The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

הערה: בעת פרסום כתב היד הזה יישום Investigational New Drug (IND) אינו נדרש לבצע FMT לCDI החוזר ונשנה בפרקטיקה קלינית. עם זאת, אם FMTs הם מתבצעים כחלק ממחקר או לאינדיקציה נוספת, ייתכן שיידרש IND או יישום מקביל 18. רשויות רגולטוריות צפויות להמשיך להעריך את הבטיחות ויעילות של FMT כפי שהוחל על מצבים רפואיים CDI ואחרים ולכן מומלץ לבדוק את הדרישות הרגולטוריות במיקום המתאים שלך לפני תחילת תכנית FMT אחד ואחת לחודשיים ברגע ש באופן פעיל בביצוע FMT. מועמדים הערה חייבים להיות מוכנים להסכים להשתלת הצואה כמו גם קולונוסקופיה. 1. זיהוי של מועמדים המתאימים לFMT <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חולים שיש להם CDI ההתקפי או חולים עם מחלה עקשן שאינו מגיבים לאנטיביוטיקה מסורתית appropriatמועמדי דואר לFMT. הערה: התקפי CDI מוגדר כהיסטוריה של שלוש או יותר אפיזודות של CDI אושר על ידי בדיקות רעלן או PCR, או שני פרקים שנזקקו לאשפוז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא החולה אינו מסוגל לעבור קולונוסקופיה בבטחה. זה בשיקול דעתו של endoscopist. </li></ol> 2. בחירת תורם צואה הערה: בחירת תורם הצואה חלה על הטיפול של CDI וייתכן שלא תהיה ישים לטיפול בהפרעות אחרות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא המטופל מזהה תורם. תורמים פוטנציאליים צריכים להיות נוכחים עם הנמען בעת ​​הביקור במרפאת הראשונית גסטרואנטרולוגיה. תורמים יכולים להיות בני זוג, בני משפחה, או חברים. תורמים יכולים לחיות באותו המקום המגורים הנמען, כל עוד קריטריונים אחרים הם נפגשו. </li></ol> זכאות 3. תורם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריטריונים להכללה: ודאו שהתורם הוא אדם בוגר בריא (ישן ≥18 שנים) ויש לו מ &#39;מעי נוצר יומיovement. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריטריונים לאי הכללה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבטיח שהתורם אינו נוטל אנטיביוטיקה או לא נקט אנטיביוטיקה בשלושה חודשים שקדמו או תרופות כל לזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם לא קיים היסטוריה של משלשלים עצירות או שימוש כרוני. בנוסף, להבטיח את התורם אין היסטוריה של מחלת מעי דלקתית, שלשול כרוני, קוליטיס המיקרוסקופי, היסטוריה אישית של מעיים / ממאירות מעי הגס, או היסטוריה של עוקף / ניתוח הרזיה אחר קיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא התורם לא נסע לאחרונה (בתוך שלושת החודשים האחרונים) לאזור שבו שלשולים מדבקים הוא דאגה. אם הם טיילו וחוו שלשול הם צריכים להיות exluded. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם לא לוקח שום סוכנים מדכאים את מערכת חיסון ולא בכימותרפיה מערכתית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהתורם אין סינדרום מטבולים, מחלות אוטואימוניות או מחלות דרמטיטיס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשיג con נכתבנשלח מהתורם למקבל לפני הקרנה בהתחשב באופי רגיש של בדיקות הסקר. להרגיע את שני הצדדים שתוצאות בדיקה לא ישותפו עם הצד השני. </li></ol> 4. הקרנה הערה: פרוטוקול הקרנה זו הותאם לחולים בריגהאם ובית החולים לנשים במסצ&#39;וסטס, ארה&quot;ב לשקול ייעוץ זיהומיות מחלקה למחלות ומניעת זיהומים בבית חולים לפני ייזום פרוטוקול FMT כדי לוודא שכל בדיקות הסקר המתאימות כבר נחשבו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נמען: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעת הביקור במרפאת הראשונית, לשלוח בדיקות המעבדה הבאות להקרנת נמען (להקמת בדיקות בסיס למחלות זיהומיות אלה ועל מנת להבטיח שאין שאלה של שידור בעתיד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צהבת (IgG וIgM), צהבת מסוג B (HBsAg / Ab וHbcAb), הפטיטיס C Ab, HIV-1/2 (Ab ועומס נגיפי) ועגבת (TP-IgG) t דם מעבדהests. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג היסטוריה יסודית של אלרגיות למזון בהערכה ראשונית זו. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תורם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתאם עם המעבדה למיקרוביולוגיה לפני ההקרנה על מנת להבטיח שרפרף נוצר הוא לא מבוטלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזמין בדיקות המעבדה מתחת להקרנת תורם אם התורם עונה על קריטריונים לזכאות כאמור בסעיף 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע צהבת (IgG וIgM), צהבת מסוג B (HBsAg / Ab וHBcAb), הפטיטיס C Ab, HIV-1/2 (עומס נגיפי וAb) ועגבת (TP-IgG) בדיקות דם במעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע difficile ג (על ידי תרבות), תרבות שרפרף שגרתית, אנטיגן Giardia, אנטיגן Cryptosporidium ובדיקות צואת מעבדה ביציות וטפילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסך התורם לא יותר מ 30 ימים, אבל רצוי 1-2 שבועות לפני ההליך המתוכנן. הערה: אם תורם מפתחת שרפרף שלשול או נוזלי הם אינם זכאים עוד לתרומה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יועץ התורם על מזונות להימנע מבוסס עלאלרגיות למזון של הנמען. התורם לא צריך לבלוע מזונות שהנמען הוא אלרגי במשך 5 הימים לפני התרומה. </li></ol> 5. טרום הליך הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נמען: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בביקור במרפאת הראשונית, אם הנמען אינו נמצא כבר בvancomycin האוראלי, להתחיל vancomycin 125 מ&quot;ג כל שעה 6 לפחות שבוע עד עשרה ימים לפני ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק את הנמען להוראות מרכז אנדוסקופיה להכנת מעי לפני קולונוסקופיה להיעשות היום לפני ההליך המתוכנן. לנמענים צריכים גם לעקוב אחר הוראות התזונה סטנדרטית של מרכז אנדוסקופיה לשבוע לפני ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להורות לנמען לקחת המנה האחרונה של vancomycin בלילה שלפני ההליך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תורם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק תורם עם כמה כוסות אוסף שרפרף. מוסיף שירותים לייבל (כובעים) וכוסות עם התווית של הנמען, כמו