כרומטוגרפיה של גז (GC) עם גילוי יינון להבה

1. אתחול ה- GC

1. הפעל את גז ואוויר נושאת הליום ולהתאים את מדי הלחץ על המכשיר.
2. הפעל את תנור העמודים לטמפרטורה גבוהה (בדרך כלל 250 °C (250 °C) ומעלה) כדי לאפות בעמודה. אל תחרוג מהטמפרטורה המרבית של העמודה. זה יסיר את כל המזהמים. תן לו לאפות לפחות 30 דקות לפני הפעלת מדגם.

2. יצירת קובץ שיטות

1. בתוכנה השולטת במכשיר, הזן את כל הערכים הרצויים עבור קובץ שיטות. תחילה, הגדר את הגדרות הדגימה האוטומטית. הגדר את מספר השטיפות לפני ההפעלה, השטיפות לאחר הריצה ושטיפה עם דגימה. שטיפות אלה מנקות את העמודה בין דוגמאות שונות.
2. הכמות המוזרקת היא בדרך כלל 1 μL. יחס פיצול מוגדר בדרך כלל מכיוון שהזרקת כל המדגם עלולה להעמיס על העמודה. אם יחס הפיצול הוא 100:1, משמעות הדבר היא כי עבור כל חלק אחד כי הוא מוזרק לתוך המכשיר 100 חלקים הולך לפסולת.
3. הזן את פרמטרי הפאזה הניידים. קצב הזרימה נשלט על ידי קבוצת הלחץ. קצבי זרימה מהירים יותר מובילים להפרדות צבע מהירות יותר, אך יש פחות זמן לנתח אינטראקציה עם העמודה.
4. הזן את תכנות הטמפרטורה. לריצה איזותרמית, הזן את טמפרטורת ההפרדה ולאחר מכן זמן להפרדה. לקבלת בחינה הדרגתית, הזינו את טמפרטורת ההתחלה והחזקו את זמן ההמתנה, את טמפרטורת הסיום ואת זמן ההמתנה ואת מהירות הרמפה ב- °C/min. נקבע גם זמן שיווי משקל המאפשר לעמודה להתקרר בחזרה לטמפרטורה המקורית בין ריצות.
5. הזן את פרמטרי הגלאי. טמפרטורת גלאי וקצב דגימה יוכנסו. הגלאי חייב תמיד להיות בטמפרטורה גבוהה יותר מטמפרטורת העמוד כך שאין עיבוי ניתוח בגלאי.
6. שמור את קובץ השיטות. ייתכן שיהיה צורך גם להוריד את הפרמטרים כך שהם ייקראו על-ידי ה- GC.

3. איסוף נתוני GC

1. הפעל את גז המימן ולוודא מד הלחץ מוגדר כראוי. תדליק את הלהבה של ה-FID.
2. על מתלה autosampler, למלא את בישול לשטוף עם ממס לשטוף, כמו acetonitrile או מתנול. תוודא שמיקן הפסולת ריק.
3. הכן את הדגימה. אם יש סיכוי לחלקיקים במדגם, סנן את המדגם. מכיוון שניתן לראות לעתים שאריות פלסטיק עם GC, השתמש רק במזרקי זכוכית ובבקבוקוני זכוכית כדי להכין את הדגימה שלך.
4. מלא את הקרבון לפחות באמצע הדרך עם מדגם כך מזרק autosampler מובטח להרים את המדגם. בקבוקונים של דוגמייה אוטומטית הם בדרך כלל 2 מ"ל, אך אם נפח הדגימה מוגבל, תוספות בקבוקון זמינות כדי להפחית את נפח הדגימה הדרוש.
5. טען את ה- vials לדוגמה לתוך מתלה הדגימה האוטומטית. עקוב אחר המיקום שבו נמצאת כל דגימה.
6. לפני ההפעלה, אפס את קו הבסיס של מקליט התרשים בתוכנת המחשב.
7. ניתן לאסוף קבצים כהפעלה יחידה או באמצעות טבלת אצווה עבור ריצות מרובות. הקפד לציין את מספר הטלפון הערוך הנכון עבור המדגם. לחץ על כפתור "התחל" ובצע קובץ.
8. הנתונים מנותחים בדרך כלל באמצעות תוכנה. פרמטרים שניתן למדוד כוללים זמן שמירה, גובה שיא, אזור שיא ומספר לוחות תיאורטיים.

4. תוצאות: ניתוח GC של דגימות קפה

1. בדוגמה זו, ניתוח GC-FID בוצע עבור קפאין וחומצה פלמיטית, שתי תרכובות שנמצאו בקפה. הקפאין פחות קוטבי מהחומצה הפלמית, שיש לה זנב אלקין ארוך שרשרת. לכן, הקפאין נשמר פחות ומתחמק תחילה מהטור הלא קוטבי של 95% דימתילפוליסילוקסן ו-5% פניל-ארילן(איור 1).
2. מהכרומטוגרמה, ניתן לחשב את אזורי השיא. אזורי השיא הם פרופורציונליים למסת הפחמן העוברת דרך הגלאי וניתן להשתמש בהם כדי ליצור עקומת כיול של תגובת מכשיר לעומת ריכוז. באיור 1, אזור השיא הוא 27,315 קפאין ו-18,852 חומצה פלמיטית.
3. מדד של יעילות עמודה הוא N, מספר הלוחות התיאורטיים. N ניתן לחשב מתוך הכרומטוגרמה עבור כל שיא. עבור איור 1, N הוא 283,000 עבור קפאין ו 261,000 עבור חומצה פלמיטית.
4. איור 2 מראה את השפעת הטמפרטורה על הפרדות איזותרמיות. שתי הפרדות הן על אותו קפאין ודגימת חומצה פלמיטית. הראשון הוא ב 180 °C (50 °F) והשני ב 200 °C (50 °F). זמני השמירה קטנים בהרבה לריצה בטמפרטורה גבוהה יותר.

איור 1. ניתוח GC-FID של קפאין ודגימות חומצה פלמיטית. תקן הקפאין 5 mM מתחמק תחילה, ואחריו דגימת חומצה פלמיטית של 1 מ"מ. רמפה הטמפרטורה הייתה 0.1 דקות ב 150 °C (50 °F) ואחריו רמפה ב 10 ° C / דקה עד 220 °C (5 °F) שבו הטמפרטורה הוחזקה במשך 5 דקות.

איור 2. ניתוח GC-FID של ריצות איזותרמיות של דגימת קפה צלוי כהה. השוואה של GC-FID פועלת ב 180 °C (50 °F) ו 200 °C (50 °F) עבור מדגם קפה צלוי כהה. הפסגות חומקות הרבה יותר מהר עם טמפרטורת 200 מעלות צלזיוס.