עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענק מטעם האגודה האמריקאית Otological CAM ועל ידי מענק מטעם המרכז הרפואי של אוניברסיטת קייס בתי חולים אל קנא ו CAM. ברצוננו להודות ג&#39;ף Churney במוקד הרפואי Group, Inc (הינקלי, OH) למתן אותנו עם מצלמה למיקרוסקופ. שירותי ייצור וידאו סיפק באדיבות Fusion קריאייטיב, שיווק בע&quot;מ (Valdosta, GA) אנו מודים יונתן פרנקל ואלכס לויט בבית CWRU על הערותיהם במהלך תקופת ההכנה של הווידאו.

חלק 1: הרדמה לקראת ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבוגרים, נשים דאנקן-הארטלי שפן הניסיונות של צ&#39;ארלס ריבר הבינלאומי Laboratories, Inc (בווילמינגטון, מסצ&#39;וסטס) הוא הרדים עם קטמין 60 מ&quot;ג / ק&quot;ג ו xylazine 12 מ&quot;ג / ק&quot;ג לתוך שריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומר סיכה נפט מוחל על העיניים כדי להגן על בעלי החיים מפני פגיעה בקרנית עקב התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיה היא גילחה מהחלק העליון של הראש עד הכתפיים בין האוזניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האזור המגולח הוא prepped בצורה סטרילית הראשון עם 7.5% povidone-יוד ואחריו 70% אתיל אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיה ממוקם על שולחן ניתוחים עם שמיכה ההתחממות על פלטפורמה מרוממת את הראש מכופף את הצוואר. הראש של החיה מופנה הרחק המנתח. כפיפה נאותה של הצוואר נדרשת על מנת לחשוף את רכס כראוי העורפית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיה היא עטופה בצורה סטרילית. </li></ol> חלק 2: חתך וחשיפה של העורף גרמי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Bupivacaine אפינפרין פלוס (Marcaine) 0.25% מוחל לאורך באתר חתך פרוספקטיבי (קו האמצע חתך בעור הגב לאורך העורף). זה גורם vasoconstriction מקומי, הגבלת דימום, ומספק שיכוך כאבים שלאחר הניתוח שנמשך אחרי שהחיה מתעוררת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך קו האמצע עור הגב נעשית על הקרקפת לאורך העורף. <img src="/files/ftp_upload/1728/1728fig1.jpg" alt="איור 1" /> איור 1: חתך בעור נעשית לאורך קו האמצע הגבי, כמתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשיג חשיפה נאותה, העור הוא חזר בו רוחבית ידי הצבת hemostat מעוקל קטן בכל צד של החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך אופקי נעשית לאורך שריר הצוואר כדי לחשוף את העורף הגרמית. בשלב זה החיה עשויה להתעוות למרות הרדמה נאותה עקב חיתוך רוחב של העצב העורפית יותר. חיתוך רוחב חוט השדרה מהווה סכנה עם חתך אופקי לאזור suboccipital. סיבוך זה יכול להימנע על ידי הקפדה העצם הבסיסית היא הרגישה תמיד מתחת להב סכין המנתחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם השרירים suboccipital חרות עד העצם, hemostat 1 / 3 משמש לחזור בו קצה שרירים מעולה. Hemostat זה מוחזק במקום על ידי עוזר כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעלית Lempert periosteal משמש כדי לחשוף את תפר temporo-העורפית. </li></ol> חלק 3: קידוח תפר temporo-העורפית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחשיפה של תפר temporo-העורפית (איור 2), לקדוח otologic עם 1.5 מ&quot;מ יהלום בר משמשת המקדחה inferio-רוחבית כדי לתפור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להלן טבלה החיצוני של הגולגולת, את המרקם הספוגי של diploë (העצם שבכתי להתערב בין טבלאות של הגולגולת) יהפכו גלויים. לאחר diploë כבר קדחו משם, את השולחן הפנימי של הגולגולת מופיעה, יחד עם גוון כחול קלוש, כי הוא סינוס סיגמואיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שולי של הסינוס סיגמואיד מוגדרים מבלי לחדור לכלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר העצם שמעל הסינוס סיגמואיד כבר דליל מספיק, בהגדלה גבוהה מנוצל וכן לבחור ישר משמש כדי להסיר בזהירות את העצם שמעל הסינוס סיגמואיד. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1728/1728fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2 אזור לקידוח חלקית overlies תפר temporo-העורפית. חלק 4: חסימה של צינור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינוס סיגמואיד skeletonized הוא חזר בו מדיאלית לחשוף את operculum. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 0.5 מ&quot;מ יהלום בר משמשת המקדחה המדיאלי כדי operculum לתוך שק endolymphatic ואת דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור endolymphatic הוא ארוז אז בשעווה העצם באמצעות לקטוף ישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פגם הגולגולת מתחזקת אז עם Gelfoam (פייזר, New York, NY). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 4-0 POLYSORB (ארצות הברית כירורגי, Norwalk, CT) תפר משמש כדי להביא את השריר יחד. אז יש מעבר חלק טכניקה תפר תת עורי על סגירת החתך בעור. עם סגירת זו אין צורך להסיר תפרים לאחר מכן, ואין סיכון כי החיה יהיה טופר באתר ולשלוף תפר. </li></ol> חלק 5: שלאחר הניתוח Care החזיר גיניאה היא לשים באינקובטור כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ובדק ב 30 דקות intervals עד ער מסוגלים לשמור על עמדה sternal. חיים נבדק על קצב הנשימה וצבע גוף. מרכז זה משתמש enrofloxacin (0.2 מ&quot;ל ב 22.7 מ&quot;ג / מ&quot;ל, תת עורי) ו עצירות (0.05 מ&quot;ל ב 0.3mg/mL, תת עורי) עבור טיפול מונע לאחר הניתוח זיהום שליטה בכאב, בהתאמה. משככי כאבים ניתנת פעם ביום הניתוח, פעמיים ביום שלאחר הניתוח הראשון לשני. אמנם אנטיביוטיקה לא הכרחי su asepticrgery, חמישה ימים, פעמיים במהלך יום של אנטיביוטיקה מניעתית עשויה להיות givenonce ביום שלאחר הניתוח שלוש. סיבוכים ניהול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיכאון הנשימה המנתח צריך תמיד להיות מודע נשימה של בעלי חיים. אם הנשימה מואטת או נעצרת, להפסיק את הניתוח מבחינה ויזואלית לבדוק לתנועה החזי. אם בעל החיים הוא חווה קושי נשימה או נשימה מאומצת, לבדוק את הפה דרכי הנשימה אינם occluded. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינוס סיגמואיד חדירה השתמש Gelfoam דחיסה יחד עם קצה יניקה עד הדימום נפסק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חדירה Dural מכסים את הפגם עם Gelfoam. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נזק וסטיבולרי לא לקדוח יותר מ 1 מ&quot;מ לרוחב הסינוס סיגמואיד. אם תעשה זאת, הסיכונים ופצעו את התעלה חצי עגול האחורי, אשר היה לפסול את כל הנתונים עבור החזיר ים. </li></ol>