גם 3 sp הריקecimen מכולות. שאל את התורם להתחיל אוסף שרפרף לא יותר מ -6 שעות לפני העיבוד (זמן של הליך). הערה: אם התורם מספק דגימות צואה מרובות, הם צריכים להיות מתויגים עם תאריכים ושעות. השתמש במדגם העדכניים ביותר (כוס דגימה מולא באופן אחד תספיק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהנמען למביא דגימת הצואה של התורם עימם להליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את דגימות הצואה בטמפרטורת חדר. תכלול כל שרפרף מעוצב. לבטל את כל צואה שאינה בשימוש במערכת ביוב סניטרית (אלא אם כן חיסכון למטרות מחקר). </li></ol></li></ol> 6. צואה הכנה הערה: ודא הליך זה נדונה ואושרה על ידי מחלקת בקרת זיהום בבית החולים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש ציוד מגן אישי בעת הכנת השרפרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שרפרף באנדוסקופיה החדרים בשטח עבודה ייעודי שבו יש שטח הצפת שמונה עשר אינץ &#39;המונע זיהום של othחומרי er. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני צואת הכנה, לנקות את האזור המיועד עם חומר חיטוי שאושר על-חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכסות את האזור עם כרית חד פעמית, כדי למנוע זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את השרפרף נוצר לתוך בלנדר מהירות אחת ארבעה עשר אונקיה ולהוסיף 500 סמ&quot;ק של מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למזג את התוכן לדקה אחת לפחות או עד שהוא מגיע עקביות slurry נוזלית. להיות זהיר, כדי למנוע דליפה בעת הסרת המכסה של הבלנדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את הפתרון דרך המסננת לתוך קערת שמונה ליטר מפלסטיק כדי לחסל כל פסולת מוצקה. מחק את המסננת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר את הפתרון המתוח למזרקי מנעול luer 60 סמ&quot;ק (כ שמונה עד תשעה לFMT סטנדרטי על ידי קולונוסקופיה). צייר את 60 סמ&quot;ק נוסף של מלח רגיל לחום. </li></ol> 7. השתלות צואה באמצעות קולונוסקופיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש ציוד מגן אישי בהתאם למדיניות יחידת אנדוסקופיה בעת ביצוע או סיוע בinfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול תרופת הרגעה קלה, אם אפשר, כך שהמטופל יוכל לשתף פעולה עם שמירה על השרפרף לאחר ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע קולונוסקופיה למעי המסוף (או ככל אפשרי מבחינה טכנית). על הכנסה של colonscope, שטיפה ושאיבת צואה נוזלית שייר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את הקירות הריריים לראיות של ביופסיות דלקת ברירית אך אינם מבוצעים באופן שיגרתי במהלך הליך FMT. הערה: לקבוע אם או לא קולונוסקופיה מלאה היא בטוחה כתוצאה מהמידה של דלקת. אם לא, כדאי לשקול סיגמואידוסקופיה מוגבלת יותר גמישה עם עירוי (להשתמש במחצית של slurry השרפרף). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות 60 סמ&quot;ק (מזרק אחד) פעם אחת במעי המסוף דרך ערוץ הביופסיה של הקולונוסקופ באמצעות כובע ערוץ ביופסיה עם צינורות הארכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בין יישומים של מזרקים שרפרף, לשטוף את הערוץ עם מלח רגיל, כדי למנוע סתימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחדיר עוד 60 cc של צואה לcecum ולאחר מכן לחזור בג הנכוןolon. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך יציקת 30 סמ&quot;ק כל 9:55 סנטימטר בעת שחלקה את התערובת באופן שווה על כל ארבעת קירות מעי גס הרביעים עד שיגיע למעי גס אמצע רוחבי. זכור לשטוף עם מי מלח בין מזרקים שרפרף. הערה: אם slurry הוא צמיג מאוד ייתכן שיהיה צורך לדחוף בכוח רב על המזרק. היזהר שכובע ערוץ הביופסיה אינו נפרד מהקולונוסקופ ולגרום לדליפה של תוכן צואה. תכופה שטיפה תאפשר למעבר קל יותר של התרחיף. אם יש קושי מתמשך בדוחפים סלארי, לשקול מחדש מתאמץ שרפרף התורם שנותר בפעם שנייה או דילול נוסף עם מלח רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב אוויר עודף על נסיגה בעת שינוי חביות מזרק בעוד נזהר שלא לשאוב כל שרפרף נוזלי. הערה: אם החולה ידע בריחת צואה, המזרק האחרון צריכה להיות חדור לא נמוכה מכפף הכבד כדי למנוע דליפה במהלך ולאחר הליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהקולונוסקופיה דואר עם FMT הושלמה, לייעץ לחולה לשמור על השרפרף כל עוד הם יכולים. הם עשויים לחדש את התזונה הרגילה שלהם ותרופות שעות לאחר קולונוסקופיה היא מלאה. </li></ol> קולונוסקופיה 8. עם FMT Clean Up <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע עיבוד מחדש לאחר הליך ציוד, ניקוי / חיטוי סביבה וסילוק פסולת לפי פרוטוקול בית חולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להיפטר מכל החומר צואתי במכל Biohazard המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביא הקולונוסקופ לאזור הטיהור לעיבוד שיגרתי לכל פרוטוקול סטנדרטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלך את הבלנדר ומסנן עם כל פסולת מלוכלכת אחרת. הערה: אם בלנדרים ליחד ומסננות הם לא ריאלי בחלופי מוסד בודד יכולות להיחשב שיטות ערבוב. דוגמא אחת: להעביר את הצואה דרך ricer תפוח אדמה נירוסטה שניתן לנקות בחיטוי. אנו ממליצים לדון בכל שיטות אפשריות עם dep בקרת זיהום של המתקן שלךartment. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטהר את כל המשטחים ששמשו להליך שימוש במוצרים שאושר המתקן. </li></ol> 9. מעקב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לארגן פגישת מעקב במרפאת גסטרואנטרולוגיה עבור המטופל כ -30 יום לאחר FMT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יועץ המטופל על הסיכון להשנות difficile ג עם קורסי עתיד של אנטיביוטיקה. </li></ol> 10. דיווח על תופעות לוואי חמורים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרות FMT נחשב הליך בטוח, זה מומלץ מאוד לעקוב אחר כל תופעות הלוואי הרגישו להיות קשורות להליך ולדווח עליהם ללוחות הרגולציה המתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לתעד את הבטיחות לטווח הארוך של FMT, לשמור על מסד נתונים אמין שניתן שאילתא מעת לעת. </li></ol>

