הכישלון של ניקוי אימות בתעשיית התרופות בשל חוסר ניקיון משטח נירוסטה

חוסר שגרה מוגדר היטב באופן עקבי לנקות משטחים קופון זוהה את התורם העיקרי ושחזורים נמוך ומשתנה בנקיון אימות. כתב יד זה מתאר את הפרוטוקול הנכון של ניקוי נירוסטה קופונים.

מטרת עבודה זו היא כדי לזהות את הפרמטרים המשפיעים על ההתאוששות של שאריות התרופות מפני השטח של פלדת אל-חלד קופונים. סדרה של גורמים היו העריכו, כולל רמות ספייק מוצרים סמים, הליך עולה, יחסי סמים-excipient, אנליסט-כדי-אנליסט השתנות, השתנות יומי, שגרת ניקוי על הקופונים. חוסר שגרה מוגדר היטב באופן עקבי לנקות השטח קופון זוהה את התורם העיקרי ושחזורים נמוך ומשתנה. הערכה של ניקוי פני השטח של הקופונים בפתרונות ניקוי-in-place (CIP) נתן התאוששות גבוהה (> 90%) ואת תוצאות לשחזור (S_rel≤4%) ללא קשר התנאים שבהם היו העריכו בעבר. הגישה הוחלה בהצלחה לניקוי אימות של מולקולות קטנות (MW < 1,000 Da) כמו גם מולקולות גדולות (MW עד 50,000 Da).

ניקיון ציוד רגיל ללא צריך לאמת לפני השקתו הבאים לשימוש בייצור של intermediates ושנה מרכיב התרופות פעיל (APIs), על המוצר למניעת זיהום צולב. ניקוי הליכים צריך להכיל פרטים מספיקים כדי לאפשר מפעילי לנקות כל סוג של ציוד באופן יעיל הדירים, הליכים אלה לאמת את המזון, והתרופות האמריקני (FDA) דרישות¹. מכתבי אזהרה רבים עקב לקוי ניקוי^2,3,4, כשל כדי לאמת את שיטת אימות הניקוי ו כישלון במעקב אחר פעולות ניקוי⁵ הונפקו על ידי ה-FDA. 21 CFR §211.67 מתווה הנדרשות לצורך אימות ניקוי מוצלחת.

זה הסטנדרט בענף כי האימות של שיטות אנליטיות לניקוי האימות מתבצע על קופונים פלדת אל-חלד עם המשטח/לסיים אותו כמו ציוד ייצור. קופונים פלדת אל-חלד (למשל, 50 ס מ²) משמשים כדי לייצג משטחים מכשור לניקוי אימות ניסויים במעבדה. במהלך פיתוח, ואלידציה של שיטות אנליטיות אלה, המדגם של הריבית (כלומר, משקעי זה צריך להיות התאושש מפני השטח של הציוד) מתובל אחוש היעד על גבי הקופון נירוסטה נקבע על ידי הגבול המקסימלי המותר carry-over (מאקו). רמה זו נקבע בהתבסס על החשיפה מקובל אשר מוגדר הגבול שבו מטופל יכול להשיג חשוף ללא תופעות בריאותיות שליליות (לא נצפתה-לוואי-אפקט-רמת, NOAEL).

אנליסט או אופרטור ייצור ניצוח על שטיפת עליך לעקוב שגרה מובנית כדי להבטיח כי ושחזורים לשחזור ללא קשר מי מבצע את המרגש. ההליך צריך פירוט באופן מפורש את סוג ספוגית, מספר דגימות בשימוש, את diluent, את כמות הממס בשימוש, התבנית באופן גורף המדויק, מספר קווים מוחל על פני השטח דגימה, כמות הזמן המושקע מקימה/חילוץ הדגימות, השיטה של זיהוי (ultra-violet, זריחה, ספקטרומטר מסה, פחמן אורגני הכולל, וכו '), טכניקת החילוץ של החומר מהראש ספוגית , ועוד.