<ol>
	<li>Andrews, J. C., Bohmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+surgical+approach+to+the+endolymphatic+sac+and+the+cochlear+aqueduct+in+the+guinea+pig.">The surgical approach to the endolymphatic sac and the cochlear aqueduct in the guinea pig.</a> Am J Otolaryngol. 10, 61-66 (1989).</li><li>Kimura, R., Schuknecht, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membranous+hydrops+in+the+inner+ear+of+the+guinea+pig+after+obliteration+of+the+endolymphatic+sac.">Membranous hydrops in the inner ear of the guinea pig after obliteration of the endolymphatic sac.</a> Pract Otolaryngol. , (1965).</li></ol>

ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת השתמש ב Case Western Reserve University.

בשבועות הבאים חסימה כירורגית של צינור endolymphatic, נושא החיה חוויות אובדן שמיעה תנודות sensorineural, כפי שהיא נמדדת על ידי עורר תגובה שמיעתית בגזע המוח. דגימה של הקלטה השמיעה בגזע המוח בתגובה (abr) מוצג באיור 3. האוזן השמאלית משמשת לשלוט unoperated. <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/1728/1728fig4.jpg"><img border="0" src="/files/ftp_upload/1728/1728fig3tmb.jpg" alt="איור 3" /></a> איור 3: רמות ABR סף kHz 16 מ שפן 28 שבועות לאחר הניתוח. סף האוזן (unoperated) השמאלי הוא 30 db SPL ועל האוזן (מופעל) ימין קרוב dB 70. בדיקה היסטולוגית של שבלול גם מראה distension של ממברנה של Reissner (איור 4). <a href="https://www-jove-com.remotexs.ntu.edu.sg/files/ftp_upload/1728/1728fig4.jpg"><img border="0" src="/files/ftp_upload/1728/1728fig4tmb.jpg" alt="איור 4" /></a> איור 4: distension של ממברנה של Reissner הוא ממצא אופייני ELH. Distension מדידה של הממברנה basilar עשויה או לא עשויה להיות נוכח.