<ol>
	<li>Eiseman, B., Silen, W., Bascom, G. S., Kauvar, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+enema+as+an+adjunct+in+the+treatment+of+pseudomembranous+enterocolitis.">Fecal enema as an adjunct in the treatment of pseudomembranous enterocolitis.</a> Surgery. 44 (5), 854-859 (1958).</li><li>Zhang, F., Luo, W., Shi, Y., Fan, Z., Ji, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Should+we+standardize+the+1,700-year-old+fecal+microbiota+transplantation.">Should we standardize the 1,700-year-old fecal microbiota transplantation.</a> Am J Gastroenterol. 107 (11), 1755-1710 (2012).</li><li>Borody, T. J., Paramsothy, S., Agrawal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation:+indications,+methods,+evidence,+and+future+directions.">Fecal microbiota transplantation: indications, methods, evidence, and future directions.</a> Curr Gastroenterol Rep. 15 (8), 337 (2013).</li><li>Mattila, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+transplantation,+through+colonoscopy,+is+effective+therapy+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection.">Fecal transplantation, through colonoscopy, is effective therapy for recurrent Clostridium difficile infection.</a> Gastroenterology. 142 (3), 490-496 (2012).</li><li>Brandt, L. J., Aroniadis, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+fecal+microbiota+transplantation:+techniques,+indications,+and+outcomes.">An overview of fecal microbiota transplantation: techniques, indications, and outcomes.</a> Gastrointest Endosc. 78 (2), 240-249 (2013).</li><li>Aas, J., Gessert, C. E., Bakken, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrent+Clostridium+difficile+colitis:+case+series+involving+18+patients+treated+with+donor+stool+administered+via+a+nasogastric+tube.">Recurrent Clostridium difficile colitis: case series involving 18 patients treated with donor stool administered via a nasogastric tube.</a> Clin Infect Dis. 36 (5), 580-585 (2003).</li><li>Garborg, K., Waagsbo, B., Stallemo, A., Matre, J., Sundoy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+faecal+donor+instillation+therapy+for+recurrent+Clostridium+difficile-associated+diarrhoea.">Results of faecal donor instillation therapy for recurrent Clostridium difficile-associated diarrhoea.</a> Scand J Infect Dis. 42 (11-12), 857-861 (2010).</li><li>Kassam, Z., Lee, C. H., Yuan, Y., Hunt, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+Clostridium+difficile+infection:+systematic+review+and+meta-analysis.">Fecal microbiota transplantation for Clostridium difficile infection: systematic review and meta-analysis.</a> Am J Gastroenterol. 108 (4), 500-508 (2013).</li><li>Kelly, C. R., de Leon, L., Jasutkar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+microbiota+transplantation+for+relapsing+Clostridium+difficile+infection+in+26+patients:+methodology+and+results.">Fecal microbiota transplantation for relapsing Clostridium difficile infection in 26 patients: methodology and results.</a> J Clin Gastroenterol. 46 (2), 145-149 (2012).</li><li>Lund-Tonnesen, S., Berstad, A., Schreiner, A., Midtvedt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile-associated+diarrhea+treated+with+homologous+feces.">Clostridium difficile-associated diarrhea treated with homologous feces.</a> Tidsskr Nor Laegeforen. 118 (7), 1027-1030 (1998).</li><li>MacConnachie, A. A., Fox, R., Kennedy, D. R., Seaton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Faecal+transplant+for+recurrent+Clostridium+difficile-associated+diarrhoea:+a+UK+case+series.">Faecal transplant for recurrent Clostridium difficile-associated diarrhoea: a UK case series.</a> QJM. 102 (11), 781-784 (2009).</li><li>Mellow, M. H., Kanatzar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopic+fecal+bacteriotherapy+in+the+treatment+of+recurrent+Clostridium+difficile+infection--results+and+follow-up.">Colonoscopic fecal bacteriotherapy in the treatment of recurrent Clostridium difficile infection--results and follow-up.</a> J Okla State Med Assoc. 104 (3), 89-91 (2011).</li><li>Polak, P., Freibergerova, M., Jurankova, J., Kocourkova, H., Mikesova, L., Svacina, R., Husa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+experiences+with+faecal+bacteriotherapy+in+the+treatment+of+relapsing+pseudomembranous+colitis+due+to+Clostridium+difficile.">First experiences with faecal bacteriotherapy in the treatment of relapsing pseudomembranous colitis due to Clostridium difficile.</a> Klin Mikrobiol Infekc Lek. 17 (6), 214-217 (2011).</li><li>Rohlke, F., Surawicz, C. M., Stollman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fecal+flora+reconstitution+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection:+results+and+methodology.">Fecal flora reconstitution for recurrent Clostridium difficile infection: results and methodology.</a> J Clin Gastroenterol. 44 (8), 567-570 (2010).</li><li>Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+health+and+disease.">Gut microbiota in health and disease.</a> Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).</li><li>Yoon, S. S., Brandt, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+refractory/recurrent+C.+difficile-associated+disease+by+donated+stool+transplanted+via+colonoscopy:+a+case+series+of+12+patients.">Treatment of refractory/recurrent C. difficile-associated disease by donated stool transplanted via colonoscopy: a case series of 12 patients.</a> J Clin Gastroenterol. 44 (8), 562-566 (2010).</li><li>Brandt, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+follow-up+of+colonoscopic+fecal+microbiota+transplant+for+recurrent+Clostridium+difficile+infection.">Long-term follow-up of colonoscopic fecal microbiota transplant for recurrent Clostridium difficile infection.</a> Am J Gastroenterol. 107 (7), 1079-1087 (2012).</li><li>Kelly, C. R., Kunde, S. S., Khoruts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+on+preparing+an+investigational+new+drug+application+for+fecal+microbiota+transplantation+studies.">Guidance on preparing an investigational new drug application for fecal microbiota transplantation studies.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 12 (2), 283-288 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

