלוף (איור 1 א). זרימת מרה בדרך כלל ניתן להבחין בתוך 10 דקות של זלוף והוא מיוצר בהתמדה במהלך זלוף (איור 1). כמות מרה תלויה באיכות של הכבד ונעה בין 0.3 מיליליטר / שעה / כבד קילוגרם ל -18 מיליליטר / דקה / קילוגרם. בכבדים עם זמן איסכמי חם יותר, זרימת מרה נוטה לרדת, ואילו תוצאות קצרות יותר חמות איסכמי זמן ביותר יציב או אפילו הגדלתייצור מיצי מרה. מדידות בזמן אמת מדידה ישירה ותכופה של perfusate על ידי ניתוח גז דם בחיוני הן למטרות הניסוי, כמו גם תנאי זלוף נאותים שמירה, חשוב חמצון וpH. לחץ חלקי של חמצן מומס צריך להיות גדול מ -700 מ&quot;מ כספית על יבוא של שני PV וHA. לחץ יצוא חמצן, שנמדד בווריד הנבוב, בדרך כלל יורד עם זלוף יותר, המשקף ספיגת חמצן גוברת. ניתן לחשב שיעורי ספיגת חמצן כפי שתוארו לעיל 13 ונעו 0.5-2.2 2 / min / קילוגרם O מיליליטר בתחילת זלוף ל2.4-9.7 2 / min / קילוגרם O מיליליטר ב t = 3 שעות (איור 1 ג). ירידה בpH הוא ציין ב30 דקות הראשונות (1D איור), כתוצאה משחרור חומצת החלב בperfusate בעיקר. זה יכול להיות נתמך על ידי תוספת של 8.4% bicarbo נתרןנייט ולאחר כ -90 דקות pH נופל חזרה לטווח נורמלי. בדרך כלל, 30-50 מיליליטר של 8.4% סודיום ביקרבונט נדרש. עליות חומצת החלב ריכוז במהירות בדקות 15-30 הראשונות, אבל מתחילה פטירה אחרי השעה הראשונה (איור 1E). מדידות פוסט-הוק transaminases כבד כגון ALT ניתן למדוד בperfusate. ב -30 דקות הראשונות עלייה גדולה של ALT בדרך כלל נצפתה המשקפת את כישלון של ALT ששוחרר במהלך איסכמיה (איור 1F). ALT הוצגו לתאם גם עם זמן איסכמי חם 13. זלוף מכונת מוגבר תוכן ATP 2.8 לקפל, המשקף מצב התאוששות אנרגיה (איור 1G). ניתוח היסטולוגית H &amp; E מגלה שום פגיעה נוספת נגרמה במהלך זלוף מכונה (איור 1H, I). יש לציין כי משטר הביופסיה שהוצע בפרוטוקול זה הוא למילמטרות וearch לא יכולות להיות ישימות למטרות קליניות. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52777/52777fig1.jpg" /> איור 1:. הערכה של כבדים אנושיים במהלך זלוף מכונה לזרום דרך PV וHA במהלך SNMP (), ייצור מיצי מרה, לכמת לשעה של זלוף (B), שיעור uprate חמצן (שלנו), מחושב על פי הפרש ביבוא (PV + HA) ויצוא (וריד נבוב), הפסיק את הקווים להראות לחצים חלקיים של חמצן בin-והיצוא במהלך זלוף (C), pH וחומצת חלב במהלך זלוף (D, E), שחרורו של ALT לperfusate (F), ATP תוכן שנמדד ברקמות מביופסיות לשעה (G) וכתמי H &amp; E של הכבד (DCD 54 שנה ישנה, ​​איסכמיה החמה 19 דקות, איסכמיה הקרה 559 דקות) לפני וזלוף (H) לאחר (I). תוצאות מוצגות כממוצע ± SEM. <ahref = היעד &quot;https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52777/52777fig1large.jpg&quot; = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Watch this Scientific Journal Video about Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion at JoVE.com

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

אנו מתארים שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד אנושיים בטמפרטורת subnormothermic (21 מעלות צלזיוס).

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

functional-human-liver-preservation-recovery-means-subnormothermic

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K Views.  Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School.  אנו מתארים שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד אנושיים בטמפרטורת subnormothermic (21 מעלות צלזיוס). 