חוץ מזה כל הגורמים הנ ל אשר משפיעות על שחזור הדגימה, פני השטח של הקופון, וכך, פני השטח של הציוד גם לשחק תפקיד. ניתן לשנות את פני השטח של הקופון עקב בתצהיר של סרט דק של חומר על פני השטח או עקב שינוי במצב חמצון של אחד או יותר של הרכיבים בפלדת אל-חלד (למשל, Fe, Cr ו- Ni)^6,7,8. לרגנרציה של פני השטח של הקופונים פלדת אל-חלד חזרה למצבו המקורי חיוני להצלחת תהליך החלפת כמותית. לימודי, שבו הקופונים פלדת אל-חלד שלא נוקו כראוי, הראה השתנות השחזור כולל אנליסט אחר, שונה לסמים, או שונים ספייק רמות^9,10,11. סטיית התקן בחדר התאוששות של משכפל עשר על שובר אחד יכול להיות עד 14% ו- 26% על קופונים 5⁹. חשוב לציין כי הערכים סטיית תקן יחסית (S_rel) גדל עם מספר גדל והולך של משכפל או עם הגדלת מספר קופונים בשימוש (קרי, קופונים חמש במקום עולה חמש פעמים על אותו בקופון)¹¹. במקרים כאלה, ההשתנות לא יכול להתפרש תנודות אקראיות. עם זאת, התוצאות שלהם יכולה להיות מוסברת על ידי מציאת שלנו כי הניקיון של פני השטח של הקופון ישפיעו על ההתאוששות. הממצאים המתוארים במאמר זה להדגים גידול משמעותי בתוצאות שחזור או להקטין את השתנות לאחר כראוי ניקוי פני השטח של הקופונים פלדת אל-חלד.

נקי-in-place (CIP) היא דרך אוטומטית של ניקוי פני השטח של ציוד זה כרוך מינימלי או אין פירוק של הציוד. במהלך CIP תהליך ניקוי, מבוצע הליך מוגדר של שטיפת רצופים עם בסיס ולאחריו חומצה כדי להסיר שאריות אורגניות. פיתחה, תרכובות chelating או סוכנים complexing מתווספים בדרך כלל לפתרונות CIP כדי לשפר את היעילות של ניקוי כל מוצר מפני השטח של הציוד. היעילות של ניקוי תלויה במספר פרמטרים כולל את הבחירה ואת ריכוז של הפתרונות CIP (קרי, סוג והרכב של בסיס חומצה, חומרים פעילי שטח), הזמן ניקוי, טמפרטורה (בדרך כלל 60-80 ° C), סוג הזיהום, הנוכחות של קשה לנקות חלקי¹². בהתבסס על הסוג של תכשיר, פתרונות CIP 100 ו- 200 נבחרו לשימוש עבור ניקוי הקופונים פלדת אל-חלד המשמש לניקוי אימות, מאז זה מדמה את התהליך CIP המשמש לניקוי ציוד הייצור.

המחקר מדווח על ההשפעה של גורמים שונים המשפיעים על ההתאוששות של שאריות התרופות מפני השטח של קופונים פלדת אל-חלד וממליץ העבודה המומלצות עבור פיתוח שיטת ניקוי אנליטי מולקולות קטנות, חלבונים טיפולית של נוגדנים. חוסר שגרה מוגדר היטב באופן עקבי לנקות השטח קופון זוהה את התורם העיקרי ושחזורים נמוך ומשתנה. גבוהה ושחזור לשחזור היה מתקבל כאשר השטח של הקופון נוקה כראוי¹³.

1. מדגם פתרון

1. לחישוב מגבלת ניקוי (CL) תרופה המבוססת על carry-over המותר המקסימלי (מאקו) על פי הקריטריונים מינון תרפויטי.
   הערה: כאן, מגבלת ניקוי (CL) סמים A חושבה להיות 2.4 µg לכל 50 ס מ² מבוסס על carry-over המותר המקסימלי (מאקו) על פי הקריטריונים מינון תרפויטי. אימות הניקוי מתבצע 50%, 100%, ו 150% ניקוי מגבלה. יש כבר שקובעת את האימות ניקוי ניסוחים שני (load 2.5% ו- 60% w/w סמים).

