Cette étude a introduit une manipulation chirurgicale pour exposer le DRG thoracique chez des souris anesthésiées pour l’imagerie calcique in vivo ainsi que l’enregistrement synchronisé de l’électrocardiogramme. Ce faisant, nous essayons de répondre à la question de savoir si l’acupuncture à PC6 sur le foramen pourrait activer le neurone DRG et réguler simultanément l’électrocardiogramme. Les techniques actuellement utilisées dans les études d’acupuncture comprennent l’électrophysiologie in vivo ou vitro, le traçage neuronal et diverses stratégies combinées à l’optogénétique et à la chimiogénétique.
L’imagerie calcique in vivo introduite dans cette étude permet de mieux comprendre les activités des populations de neurones DRG induites par l’acupuncture, le tout dans différents modèles animaux, via des enregistrements dynamiques et en temps réel. En raison de la courbure physiologique de la colonne thoracique au niveau des segments thoraciques de un à cinq vertèbres, les DRG thoraciques sont assez difficiles à exposer. De plus, les influences des rythmes cardiaques et pulmonaires rendent la fixation des DRG thoraciques difficile.
Sinon, l’anesthésie respiratoire et le maintien de l’état des souris pendant des heures ne sont pas faciles. L’imagerie calcique in vivo révèle l’activité de populations neuronales spécifiques en utilisant des souris issues du génie génétique. C’est la première fois que les neurones DRG thoraciques sont observés in vivo.
Cette approche permet d’observer les activités neuronales produites par les stimulations somatiques ou viscérales ainsi que leur diaphonie. Notre laboratoire a établi des méthodes pour l’imagerie calcique in vivo de la DRG thoracique et lombaire, et à l’avenir, nous examinerons les récepteurs liés aux facteurs initiateurs de l’acupuncture, à l’hypersensibilité des acupoints, aux interactions entre la stimulation de l’acupuncture somatique et les entrées viscérales. Après avoir effectué une trachéotomie sur une souris anesthésiée, placez la souris en position couchée sur un coussin chauffant.
Faites une incision longitudinale de deux centimètres au centre de la nuque, s’étendant des six vertèbres cervicales aux trois vertèbres thoraciques. Séparez soigneusement les glandes graisseuses et hibernantes au niveau de la face antérieure des vertèbres thoraciques de la souris, en évitant les vaisseaux sanguins sous les glandes. Utilisez des ciseaux à ressort pour couper la peau et les couches musculaires, y compris le muscle trapèze.
Insérez un écarteur entre les muscles pour faciliter l’exposition supplémentaire. Retirez les muscles qui s’attachent à la pince de tête et la partie droite des muscles du cou long, exposant les apophyses épineuses de la deuxième thoracique. Déplacer les muscles semi-spinalis et spinalis pour exposer l’arc vertébral de C6 à T3. Coupez la connexion entre la plaque vertébrale et le processus articulaire de la plaque thoracique.
À l’aide d’une pince fine, vous enlevez méticuleusement les apophyses articulaires gauche et droite et les apophyses mamillaires de la thoracique. Nettoyez le tissu conjonctif sus-jacent. Exposez soigneusement le ganglion de la racine dorsale thoracique gauche ou droit, ou DRG, en assurant l’intégrité de l’épineurium du côté choisi.
Placez une petite boule de coton imbibée de solution saline chaude sur le DRG exposé pour maintenir l’humidité. Connectez le moniteur ECG avec le pôle négatif sur le membre supérieur droit, le fil de terre sur le membre inférieur droit et le pôle positif sur le membre inférieur gauche. Placez la souris sur la platine de la pince vertébrale personnalisée avec un coussin chauffant.
Fixez la souris à l’aide de deux clips fixés aux apophyses articulaires de la six cervicale et de la trois thoracique. Positionnez la pince vertébrale avec la souris sécurisée sous le microscope confocal. Placez l’objectif pneumatique à longue distance de travail 10x/0,32 sur le DRG thoracique 1 exposé.
Réglez la taille du pas sur 25 micromètres et une résolution de 512 par 512 ou 1 024 par 1 024 pixels. Ajustez l’axe z de la platine vers le haut et vers le bas et capturez l’intégralité du DRG thoracique 1. Appliquez une stimulation par brosse sur le membre supérieur de la souris et évaluez la réactivité des neurones DRG imagés.
Effectuez des stimulations nerveuses périphériques lors de la stimulation PC6 à l’aide d’un stimulateur. Dans des conditions de base, la plupart des neurones du DRG thoracique 1 ne présentaient pas de fluorescence GFP. La stimulation somatique a entraîné une augmentation rapide et transitoire de la fluorescence de GCaMP avec une augmentation du nombre et de l’intensité de la GFP.
Les stimulations nerveuses périphériques lors de l’application de PC6 ont entraîné des changements similaires à la fluorescence de GCaMP que la stimulation somatique. Les neurones ont été marqués et numérotés dans un seul DRG thoracique après traçage avec un logiciel d’imagerie. Les neurones présentant des changements d’intensité de fluorescence dépassant 130 % du seuil F0 ont été considérés comme des réponses positives.
L’histogramme a montré les différents diamètres des neurones répondant aux stimulations nerveuses périphériques à PC6. Les stimulations nerveuses périphériques lors de la stimulation PC6 ont montré une augmentation de la fréquence cardiaque.