השתלות צואה הוכחו להיות טיפול יעיל ובטוח לCDI החוזר ונשנה. נציין כאן פרוטוקול סטנדרטי לFMT באמצעות קולונוסקופיה וכללו התוצאות שלנו במשך 22 חולים שעברו את הפרוצדורה לCDI החוזר ונשנה. התוצאות שלנו עד כה דומות לנתונים שפורסמו למחלה חוזרת עם רק חולה אחד חוזר לאחר FMT חודש אחד. שלב קריטי של ההליך הוא ביקור prescreening כדי להבטיח שהתורם מתאים וכי לחולה יש אין התוויות נגד לעובר קולונוסקופיה. הקרנה בדרך כלל לוקחת שלושה עד ארבעה ימים כדי להשלים את ההליך וניתן לתזמן זמן קצר לאחר מכן. שינויים קלים עשויים להיות נעשו בהתאם למטופל. המטופל שנדרש שתי FMTs גם מחלת קרוהן והיה פוסט מעמד כריתת מעי גס מוחלטת עם ההשקה ileo-אנאלי. ההשתלה הראשונה שלו הייתה באמצעות הקולונוסקופ שבו אנו החדירו שרפרף ב -90 סנטימטרים frאום פי הטבעת למעי הדק שלו. כאשר ג difficile חזר על עצמו, המשיך עם FMT שני באמצעות enteroscopy המעי הדק וכתוצאה מהחלטה. כפי שצוין בפרוטוקול, ניתן לבצע סיגמואידוסקופיה גמישה מוגבלת יותר אם יש עדות לדלקת משמעותית או החולה אינו יכול לסבול קולונוסקופיה מלאה. הגבלה של FMT עשויה להיות כיסוי ביטוחי. בארצות הברית, לא כל חברות הביטוח המסחריים לכסות הליך זה. לכן, חשוב לבדוק עם חברת הביטוח של המטופל לפני FMT ומכתב צורך רפואי יש צורך לעתים קרובות. לסיכום, FMT הוא טיפול יעיל לCDI החוזר וטומן בחובו הבטחה לטיפול בתהליכי מחלה אחרים, כגון מחלות אוטואימוניות ומחלות מעי דלקתיות. בעתיד הקרוב, מקדם כגון יצירת &quot;בנקים שרפרף&quot; עשויה לייתר את הצורך בתורמי שרפרף ולייעל את הקדם-pתהליך מיון שרפרף rocedure. למרות שפרופיל הבטיחות של קולונוסקופיה עם FMT נראה מצוין, ההשלכות ארוכת הטווח עדיין לא ידועות. בכל הקשור בהצגת מקרה האישה בת 69, היא עברה FMT מוצלח והייתה נורמליזציה של תנועותיה מעי בתוך 2 ימים של ההליך. היא עברה טיפול נוסף של CLL עם כימותרפיה ונשארה ג difficile חופשי ליותר משישה חודשים.