surgical induction of endolymphatic hydrops by obliteration of the endolymphatic duct

אינדוקציה כירורגי של hydrops endolymphatic (ELH) בשנת החזיר ניסיונות על ידי מחיקה ו חסימה של צינור endolymphatic הוא מודל טוב קיבל חיה של המצב ואת חשוב לתאם עבור מחלות אנושיות מנייר. בשנת 1965, רוברט קימורה והרולד Schuknecht הראשון שתיאר גישה intradural עבור חסימה של צינור endolymphatic (קימורה 1965). למרות יעיל, טכניקה זו, אשר דורש חדירה של כיסוי המגן של המוח, שנגרמו רמה רצויה של תחלואה ותמותה בנושאים בעלי חיים. כתוצאה מכך, התפתחה אנדרוז Bohmer גישה extradural, אשר כצפוי מייצרת פחות סיבוכים הקשורים למערכת העצבים החדירה המרכזית (CNS). (אנדרוז Bohmer 1989) הגישה המתוארת כאן extradural הראשונה מחייבת חתך קו האמצע באזור העורף כדי לחשוף את שכבת השרירים הבסיסית. אנחנו פועלים אך ורק בצד ימין. לאחר נסיגת המתאים הרקמה שמעל, חתך אופקי עשוי לתוך השרירים של העורף את הזכות לחשוף את קו ימין temporo-העורפית תפר. עצם מיד inferio-לרוחב קו תפר (איור 1) הוא קדח אז עם מקדח otologic עד הסינוס סיגמואיד הופך לגלוי. נסיגת המדיאלי של הסינוס סיגמואיד חושף את operculum של צינור endolymphatic, אשר הבתים שק endolymphatic. קידוח המדיאלי כדי operculum לאזור שק endolymphatic מגלה את צינור endolymphatic, אשר הוא ארוז אז בשעווה העצם לייצר חסימה ו ELH בסופו של דבר. בשבועות הבאים, החיה תדגים את אובדן פרוגרסיבי, שמיעה תנודות וראיות היסטולוגית של ELH.

Watch this Scientific Journal Video about Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct at JoVE.com

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

סרט הווידאו הזה מראה כיצד בניתוח לחסום צינור endolymphatic החזיר של ניסיונות לייצר hydrops endolymphatic.

אינדוקציה כירורגי של Hydrops Endolymphatic על ידי מחיקה של צינור Endolymphatic

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

surgical-induction-endolymphatic-hydrops-obliteration-endolymphatic

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

11.4K Views.  Case Western Reserve University. סרט הווידאו הזה מראה כיצד בניתוח לחסום צינור endolymphatic החזיר של ניסיונות לייצר hydrops endolymphatic.

Video: Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Imaging Effector Memory T cells in the Ear After Induction of Adoptive DTH

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an immune reaction in which the main players are CCR7- effector / memory T lymphocytes. Here, we demonstrate a method for inducing and recording the progress of a DTH reaction in the rat ear. This is followed by a demonstration of the preparation of rat ear tissue for two-photon imaging of the CCR7- effector / memory T cell response.
An adoptive DTH is induced by the intraperitoneal injection of GFP-labeled Ova-specific CCR7- effector / memory T cell line (Beeton, C J. Visualized Experiments, Issue 8). Cells are then allowed to equilibrate in the rat for 48 hours before challenge by injecting one ear with saline (control ear) and the other with a 1:1 mix of Ova and Ova conjugated to Texas-Red (Ova-TR) to allow visualization of resident antigen-presenting cells.
We describe a method of tissue preparation useful for imaging the motility of cells within the deep dermal layer during an immune response, in conjunction with visualization of collagen fibers by second harmonic generation. Ear tissue is cut into 5 x 5 mm squares (slightly larger is better) and mounted onto plastic cover slips using Vetbond&trade;, which are then secured using silicone grease in an imaging chamber and superfused by oxygen-bubbled tissue culture medium at 37&deg;C.

Here we demonstrate a method for inducing and recording the progress of a delayed type-hypersensitivity (DTH) reaction in the rat ear. This is followed by a demonstration of the preparation of rat ear tissue for two-photon imaging of the effector / memory T cell response.

הדמיה מפעיל T זיכרון תאים באוזן לאחר אינדוקציה של DTH המאמצת

Delayed type hypersensitivity (DTH) is an immune reaction in which the main players are CCR7- effector / memory T lymphocytes. Here, we demonstrate a ...