Video: Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal hyperplasia (IH) that eventually leads to vessel occlusion and graft failure. Mechanical forces, particularly low shear stress and high wall tension, are thought to initiate and to sustain these cellular and molecular changes, but their exact contribution remains to be unraveled. To selectively evaluate the role of pressure and shear stress on the biology of IH, an ex&#160;vivo perfusion system (EVPS) was created to perfuse segments of human saphenous veins under arterial regimen (high shear stress and high pressure). Further technical innovations allowed the simultaneous perfusion of two segments from the same vein, one reinforced with an external mesh. Veins were harvested using a no-touch technique and immediately transferred to the laboratory for assembly in the EVPS. One segment of the freshly isolated vein was not perfused (control, day 0). The two others segments were perfused for up to 7 days, one being completely sheltered with a 4 mm (diameter) external mesh. The pressure, flow velocity, and pulse rate were continuously monitored and adjusted to mimic the hemodynamic conditions prevailing in the femoral artery. Upon completion of the perfusion, veins were dismounted and used for histological and molecular analysis. Under ex&#160;vivo conditions, high pressure perfusion (arterial, mean = 100 mm Hg) is sufficient to generate IH and remodeling of human veins. These alterations are reduced in the presence of an external polyester mesh.

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mechanisms leading to the development of intimal hyperplasia (IH) and vein graft failure are still poorly understood. This study describes an ex&#160;vivo system to perfuse human veins under controlled flow and pressure. Furthermore the efficiency of external mesh reinforcement to limit the development of IH was evaluated.

נוהל saphenous אדם הוורידים<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף וחיצוני חיזוק

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic agent melphalan. Briefly, the procedure starts with the setup of a percutaneous veno-venous bypass from the femoral vein to the external jugular vein. Via a laparotomy, catheters are then inserted into the proper hepatic artery and the caval vein. The portal vein and the caval vein, both supra- and infrahepatically, are then clamped. The arterial and venous catheters are connected to a heart lung machine and the liver is perfused with melphalan (1 mg/kg body weight) for 60 min. This way it is possible to locally perfuse the liver with a high dose of a chemotherapeutic agent, without leakage to the systemic circulation.
In previous studies including patients with isolated liver metastases of uveal melanoma, an overall response rate of 33-100% and a median survival between 9 and 13 months, have been reported. The aim of this protocol is to give a clear description of how to perform the procedure and to discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

Here, we present a protocol how to perform an isolated liver perfusion (IHP) with melphalan and we also discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

כבדית זלוף המבודד לטיפול בכבד גרורות של מלנומה של הענביה

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף כליות לשימור הכליה שתלים לפני השתלה

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Generation of a Humanized Mouse Liver Using Human Hepatic Stem Cells

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in which the liver has been repopulated with functional human hepatocytes, could serve as a useful tool for investigating human hepatic cell biology, drug metabolism, and other preclinical applications. One of the key factors required for successful transplantation of human hepatocytes into mice is the elimination of the endogenous hepatocytes to prevent competition with the human cells and provide a suitable space and microenvironment for promoting human donor cell expansion and differentiation. To date, two major liver injury mouse models utilizing fumarylacetoacetate hydrolase (Fah) and uroplasminogen activator (uPA) mice have been established. However, Fah mice are used mainly with mature hepatocytes and the application of the uPA model is limited by decreased breeding. To overcome these limitations, Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice were used for in vivo differentiation of immature human hepatocytes and humanized liver generation. Human hepatic stem cells (HpSCs) successfully repopulated the livers of Alb-TRECK/SCID mice that had developed lethal fulminant hepatic failure following diphtheria toxin (DT) treatment. This model of a humanized liver in Alb-TRECK/SCID mice will have functional applications in studies involving drug metabolism and drug-drug interactions and will promote other in vivo and in vitro studies.

Here, we present a novel humanized mouse liver model generated in Alb-toxin receptor mediated cell knockout (TRECK)/SCID mice following the transplantation of immature and expandable human hepatic stem cells.