השתלות צואה לטיפול בקוליטיס pseumembranous תוארו לראשונה בשנת 1958 1. עם זאת, דיווחים על בליעת צואה לטיפול בהרעלת מזון ותאריך שלשול חמור בחזרה כבר במאה הרביעית סין 2. השתלת חיידקי צואה (FMT) נקראת גם בספרות &quot;השתלת צואה&quot;, &quot;עירוי פרוביוטיים אנושי&quot;, &quot;השתלת צואה&quot;, &quot;שיקום Microbiome מעיים&quot;, ו &quot;העברת צואה&quot;. היא כוללת איסוף צואת מתורם בריא, הוקרן מראש ומתן תרחיף מוכן למערכת העיכול של הנמען באמצעות צינור nasogastric, esophagogastricduodenoscopy, קולונוסקופיה, או חוקן 3. סדרת מקרה רב דיווחה על היעילות של ממשל באמצעות NGT וחוקן, אולם האחרון יותר מחקרים הראו כי ממשל של שרפרף תורם באמצעות קולונוסקופיה היא בטוחה ויעילה ביותר 4.בעוד דווחו שיטות אחרות כגון ניהול צינור nasogastric, משלוח של שרפרף תורם באמצעות קולונוסקופיה יש פחות תופעות לוואי מיידיות (נפיחות בבטן ובחילות למשל) 4 ומצאנו כי חולים מקבלים יותר את מושג FMT כאשר הוא מבוצע על ידי קולונוסקופיה. אחד היתרונות הטיפוליים של FMT באמצעות קולונוסקופיה היא הירידה ביומסה מעי הגס עקב שטיפת המעי שמתבצעת לפני ההליך 4. מחקרים רבים חקרו את התפקיד של FMT לטיפול בדלקת המעי גס ושלשולים הנגרם על ידי C. הפתוגן האופורטוניסטי difficile (CDI). השכיחות של CDI ממשיכה לעלות והוא גורם עיקרי לתחלואה ולתמותה בניטל כלכלי גדול ברחבי העולם. טיפול קו הראשון לCDI מורכב מטיפול האנטיביוטי, אולם שיעורי הישנות דווחו בין 15-35% 5. סדרת מקרים ודיווחים כמה יש לי לעשותcumented את הבטיחות ויעילות של FMT לעקשן CDI לטיפול רפואי סטנדרטי באנטיביוטיקה 4,6-16. מחקר מסתכל על מעקב ארוך טווח של חולים לאחר FMT באמצעות קולונוסקופיה לCDI דיווח 91% שיעור ריפוי ראשוני בחולי 77 17. במרכז שלנו (Brigham and אגף בית החולים לנשים לגסטרואנטרולוגיה, Hepatology ואנדוסקופיה), יזמנו תכנית השתלת צואה בחולים עם הישנות או CDI עקשן. מועמדים מתאימים מוגדרים כמטופלים שיש להם CDI החוזר (היסטוריה של 3 או יותר פרקים, או כ -2 פרקים שנזקקה לאשפוז), או בחולים עם מחלת עקשן שאינה מגיבים לאנטיביוטיקה מסורתית. אנו מאמינים בגישה שיטתית לכל שלבי הליך זה ממקסם את היעילות. בכתב היד הזה וסרטון נלווה, אנחנו פירוט הפרוטוקול שמועסקים במרכז שלנו, הכולל חולה ותורם הקרנה, הכנת שרפרף, והמשלוח של שרפרףt הזמן של קולונוסקופיה. שיטה זו הניבה תוצאות חיוביות דומות לספרות שפורסמה. הצגת מקרה: חולה זה מייצג מטופל טיפוסי התייחס להשתלת צואה. המטופל הוא אישה בת 69 עם היסטוריה של לוקמיה לימפוציטית כרונית שהייתה לי הישנות של מחלה הדורשת טיפול נוסף עם כימותרפיה. היא סבלה משלושה פרקים של CDI בשנה האחרונה, ולכן הופנתה למרפאת שלנו בתמורה של כימותרפיה לפני FMT מחדש ייזום. הפרק הראשון שלה CDI התרחש באוקטובר 2012. היא לא הייתה כל אנטיביוטיקה שקדמה. היא הייתה חולה מאוד במחלקה לטיפול הנמרץ לאחר שהציג עם הלם זיהומי ועברה הסטת ileostomy לולאה עם antegrade vancomycin חוקנים לקורס 6 בשבוע בשילוב עם vancomycin האוראלי נתן את חומרת מחלתה. היא עשתה טובה מאוד עם רזולוציה של שלשולה והיא הייתה מסוגלת לבואאנטיביוטיקה מ. היא פיתחה בקע סביב סטומה אז זה היה הפוך. זמן קצר לאחר היפוך ostomy היא שוב פיתחה שלשולים ונמצא שוב להיות C. רעלן difficile חיובי. היא סיימה עוד קורס 6 שבוע של vancomycin האוראלי והיה מסוגל לרדת, שלו בהצלחה. עם זאת כמה חודשים לאחר מכן, היא שוב פיתחה שלשול שהיה ג רעלן difficile חיובי והחל בקורס השלישי שלה vancomycin האוראלי. היא עושה גם באנטיביוטיקה כאשר צוין כי הספירה הלבנה שלה עלתה ל&gt; 100 והיא מצאה שיש הישנות של CLL בביופסיה של מוח עצם. אונקולוגים היו מודאגים לגבי ייזום כימותרפיה ללא רזולוציה של CDI מלא ולכן אנחנו התבקשו לבצע FMT.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="840">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:247px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:121px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:355px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92" style="height:92px;width:247px;">Blender</td>
			<td style="width:121px;">Hamilton Beach</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&#38;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:247px;">Strainer</td>
			<td style="width:121px;">Winco MS3A-8S Strainer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:355px;">http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&#38;ie=UTF8&#38;qid=1395001295&#38;sr=1-3&#38;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Disposable pads (chux), 17in x 24in.&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>one package&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:247px;">Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart&#160;</td>
			<td>hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1 or 2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">500 cc bottle of sterile normal saline</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">60cc leur lock syringes</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>8 or 9</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Biopsy channel cap with extension</td>
			<td style="width:121px;">hospital standard</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