2. ניקוי את הליך קופוני הנחה

1. הגישה הראשונית
   1. לנקות את הקופונים על-ידי שטיפה ניגוב על פני 10-15 s פעמיים עם מים ועם פעמיים מתנול כדי לחסל את המקדמה שיורית. ביצוע תהליך זה בשכונה כמו מתנול רעיל ולא יציבה מאוד.
2. גישה מתקדמת
   1. שימוש בפתרונות ניקוי-in-place
      1. הגדר את sonicator בטמפרטורת החדר. Sonicator יש התאמה להגדרה אין כוח, ולכן הזמן מוגדר לתת תוצאות ניקוי נאותים.
      2. לטבול את הקופונים במים כיתה של ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC), sonicate למשך 2 דקות.
      3. לטבול את הקופונים 0.1% תמיסת דטרגנט אלקליין במים כיתה HPLC, sonicate למשך 2 דקות.
      4. לטבול את הקופונים במים HPLC, sonicate למשך 2 דקות.
      5. לטבול את הקופונים 0.1% תמיסת דטרגנט החומצה במים HPLC, sonicate למשך 2 דקות.
      6. לטבול את הקופונים במים HPLC, sonicate למשך 2 דקות.
   2. באמצעות חומצה-בסיס-מי חמצן
      הערה: זה שיטה חלופית כלל שימוש חומצה, בסיס, חמצן במקום דטרגנטים אלקליין, חומצה.
      1. הגדר את sonicator בטמפרטורת החדר. Sonicator יש התאמה להגדרה אין כוח, ולכן הזמן מוגדר לתת תוצאות ניקוי נאותים.
      2. לטבול את הקופונים במים, sonicate למשך 2 דקות.
      3. לטבול את הקופונים ב 0.1 M נתרן הידרוקסידי, sonicate למשך 2 דקות.
      4. לטבול את הקופונים במים, sonicate למשך 2 דקות.
      5. לטבול את הקופונים כשיביאו 0.1 M, sonicate למשך 2 דקות.
      6. לטבול את הקופונים במים, sonicate למשך 2 דקות.
      7. לטבול את הקופונים ב- 0.1 מ"ג/מ"ל NaNo2, sonicate למשך 2 דקות.
      8. לטבול את הקופונים במים, sonicate למשך 2 דקות.

3. הליך המרגש

1. הר הקופונים פלדת אל-חלד על החלק התחתון של 250 מ ל (או 500 מ"ל) גביע פלסטיק באמצעות קלטת צדדית כפולה.
2. להחזיק. הספל כדי להפוך את עולה של מקימה בתהליכי נוחה. פעולה זו מקטינה גם כמה. תאונות בלתי רצויות כגון מחטיאים את הפינה כאשר המרגש.
3. להשרות נפח מוגדר ריכוז מסוים, ניסוח (למשל, 200 µL של µg/mL 12 ב- 2.5% סמים w/w A עומס) בדפוס whirly על פני השטח של הקופון באמצעות פיפטה של תזוזה חיובית.
4. לחכות עד פני השטח של הקופון יבש (~ 3-10 דקות בהתאם התנודתיות של המדגם).
5. טובלים מקלון יבש בבקבוקון עם 2 מ של diluent (מתנול: חומצה פורמית 100:0.2 נפח/עוצמת קול...).
6. הסר הממס עודף על ידי לחיצה על הדגימה נגד בתוך המבחנה.
7. נגב את פני השטח של הקופון במשיחות צד לצד תיקו, חופפים בחוזקה עד אזור הבדיקה סה כ 50 ס מ² נמחק עם צד אחד של מקלון רטוב.
8. חזור על התהליך ניגוב (שלב 3.7) תוך שימוש באותו הצד של הדגימה.
9. דגימה ארבעת הקצוות של הקופון פעמיים.
10. הפוך את הספוגית לצד השני ולסובב את הקופון ב- 90° עם כיוון השעון או נגד כיוון השעון; לפיכך, סיבוב כיוון מקימה 90 °.
11. חזור על ההצעה swabbing כמפורט בשלבים 3.7-3.9. לאחר הדגימה של פני השטח, חותכים את הראש ספוגית באמצעות מספריים לתוך הבקבוקון הממס.
12. חזור על התהליך swabbing עם מקלון השני תוך כדי סיבוב את הקופון ב- 90° לכיוון באותו כיוון נבחר לפני.
13. Sonicate את המבחנה המכילה שני ראשים ספוגית למשך 5 דקות ולאחר מכן מערבולת 10 s.
14. להעביר את הפתרון לתוך המבחנה HPLC ויסמנו כפתרון עבודה.