דור של כבד עכבר אנושי באמצעות תאי גזע אנושי כבדיה

A novel animal model involving chimeric mice with humanized livers established via human hepatocyte transplantation has been developed. These mice, in ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

שיטה של ​​המגזרים הישירים Intra-כבדית משלוח באמצעות מודל קלאמפ עכברוש הכבד hilar

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Functional Characterization of Endogenously Expressed Human RYR1 Variants

More than 700 variants in the RYR1 gene have been identified in patients with different neuromuscular disorders including malignant hyperthermia susceptibility, core myopathies and centronuclear myopathy. Because of the diverse phenotypes linked to RYR1 mutations it is fundamental to characterize their functional effects to classify variants carried by patients for future therapeutic interventions and identify non-pathogenic variants. Many laboratories have been interested in developing methods to functionally characterize RYR1 mutations expressed in patients&#39; cells. This approach has numerous advantages, including: mutations are endogenously expressed, RyR1 is not over-expressed, use of heterologous RyR1 expressing cells is avoided. However, since patients may present mutations in different genes aside RYR1, it is important to compare results from biological material from individuals harboring the same mutation, with different genetic backgrounds. The present manuscript describes methods developed to study the functional effects of endogenously expressed RYR1 variants in: (a) Epstein Barr virus immortalized human B-lymphocytes and (b) satellite cells derived from muscle biopsies and differentiated into myotubes. Changes in the intracellular calcium concentration triggered by the addition of a pharmacological RyR1 activators are then monitored. The selected cell type is loaded with a ratiometric fluorescent calcium indicator and intracellular [Ca2+] changes are monitored either at the single cell level by fluorescence microscopy or in cell populations using a spectrofluorometer. The resting [Ca2+], agonist dose response curves are then compared between cells from healthy controls and patients harboring RYR1 variants leading to insight into the functional effect of a given variant.

Here methods used to study the functional effect of RYR1 mutations endogenously expressed in Epstein Barr Virus immortalized human B-lymphocytes and muscle biopsy derived satellite cells differentiated into myotubes are described.

אפיון פונקציונלי של גרסאות RYR1 אנושיות מבוטאות אנדוגניות

More than 700 variants in the RYR1 gene have been identified in patients with different neuromuscular disorders including malignant hyperthermia ...

Dynamic Navigation in Endodontics: Guided Access Cavity Preparation by Means of a Miniaturized Navigation System

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common sequelae of dental trauma but can also occur with stimuli such as caries, bruxism, or after placing a restoration. In order to access the root canal as minimally invasive as possible in case of a necessary root canal treatment, dynamic navigation has recently been introduced in endodontics in addition to static navigation. The use of a dynamic navigation system (DNS) requires pre-operative cone-beam computed tomography (CBCT) imaging and a digital surface scan. If necessary, reference markers must be placed on the teeth before the CBCT scan; with some systems, these can also be planned and created digitally afterward. By means of a stereo camera connected to the planning software, the drill can now be coordinated with the help of reference markers and virtual planning. As a result, the position of the drill can be displayed on the monitor in real-time during preparation in different planes. In addition, the spatial displacement, the angular deviation, and the depth position are also displayed separately. The few commercially available DNS mostly consist of relatively large camera-marker-systems. Here, the DNS contains miniaturized components: a low-weight camera (97 g) mounted on the micromotor of the electric handpiece utilizing a manufacturer-specific connecting mechanism and a small marker (10 mm x 15 mm), which can be easily attached to an individually manufactured intraoral tray. For research purposes, a post-operative CBCT scan can be matched with the pre-operative one, and the volume of tooth structure removed can be calculated by the software. This work aims to present the technique of guided access cavity preparation by means of a miniaturized navigation system from imaging to clinical implementation.

Dynamic navigation systems (DNS) provide real-time visualization and guidance to the operator during endodontic access cavities preparation. The planning of the procedure requires three-dimensional imaging utilizing cone beam computed tomography and surface scans. After the export of the planning data to the DNS, access cavities can be prepared with minimal invasion.

ניווט דינמי באנדודונטיה: הכנת חלל גישה מודרכת באמצעות מערכת ניווט ממוזערת

In the case of teeth with pulp canal calcification (PCC) and apical pathology or pulpitis, root canal treatment can be very challenging. PCC are common ...