הצואה חיידקי השתלה (FMT) היא טיפול בטוח ויעיל ביותר עבור ג החוזר והעקשן זיהום difficile (CDI). שיטות שונות של ממשל FMT דווחו בספרות כוללים צינור nasogastric, העליונה אנדוסקופיה, חוקן וקולונוסקופיה. FMT באמצעות תשואות קולונוסקופיה שיעורי ריפוי מצוינים, והוא גם נסבל היטב. מצאנו כי חולים למצוא מצב מקובל ונסבל זה של משלוח. במרכז שלנו, יש לנו יזמה תכנית השתלת צואה בחולים עם הישנות או CDI עקשן. פיתחנו פרוטוקול באמצעות תהליך חוזר ונשנה של תיקון ובצענו 24 השתלות צואה על 22 חולים עם הצלחת שיעורים דומים לספרות שפורסמה הנוכחית. גישה שיטתית להקרנת מטופל ותורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של השרפרף למקסימום הצלחה טיפולית. כאן אנו פירוט כל צעד של פרוטוקול FMT שיכול להתבצע בכל אנדוסקופיהמרכז עם רמה גבוהה של בטיחות והצלחה.

יש לנו לבצע 24 FMTs על 22 חולים במרכז שלנו (טבלת 1), תוך שימוש בפרוטוקול לעיל. היו תשעה חולים במחל מעי דלקתיים במקביל (שישה עם מחלת קרוהן ושלוש עם קוליטיס כיבית). כל תשע היו החלטה של ​​CDI. אחד מהחולים עם מחלת קרוהן היה מעמד לפרסם כריתת מעי גס הכולל לקוליטיס קרוהן. בהתחלה הוא עבר FMT באמצעות קולונוסקופיה אולם לאחר שחווה בשבועות שלאחר FMT הישנות הוא עבר FMT שני באמצעות אנדוסקופיה העליונה אשר הביאה בהחלטת CDI. עשר מתוך שלושה עשר של החולים שאינם IBD היו החלטה של תסמינים הקשורים לג מלא difficile לאחר FMT אחד עם אורך ממוצע של מעקב של 3 חודשים [2 שבועות - 17 חודשים]. חולה אחד עבר FMT שני, שהביא להחלטה של ​​CDI. החולה השני שהישנות לאחר FMT בחר שלא צריך השתלה שנייה. לא היו סיבוכים הקשורים להליך או FMT (כלומר זיהומים,התלקחות של IBD, בחילות, הקאות, כאבי בטן, או דימום במערכת עיכול) במהלך המוגבל למועד מעקב. חולה אחד עם IBD לא חוויה עצמית מוגבל כאבי בטן יום אחד לאחר FMT. טבלת 1: מאפיינים של חולים שעברו השתלת צואה חיידקים במרכז שלנו. <img alt="טבלת 1" src="/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" width="500" /> <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/52154/52154table1.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של השולחן הזה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection at JoVE.com

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

הצואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה היא טיפול בטוח ויעיל לזיהום C.difficile חוזר ועקשן. גישה שיטתית למטופל והקרנת תורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של הצואה במהלך קולונוסקופיה תהיה למקסם את ההצלחה טיפולית.

צואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה לחוזרת<em&gt; C. difficile</em&gt; זיהום

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

fecal-microbiota-transplantation-via-colonoscopy-for-recurrent-c

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.0K Views.  Brigham and Women‘s Hospital.  הצואה חיידקי השתלה באמצעות קולונוסקופיה היא טיפול בטוח ויעיל לזיהום C.difficile חוזר ועקשן. גישה שיטתית למטופל והקרנת תורם, הכנת השרפרף, ואספקה ​​של הצואה במהלך קולונוסקופיה תהיה למקסם את ההצלחה טיפולית. 

Video: Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex Vivo זיהום של רקמה חיה עם וירוסים oncolytic

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) cases 1 and is the ultimate cause of death in patients with the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS) 2.
ALS is a devastating neurological disorder that is characterized by relatively rapid degeneration of upper and lower motor neurons. Patients ultimately succumb to the disease on average 2-5 years following diagnosis because of respiratory paralysis due to loss of phrenic motor neuron innnervation of the diaphragm 3. The vast majority of cases are sporadic, while 10% are of the familial form. Approximately twenty percent of familial cases are linked to various point mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gene on chromosome 21 4. Transgenic mice 4,5 and rats 6 carrying mutant human SOD1 genes (G93A, G37R, G86R, G85R) have been generated, and, despite the existence of other animal models of motor neuron loss, are currently the most highly used models of the disease.
Spinal cord injury (SCI) is a heterogeneous set of conditions resulting from physical trauma to the spinal cord, with functional outcome varying according to the type, location and severity of the injury 7. Nevertheless, approximately half of human SCI cases affect cervical regions, resulting in debilitating respiratory dysfunction due to phrenic motor neuron loss and injury to descending bulbospinal respiratory axons 1. A number of animal models of SCI have been developed, with the most commonly used and clinically-relevant being the contusion 8.
Transplantation of various classes of neural precursor cells (NPCs) is a promising therapeutic strategy for treatment of traumatic CNS injuries and neurodegeneration, including ALS and SCI, because of the ability to replace lost or dysfunctional CNS cell types, provide neuroprotection, and deliver gene factors of interest 9.
Animal models of both ALS and SCI can model many clinically-relevant aspects of these diseases, including phrenic motor neuron loss and consequent respiratory compromise 10,11. In order to evaluate the efficacy of NPC-based strategies on respiratory function in these animal models of ALS and SCI, cellular interventions must be specifically directed to regions containing therapeutically relevant targets such as phrenic motor neurons. We provide a detailed protocol for multi-segmental, intraspinal transplantation of NPCs into the cervical spinal cord ventral gray matter of neurodegenerative models such as SOD1G93A mice and rats, as well as spinal cord injured rats and mice 11.

