Perfusion rétrograde de glande parotide à travers le canal de Stensen chez un primate non humain pour l’administration de gènes vectoriels

Ce protocole est important car il démontre en détail la procédure de perfusion rétrograde des glandes salivaires. La procédure peut être utilisée pour diverses raisons médicales, telles que l’immunoprophylaxie vectorielle ou la thérapie génique. Cette technique est facile à apprendre et à reproduire.

Les auteurs ont réussi à effectuer cette procédure avec succès à plusieurs reprises en dépit de ne pas être des chirurgiens buccaux, ni d’avoir une telle expérience. Après anesthésie, utilisez des télescopes dentaires pour le grossissement et identifiez la papille parotide ou l’ouverture du canal de Stenson sur la joue postérieure adjacente à la deuxième molaire supérieure. Dilatez doucement la papille parotide en plaçant la pointe d’un dilatateur conique au centre ou à l’ouverture de la papille et faites pivoter le dilatateur d’avant en arrière pendant environ 20 à 30 secondes.

Ensuite, à l’aide d’une pince à épileuse, maintenez l’extrémité marquée du tube en polyéthylène attachée à la seringue contenant de l’infuseur à environ 0,5 centimètre de l’extrémité distale et insérez doucement l’extrémité du tube dans la papille dilatée. Avancez doucement le tube par de petits mouvements de rotation pour aider les tubes à glisser, suivis d’un réajustement de la pince à épile de 0,5 centimètre proximal à la poignée précédente. Répétez ce processus jusqu’à ce que la marque de deux centimètres atteigne la papille parotide.

Ensuite, pour sceller la papille parotide et réduire le déversement de l’infusate dans la cavité buccale, appliquez un cyanoacrylate sur la joue autour de la papille et sur le tube inséré. Une fois que le cyanoacrylate sèche, injectez lentement l’infusate pendant cinq minutes à raison de 100 microlitres par minute. Une fois la perfusion terminée, laissez le tube en place pendant au moins cinq minutes, gardant ainsi le canal scellé et permettant à l’infuser de rester dans la glande parotide.

Enfin, retirez le tube avec une traction douce et le cyanoacrylate se libérera avec le tube. La fluoroscopie à l’aide d’une perfusion de contraste radio a démontré la ramification de la solution à travers le canal de Stenson et dans la glande parotide. L’immuno, en tant qu’analyse chimique de la glande parotide, a révélé une coloration positive de l’EGFP dans les cellules canalaires et acineuses, ce qui indique une transduction et une transcription réussies dans les deux types de cellules.

Le principal défi de cette procédure est probablement d’introduire le tube en polyéthylène dans la papille, ce qui doit être fait très doucement et lentement.