Instillation intratrachéale non invasive de lipopolysaccharides chez la souris

Notre protocole propose une nouvelle méthode d’administration non invasive du LPS de la trachée au poumon, avec plus de précision. Les personnes qui essaient cette méthode pour la première fois devraient faire beaucoup d’efforts pour trouver la position de la trachée. Pour préparer la plate-forme d’intubation, passez la ficelle à travers les deux trous et attachez ses extrémités aux petites saillies au sommet du riser.

Ensuite, fixez deux élastiques à chaque extrémité du trombone et collez-les à l’arrière de la colonne montante. Enfin, fixez la colonne montante à la base à un angle de 90 degrés. Assemblez la canule sur un stylo canule et allumez la lumière du stylo.

Ensuite, désinfectez les petites pinces chirurgicales et la pipette Pasteur en utilisant 70% d’alcool. Pour préparer la solution du composé d’essai, ajouter trois milligrammes de lipopolysaccharide, ou LPS, dans un millilitre de pH 7,2 PBS. Ensuite, dissoudre 10 milligrammes de pentobarbital sodique dans un millilitre de solution saline normale et filtrer la solution à l’aide d’un filtre à seringue de 0,45 micromètre.

Placez la souris anesthésiée sur la plateforme d’intubation. Ensuite, fixez les dents de devant supérieures avec la ficelle et les deux avant-pieds avec les élastiques. À l’aide d’une pince à épiler, retirez la langue et tenez-la.

Poussez lentement la canule le long de la bouche jusqu’à l’épiglotte mandibulaire. Localisez la trachée avec la lumière du stylo canule et insérez-y lentement la canule. Retirez ensuite le stylo d’intubation en laissant la canule à l’intérieur.

Insérez la pipette Pasteur dans le joint de la canule et appuyez sur la tête. Après une intubation endotrachéale réussie, à l’aide d’une microseringue à tête plate, instiller la solution de LPS préparée à raison de trois milligrammes par kilogramme à travers la canule. Une fois terminé, sortez la microseringue et la canule.

Retirez la souris de la plate-forme d’intubation et placez-la dans une cage séparée pour récupérer. Observez l’état respiratoire de la souris jusqu’à ce qu’elle récupère et reprenne conscience. 12 heures après l’instillation trachéale de LPS, l’expression d’une cytokine inflammatoire, le TNF-alpha, et le rapport poids sec-humide des poumons ont été évalués et comparés à d’autres méthodes d’instillation.

Les taux sériques de TNF-alpha dans le groupe d’intubation oropharyngée non invasive ont été significativement augmentés par rapport au groupe témoin blanc. Le rapport poumon poids sec-humide a également été augmenté, atteignant le même niveau que dans le groupe d’intubation trachéale chirurgicale. Il est important de ne pas gratter la trachée dans le processus de recherche de l’emplacement de la trachée.

La technique pourrait également être utilisée pour administrer d’autres médicaments qui doivent atteindre les poumons de manière non invasive.