Neural precursor transplantation is a promising strategy for protecting and/or replacing lost/dysfunctional cervical phrenic motor neurons in spinal cord injury (SCI) and the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS). We provide a protocol for cell delivery to cervical spinal cord ventral horn in rodent models of ALS and SCI.

Intraspinal השתלת תאים עבור מיקוד הורן הגחון צוואר הרחם ב טרשת לרוחב amyotrophic וקורד טראומטית פגיעה בעמוד השדרה

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Small bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with short gut syndrome and failure of parenteral nutrition (irreversible intestinal failure). In specialized centers improved operative and managing strategies have led to excellent short- and intermediate term patient and graft survival while providing high quality of life 1,3. Unlike in the more common transplantation of other solid organs (i.e. heart, liver) many underlying mechanisms of graft function and immunologic alterations induced by intestinal transplantation are not entirely known6,7. Episodes of acute rejection, sepsis and chronic graft failure are the main obstacles still contributing to less favorable long term outcome and hindering a more widespread employment of the procedure despite a growing number of patients on home parenteral nutrition who would potentially benefit from such a transplant. The small intestine contains a large number of passenger leucocytes commonly referred to as part of the gut associated lymphoid system (GALT) this being part of the reason for the high immunogenity of the intestinal graft. The presence and close proximity of many commensals and pathogens in the gut explains the severity of sepsis episodes once graft mucosal integrity is compromised (for example by rejection). To advance the field of intestinal- and multiorgan transplantation more data generated from reliable and feasible animal models is needed. The model provided herein combines both reliability and feasibility once established in a standardized manner and can provide valuable insight in the underlying complex molecular, cellular and functional mechanisms that are triggered by intestinal transplantation. We have successfully used and refined the described procedure over more than 5 years in our laboratory 8-11. The JoVE video-based format is especially useful to demonstrate the complex procedure and avoid initial pitfalls for groups planning to establish an orthotopic rodent model investigating intestinal transplantation.

Small bowel transplantation has become an accepted treatment option for patients with irreversible intestinal failure. Our experimental model of orthotopic small bowel transplantation in rats serves as a reliable tool to address underlying immunologic and inflammatory processes that complicate intestinal transplantation.

השתלות מעי דק orthotopic בחולדות

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Bronchoalveolar Lavage (BAL) for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove nonadherent cells and lung lining fluid from the mucosal surface. In research environments, BAL allows sampling of innate (lung macrophage), cellular (B- and T- cells), and humoral (immunoglobulin) responses within the lung.
BAL is internationally accepted for research purposes and since 1999 the technique has been performed in &#62; 1,000 subjects in the UK and Malawi by our group.
Our technique uses gentle hand-held suction of instilled fluid; this is designed to maximize BAL volume returned and apply minimum shear force on ciliated epithelia in order to preserve the structure and function of cells within the BAL fluid and to preserve viability to facilitate the growth of cells in ex vivo culture. The research technique therefore uses a larger volume instillate (typically in the order of 200 ml) and employs manual suction to reduce cell damage.
Patients are given local anesthetic, offered conscious sedation (midazolam), and tolerate the procedure well with minimal side effects. Verbal and written subject information improves tolerance and written informed consent is mandatory. Safety of the subject is paramount. Subjects are carefully selected using clear inclusion and exclusion criteria.
This protocol includes a description of the potential risks, and the steps taken to mitigate them, a list of contraindications, pre- and post-procedure checks, as well as precise bronchoscopy and laboratory techniques.

Bronchoalveolar Lavage BAL for Research; Obtaining Adequate Sample Yield

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy and bronchoalveolar lavage using low pressure suction. The technique is used to harvest immune cells from the lung bronchoalveolar surfaces. Local anesthetic and mild conscious sedation (midazolam) is used. Subjects tolerate the procedure well and experience minimal side effects.

שטיפה ברונכואלוואולרית (BAL) למחקר; קבלת תשואה הולמת לדוגמא

We describe a research technique for fiberoptic bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL) using manual hand held suction in order to remove ...

Tumor Treating Field Therapy in Combination with Bevacizumab for the Treatment of Recurrent Glioblastoma

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA approved in April 2011 for the treatment of patients 22 years or older with rGBM. The device delivers alternating electric fields and is programmed to ensure maximal tumor cell kill1.
Glioblastoma is the most common type of glioma and has an estimated incidence of approximately 10,000 new cases per year in the United States alone2. This tumor is particularly resistant to treatment and is uniformly fatal especially in the recurrent setting3-5. Prior to the approval of the TTF System, the only FDA approved treatment for rGBM was bevacizumab6. Bevacizumab is a humanized monoclonal antibody targeted against the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein that drives tumor angiogenesis7. By blocking the VEGF pathway, bevacizumab can result in a significant radiographic response (pseudoresponse), improve progression free survival and reduce corticosteroid requirements in rGBM patients8,9. Bevacizumab however failed to prolong overall survival in a recent phase III trial26. A pivotal phase III trial (EF-11) demonstrated comparable overall survival between physicians&#8217; choice chemotherapy and TTF Therapy but better quality of life were observed in the TTF arm10.
There is currently an unmet need to develop novel approaches designed to prolong overall survival and/or improve quality of life in this unfortunate patient population. One appealing approach would be to combine the two currently approved treatment modalities namely bevacizumab and TTF Therapy. These two treatments are currently approved as monotherapy11,12, but their combination has never been evaluated in a clinical trial. We have developed an approach for combining those two treatment modalities and treated 2 rGBM patients. Here we describe a detailed methodology outlining this novel treatment protocol and present representative data from one of the treated patients.