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ideal tool for studying the formation and initial patterning of the nervous system. This video demonstrates how to graft organizer tissue into a host, a method by which Hensen s node (the organizer in the chick embryo) is grafted to a host competent ectoderm. The organizer graft instructs overlying na ve tissue to adopt a neural fate via neural inducing signals. This mechanism is referred to as neural induction, and constitutes the initial step in the formation of brain and spinal cord in amniotes. This method is essentially used for the characterization of putative neural inducing molecules in chick. This video demonstrates the different steps in the assay for neural induction; First, the donnor embryo is explanted and pinned on a dish. Then, the host embryo is prepared for New culture. The graft is excised and transplanted to the host area pellucida margin. The host is cultured for 18-22 hrs. The assembly is fixed and processed for further applications (e.g. in situ hybridization). This method was originally devised by Waddington 1,2 and Gallera 3,4.

Neural induction is the first step in the formation of the brain. It is a mechanism by which Hensen's node (organizer), instructs adjacent tissue to adopt a neural fate, i.e. to give rise to the nervous system. This video demonstrates an assay for neural induction in chick embryo.

Assay עבור אינדוקציה עצבית בעובר צ&#39;יק

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important treatment for aneurysms which attempts to exclude blood from flowing into the aneurysmal segment of the vessel while preserving blood flow in a normal fashion.  Improper clip placement may result in residual aneurysm with the potential for subsequent aneurysm rupture or partial or full occlusion of distal arteries resulting in cerebral infarction.  Here we describe the use of an ultrasonic flow probe to provide quantitative evaluation of arterial flow before and after microsurgical clip placement at the base of a middle cerebral artery aneurysm.  This information helps ensure adequate aneurysm reconstruction with preservation of normal distal blood flow.

Description of the surgical obliteration of a cerebral aneurysm utilizing an ultrasonic flow probe to assess arterial flow prior to and after aneurysm clip placement.

Microsurgical הכחדה קליפ של מפרצת במוח התיכון באמצעות הערכת תזרים intraoperative

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. The large airways therefore require an efficient repair mechanism to protect our bodies. This repair process occurs from stem cells in the airways and isolating these stem cells from the airways is important for understanding the mechanisms of repair and regeneration. It is also important for understanding abnormal repair that can lead to airway diseases 2. The goal of this method is to isolate a novel stem cell population from the mouse tracheal submucosal gland ducts and to place these cells in in vitro and in vivo model systems to identify the mechanisms of repair and regeneration of the submucosal glands 3. This production shows methods that can be used to isolate and assay the duct and basal stem cells from the large airways 3.This will allow us to study diseases of the airway, such as cystic fibrosis, asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Currently, there are no methods for isolation of submucosal gland duct cells and there are no in vivo models to study the regeneration of submucosal glands.

Here we demonstrate our protocol for isolation of basal and submucosal gland duct cells from mouse tracheas. We also demonstrate the method of injecting stem cells into the dorsal mouse fat pad to create an in vivo model of submucosal gland regeneration.

בידוד של תאי בסיס ותאי בלוטת Duct Submucosal מעכבר קנה נשימה

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP binds to vasopressin V2 receptors (V2R) on the surface of the cells and thereby induces synthesis of cAMP. This stimulates cellular signaling processes leading to changes in the phosphorylation of the water channel aquaporin-2 (AQP2). Protein kinase A phoshorylates AQP2 and thereby triggers the translocation of AQP2 from intracellular vesicles into the plasma membrane facilitating water reabsorption from primary urine. Aberrations of AVP release from the pituitary or AVP-activated signaling in principal cells can cause central or nephrogenic diabetes insipidus, respectively; an elevated blood plasma AVP level is associated with cardiovascular diseases such as chronic heart failure and the syndrome of inappropriate antidiuretic hormone secretion.
Here, we present a protocol for cultivation of primary rat inner medullary collecting duct (IMCD) cells, which express V2R and AQP2 endogenously. The cells are suitable for elucidating molecular mechanisms underlying the control of AQP2 and thus to discover novel drug targets for the treatment of diseases associated with dysregulation of AVP-mediated water reabsorption. IMCD cells are obtained from rat renal inner medullae and are used for experiments six to eight days after seeding. IMCD cells can be cultured in regular cell culture dishes, flasks and micro-titer plates of different formats, the procedure only requires a few hours, and is appropriate for standard cell culture laboratories.

Arginine-vasopressin (AVP) controls fine-tuning of body water homeostasis through facilitating water reabsorption by renal principal cells. Here, we present a protocol for the cultivation of primary rat inner medullary collecting duct cells suitable for the elucidation of molecular mechanisms underlying AVP-mediated water reabsorption.