4. חישוב של התאוששות

1. שחזור הדגימה
   1. הכן את פתרונות בקרה על ידי ערבוב 200 µL כל של הקופון spiking פתרונות עם 1,800 µL של diluent.
   2. הפעלת המערכת כרומטוגרפיה בהתאם לתנאים המפורטים בטבלה1.
   3. לחשב את ההתאוששות של הפתרון עובד ספוגית בהתבסס על השטח היחסי מתחת לשיא של הפתרונות לעבוד (A_W) והפתרון שליטה (_C).
   4. חזור על התהליך על שלושה קופונים ולחשב את ההתאוששות הממוצעת יחד עם סטיית תקן יחסית (S_rel).
      הערה: כל השיטות האנליטיות המשמש כאן היו תוקף על פי הנחיות ICH Q2(R1). התנאים דגמים מפורטים בסעיף גשמי.

התוצאות נציג מניסיונות הראשוני לניקוי אימות עבור סמים אצבע הם מסוכם בטבלה מס ' 2. לפני הקופונים נוקו על פי הנוהל מפורט בסעיף ניסיוני, התקבלו תוצאות לא עקביות ברמות ספייק שונים, עבור יחס שונים של API/excipient, אנליסטים שונים, ועבור אפילו האנליסט באותו יום שונה. ההשתנות שנצפו בשחזורי הצורך לטפל, ככל מספר התוצאות נכשלו לדרישות האימות (60% < שחזור < 150%), כגון השחזור עבור התרופה 60% לטעון גבולות ניקוי בכלל.

הסוג הראשון של השתנות ציין בטבלה מס ' 2 הוא ההשתנות בדיוק כפי שניתן לראות מן גבוהה S_rel המשויכת רוב מתוצאות שחזור (מספרים רשומים בסוגריים). חוץ מזה כדי הצפוי אנליסט-כדי-אנליסט ההשתנות (הנתונים המוצגים הפניה ¹³), השתנות היומיומית הוא ציין גם עבור אנליסט אחד עם כל תנאים אחרים לא ישתנה, כפי שניתן לראות את הניסויים הראשונים בטבלה מס ' 2 (ב- 2.5% סמים load). שחזורי לא עקביים נצפו ברמות ספייק שונים של 50%, 100% ו- 150% המגבלה ניקוי (S_rel עד 16% עבור התרופה 60% לטעון ב- 150% ניקוי גבול), בלי קשר את העומס סמים או האנליסט עושה את הניסוי. . In addition, היה השתנות אפילו על יחסי API/excipient שונים, טען סמים 2.5% ו- 60% (טבלה 2) ועל עומס סמים 50% דיווחו על הפניה ¹³). ניסוח נמוך נתן את ההתאוששות הגבוהה ביותר בממוצע, רומז כי excipient היה שיפור ההתאוששות של הסם של הקופון. סביר להניח 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC), חומרים פעילי, שטח-הסם אורגני מורכב מן האינטראקציה קלאציה מתכת ויש משופרת ההסרה של הסם מהמשטח קופון כאשר היחס סמים/excipient היה נמוך.