A novel methodology that is employed for the treatment of recurrent glioblastomas is described. This treatment approach employs the application of alternating electric tumor treating fields (TTFields), known as TTF Therapy in combination with bevacizumab, a targeted agent that is currently FDA approved as monotherapy.

גידול טיפול שדה תרפיה בשילוב עם Bevacizumab לטיפול החוזר וגליובלסטומה

A novel device that employs TTF therapy has recently been developed and is currently in use for the treatment of recurrent glioblastoma (rGBM). It was FDA ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for acute as well as end-stage lung diseases. With the increase in clinical demand and prolonged use of ECMO, procedural optimization and prevention of multi-organ damage are of critical importance. The aim of this protocol is to present a detailed technique of veno-venous ECMO in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This protocol demonstrates the technical design of the ECMO and surgical steps. This murine ECMO model will facilitate the study of pathophysiology related to ECMO (e.g., inflammation,bleeding and thromboembolic events). Due to the abundance of genetically modified mice, the molecular mechanisms involved in ECMO-related complications can also be dissected.

Here we present a protocol describing the technique of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) in a non-intubated, spontaneously breathing mouse. This murine model of ECMO can be effectively implemented in experimental studies of acute and end-stage lung diseases.

ממברנה בעיות ורידים-Veno חמצון בעכבר

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...

Immunofluorescence Labelling of Human and Murine Neutrophil Extracellular Traps in Paraffin-Embedded Tissue

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They mature in the bone marrow and are released into the peripheral blood, where they circulate for about 6&#8722;8 h; however, in tissue, they can survive for days. By diapedesis through the endothelium, they leave the blood stream, enter tissues, and migrate towards the site of an infection following chemotactic gradients.&#160;Neutrophils can combat invading microorganisms by phagocytosis,&#160;degranulation, and generation of neutrophil extracellular traps (NETs). This protocol will help to detect NETs in paraffin-embedded tissue. NETs are the result of a process called NETosis, which leads to the release of nuclear, granular, and cytoplasmic components either from living (vital NETosis) or dying (suicidal NETosis) neutrophils. In vitro, NETs form cloud-like structures, which occupy a space several times larger than that of the cells from which they descended. The backbone of NETs is chromatin, to which a selection of proteins and peptides originating from granules and cytoplasm are bound. Thereby, a high local concentration of toxic compounds is maintained so that NETs can capture and inactivate a variety of pathogens including bacteria, fungi, viruses, and parasites, while diffusion of the highly active NET components leading to damage in neighboring tissue is limited. Nevertheless, in recent years it has become apparent that NETs, if generated in abundance or cleared insufficiently, do have pathological potential ranging from autoimmune diseases to cancer. Thus, detection of NETs in tissue samples may have diagnostic significance, and the detection of NETs in diseased tissue can influence the treatment of patients. Since paraffin-embedded tissue samples are the standard specimen used for pathological analysis, it was sought to establish a protocol for fluorescent staining of NET components in paraffin-embedded tissue using commercially available antibodies.

Neutrophil extracellular traps (NETs) are three-dimensional structures generated by stimulated neutrophil granulocytes. It has become clear in recent years that NETs are involved in a wide variety of diseases. Detection of NETs in tissue may have diagnostic relevance, so standardized protocols for labelling NET components are required.

Immunofluorescence התוויות של האדם ומורין נויטרופילים מלכודות ממומנת ב-פרפין רקמה מוטבעת

Neutrophil granulocytes, also called polymorphonuclear leukocytes (PMN) due to their lobulated nucleus, are the most abundant type of leukocytes. They ...

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue (ISWAT) Transplantation Model of Murine Islets

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for islet transplantation in rodent models. However, the tight kidney capsule limits the transplantation of sufficient islets in large animals and humans. The inguinal subcutaneous white adipose tissue (ISWAT), a new subcutaneous space, was found to be a potentially valuable site for islet transplantation. This site has better blood supply than other subcutaneous spaces. Moreover, the ISWAT accommodates a larger islet mass than the kidney capsule, and transplantation into it is simple. This manuscript describes the procedure of mouse islet isolation and transplantation in the ISWAT site of syngeneic diabetic mouse recipients. Using this protocol, murine pancreatic islets were isolated by standard collagenase digestion and a basement membrane matrix hydrogel was used for fixing the purified islets in the ISWAT site. The blood glucose levels of the recipient mice were monitored for more than 100 days. Islet grafts were retrieved at day 100 after transplantation for histological analysis. The protocol for islet transplantation in the ISWAT site described in this manuscript is simple and effective.

Inguinal Subcutaneous White Adipose Tissue ISWAT Transplantation Model of Murine Islets

In this protocol, a method of murine islet isolation and transplantation into the inguinal subcutaneous white adipose tissue is described. Isolated syngeneic murine islets are transplanted into a murine recipient using a basement membrane hydrogel. The blood glucose level of the recipients is monitored, and histology analysis of the islet grafts is performed.

השתלת מודל שומן לבן תת-עורית (ISWAT) מדגם ההשתלה של איויין מורנה

Pancreatic islet transplantation is a well-established therapeutic treatment for type 1 diabetes. The kidney capsule is the most commonly used site for ...