Nous fournissons un protocole pour établir l’hémorragie massive de pontine chez un rat. Ce modèle est facile à établir, reproductible et très réussi. L’injection distillée de la méthode autologue de rat pourrait être employée pour faire l’hémorragie dans n’importe laquelle des régions de cerveau.
Les personnes qui veulent essayer ces techniques devraient apprendre à utiliser un cadre stéréotaxique et se familiariser avec l’anatomie des pontines. Commencez par placer un rideau chirurgical sur la souris. Faites une incision avec un scalpel le long de la ligne médiane marquée.
Utilisez un coton-tige pour enlever tout sang potentiel. Placez ensuite un morceau de pince de chaque côté du lambeau du cuir chevelu pour exposer le crâne. Trempez un coton-tige dans une solution saline à 0,9 % et retirez délicatement les tissus conjonctifs de l’os du crâne.
Utilisez un stylet pour marquer le point central du bregma comme point d’origine. Effectuez une craniotomie à l’aide d’une micro perceuse, en procédant prudemment. Lorsque vous avez terminé, retirez la micro perceuse du cadre stéréotaxique.
Mettez une seringue Hamilton de 100 microlitres dans le support stéréotaxique. Allumez l’interrupteur de la pompe d’injection. Cliquez sur le bouton d’inhalation rapide.
Puis aspirer la solution d’héparine à 100 microlitres et la drainer complètement. Appliquez de la chlorhexidine et un gommage chirurgical à 75% d’alcool sur l’ensemble du conte de la racine à la pointe au moins trois fois pour désinfecter la peau, adoucir l’excité et dilater la veine caudale pour augmenter le taux de réussite de l’injection. Attachez une acupuncture du cuir chevelu à une seringue d’un millilitre, puis insérez l’acupuncture du cuir chevelu dans une veine latérale de la queue à trois centimètres de l’extrémité de la queue et prenez 150 microlitres de sang.
Retirez l’acupuncture du cuir chevelu de la seringue millilitre et transférez le sang dans un tube. Travailler rapidement pour prévenir la coagulation du sang. Changez les gants chirurgicaux.
Sélectionnez le mode de retrait. Réglez le volume sur 100 microlitres et réglez la vitesse sur 200 microlitres par minute. Cliquez sur le bouton de course et aspirez 100 microlitres de sang dans la seringue Hamilton.
Passez en mode infuse et réglez la vitesse sur une microlitre par minute. Avancez la seringue jusqu’à ce que la pointe atteigne 9,2 millimètres sous la surface du cerveau et injectez les 10 premiers microlitres de sang. Cliquez sur le bouton Exécuter.
Arrêtez l’injection et laissez la seringue en position pendant 20 minutes pour empêcher le sang de s’écouler dans l’espace sous-arachnoïdien. Rétractez la seringue jusqu’à ce que la pointe arrive à neuf millimètres sous la surface du cerveau, puis redémarrez l’injection à la même vitesse d’un microlitre par minute jusqu’à ce que le sang résiduel ait été injecté complètement. Laissez la seringue en position pendant 10 minutes pour éviter le refoulement sanguin.
Retirez la seringue du cerveau lentement. Ensuite, utilisez du ciment osseux pour couvrir le trou de craniotomie. Lorsque le ciment sèche, suturez la plaie avec un filament de suture polyamide à quatre zéro.
Après avoir cousu trois ou quatre points de suture, attachez 2 nœuds chirurgicaux standard. Observez le rat toutes les 15 minutes jusqu’à ce qu’il se rétablisse complètement de l’anesthésie, puis retournez-le dans la cage d’origine avec un coussin chauffant en dessous. Fournir au rat un accès gratuit à la nourriture et à l’eau.
Un total de 25 animaux ont été utilisés pour le contrôle 30 microliter, 60 microliter, et 100 injections de sang de microliter. Des tests comportementaux ont été conduits les jours un, trois, sept et 14 après chirurgie. L’hémorragie de pontine a causé des déficits neurologiques comme le réflexe cornéen diminué et le cercle.
L’injection de 100 microlitres de sang a également induit le myotonia. Le balayage de MRI a été exécuté pendant 24 heures après chirurgie. Dans les groupes d’injection de sang, l’hémorragie a été détectée comme jante hypointense avec un noyau ISO à légèrement hyperintense dans la partie Basiler des étangs.
Le volume de l’hémorragie a augmenté avec le volume d’injection. Les rats ont été sacrifiés à 24 heures et 14 jours après chirurgie. Et des sections de deux millimètres d’épaisseur ont été faites.
Une hémorragie a été détectée autour du site d’injection et se distribuant à la base des étangs. Il y avait un léger oedème autour de l’hémorragie dans le groupe d’injection de sang 100 microliter. Certains des rats ont été sacrifiés pendant trois jours après chirurgie et des sections de paraffine ont été faites pour IL souillant.
Les résultats ont montré que dans les groupes d’injection sanguine, les cellules inflammatoires enrichies dans la zone d’hémorragie para sont restées contenues avec des globules rouges intacts. Lorsque vous essayez ce protocole, assurez-vous de vous souvenir de la position d’injection. Cette méthode peut être utilisée pour induire une hémorragie dans n’importe quelle région cérébrale spécifique.