בהתבסס על סוגי השתנות שנדונו לעיל, הגישה הראשונית כדי לשפר את ההתאוששות היה לפיתוח מחדש שיטת החילוץ ותנאי ניסיוני להשגת החלמה עקבי וגבוה. מותאם פרמטרים כללו: מקימה הטכניקה, את diluent (ממיסים שונים, שונים יחסי אורגני/המימית, חומצות שונות וריכוז חומצה), הממס spiking, ה-pH של הדקר, את diluent, את הטכניקה spiking הטכניקה החילוץ של סמים ספוגית. שחזורי הממוצע על 4 קופונים שונים יחד עם סטיית תקן יחסית מוצגים באיור 1 עבור ניסויים. המסקנה העיקרית הייתה כי אף אחד השינויים הנ ל חיסלה ההשתנות שנצפו בעבר בטבלה מס ' 2. לא משנה הגורם ניסיוני שהשתנה, ההשתנות של החלמה (S_rel) ניתן לממש קופון אחד למשנהו היה ניכר וזה במקרים מסוימים היה > 20%. בתוך שגיאה ניסיוני, כמעט את כל הניסויים לא נחשבו שונה מבחינה סטטיסטית. ההבדל בין התאוששות בודדים על כל השטח קופון ההחלמה הממוצע (ΔRecovery) מוצגים באיור2. ברור כי ההחלמה הממוצע הוא שונה מן השטח ניתן לממש קופון אחד למשנהו. לכן, פני השטח קופון צפוי להיות לתורם המרכזי ההשתנות שנצפו.

היתה הסתברות גבוהה שהיה ההשתנות שנצפו בעבר בחדר התאוששות בשל השתנות קופון-כדי-קופון. הניסויים אימות ניקוי עבור עומס 60% סמים חזרו על עצמן שש פעמים, עם כל ניסוח עלה על 4 קופונים של חומר זהה וסיום פני השטח, הכל מהספק אותו. היה ברור מן התוצאות המוצגות באיור 3 כי השחזור עבור ניסוח 60% לא היה מאוד לשחזור מהמשפט אחד למשנהו, עם כי המגמה הכללית כלפי החלמה נמוכים כמו הניסויים התקדמה. יתר על כן, נצפו הבדלים בין קופונים-ניסוח זה (איור 2). ההשתנות שנצפה הציע כי השטח של הקופונים השונים לא היה זהה ויקיים אינטראקציה אחרת עם המטריקס.

הגישה הראשונה כדי למזער את ההבדל בין הקופונים היה לנקות ביסודיות את המשטחים על הקופונים. קופונים המשמש להשגת התאוששות באיור 3 נוקו על פי הנוהל שהוצג בסעיף ניסיוני. מתוצאות שחזור לאחר ניקוי הקופונים מוצגים באיור3. ברור כי ההתאוששות היא כמעט לשחזור מהמשפט אחד למשנהו, כי ההבדל בחדר ההתאוששות בין קופונים ממוזער.

בטבלה 2 מציגה השוואה של התוצאות השחזור לפני ואחרי ניקוי הקופונים תחת ניסוי באותם התנאים. ניתן להסיק את המסקנות הבאות: 1) כל ושחזורים היו גבוהות (90-100%); 2) הערכים S_rel בכל רמה spiking היו מקובל ולא הרבה יותר קטן מאשר התוצאות שדווחה בעבר על טרסה קופונים, 3) ההשתנות בשחזור מרמת ספייק אחד למשנהו היה ממוזער, 4) ההבדל בניסוח לא השפיע על ההתאוששות.

קופונים לנקות עם CIP פתרונות ואז שימשו לניקוי אימות של תרכובות B (מולקולה קטנה אחרת) C ו- D (מולקולות גדולות, קרי, תכשירים) על ניסוחים שונים ורמות ספייק. לאותן מסקנות להסיק ניסויים על סמים A שהיו ישימים עבור סמים B, C ו- D (תוצאות מפורטות שמוצג הפניה ¹³). שחזורי גבוהה התקבלו על פני גודל מולקולרי ומאפיינים physicochemical על-ידי החלת בגישה שיטתית ניקוי עבור הקופונים.