Medullary העכברוש הראשוני culturing הפנימי איסוף תאי Duct

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during development. Misregulation of this process has been implicated as a key event in fibrosis and the progression of carcinomas to a metastatic state. Understanding the processes that underlie EMT is imperative for the early diagnosis and clinical control of these disease states. Reliable induction of EMT in vitro is a useful tool for drug discovery as well as to identify common gene expression signatures for diagnostic purposes. Here we demonstrate a straightforward method for the induction of EMT in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells pre- and post-EMT induction by immunocytochemistry are also included. Additionally, we demonstrate the effectiveness of this method through antibody-based array analysis and migration/invasion assays.

A straightforward method is described for the induction of epithelial to mesenchymal transition (EMT) in a variety of cell types. Methods for the analysis of cells in EMT states by immunocytochemistry are included.

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation of Human Hepatocytes by a Two-step Collagenase Perfusion Procedure

The liver, an organ with an exceptional regeneration capacity, carries out a wide range of functions, such as detoxification, metabolism and homeostasis. As such, hepatocytes are an important model for a large variety of research questions. In particular, the use of human hepatocytes is especially important in the fields of pharmacokinetics, toxicology, liver regeneration and translational research. Thus, this method presents a modified version of a two-step collagenase perfusion procedure to isolate hepatocytes as described by Seglen 1.
Previously, hepatocytes have been isolated by mechanical methods. However, enzymatic methods have been shown to be superior as hepatocytes retain their structural integrity and function after isolation. This method presented here adapts the method designed previously for rat livers to human liver pieces and results in a large yield of hepatocytes with a viability of 77&plusmn;10%. The main difference in this procedure is the process of cannulization of the blood vessels. Further, the method described here can also be applied to livers from other species with comparable liver or blood vessel sizes.

A modified two-step collagenase perfusion procedure for isolation of human hepatocytes is described. This method can also be applied to other mammalian livers. The isolated hepatocytes are available in high yield and viability, making them a suitable model for scientific research in areas such as liver regeneration, pharmacokinetics and toxicology.

בידוד של hepatocytes האנושי על ידי שני שלבים Collagenase זלוף נוהל

The liver, an organ with an exceptional regeneration capacity, carries out a wide range of functions, such as detoxification, metabolism and homeostasis. ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) maintain the turnover of all mature blood cell lineages. The coordination of the complex signals leading to specific HSC fates relies upon the interaction between HSCs and the intricate bone marrow microenvironment, which is still poorly understood[1-2].
We describe how by combining a newly developed specimen holder for stable animal positioning with multi-step confocal and two-photon in vivo imaging techniques, it is possible to obtain high-resolution 3D stacks containing HSPCs and their surrounding niches and to monitor them over time through multi-point time-lapse imaging. High definition imaging allows detecting ex vivo labeled hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) residing within the bone marrow. Moreover, multi-point time-lapse 3D imaging, obtained with faster acquisition settings, provides accurate information about HSPC movement and the reciprocal interactions between HSPCs and stroma cells.
Tracking of HSPCs in relation to GFP positive osteoblastic cells is shown as an exemplary application of this method. This technique can be utilized to track any appropriately labeled hematopoietic or stromal cell of interest within the mouse calvarium bone marrow space.

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

The nature of the interactions between hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) and bone marrow niches is poorly understood. Custom hardware modifications and a multi-step acquisition protocol allow the use of two-photon and confocal microscopy to image ex vivo labeled HSPCs homed within bone marrow areas, tracking interactions and movement.

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

ניתוח Glucocorticoid צואה: לא פולשני ניטור הכליה ב Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile duct proliferation. However, long-term experiments can lead to increased morbidity and mortality. In select mouse strains with underlying liver disease, meaningful comparisons can be made even with ligation of a single lobe of the liver, which can reduce animal losses and expenses. Here, we describe partial bile duct ligation (pBDL) in the mouse, in which only the left hepatic bile duct is ligated, causing biliary obstruction in the left lobe but not the remaining lobes. With careful microsurgical technique, pBDL experiments can be cost-effective, since the unligated lobe serves as an internal control to the ligated lobes, when subjected to the same conditions in the same animal. Unlike cBDL, a separate sham-operated control group is not necessary. pBDL is highly useful to directly compare localized versus systemic effects of cholestasis and other retained bile components. pBDL can also be repurposed as a novel method to investigate mechanisms related to medications and cell migration.

Here, we present partial bile duct ligation as a surgical model of liver injury and regeneration in rodents.

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...