איור 1 . ממוצע שחזור המתקבל קופונים ארבע. קווי שגיאה לייצג סטיית תקן יחסית בין ניסויים ארבע על ארבע קופונים. ניסוי מספר: 1) ספייק נורמלי, 2) 10% חומצה פורמית, 3) בלי חומצה פורמית, 4) אין מים בפתרון ספייק, 5) אחוז גבוה פלצבו (97%), 6) אין פלצבו, 7) לסחוט ספוגית עם מרית, 8) הוספת צעד centrifuging, ו 9) 0.1% HCL. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2 . ההבדל בחדר התאוששות (ΔRecovery) המתקבל קופונים ארבע. ΔRecovery ההבדל בין ההתאוששות על הקופון ההחלמה הממוצע על הקופונים ארבע. ניסוי מספר: 1) ספייק נורמלי, 2) 10% חומצה פורמית, 3) בלי חומצה פורמית, 4) אין מים בפתרון ספייק, 5) אחוז גבוה פלצבו (97%), 6) אין פלצבו, 7) לסחוט ספוגית עם מרית, 8) הוספת צעד centrifuging, ו 9) 0.1% HCL. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3 . השתנות בחדר התאוששות של סם A ביחס לסמים/Excipient 2.5% לפני ואחרי ניקוי. משולשים מוצק תואמות לערכים השחזור לפני ניקוי הקופונים, כאשר היא פתוחה סמלים יתאימו לערכים התאוששות לאחר ניקוי הקופונים. קווי שגיאה לייצג סטיית תקן יחסית בין ניסויים ארבע על ארבע קופונים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

טבלה 1: כרומטוגרפיה תנאים.

בטבלה 2. עלה שחזורי עבור עומס סמים שונים לפני ואחרי ניקוי הקופונים לפי ההליך בסעיף ניסיוני.

התורם העיקרי ושחזורים נמוך ומשתנה של API שאריות של פלדת אל-חלד קופונים היה לייחס חוסר שגרה מוגדר היטב עבור ניקוי של משטחים קופון. ניקוי פני השטח של הקופונים הביא עקביים, מדויקים שחזור ממוסמר ובתוצאות לשחזור. עם ההדגמה של שחזורי גבוהה מקופונים פלדת אל-חלד, התוצאות בפועל אימות ניקוי המתקבל ציוד הייצור באמצעות פעולות שירות המאומת צריך להיות מדויק ולא מדויק, משקפת רמת שאריות על הציוד עם הסיכון המינימלי של התשלילים שווא עבור דחויים המוצר כדי מוצר שעלול לסכן את בטיחות המטופל.

הגישה הראשונית ואחריו האנליסט כדי לפתור בעיות התאוששות נמוך ולא עקבי היה על-ידי שינוי התנאים ניסיוני כגון: אחוז אורגני ב diluent את התהליך spiking, סוג, כוחו של חומצה פתרון עולה, וכו '. גישה זו לא פתר את הבעיה השחזור נמוכה ולא עקבית. למרות זאת, הנ ל פתרו את הבעיה לחלוטין כאשר הנירוסטה נוקה כראוי באמצעות פתרון נקי-in-place. הישג זה תוצאות מאוד להגדיל את סיכויי המעבר המוצלח של ניקיון אימות של ציוד הייצור. חשוב לשים לב כי הפתרונות CIP המשמש כאן מוגבלות לתעשיית התרופות, ולכן יש לבחור פתרונות CIP מתאימים עבור סוגים אחרים של תעשיות (מזון מעובד, מוצרי חלב, מוצרי קוסמטיקה, וכו '). הבחירה של פתרונות CIP, את תהליך הניקוי הם שלבים קריטיים להצלחת התהליך. פרוטוקול המובאת כאן לסייע לאנליסטים בתעשייה הפרמצבטית, כמו גם תעשיות אחרות עיצוב טוב יותר ובצע אימות ניקוי מוצלחת. העבודה גם יעזור למזער אצווה-כדי-אצווה ו/או המוצר-כדי-מוצר זיהום זה עלול להשפיע לרעה על בריאות האדם.

אין אינטרסים כלכליים או ניגוד אינטרסים קיימות.

סוכנויות מימון אין תמיכה עבודה זו.